柔肝通络汤对MCAO大鼠自噬蛋白Beclin1及LC3表达的影响

目的 从细胞自噬的角度探讨柔肝通络汤治疗脑缺血再灌注损伤的作用机制。方法 将120只SD大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组及柔肝通络汤组。空白组不予处理,假手术组及模型组予蒸馏水灌胃,柔肝通络汤组柔肝通络汤灌胃,均预处理1周。末次灌胃30min后,建立脑缺血再灌注模型。按再灌注3、6、12、24h时间点进行大鼠神经功能缺损评分并取脑,进行神经功能评分、TTC染色、HE染色、免疫组化法检测Beclin1、LC3蛋白的表达。结果 与空白组及假手术组相比,模型组大鼠神经功能缺损评分升高(P<0.01),模型组与柔肝通络汤组均可见面积不等的梗死灶(P<0.01);模型组大鼠梗死侧脑组织细胞形态变性、坏死,出现噬神经细胞现象,且随时间增长而加重,Beclin1及LC3表达升高(P<0.01)。与模型组比较,柔肝通络汤组神经功能缺损评分下降(P<0.05),梗死面积有所减小,差异有统计学意义(P<0.05)。且柔肝通络汤组各亚组较模型组细胞形态损伤明显减轻,Beclin1及LC3表达均降低(P<0.01)。结论 柔肝通络汤能改善大鼠神经功能缺损,缩小脑梗死灶,...     

柔肝通络汤对脑缺血再灌注损伤大鼠Bcl-2蛋白表达的影响

目的 探讨柔肝通络汤对脑缺血再灌注损伤大鼠Bcl-2蛋白表达的影响.方法 将78只SD大鼠随机分为5组:假手术组、模型组及柔肝通络汤高、中、低剂量组.假手术组及模型组连续1周灌胃蒸馏水.柔肝通络汤各剂量组分别给予高、中、低剂量的柔肝通络汤灌胃,最后一次灌胃30 min后,制成大脑中动脉栓塞模型,保持缺血状态2h后,分别...     

柔肝通络汤对脑缺血大鼠外周血内皮祖细胞影响的实验研究

目的:观察柔肝通络汤对脑缺血大鼠内皮祖细胞(Endothelial Progenitor Cells,EPCs)的影响,探讨其改善脑缺血神经功能缺损的可能机制。方法:采用线栓法制备大脑中动脉闭塞的脑缺血大鼠模型,随机分为0.9%氯化钠注射液组、辛伐他汀组、柔肝通络汤组,每组各10只;另取10只设为假手术组。各组分别于造模成功后第1天开始灌胃给药,连续7d。采用Longa神经功能评分评价造模术后3h及给药前后各组大鼠神经功能缺损情况,于造模前及给药前后使用CD_(34)、CD_(133)双抗体标记结合流式细胞仪检测各组大鼠外周血EPCs数量。结果:各治疗组给药前Longa评分均较造模术后3h降低;给药后Longa评分柔肝通络汤组、辛伐他汀组均低于0.9%氯化钠注射液组,且柔肝通络汤组低于辛伐他汀组,差异均有统计学意义(P0.01);急性脑缺血发生后,大鼠外周血CD_(34)+CD_(133)+EPCs数量先下降再上升,柔肝通络汤与辛伐他汀可使EPCs数量增加,且柔肝通络汤作用优于辛伐他汀。结论:柔肝通络汤可能通过增加EPCs数量及功能来促进大鼠脑缺血后神经功能的恢复。     

针刺对大鼠全脑缺血后神经元凋亡的影响

目的 :探讨针刺对大鼠脑缺血后神经元凋亡的影响 ,揭示针刺脑保护机理。方法 :采用“4 -动脉阻断”方法来建立大鼠全脑缺血模型 ;用神经元尼氏体亚甲兰特殊染色法观察大鼠脑缺血后海马CA1区神经元损害情况 ;原位细胞凋亡检测法 (TUNEL染色 )及电镜观察脑缺血后大脑皮层、海马CA1区神经元凋亡情况。结果 :与假手术组、针刺组相比 ,脑缺血组大脑皮层、海马CA1区神经元缺失明显 (P <0 .0 1)。脑缺血组、针刺组大脑皮层、海马CA1区均存在神经元凋亡 ,但针刺组大脑皮层、海马CA1区凋亡神经元数明显少于脑缺血组 (P <0 .0 1)。结论 :经“4 -动脉阻断”方法建立的大鼠全脑缺血模型证实了针刺的脑保护作用。全脑缺血后的迟发性神经元死亡很可能经由凋亡途径 ,而针刺可通过抑制缺血性神经元凋亡而发挥一定的神经保护作用。     

参芪通络注射液对缺血再灌注损伤大鼠脑组织钙含量及血CK-BB的影响

目的：探讨中药参芪通络注射液对缺血再灌注损伤大鼠脑组织钙含量及血肌酸磷酸激酶脑型同功酶（CK-BB）的影响.方法：采用4血管法造成缺血再灌注脑损伤模型,分别给予不同剂量参芪通络及复方丹参注射液,观察对脑组织钙含量及血CK-BB的影响.结果：高剂量参芪通络注射液对脑组织钙含量和血CK-BB有显著降低作用,与复方丹参组比较存在显著性差异（P＜0.05）.结论：参芪通络注射液有抗缺血再灌注脑损伤作用.     

小柴胡汤预处理对肝脏缺血再灌注损伤大鼠肝内胆管上皮细胞凋亡的影响

目的:观察小柴胡汤对肝脏缺血再灌注损伤大鼠肝内胆管上皮细胞凋亡以及胆汁中Glu、GGT、AKP水平改变的影响.方法:将大鼠36只随机分为缺血再灌注(IR)组、假手术(SO)组,小柴胡汤预处理(XP)组,肝脏缺血时间为30min,于再灌注120min末引流胆汁,取肝脏标本,观察各组大鼠胆汁中Glu、GGT、AKP水平变化,并通过原位末端标记法检测肝内胆管上皮细胞凋亡情况.结果:IR组胆汁中Glu 、GGT、AKP含量均明显高于SO组(P＜0.01);XP组则显著低于IR组(P＜0.01).IR组胆管上皮细胞凋亡指数(AI)明显高于SO组,差异具有高度显著性(P＜0.01),凋亡细胞主要见于肝内大胆管,SO组凋亡的胆管上皮细胞罕见;XP组胆管上皮细胞凋亡指数(AI)明显低于IR组,差异具有显著性(P＜0.01).结论:肝脏缺血再灌注损伤能促进肝内胆管上皮细胞凋亡的发生,小柴胡汤预处理可减轻肝内胆管上皮细胞损伤.     

参芪通络注射液对缺血再灌注损伤大鼠脑组织钙含量及血CK-BB的影响

目的:探讨中药参芪通络注射液对缺血再灌注损伤大鼠脑组织钙含量及血肌酸磷酸激酶脑型同功酶(CK-BB)的影响.方法:采用4血管法造成缺血再灌注脑损伤模型,分别给予不同剂量参芪通络及复方丹参注射液,观察对脑组织钙含量及血CK-BB的影响.结果:高剂量参芪通络注射液对脑组织钙含量和血CK-BB有显著降低作用,与复方丹参组比较存在显著性差异(P＜0.05).结论:参芪通络注射液有抗缺血再灌注脑损伤作用.     

芪菖治瘫口服液对脑缺血再灌注损伤大鼠脑细胞凋亡的影响

目的观察芪菖治瘫口服液对脑缺血再灌注损伤大鼠脑细胞调亡的影响。方法利用先后夹闭大鼠双侧颈总动脉、基底动脉的方法制备大鼠脑缺血再灌注损伤模型,测定假手术对照组、模型对照组、各给药组大鼠各部位脑组织凋亡细胞数。结果各给药组凋亡细胞数均不同程度地低于模型对照组,有显著的统计差异。结论芪菖治瘫口服液具有减少细胞凋亡的作用。     

芪棱汤对大鼠脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡的影响

目的:研究芪棱汤对脑缺血再灌注后,"缺血半暗带"神经元细胞凋亡的影响.方法:采用线栓加环扎法模型,运用TUNEL法,在脑缺血再灌注后不同时间点检测凋亡细胞数目的变化.结果:在再灌注各时间段,补阳还五汤及芪棱汤均能减少缺血半暗带神经元细胞的凋亡(P＜0.05),而芪棱汤的效果优于补阳还五汤(P＜0.05).结论:芪棱汤可以减少脑缺血再灌注损伤后细胞的凋亡,从而达到脑保护的作用.     

葛根素对大鼠局灶性脑缺血后神经元凋亡的影响

目的:探讨葛根素对大鼠局灶性脑缺血的保护作用。方法:采用线栓法制作大鼠大脑中动脉栓塞模型(MCAO),将动物随机分为假手术组、模型组、生理盐水组和葛根素组,用TTC法测量梗死体积,免疫组化法检测bcl-2和bax的表达水平,原位末端标记(TUNEL)法检测凋亡水平,流式细胞仪测定脑细胞凋亡率。结果:葛根素可有效提高大鼠局灶性脑缺血时脑组织中bcl-2的含量,并抑制bax的表达,降低凋亡细胞水平,并与剂量呈相关性。结论:葛根素可提高MCAO后脑组织中的bcl-2的含量,降低bax的含量,减轻神经元凋亡。     

槐定碱对永久性大脑中动脉栓塞大鼠脑细胞的作用及机制研究

目的 探究槐定碱对永久性大脑中动脉栓塞(permanent middle cerebral artery occlusion,pMCAO)大鼠脑细胞的作用及机制.方法 SD大鼠随机分为对照组、模型组和槐定碱低、中、高剂量(2.5、5.0、10.0 mg/kg)组,给予槐定碱5d后,建立pMCAO大鼠模型.考察槐定碱对p...     

复方北芪口服液对大鼠大脑中动脉阻塞/缺血再灌流模型细胞凋亡的影响

目的　采用流式细胞仪检测复方北芪口服液对大鼠大脑中动脉阻塞 /缺血再灌流(MCAO/IR)模型细胞凋亡的影响 ,从细胞凋亡的角度探讨该药作用于脑缺血损伤的可能机制。方法　清洁级雄性SD大鼠 18只 ,随机分为模型组、假手术组、治疗组。取新鲜缺血侧脑海马制成单细胞悬液 ,进行凋亡的定量分析。结果　假手术组即可测得凋亡峰 ,模型组、治疗组细胞凋亡百分率明显高于假手术组 ,均有显著性差异 (P <0 .0 1) ;治疗组的百分率较模型组明显降低 ,有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论　复方北芪口服液有明显抗凋亡的作用 ,运用补肾益气活血法治疗缺血中风有着普遍的指导意义     

芍药苷对中动脉阻塞模型大鼠环氧酶通路表达的影响

目的探讨芍药苷对大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)诱导的环氧酶代谢通路表达的影响。方法 120只雄性SD大鼠,随机分为假手术组、模型组、芍药苷低、中、高(10、20、40 mg/kg)剂量组、尼莫地平组。线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血90 min,再灌注24 h模型。观察芍药苷对神经症状、梗死体积及脑含水量的影响,采用免疫组化SP法检测COX-2的表达情况,ELISA法测缺血侧额区皮质肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素1-β(IL-1β)、血栓素A2(TXA2)和前列腺素I2(PGI2)水平。结果芍药苷处理组较模型组能显著改善大鼠神经缺损症状,缩小梗死体积,降低缺血侧脑含水量,抑制COX-2阳性表达,减少TNF-α、IL-1β、TXA2的释放,提高PGI2水平。结论芍药苷可能通过抑制花生四烯酸的环氧酶代谢通路产生脑神经保护作用。     

补阳还五汤对脑缺血再灌注大鼠皮质神经细胞凋亡的影响

目的　研究补阳还五汤对脑缺血再灌注大鼠皮质神经细胞凋亡的影响。方法　将 36只SD大鼠随机分为 3组 :假手术组 (P ,n =12 )、模型对照组 (C ,n =12 )、补阳还五汤组 (B ,n =12 )。线栓法制作大鼠脑缺血再灌注模型 ,脑缺血再灌注 4 8h后TTC染色计算脑梗死体积 ,TUNEL染色检测神经细胞凋亡 ,免疫组化方法检测缺血侧皮质Bcl- 2 /Bax的表达 ,电镜观察线粒体的变化。结果　脑缺血再灌注后缺血侧皮质神经细胞凋亡增多 ,同时Bcl- 2表达减少 ,Bax表达增多 ,Bcl- 2 /Bax比值下降 ,线粒体肿胀且大多破裂。补阳还五汤干预后 ,细胞凋亡减少 ,脑梗死体积减小 ,Bcl- 2 /Bax比值上升 ,线粒体肿胀减轻。结论　补阳还五汤可能通过抑制神经细胞凋亡而减小脑梗死体积 ,其机制可能是通过上调Bcl- 2 /Bax比值 ,保护线粒体 ,防止发生线粒体通透性转变。     

加减地黄饮子预处理对局灶性脑缺血大鼠脑组织神经生长因子表达的影响

目的观察加减地黄饮子预处理对局灶性脑缺血大鼠脑组织神经生长因子(NGF)表达的影响及其可能的神经元保护机制。方法采用栓线法制作大鼠局灶性脑缺血损伤模型(MCAO)。将120只Wistar大鼠随机分成6组:空白组、假手术组、模型组、中药高剂量组、中药低剂量组、西药对照组,每组20只。连续灌胃7 d后,进行手术操作。HE染色法观察大鼠脑组织病理学改变;免疫组织化学法观察大鼠脑组织NGF的表达。结果低剂量、高剂量加减地黄饮子均能保护梗死区神经细胞,细胞结构较完整;增强梗死区脑组织NGF的表达。结论加减地黄饮子预处理可对局灶性脑缺血大鼠脑组织神经元起保护作用,其脑保护作用机制可能与调节大鼠脑组织NGF表达及保护梗死区神经细胞结构有关。     

大鼠大脑中动脉梗死模型的评价标准探讨

[目的]选择适合的评价方法及纳入排除标准,以提高对脑缺血模型是否成功的准确判定程度。[方法]采用线栓法建立Wistar大鼠的大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,用激光多普勒分别测量造模前、后局部脑血流量(rCBF)。分别在缺血后1、2、3、6、9、12、15、18、21、24 h进行Longa神经行为学评分,断头取脑,利用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法对脑梗死情况进行判定。[结果]经解剖和TTC染色验证,神经行为学评分法对44只MCAO大鼠模型判读准确,准确率为75.86%,结合解剖结果,准确率为86.21%。多普勒脑血流量检测法对51只模型MCAO大鼠模型判读准确,准确率为87.93%。结合解剖结果,准确率为100%。[结论]激光多普勒血流测量法对大鼠大脑中动脉梗死模型是否成功的判断具有良好的敏感性和准确性,尤其适用于超急性期大脑中动脉梗死模型的判定。     

Neuroprotective effect of Longshengzhi capsule following permanent middle cerebral artery occlusion in rats

ObjectiveLongshengzhi capsule (LSZC) is an optimized preparation based on the traditional Chinese Medicine formula Buyanghuanwu Decoction (BYHWD), and is approved by the China Food and Drug Administration for treating stroke-induced disability and vascular diseases. Herein, we examined the pharmacodynamics, anti-apoptotic and anti-oxidant actions, and potential mechanisms of action of LSZC following stroke in rats.MethodsPermanent middle cerebral artery occlusion (MCAO) was used as an ischemic stroke model. LSZC was administered intragastrically. We examined the survival rate, bodyweight, and neurological deficits in stroke rats. Brain infarct size was determined by 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride staining. Brain pathology was examined using hematoxylin and eosin staining, Nissl staining, and TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling staining. Malondialdehyde, catalase, superoxide dismutase, and glutathione levels were examined by commercial kits. Expression of Nrf2, heme oxygenase-1, Bax, Bcl-2, cleaved caspase-3, and caspase-3 proteins in brain tissue was measured by Western blot.ResultsLSZC markedly improved the survival rate and bodyweight, and reduced infarct volume and neurological deficit scores, in MCAO stroke rats. LSZC also significantly attenuated oxidative stress, as indicated by decreased expression of malondialdehyde, and upregulation of Nrf2, heme oxygenase-1, catalase, superoxide dismutase, and glutathione. Moreover, LSZC significantly decreased apoptosis, including a decrease in Bax and cleaved caspase-3 expression, and an increase in Bcl-2, as well as a reduction in numbers of apoptotic neurons.ConclusionLSZC treatment is neuroprotective against ischemic stroke, potentially via reducing oxidative stress and apoptosis. The Nrf2 and apoptotic signaling pathways may play important roles in the antioxidant and anti-apoptotic actions of LSZC.     

三七三醇皂苷对大脑中动脉梗塞大鼠行为学、病理形态学及血清白细胞介素-6的影响

目的:探讨三七三醇皂苷对大鼠脑梗死后不同恢复时点相关病理生理改变及对血清白细胞介素-6(IL-6)水平的影响。方法:采用线栓法制备大脑中动脉梗塞大鼠模型(MACO),研究三七三醇皂苷对大脑中动脉梗塞大鼠脑缺血后不同时间点的行为障碍、缺血组织病理形态及血清白细胞介素-6水平的影响。结果:阻断大脑中动脉后3d内,所有大鼠都出现程度不同的运动障碍,血清IL-6水平显著升高。三七三醇皂苷可减轻MCAO大鼠神经功能损伤表现,部分改善其活动度,明显抑制其血清中IL-6水平。结论:三七三醇皂苷能有效抑制级联反应中炎性细胞因子IL-6的产生,减轻或消除脑缺血级联反应中的炎症反应,发挥保护神经元的作用。     

针刺对局灶性脑缺血大鼠脑梗死灶周围皮质单羧酸转运体2表达的影响

目的:观察针刺对局灶性脑缺血大鼠脑组织单羧酸转运体(MCT)2表达的影响,探讨针刺治疗缺血性脑血管病的作用机制。方法:Wistar大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组和针刺组,每组20只。采用线栓法建立局灶性脑缺血大鼠模型。针刺组取百会风府曲池足三里,百会风府行平补平泻手法,曲池足三里连接电针仪,20min/次,每天1次,共7d。采用Longa神经功能缺损评分评价大鼠神经功能缺损情况;酶化学法检测脑梗死灶周围皮质乳酸脱氢酶(LDH)、果糖-6-磷酸激酶(PFK)和丙酮酸激酶(PK)的活力;免疫荧光检测脑梗死灶周围皮质MCT2的表达和定位;实时荧光定量PCR和Western blot法检测脑梗死灶周围皮质MCT2mRNA和蛋白的相对表达量。结果:与正常组和假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺损评分显著增高(P0.01);脑梗死灶周围皮质LDH、PFK、PK的活力显著降低(P0.01);MCT2阳性表达的荧光强度显著增加(P0.01);MCT2蛋白的相对表达显著升高(P0.01),MCT2mRNA的相对表达差异无统计学意义(P0.05)。与模型组比较,针刺组大鼠神经功能缺损评分显著降低(P0.01);LDH、PFK、PK的活力显著升高(P0.01,P0.05);MCT2阳性表达的荧光强度、MCT2蛋白和mRNA的相对表达量显著升高(P0.01)。结论:针刺可上调MCT2在脑梗死灶周围皮质中的表达水平,进而改善大脑能量供应和代谢,促进神经功能修复。