非诺贝特对高甘油三酯血症并骨质疏松大鼠骨代谢的影响

目的探讨非诺贝特对去卵巢骨质疏松并高甘油三酯（TG）血症大鼠股骨中细胞核因子κB受体活化因子配体/护骨素（RANKL/OPG）mRNA表达的影响。方法将40只3月龄雌性SD大鼠,用果糖饲养复制高TG模型,大鼠共分为去卵巢＋果糖组、去卵巢＋果糖＋非诺贝特（FF）组、去卵巢＋普食组、假手术＋果糖组。12周后取股骨检测细胞核因子κB受体活化因子配体（RANKL）mRNA、护骨素（OPG）mRNA表达水平。结果去卵巢＋果糖组的TG水平高于去卵巢＋普食组（P〈0.01）,也高于去卵巢＋果糖＋FF组（P﹤0.01）;去卵巢＋果糖组RANKL mRNA/OPG mRNA水平,均高于去卵巢＋果糖＋FF组、去卵巢＋普食组和假手术＋果糖组（P〈0.01或〈0.05）。结论非诺贝特可通过降低TG而保持RANKLmRNA/OPGmRNA的平衡。     

RANKL/OPG系统与类风湿性关节炎

骨质重建是骨吸收和骨形成的动态平衡过程,破骨细胞是骨吸收的效应细胞。类风湿性关节炎(RA)致残的主要原因是关节软骨及骨的破坏,破骨细胞(OC)在RA骨破坏的病理过程中起关键作用。核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)／护骨素(OPG)系统对破骨细胞生成起决定作用,也是治疗RA的新靶点。     

OPG/RANKL/RANK系统及其临床应用

人OPG，RANK和RANKL是3个肿瘤坏死因子家族新成员，主要存在于人的骨髓及其他少数组织中。2000年美国骨与矿物质研究协会对其给予了标准化命名，并统称为OPG/RANKL/RANK系统。作为破骨细胞形成、分化和骨吸收调节的关键调节物，OPG/RANKL/RANK系统在骨质疏松、骨硬化病、类风湿性关节炎、骨肿瘤、Paget’s病、牙周炎及正畸牙移动等临床疾病的发病机制及治疗方面均取得了较大进展。     

姜黄素对佐剂性关节炎大鼠滑膜OPG和RANKL蛋白表达的影响

目的:通过观察姜黄素对佐剂性关节炎(Adjuvant arthritis,AA)模型大鼠滑膜病理、滑膜骨保护素(Osteoprotegerin,OPG)、核因子κB受体活化因子配体(Receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)表达的影响,探讨其防治类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)可能作用机制。方法:雄性SD大鼠以弗氏完全佐剂造模,分为模型组与姜黄素组,另有正常组,d 28处死所有大鼠行滑膜常规病理HE染色,并用Western blot法来检测滑膜RANKL、OPG蛋白的表达。结果:模型组大鼠滑膜炎性细胞浸润、纤维细胞及滑膜细胞的增生较正常组均明显增加(P<0.01),而姜黄素组的大鼠滑膜组织病理较模型组显著改善(P<0.01);姜黄素组大鼠的滑膜RANKL表达显著低于模型组,滑膜OPG表达显著高于模型组,RANKL/OPG比值显著低于模型组(P<0.01)。结论:姜黄素不仅改善AA大鼠关节滑膜病理学损伤,还可调节滑膜RANKL/OPG的比值。因此姜黄素可能通过调节OPG/RANKL系统来发挥对AA大鼠的治疗作用。     

RANK/RANKL/OPG系统与肿瘤

胞核因子κB受体活化因子/细胞核因子κB受体活化因子配体/骨保护因子(RANK/RANKL/OPG)系统在破骨细胞的活化、发育、成熟过程中起关键性作用,近年研究发现该系统也广泛参与骨肿瘤发生、肿瘤骨转移、细胞凋亡,这些研究为相关疾病的治疗提供了新的思路和方法,如重组OPG和人类RANKL单克隆抗体AMG-162的应用。     

OPG／RANKL在大鼠骨关节炎模型中的表达及意义

目的：检测骨保护素（OPG）和核因子Kβ受体活化因子配体（RANKL）在大鼠骨关节炎（OA）模型软骨下骨中的表达,探讨其与OA软骨下骨病变的关系及意义。方法：36只大鼠分两组。模型组行右膝前交叉韧带＋内侧副韧带横断术造模,对照组仅切开关节囊。术后2,6,8周取两组膝关节标本,观察外观、Mankin评分和骨形态计量参数变化,并检测软骨下骨中OPG和RANKL含量及其比值。结果：模型组软骨Mankin评分随时间逐渐增加（P〈0．01）;骨形态计量学显示造模后2周骨量降低,6、8周增加（P〈0．05）;模型组OPG含量由低变高,RANKL含量则由高变低,其比值逐渐增加（P〈0．01）。结论：OPG、RANKL在OA软骨下骨异常重建中起着重要作用。由此推测,在OA早期对其调控可能抑制异常骨重建,将是治疗OA的一种潜在有效方法。     

脊髓损伤大鼠骨组织微环境中RANKL/OPG表达的改变

目的研究脊髓损伤(SCI)大鼠骨组织微环境中RANKL/OPG表达的改变,探讨SCI对骨代谢的影响。方法 20只雄性6wSD大鼠,分为SCI组和Sham组。饲养3w后收集右侧胫骨测定骨密度,左侧胫骨切取后立刻液氮冷冻保存,一部分用于骨组织提取RNA,半定量RT-PCR分析RANKL、OPG、Col1α1、OCN基因的表达变化;另一部分用于酶免疫分析(EIA)方法测量骨组织中RANKL和OPG的含量。结果 3w时SCI组胫骨的骨密度明显低于Sham组,骨密度的下降既发生在胫骨近端干骺端(-26.3%,P0.05),又发生在胫骨干(-21.2%,P0.05)。RT-PCR检测表明,SCI后3w大鼠胫骨近端骨组织微环境中RANKL的表达显著上调(+122.2%,P0.01),OPG(-22.1%,P0.05)和OCN(-25.3%,P0.05)的表达显著下调。RANKL和OPG的表达改变也得到了EIA的证实。结论 SCI时RANKL过表达及OCN和OPG表达下调,提示SCI时易发生骨质疏松。     

周期性和持续性流体剪切力对成骨细胞OPG、RANKL蛋白表达的影响

目的:观察两种不同加载模式的流体剪切力(周期性或持续性)对MC3T3-E1成骨细胞增殖以及骨保护素(OPG)、细胞核因子k B受体活化因子配体(RANKL)蛋白表达的影响,同时探讨影响成骨细胞功能的最佳流体剪切力加载模式。方法:对MC3T3-E1成骨细胞分别加载生理强度为12 dyn/cm2的周期性流体剪切力或持续性流体剪切力。其中,持续性模式采用12 dyn/cm2的流体剪切力,加载成骨细胞2 h,静息2 h;周期性流体剪切力采用12 dyn/cm2流体剪切力加载成骨细胞30 min,然后静息3 0min,如此往复循环4次,总的加力时间为2 h。最后,MTT法检测不同加载模式下成骨细胞的增殖情况,Westernblot检测两组成骨细胞OPG、RANKL蛋白的表达影响。结果:MTT结果显示,两种加载模式的流体剪切力均能够显著促进成骨细胞的增殖(P<0.05),与持续性流体剪切力相比,周期性流体剪切力更能有效的促进成骨细胞的增殖(P<0.05)。另外,两种模式的流体剪切力均能有效地调控MC3T3-E1成骨细胞OPG、RANKL的表达(P<0.05)。但与持续性流体剪切力相比,周期性流体剪切力对成骨细胞OPG蛋白的促进作用更为显著(41.34%±5.37%vs 80.42%±4.19%,P<0.05);对成骨细胞RANKL蛋白的抑制作用更为明显[(24.17±5.92)%vs(8.45±2.18)%,P<0.05]。结论:与持续流体剪切力相比,周期性流体剪切力对成骨细胞增殖以及OPG、RANKL蛋白有更显著的调节作用。     

RANKL／OPG与人多发性骨髓瘤骨病的关系

多发性骨髓瘤(MM)是以骨髓微环境中浆细胞恶性增殖为特征的血液肿瘤。细胞核因子κB受体活化因子配基(RANKL) /护骨素(OPG)与MM发病关系密切。在MM中,存在RANKL表达上调、OPG表达下调;这种RANKL/OPG比率异常与MM骨病及骨病范围、MM的肿瘤负荷、分期和预后均有关。     

自拟补肾活血颗粒对去卵巢骨质疏松症大鼠的治疗作用

目的:观察自拟补肾活血颗粒(MBHG)对去卵巢大鼠骨质疏松症的治疗作用。方法:雌性SD大鼠,随机取10只作为假手术组(sham组),其余大鼠制备去卵巢骨质疏松症,随机分为:模型(model)组;补肾活血颗粒高(200 mg/kg)、中(100 mg/kg)、低(50 mg/kg)剂量组;阳性对照组(戊酸雌二醇组)。每组10只,连续灌胃给药12周。观察大鼠骨小梁形态,测量骨小梁的面积、厚度、间距及面积百分数,全自动分析仪检测血清中钙、磷和碱性磷酸酶(ALP)含量,测量大鼠骨密度(BMD),ELISA法检测血清雌激素(E2)、骨钙素(BGP)、骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化因子(RANK)和核因子κB受体活化因子配体(RANKL)水平。结果:与模型组比较,各给药组骨小梁显著变宽,数目增多,网状结构有部分恢复。各给药组骨小梁厚度、骨小梁面积和骨小梁面积百分数均大于模型组,骨小梁间距均小于模型组(P0.05)。各给药组血清中钙、磷、E2、OPG以及股骨BMD水平均显著高于模型组,ALP、BGP、RANK和RANKL水平均显著低于模型组(P0.01)。结论:自拟补肾活血颗粒对去卵巢大鼠骨质疏松症有显著的治疗作用。作用机制可能与上调OPG、抑制RANKL分泌有关。     

Preprotachykinin gene expression in the mediobasal hypothalamus of estrogen-treated and ovariectomized control rats

Summary We have determined the localization of preprotachykinin (PPT) mRNA-containing neurons in the mediobasal hypothalamus of the rat. PPT mRNA-containing neurons are present in the ventromedial nucleus (with a concentration in the ventrolateral aspect (VL-VM)), the dorsomedial nucleus, the lateral hypothalamus and the arcuate nucleus. This distribution is consistent with the findings of immunocytochemical studies of substance P-immunoreactive neurons in the hypothalamus. We have also examined whether PPT gene expression is regulated by estrogen in the VL-VM by comparing the levels of PPT mRNA in the VL-VM of ovariectomized rats and ovariectomized, estrogen-replaced rats. Both in situ hybridization and slot blot hybridization analysis revealed no changes in PPT mRNA content in the VL-VM following estrogen treatment. These results suggest that estrogen does not regulate lordosis behavior by affecting PPT gene expression in VL-VM neurons.     

低载荷机械振动对去势大鼠骨组织成骨相关蛋白表达情况的影响

目的通过对去势大鼠加载不同时段的低载荷机械振动,探讨不同的振动持续时间对骨质疏松大鼠骨组织成骨相关蛋白表达的影响。方法 6个月龄雌性Wistar大鼠24只,随机分为8周去势对照组(C8)、12周去势对照组(C12)、8周振动组(V8)和12周振动组(V12)。所有大鼠接受去势手术1周后开始实施振动试验,对V8组与V12组大鼠分别加载35 Hz、0.25 g的低载荷机械振动,每天15 min;去势对照组不做处理。8周与12周后分两批断颈处死大鼠,采用Western blot技术检测各组大鼠成骨相关蛋白BMP-2、p-ERK、Runx2、OCN的表达。结果低载荷机械振动能够显著上调去势大鼠骨组织BMP-2、p-ERK、Runx2和OCN的蛋白表达水平(P<0.01),随着振动时间的延长,V12组较V8组蛋白含量分别增加了22.61%(P<0.05)、27.96%(P<0.01)、25.85%(P<0.01)、27.05%(P<0.01);去势对照组间各蛋白表达水平无明显差异(P>0.05)。结论低载荷机械振动能够上调骨组织成骨相关蛋白的表达水平,并随着振动时间的增加显现出更为优越的成骨作用。     

去卵巢大鼠骨质疏松对下丘脑雌激素α受体的影响

目的 观察去卵巢雌性大鼠骨质疏松对下丘脑雌激素α受体(estrogen receptor alpha,ERa)及基基因表达的影响。方法 将45只SD大鼠随机分为对照组、假手术对照组和去卵巢组,用免疫组织化学方法和原位杂交方法检测下丘脑ERa及其mRNA表达。结果 去卵巢组ERa受体及其mRNA阳性细胞与对照组比较显著减少(P<0.01)。结论 下丘脑ERa受体及其mRNA阳性细胞的减少可能在绝经后骨质疏松发生起重要作用。     

不同剂量大豆异黄酮对去卵巢大鼠骨密度和血脂影响的研究

目的探讨不同剂量的大豆异黄酮对去卵巢大鼠骨密度和血脂水平的影响.方法选用43只10w龄性成熟SD雌性大鼠行去势手术,2w后采用完全随机的方法分为5组:阴性对照组(溶媒花生油灌胃)、阳性对照组(戊酸雌二醇500ng/g·BW·d)、大剂量组(大豆异黄酮2500μg/g·BW·d)、中剂量组(大豆异黄酮500μg/g·BW·d)和小剂量组(大豆异黄酮50μg/g·BW·d).分别于给药前和给药6周后测量总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDC)、低密度脂蛋白(LDL),并测量腰椎和股骨的骨密度.结果给大豆异黄酮6周后,大、中、小剂量组和阳性对照组腰椎骨密度均高于阴性对照组;大剂量纽骨密度的增加,有显著性差异(P＜0.05);中剂量组骨密度增加的程度和阳性对照组(戊酸雌二醇组)相似,但与阴性对照组比较无显著性差异(P＞0.05);大豆异黄酮对股骨骨密度无明显影响.大鼠去卵巢后TC和LDL下降,给大豆异黄酮后使TC和LDL进一步下降,以大剂量组最为显著,中剂量组的作用与阳性时照组相似,小剂量组无作用.结论大豆异黄酮具有雌激素样作用,能增加去卵巢大鼠的腰椎骨密度,进一步降低由于去卵巢引起的血清TC和LDL下降,它的作用强度与剂量呈正比.因此大豆异黄酮的作用值得进一步研究,以确定它是否具有临床价值.     

Anxiolytic property of estrogen related to the changes of the monoamine levels in various brain regions of ovariectomized rats

Anxiety is a symptom reflecting the dysregulation of monoaminergic neurotransmitters which may be modulated by estrogen. In our current study, we investigated the effects of chronic estrogen administration (10 microg/kg, s.c. for 4 weeks) on anxiety-like behavior using the elevated plus-maze with the corresponding changes of monoamines in the brain regions contributing to anxiety. The behavioral test revealed that estrogen-treated rats (Ovx+E(2)) spent more time in the open arm of the maze as well as a higher time/entry ratio in open arms than ovariectomized (Ovx) rats, indicating an anxiolytic property of estrogen. The increase in open arm time corresponded to an increase in uterine weight, indicated a correlation between the function of estrogen and its anxiolytic effect. Measurements of brain monoamines following estrogen treatment revealed decreases in norepinephrine, dopamine and serotonin in all of the brain regions studied, which also lead to an increase in turnover rates. The concentrations of norepinephrine in caudate putamen, of dopamine in nucleus accumbens, of serotonin in frontal cortex, hippocampus, caudate putamen, nucleus accumbens, and substantia nigra and of the serotonin metabolite, the 5-hydroxyindolacetic acid in substantia nigra of Ovx+E(2) rats were significantly lower than those of Ovx rats. Interestingly, the uterine weight was negatively correlated with the changes of dopamine and serotonin (with the exception of the hippocampus), suggesting a regulatory role of estrogen on these systems. From these data, we concluded that, in fact, there is a relationship between estrogen and monoamines (i.e. serotonin, dopamine) in modulating the anxiety-like behaviors in female rats.     

正常及关节盘移位后颞下颌关节滑膜OPG/OPGL的表达及意义

目的： 观察正常及关节盘移位后颞下颌关节滑膜内护骨素OPG及其配体OPGL的表达及意义。方法： 32只日本大耳白兔，25只建立颞下颌关节盘前移位的动物模型，术后1、2、4、8、12周处死，5只行模拟手术作为假手术对照，另2只不行手术作为空白对照。取颞下颌关节标本，HE染色观察镜下结构， S-P免疫组化法检测滑膜中OPG和OPGL的表达与分布。结果： 各实验组动物术后体重无减轻，伤口愈合良好，大体及显微镜下观察关节盘明显前移位。对照组OPG主要表达于滑膜下层血管内皮细胞及部分滑膜衬里细胞，滑膜内 OPGL无表达或鲜有表达。关节盘移位后，仅1、2周各1个样本滑膜下层少量OPGL表达，其它样本未见明显OPGL阳性细胞；OPG表达强度无减弱。结论： 正常颞下颌关节滑膜内OPG表达明显强于OPGL，对正常状态骨软骨代谢平衡的维持有重要意义；关节盘移位后OPG和OPGL无明显变化，保证了关节盘移位后骨软骨代谢能维持平衡。     

枸杞多糖通过调控PI3K/Akt/eNOS信号通路对去卵巢大鼠心肌产生抗氧化作用

目的:观察枸杞多糖对去卵巢大鼠心肌PI3K/Akt/e NOS信号通路的影响。方法:将30只SD雌性大鼠随机分为假手术组、去卵巢组、补佳乐组、枸杞多糖高剂量组及枸杞多糖低剂量组,ELISA法比较各组血清雌激素、LDH及CK水平,检测心肌H_2S含量及氧化应激损伤相关指标,HE染色观察各组心肌的形态变化,Western blot法检测各组大鼠心肌e NOS蛋白及PI3K/Akt通路蛋白的表达。结果:与假手术组相比,去卵巢组大鼠血清雌二醇水平降低,心肌H_2S含量和GSH-Px活性下降,心肌e NOS蛋白及PI3K/Akt通路蛋白的表达均有所降低,心肌ROS活性和MDA含量升高(P0.05),心肌细胞排列紊乱,细胞间隙增大,血清LDH和CK活性均增多;与去卵巢组比较,枸杞多糖高剂量组大鼠血清雌二醇含量增加(P0.05),心肌H_2S含量、GSH-Px活性、e NOS蛋白及Akt磷酸化水平均提高,心肌ROS活性和MDA含量下降(P0.05),血清LDH和CK活性均降低,并且改善大鼠心肌形态的变化。结论:枸杞多糖可以通过调控PI3K/Akt/e NOS通路改善去卵巢大鼠心脏变化防治绝经后心血管病变。