角蛋白19、癌胚抗原mRNA的表达与微转移的探测

目的：为了探讨癌症患者在开始接受治疗时是否已发生血液循环中癌细胞的微转移而进行此项实验。方法：以角蛋白19（K19）－mRNA及癌胚抗原（CEA）－mRNA两基因的表达为标记物；应用巢式－反转录聚合酶链反应（Nested-RT-PCR)进行扩增，再将产物在8％PAG上电泳，以银染色显色后进行分析。判断标准：结肠癌以两项表达皆阳性者为肯定有转移。单项阳性者为可疑，双项阴性者为无转移；卵巢癌以K19mRNA表达阳性为有转移，单项CEA阳性为可疑，双项阴性为无转移。结果：结肠癌组75例患者的门静脉血中肯定有转移者36例（48．0％）可疑者29例（38．7％），无转移者10例（13．33％）。35例之周围血肯定有转移者8例（22．86％），可疑者18例（51．43％），阴性9例（25．7％）。两种标本与正常对照组相比较缘有显著性差异（P＜0．005）。卵巢癌组50例患者之骨髓所测结果：阳性25例（50．0％），阴性23例（46．0％），可疑2例（4．0％），与对照组相比有显著性差异（P＜0．025）。周围血22例中阳性3例（13．63％），可疑1例（4．55％），阴性18例（81．82％）与对照组相比无显著性。对20例结肠癌患者作了动态观察，除手术时采血外并于出院时复查，结果20例中阳性加可疑仍占55％。结肠癌随临床分期早晚其阳性率亦随之上升：A＋B期38．89％、C期45．45％、D期70．59％。病理形态分化程度之高低与微转移亦呈正相关，分化较高者阳性率37．03％，分化较低者76．2％。结论：（1）入院时结肠癌有48．0％、卵巢癌有50％已发生微转移。说明临床上的早期并非实际早期。未接受化疗的结肠癌患者出院时仍有20．00％为阳性，说明手术不能消灭全部微转移，尚须及早进行化疗。（2）临床分期的进展及病理形态分化之高低皆与微转移呈正相关。（3）卵巢癌单检测K19即可诊断而肠癌以K19及CEA联合应用更可靠。（4）标本采集，结肠癌以门静脉血而卵巢癌则以骨髓为首选。     

细胞角蛋白19mRNA在非小细胞肺癌外周血中的表达及其对微转移的临床意义

目的通过检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血CK19 mRNA的表达,探讨其对外周血微转移的意义。方法 NSCLC患者170例,肺良性疾病患者20例和健康志愿者20例作为对照,均在治疗前抽取外周血,通过RT-PCR法检测CK19 mRNA的表达,结合随访资料和生存时间进行分析。结果 NSCLC患者的CK19 mRNA阳性率为46.5%(79/170),对照组为5%(2/40),差异有统计学意义(P<0.01)。外周血CK19 mRNA阳性患者的远处转移发生率为32.4%(24/74),高于阴性患者的发生率(17.1%,14/82;P<0.05)。全组无瘤生存时间为37个月,外周血CK19 mRNA阳性组和阴性组的无瘤生存时间分别为30个月和45个月(P=0.003)。结论 CK19 mRNA是一种检测NSCLC外周血微转移的较好方法,对判断病程发展和指导临床治疗具有重要意义,是预测复发转移和预后不良的辅助指标。     

K19 mRNA表达及其在诊断直肠癌淋巴结微转移中的意义

目的：研究角蛋白19（K19）mRNA在直肠癌区域淋巴结微转移中的表达及其临床意义。方法：通过病理组织学及逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）扩增K19mRNA对19例直肠癌患者的癌组织标本和51个淋巴结进行检测。结果：19例直肠癌患者癌组织均有K19mRNA表达;51个淋巴结中组织学阳性16个（31．4％）,而RT—PCR阳性21个（41．2％）,RT—PCR扩增K19mRNA及内参照β-actin后,所有癌组织及转移淋巴结显示221bp和461bp的扩增片断,而非肿瘤患者的8个淋巴结仅显示221bp扩增片断。结论：K19可作为检测直肠癌患者淋巴结微转移的分子标志物,RT—PCR扩增K19mRNA检测直肠癌区域淋巴结微转移可能是一种敏感、特异的检测方法,是对常规病理组织学方法的补充。     

RT-PCR检测K19 mRNA诊断直肠癌区域淋巴结微转移

目的：探讨RT—PCR检测K19 mRNA诊断直肠癌区域淋巴结微转移的价值及其应用前景。方法：通过病理组织学及RT—PCR扩增K19 mRNA对19例直肠癌患者的癌组织标本和51个淋巴结进行检测。结果：19例直肠癌患者癌组织均有K19 mRNA表达；51个淋巴结中组织学阳性16个（31．4％），而RT—PCR阳性21个（41．2％）。RT—PCR扩增K19 mRNA及内参照β—actin后，所有癌组织及转移淋巴结显示461bp和221bp的扩增片断，而非肿瘤患者的8个淋巴结仅显示221bp扩增片断。结论：RT—PCR扩增K19 mRNA检测直肠癌区域淋巴结微转移是一种敏感、特异的检测方法，优于常规病理组织学方法。     

RT—PCR检测K19 mRNA诊断直肠癌区域淋巴结微转移

目的：探讨RT—PCR检测K19 mRNA诊断直肠癌区域淋巴结微转移的价值及其应用前景。方法：通过病理组织学及RT—PCR扩增K19 mRNA对19例直肠癌患者的癌组织标本和51个淋巴结进行检测。结果：19例直肠癌患者癌组织均有K19 mRNA表达；51个淋巴结中组织学阳性16个（31．4％），而RT—PCR阳性21个（41．2％）。RT—PCR扩增K19 mRNA及内参照β—actin后，所有癌组织及转移淋巴结显示461bp和221bp的扩增片断，而非肿瘤患者的8个淋巴结仅显示221bp扩增片断。结论：RT—PCR扩增K19 mRNA检测直肠癌区域淋巴结微转移是一种敏感、特异的检测方法，优于常规病理组织学方法。     

CK19mRNA监测乳腺癌血行微转移的对照研究

目的：探讨乳腺肿瘤患者在不同时期癌微转移的可能性。方法：用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）方法对实验组60例乳腺癌患者外周血细胞角蛋白19（CK19）进行了检测。并以术后30例乳腺良性疾病和30例健康人作对照组。结果：实验组60例中,CK19阳性数分别为术前54例;术后综合治疗后19例、6个月～8个月复查23例,阳性率分别为90．0％、31．7％和38．3％;对照组30例乳腺良性疾病患者中,1例CK19阳性,阳性率为3．3％,正常健康人中无CK19阳性。两组比较有统计学意义（P〈0．01）,而治疗后与术后6个月～8个月复查的两组之间无显著性差异（P〉0．05）,其中40例有淋巴结转移的患者CK19阳性率为97．5％（39／40）,无淋巴结转移的20例患者CK19阳性率为75．0％（15／20）,两组比较有统计学意义（P〈0．05）。结论：CK19RT-PCR可以早期监测乳腺肿瘤患者发生血行微转移,提示CK19可作为一种较好的辅助诊断指标,为乳腺肿瘤进一步治疗提供依据,对治疗方案的选择和疗效评估有较大的意义,帮助综合判断预后。     

肺癌患者外周血癌胚抗原 mRNA和细胞角蛋白19 mRNA的联合检测

目的　观察肺癌患者外周血循环细胞中癌胚抗原 (CEA)mRNA和细胞角蛋白 19(CK19)mRNA的表达情况 ,并探讨CEAmRNA和CK19mRNA联合检测的临床意义。方法　用RT PCR方法 ,分别检测 5 0例肺癌患者、2 5例肺部良性疾病患者和 37例健康志愿者外周血中CEAmRNA和CK19mRNA的表达 ,并对CEAmRNA和CK19mRNA联合检测与单项检测的阳性率进行比较 ,分析联合检测对肺癌诊断的灵敏度与特异性。结果　 5 0例肺癌患者中 ,CEAmRNA阳性表达率为 6 0 .0 % (30 / 5 0 ) ,CK19mRNA阳性表达率为 38.0 % (19/ 5 0 ) ,两者联合检测阳性率为 82 .0 % (41/ 5 0 )。联合检测与单项检测相比 ,能显著提高诊断灵敏度 ,且并不影响特异性。联合检测与单项检测相比 ,灵敏度差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,特异度差异无显著性 (P >0 .0 5 )。同时 ,肺癌患者的联合检测阳性率亦均显著高于肺部良性疾病组 (2 5例 ,阳性率 2 8.0 % )和健康对照组 (37例 ,阳性率 8.1% ;P <0 .0 0 1)。结论　外周血循环细胞中CEAmRNA和CK19mRNA的联合检测可提高肺癌细胞向外周血播散的检出率 ;随访并扩大样本含量有助于探讨其在检测微转移中的意义     

CK19作为微转移癌检测基因标志的假基因干扰及解决方法

基因标志的选择是微转移得到正确检出的关键。细胞角蛋白家族中的ＣＫ19(ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ 19)作为上皮组织来源的组织特异性标志 ,是文献报道中检测微转移应用最多的基因标志 ,但研究报道结果不同 ,甚至相反。本研究目的在于验证ＲＴ ＰＣＲ方法检测ＣＫ19基因表达时存在的假基因干扰[1] ,并通过方法优化解决假基因干扰问题 ,从而建立适于临床应用的乳腺癌微转移检测方法。一、材料与方法1.标本选取和处理 :(1)阴性对照样本 :正常献血员外周血 18份 ,抗凝后经密度梯度离心分离单个核细胞 ;非上皮性肿瘤患者的淋巴结 12例。 (2 )阳性…     

无假基因干扰的CK19 RT-PCR方法检测乳腺癌外周血微转移

目的:以CK19为基因标志检测乳腺癌患者外周血中播散的肿瘤细胞,并对其临床意义进行评价。方法:采用优化的无假基因干扰的RT-PCR方法检测乳腺癌患者外周血有核细胞的CK19mRNA表达。结果:1)方法可靠性验证:检测30例正常人外周血CK19mRNA表达,结果无假阳性;将乳腺癌细胞系MCF-7以1∶107与正常外周血有核细胞混合,检测CK19mRNA表达,结果无假阴性。2)检测乳腺癌41例,外周血肿瘤细胞阳性检出率26.8%(11/41);乳腺癌患者外周血肿瘤细胞阳性率在患者不同年龄、肿瘤大小、临床分期、组织学分级、ER和PR状态的各组间差异无显著性(P>0.05);淋巴结转移阳性病例外周血肿瘤细胞检出率(38.1%)明显高于淋巴结转移阴性组(15.0%),虽然统计学差异不具有显著性(P=0.10),但提示淋巴结转移阳性的患者肿瘤细胞血行播散的危险性有增加的趋势。结论:以CK19为基因标志采用RT-PCR方法检测乳腺癌患者外周血中的肿瘤细胞可能是乳腺癌有意义的预后指标,可以为治疗方案的选择、治疗疗效的评价及外周血干细胞移植联合大剂量化疗适应证筛选提供重要依据。     

肿瘤细胞株和癌组织角蛋白19、20 mRNA表达及临床意义

目的　建立利用角蛋白检测外周血中循环癌细胞的方法 ,探讨角蛋白 19、2 0 (K19、K2 0 )在不同肿瘤细胞株和肿瘤组织中的表达。方法　采用定量逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)方法检测11个肺癌、食管癌、膀胱癌、大肠癌肿瘤细胞株和 33例相对应的癌组织中特异性K19、K2 0mRNA的表达。结果　 4种肿瘤细胞株及 33例相对应的癌组织均表达K19mRNA ,但表达量有明显差别。同种癌组织之间K19mRNA的表达量相差在 1.7～ 10倍之间 ,表达量最低者仅为阳性对照的 12 %以下。肺癌和食管癌细胞株和癌组织中均未见K2 0mRNA的表达。 6例膀胱癌组织中 ,仅有 1例呈阳性 ;5例肠癌组织中 ,4例呈阳性 ,表达量为阳性对照的 41%～ 77%。膀胱癌细胞株EJ1和肠癌细胞株SW480未见K2 0mRNA的表达。结论　K19、K2 0可作为检测外周血中循环癌细胞的生物标志物。但个别癌组织中K19、K2 0的表达低下 ,有可能导致检测出现假阴性结果。     

Tumor markers carcinoembryonic antigen, tissue polypeptide antigen, and carbohydrate antigen 19/9 in liver diseases

The tumor markers carcinoembryonic antigen (CEA), tissue polypeptide antigen (TPA), and carbohydrate antigen 19/9 (CA19/9) have been compared with regard to their sensitivity to liver diseases. All three markers have been found to be sensitive to liver diseases, but to a different degree: TPA rises the most; CEA the least. The sensitivities of TPA and CA19/9 are higher in a group of liver diseases than, for comparison, in a group of colorectal carcinomas.     

Diagnostic value of preoperative serum carcinoembryonic antigen and carbohydrate antigen 19-9 in colorectal cancer

Background

Since the first introduction of tumour markers, their usefulness for diagnosis has been a challenging question. The aim of the present prospective study was to investigate, in colorectal cancer patients, the relationship between preoperative tumour marker concentrations and various clinical variables.

Methods

The study prospectively enrolled 131 consecutive patients with a confirmed diagnosis of colorectal carcinoma and 131 age- and sex-matched control subjects with no malignancy. The relationships of the tumour markers carcinoembryonic antigen (cea) and carbohydrate antigen (ca) 19-9 with disease stage, tumour differentiation (grade), mucus production, liver function tests, T stage, N stage, M stage were investigated.

Results

Serum concentrations of cea were significantly higher in the patient group than in the control group (p = 0.001); they were also significantly higher in stage iii (p = 0.018) and iv disease (p = 0.001) than in stage i. Serum concentrations of cea were significantly elevated in the presence of spread to lymph nodes (p = 0.005) in the patient group. Levels of both tumour markers were significantly elevated in the presence of distant metastasis in the patient group (p = 0.005 for cea; p = 0.004 for ca 19-9).

Conclusions

Preoperative levels of cea and ca 19-9 might provide an estimate of lymph node invasion and distant metastasis in colorectal cancer patients.     

非小细胞肺癌患者外周血CK19 mRNA检测临床意义的探讨

目的:应用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)法检测肺癌外周血中的表达情况,并探讨其表达的临床意义。方法:用RT-PCR法检测98例肺癌患者外周血CK19 mRNA表达。结果:NSCLC组患者外周血CK19 mRNA的阳性率为77.55%(76/98),显著高于良性病变组的3.57%(1/28)和健康对照组的0,χ2=73.68,P<0.05;Ⅱ期〔87.50%(35/40)〕和Ⅲ期〔88.89%(24/27)〕NSCLC患者的阳性率显著高于Ⅰ期〔54.84%(17/31)〕患者的阳性率,χ2=13.453,P<0.05;淋巴结转移阳性和阴性患者的外周血中CK19 mRNA阳性率分别为89.55%(60/67)和51.61%(16/31),差异有统计学意义,χ2=17.523,P<0.05;而不同病理类型NSCLC患者外周血CK19mRNA阳性率之间差异无统计学意义,χ2=0.414,P>0.05。结论:肺癌患者外周血中CK19 mRNA表达较高可能与肺癌转移有关,检测CK19 mRNA对于早期判断患者转移和复发有一定的临床意义。     

结直肠癌及淋巴结组织CEA mRNA表达的实时荧光定量检测

目的:建立检测CEA mRNA表达水平的实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-PCR)方法,并探讨结直肠癌及淋巴结组织中CEA mRNA表达的应用价值。方法:应用SYBR Green Ⅰ作为荧光染料,以GAPDH作为内对照,建立检测CEA mRNA的FQ-PCR方法,并对56例结直肠癌组织、淋巴结组织CEA mRNA的表达水平进行检测。结果:CEA mRNA在结直肠癌组织中均表达,但表达水平在不同病理分化程度(P=0.8661)及不同Duke分期(P=0.2986)中无明显变化;在检测的231个淋巴结中,共有137个淋巴结CEA mRNA表达为阳性,表达水平为18.31±36.85,其阳性表达率为59.3%(137/231),明显高于常规病理检测[29.4%(68/231)],χ2=41.7497,P=0.0001;CEA mRNA在Duke C D期淋巴结中表达水平(32.85±53.49)显著高于Duke A B期(6.54±14.57),P=0.0001。结论:FQ-PCR方法简便、特异和可靠;比常规病理检查更加敏感,可有效补充常规病理检查的不足,在预测肿瘤微转移方面具有重要的临床应用价值。     

四种乳腺癌相关基因联合检测对乳腺癌诊断的临床应用研究

目的:探讨核内原癌基因(nuclear oncogene,MYC)、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(B cell lymphoma/leukemia 2 gene,Bcl-2)、细胞周期蛋白D1（Ccnd1）和细胞角蛋白19(cytokeratin 19,CK19)基因表达水平在乳腺癌诊断和治疗监测中的应用。方法:建立荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法,并以GAPDH为内对照测定34名健康女性体检者、55例良性乳腺疾病患者和91例乳腺癌患者外周血中MYC,Ccnd1,Bcl-2和CK19的表达量。结果:MYC,Ccnd1,Bcl-2和CK19表达水平与GAPDH的比值在乳腺癌组显著高于健康女性体检者和良性乳腺疾病患者（P<0.05）。它们在正常对照组和良性乳腺疾病组间差异无统计学意义（P>0.05）。四组GAPDH差异无统计学意义（P>0.05）。MYC,Ccnd1,Bcl-2与CK19联合检测的灵敏度高于单个基因的检测。结论:FQ-PCR技术可以快速定量检测MYC,Ccnd1,Bcl-2和CK19 mRNA,四者联合检测可有效提高对乳腺癌诊断的灵敏度。