肝癌患者外周血淋巴细胞转录因子的表达及意义

目的研究原发性肝癌患者外周血单个核细胞(PBMC)的Th1-、Th2-特异性转录因子(TF)T-bet、GATA mRNA表达水平及意义。方法选取23例初次诊断为肝癌并需外科手术治疗的患者为肝癌组,体检中心健康者21例为对照组。采集所有受试者空腹外周静脉血标本,用含有淋巴细胞分离液的淋巴细胞分离管分离外周静脉血淋巴细胞。采用荧光实时定量PCR(RTq PCR)测定PBMC的T-bet mRNA和GATA-3 mRNA表达水平。结果肝癌组PBMC的T-bet mRNA水平显著低于对照组(P<0.01);肝癌组GATA-3 mRNA水平显著高于对照组(P=0.024)。肝癌组PBMC T-bet mRNA/GATA-3 mRNA比值较对照组显著降低(P=0.031)。结论原发肝癌患者PMBC T-bet表达降低、GATA-3表达增加,T-bet/GATA-3比值显著降低,且GATA-3表达显著,显示在转录水平存在Th2细胞漂移。     

室缺合并肺高压患儿转录因子T-bet和GATA-3的检测及意义

目的检测先天性心脏病室间隔缺损合并不同程度肺高压患儿外周血单核细胞中转录因子T-bet mRNA和GATA-3 mRNA的表达水平,分析不同程度肺高压对室缺患儿Th1和Th2细胞水平的影响及意义。方法选取2017年12月至2019年12月在河北省儿童医院心脏外科住院的室缺患儿共80例,按肺动脉高压程度分为轻度组、中度组、重度组各20例,对照组为未合并肺动脉高压组20例,采用实时荧光定量技术检测外周血单核细胞中转录因子T-bet mRNA和GATA-3 mRNA的表达水平。结果T-bet mRNA: 中/重度组转录因子T-bet mRNA的表达水平均明显低于对照组（P＜0.05）。GATA-3 mRNA:轻/中/重度组转录因子GATA-3 mRNA的表达水平均低于对照组（P＜0.05）。结论中度及重度肺高压患儿存在Th1、Th2细胞水平均降低即患儿细胞免疫及体液免疫水平均下降或紊乱。     

喘可治注射液逆转哮喘患者Th1/Th2失衡的作用机制

采集发作期哮喘患者的静脉血，分离外周血单个核细胞（PBMC），分为两份，一份加入PHA（对照组），另一份加入喘可治注射液和PHA（观察组），培养48h后分别收集上清液和细胞沉淀，采用RT-PCR方法测定细胞沉淀中T-bet mRNA、GATA-3 mRNA的表达强度，ELISA法测定上清液中IL-4、IL-5、IL-13、IFN-γ的表达水平。结果：①观察组细胞沉淀中T-bet mRNA的表达强度较对照组显著增强，GATA-3 mRNA表达强度显著减低；T-bet／GATA-3比值较对照组显著增高。②观察组上清液中IL-4、IL-5、IL-13水平均较对照组显著降低，IFN-γ水平较对照组显著增高。认为喘可治注射液可通过上调T-bet表达、下调GATA-3表达来调节T-bet／GATA-3比值，逆转Th1／Th2细胞失衡。     

免疫性血小板减少症患者外周血白细胞介素-18及其受体α链的表达

目的 通过检测新诊断的免疫性血小板减少症(ITP)患者用药前外周血IL-18和CD_3~+细胞表面IL-18受体α链(IL-18Rα)的表达,探讨IL-18和IL-18Rα在ITP发病中的作用机制.方法 以我院门诊及住院治疗的18例新诊断的ITP为研究对象,应用ELISA检测血浆中IL-18的含量,采用流式细胞术分析CD_3~+细胞和总淋巴细胞表面IL-18Rα的表达,应用RT-PCR检测外周血单个核细胞(PBMCs)中IL-18 mRNA、转录因子T-bet mRNA和GATA-3 mRNA的表达.选择15例与试验组匹配的健康志愿者作为正常对照组.结果 新诊断的ITP患者血浆中IL-18的含量为(468.57±141.62)pg/ml,显著高于对照组(P<0.05);CD_3~+细胞表面及淋巴细胞表面IL-18Rα的表达分别为(8.50±3.16)%和(9.16±2.98)%,两者均显著高于对照组(P<0.05);ITP患者PBMCs中IL-18 mRNA、T-bet mRNA和GATA-3 mRNA的表达分别为0.12±0.02、0.07±0.02和0.0039±0.0014,IL-18mRNA和T-bet mRNA显著高于对照组(P<0.05),而GATA-3 mRNA显著低于对照组(P<0.05),T-bet/GATA-3比例显著增高.结论 IL-18与ITP的发生发展有关,本研究从蛋白和基因水平说明IL-18和IL-18Rα可能上调ITP患者Th1类细胞的表达,通过调整T-bet/GATA-3的比例,恢复Th1/Th2的平衡,有望为ITP的治疗提供一个新的治疗策略.     

T-bet和GATA-3基因在肝泡型包虫病患者肝脏组织中的表达及作用

目的探讨T-bet和GATA-3基因在肝泡型包虫病患者肝脏组织中的表达及作用。方法选取14例在新疆医科大学第一附属医院接受手术治疗的肝泡型包虫病患者病灶组织(L组)、病灶旁组织(P组)及正常肝组织(N组),采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各肝脏组织中T-bet和GATA-3 mRNA的表达,采用两两比较的t检验和Pearson相关性检验分析结果。结果 T-bet mRNA在L组、P组和N组的表达量分别为3.98、0.89和0.27,其中L组与P组比较差异无统计学意义(t=0.307,P>0.05),L组与N组比较差异有统计学意义(t=3.695,P<0.01),P组与N组比较差异有统计学意义(t=3.492,P>0.05)。GATA-3mRNA在L组、P组和N组的表达量分别为119.23、6.30和0.53,其中L组与N组比较差异有统计学意义(t=5.190,P<0.01),P组与N组比较差异有统计学意义(t=4.649,P<0.01),L组与P组差异无统计学意义(t=1.711,P>0.05)。肝脏不同组织中,T-bet和GATA-3mRNA的表达量呈正相关(相关系数为0.730~0.932)。结论 Th1细胞转录因子T-bet基因和Th2细胞转录因子GATA-3基因在肝脏病灶组织中的表达升高,这些变化或与泡型包虫病发病过程中寄生虫肉芽肿的形成有关。     

免疫性血小板减少症患者Th1/Th2细胞失衡与特异性转录因子表达异常

目的:探讨Th1/Th2细胞失衡以及特异性转录因子表达异常在免疫性血小板减少症(ITP)中的临床意义。方法:入组ITP患者40例,应用流式细胞术检测Th1与Th2细胞、RT-PCR技术检测Th1特异性转录因子T-bet mRNA和Th2特异性转录因子GATA-3mRNA表达水平以及AimPlex流式高通量技术检测Th1细胞因子IFN-γ与TNF-α以及Th2细胞因子IL-4与IL-10水平。20例健康者作为正常对照组。结果:与对照组相比较,ITP组Th1/Th2细胞比值以及Th1细胞因子TNF-α与IFN-γ表达水平显著升高(P0.05),Th2细胞因子IL-4与IL-10表达水平显著降低(P0.05)。Th1特异性转录因子T-bet mRNA以及Th2特异性转录因子GATA-3mRNA表达水平显著升高(P0.05)。结论:ITP患者存在Th1/Th2细胞失衡以及特异性转录因子表达异常,反映了ITP患者机体免疫功能紊乱。     

IgA肾病外周血单个核细胞T-betGATA-3ROR-γt和Foxp3mRNA的表达及其意义研究

目的 在mRNA水平探讨IgA肾病患者外周血Th1、Th2、Th17和Treg细胞免疫失衡及其与IgA肾病(IgAN)牛津分型的相关性。方法 以2010年11月至2011年11月在大连医科大学附属第一医院肾内科经肾活检病理确诊的原发性IgAN患者为研究对象,应用实时荧光定量PCR检测IgAN患者(20例)和健康对照组(10名)外周血单个核细胞的特异性转录因子T-bet、GATA-3、ROR-γt、Foxp3的mRNA表达水平。结果 与对照组比较,IgAN组ROR-γt表达明显升高(P<0.05)、Foxp3表达明显下降(P<0.05),且ROR-γt/Foxp3比值明显升高(P<0.05);而T-bet、GATA-3的表达与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。按IgAN牛津分型病理指标分组结果比较显示,M1组T-bet表达及T-bet/GATA-3的比值较M0组明显升高(P<0.05)。进一步相关分析显示,IgAN组T-bet表达与系膜增殖积分呈显著正相关(r=0.541,P<0.01)。S1组T-bet表达显著升高(P<0.01),ROR-γt表达无明显差异(P>0.05),T-bet/ROR-γt比值明显升高(P<0.05);而GATA-3、Foxp3无变化(P>0.05)。结论 IgAN患者外周血单个核细胞在mRNA水平出现了偏向Th17极化,而Treg的应答被抑制。IgAN系膜增殖程度与Th1极化呈正相关,而肾小球节段硬化的Th1/Th17的比值明显升高。     

Th1、Th2和Th17细胞失衡与克罗恩病的关系

背景:免疫功能紊乱是炎症性肠病发病的关键环节,研究发现Th1、Th2和Th17细胞比例失衡与肠道免疫失调相关。目的:探讨Th1、Th2和Th17细胞失衡与克罗恩病(CD)的关系。方法:收集2013年1月—2014年12月温州医科大学附属第二医院收治的CD患者36例,同期行肠息肉摘除术患者40例作为对照组,分别取病变部位肠组织和正常肠组织,采用real-time PCR和免疫组化法检测Th1、Th2、Th17细胞相关转录因子(T-bet、GATA-3、RORγt)和细胞因子(IFN-γ、IL-4、IL-17A)表达。结果:与对照组相比,CD组肠组织中T-bet、RORγt mRNA表达、IFN-γ、IL-17A mRNA和蛋白表达以及代表Th1/Th2、Th17/Th2比例的T-bet/GATA-3、RORγt/GATA-3比值均显著增高(P0.05),各转录因子与相应细胞因子表达呈显著正相关(P0.05)。IFN-γ和IL-17A免疫阳性物质均定位于细胞质,在CD患者中阳性细胞主要分布于上皮层和黏膜固有层。分层分析显示活动期CD的上述指标均显著高于缓解期(P0.05);活动期CD代表Th17/Th1比例的RORγt/T-bet比值亦较缓解期显著增高(P0.05)。结论:肠组织中Th1、Th2和Th17细胞失衡与CD密切相关,Th1、Th17细胞极化可能在其中起重要作用,活动期CD以Th17细胞极化为著。     

白藜芦醇对JurcatT细胞分化为Th1/Th2细胞作用的影响及机制

目的探讨白藜芦醇调节Jurkat T细胞分泌为Th1/Th2型细胞作用的影响。方法将不同浓度的白藜芦醇作用于受植物血凝素（PHA）刺激的Jurkat T细胞,于不同时间点分别用ELISA法检测Th1型细胞因子IFN-γ和Th2型细胞因子IL-10;RT-PCR法检测T-bet和GATA-3 mRNA表达。结果白藜芦醇作用后IFN-γ、IL-10及T-bet mRNA、GATA-3 mRNA的表达均明显降低,具有浓度和时间依赖性。结论白藜芦醇对受PHA刺激的JurcatT细胞由Th0向Th1、Th2细胞分化起抑制作用。     

T-bet、GATA-3在慢性特发性血小板减少性紫癜患者外周血中的表达及意义

目的进一步探讨慢性特发性血小板减少性紫癜（CITP）的发病机制。方法选择25例CITP患者（CITP组）及25例健康体检者（正常对照组）,采用ELISA法检测外周血Th细胞因子IFN-γ、IL-10表达;采用RT—PCR检测外周血淋巴细胞中转录因子T-bet、GATA-3mRNA表达。结果与正常对照组相比,CITP组IFN—γ表达显著升高、IL-10表达显著降低（P〈0．01）,T—betmRNA表达明显升高、GATA-3mRNA表达明显下降（P〈0．05）。结论T-bet、GATA-3表达异常在CITP发生、发展过程中发挥重要作用,可能机制为增强TM细胞功能、抑制Th2细胞功能。     

支气管哮喘患者CC16与气道炎症及Th1/Th2细胞因子的关系

目的探讨支气管哮喘（哮喘）患者CC16与气道炎症及Th1/Th2细胞因子的关系。方法采取病例对照研究,收集25例哮喘急性发作期患者和33例健康对照组。采外周静脉血分离血浆,提取外周血单个核细胞（PBMC）,用ELISA测定血浆中CC16、干扰素-γ（IFN-γ）、白介素-4（IL-4）的水平;用RT-PCR法检测PBMC转录因子T-bet和Gata-3mRNA表达水平。结果 1.哮喘组CC16及IFN-γ分别为（21.96±7.31）ng/ml,（118.73±22.59）pg/ml,明显低于对照组[分别为（64.88±25.27）ng/ml和（145.53±29.50）pg/ml,（均P〈0.01）],哮喘组IL-4（425.22±4.37）pg/ml高于对照组（69.72±10.15）pg/ml,（P〈0.01）。2.哮喘组T-betmRNA、T-bet/GATA-3表达水平（0.12±0.01,0.25±0.04）显著低于对照组（0.48±0.12,1.894±0.65）（均P〈0.01）,GATA-3mRNA表达（0.45±0.05）较对照组明显升高（0.30±0.08）（P〈0.01）。3.CC16与T-betmRNA表达水平、T-bet/GATA-3呈正相关（r分别为0.792,0.761,均P〈0.01）;与GATA-3mRNA无明显相关性（r=-0.146,P=0.551）。结论 CC16参与哮喘气道炎症反应,并以Th1/Th2细胞因子失衡为特点。     

过敏性哮喘患者外周血T-bet、GATA-3、RORγt和FoxP3 mRNA的表达变化

目的：探讨特异性转录因子T-bet、GATA-3、RORγt和FoxP3 mRNA在过敏性哮喘患者外周血中的表达变化。方法：选择30例慢性持续期的屋尘螨过敏性哮喘患者,其中轻度哮喘17例、中重度哮喘13例,14名正常人作为对照。通过荧光实时定量PCR方法检测3组患者外周血单个核细胞（PBMC）中T-bet、GATA-3、RORγt和FoxP3mRNA的表达。结果：轻度和中重度哮喘患者的GATA-3 mRNA表达均显著高于正常人（均P〈0.01）。中重度哮喘患者的RORγt mRNA表达明显高于正常人和轻度哮喘患者（均P〈0.01）。T-bet和FoxP3 mRNA表达在3组间差异无统计学意义（均P〉0.05）。结论：过敏性哮喘中GATA-3表达增加,中重度哮喘中RORγt表达增加,GATA-3和RORγt在哮喘发病中起着重要的作用。     

支气管哮喘患者Th2细胞过度分化与转录因子T-bet和GATA-3的调控作用

目的　探讨支气管哮喘 (简称哮喘 )患者是否存在Th2细胞过度分化以及转录因子T bet和GATA 3的调控作用。方法　将 32例哮喘患者 (A组 )和 2 0名健康对照者 (B组 )纳入研究。A组中儿童型 (A1组 )和成人型 (A2 组 )分别为 12、2 0例 ,变应原皮试阳性 (AⅠ 组 )和阴性 (AⅡ 组 )者分别为 18、14例。采用酶联免疫吸附测定 (ELISA)法检测哮喘患者外周血淋巴细胞培养上清液中白细胞介素 4 (IL 4 )和γ干扰素 (INF γ)浓度 ,用直接免疫荧光标记法测定淋巴细胞中CCR3 和CCR5 阳性细胞率 ,用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)和流式细胞术 (FCM)测定淋巴细胞中T bet、GATA 3mRNA表达水平。结果　A组和B组患者淋巴细胞培养上清液中IL 4、INF γ浓度分别为 (118± 2 5 ) μg/L、(75± 12 ) μg/L、(6 5 1± 85 ) μg/L、(1179± 332 ) μg/L ,A、B两组比较差异均有显著性 (P均 <0 0 0 1) ;A1组和A2 组淋巴细胞培养上清液中IL 4浓度分别为 (12 1± 2 5 ) μg/L、(118± 2 5 ) μg/L ;INF γ浓度分别为 (6 39±132 ) μg/L、(6 6 1± 84 ) μg/L ,A1和A2 组分别与B组比较差异均有显著性 (P均 <0 0 1) ,但A1组与A2 组间比较差异无显著性 (P >0 0 5 )。AⅠ 组与AⅡ 组IL 4浓度分别为 (12 6± 2 3) μg/L、(10 7± 2 6     

罗格列酮对支气管哮喘急性发作期患者T淋巴细胞转录因子T-bet/GATA-3表达的调控

目的 探讨罗格列酮对支气管哮喘（简称哮喘）急性发作期患者T淋巴细胞转录因子T-bet与转录因子GATA-3表达的调控、对Th1／Th2细胞因子的影响及与地塞米松（DXM）作用机制的异同。方法 哮喘急性发作期患者（A组）10例及健康自愿者（B组）10名。分离、纯化、培养外周血T淋巴细胞，根据实验要求将两组分为3、24h组，再根据不同的干预分为：未干预对照组（A1组、B1组）、罗格列酮干预组（A2组、B2组）及DXM干预组（A3组、B3组）；用酶联免疫吸附（ELISA）法检测T淋巴细胞培养上清液中γ干扰素（IFN-γ）及白细胞介素4（IL-4）的水平，用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测T淋巴细胞T-bet mRNA、GATA-3 mRNA的表达水平。结果 A组3、24hT淋巴细胞培养上清液中IFN-γ、IFN-γ／IL-4和T淋巴细胞的T-bet mRNA、T-bet mRNA／GATA-3 mRNA水平分别为357±31、783±47、5．5±1．0、8．4±1．5、18．7±3．7、11．9±2．9、1．20±0．11、0．290±0．020．与B组3、24h（659±41、1394±120、11．5±3．0、17．4±4．0、29．0±4．0、18．9±4．0、3．82±0．81、0．870±0．090）比较差异有统计学意义（t值分别为18．59、5．95、14．87、6．25、6．06、4．63、10．23、18．67，P均〈0．05），A组3、24h IL-4、GATA-3 mRNA水平分别为65±6、96±9、16．4±4．2、41±6，与B组3、24h（57±5、83±7、7．8±2．2、23±4）比较差异有统计学意义（t值分别为3．19、3．90、5．77、7．76，P均〈0．05）；A、B组T淋巴细胞培养上清液中IFN-γ、IL-4、IFN-γ／IL-4在3h水平分别为357±31、65±6、5．5±1．0、659±41、57±5、11．5±3．0，与24h（783±47、96±9、8．4±1．5、1394±120、83±7、17．4±4．0）水平比较差异有统计学意义（t值分别为23．8、9．48、5．03、18．21、9．01、3．53，P均〈0．05）：A、B组T淋巴细胞T-bet mRNA和T-bet mRNA／GATA-3 mRNA在3h时分别为18．7±3．7、1．20±0．11、29.0±4．0、3.82±0．81，与24h（11．9±2．9．0．290±0．020、18．9±4．0、0．870±0．090）水平比较差异有统计学意义（t值分别为4．62、5．66、29．67、11．5，P均〈0．05），但A、B组GATA-3 mRNA在3h（16．4±4．2．7．8±2．2）的水平，分别低于24h（41±6、23±4）水平（t值分别为10．70、10．11，P均〈0．05）；A组T淋巴细胞T-bet mRNA表达与T淋巴细胞培养上清液中IFN-γ呈正相关r=0．581，P〈0.05），与IL-4呈负相关（r=-0．493，P〈0．05）；A组GATA-3 mRNA表达与IFN-γ呈负相关（r=-0.501，P〈0．05），与IL-4呈正相关（r=0．579，P〈0．05）；A组T—bet mRNA／GATA-3 mRNA比值与IFN-γ/IL4比值呈正相关（r=0．696，P〈0．05）。结论 罗格列酮通过影响哮喘急性发作期患者T淋巴细胞T-bet和GATA-3的表达，从而调控IFN-γ和IL-4的平衡。