培美曲塞联合β-榄香烯对宫颈癌 HeLa 细胞增殖和凋亡的影响

目的：培美曲塞和β-榄香烯均可抑制肿瘤细胞的生长。文中探讨培美曲塞联合β-榄香烯对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响。方法体外培养宫颈癌HeLa细胞,将培美曲塞（浓度为38、76、152、228、304μg／mL）单独作用于HeLa细胞后24、48 h用MTT比色法检测细胞的增殖情况,实验分β-榄香烯组（125μg／mL ）、培美曲塞组（76μg／mL ）、联合用药组（培美曲塞76μg／mL,β-榄香烯125μg／mL）及空白对照组（0μg／mL）,24 h后用MTT法检测细胞的增殖情况,用流式细胞术检测24 h细胞的凋亡率。结果 MTT法显示,培美曲塞浓度在38、76、152、228、304μg／mL梯度范围内对HeLa细胞有抑制作用,随浓度增加,抑制率增强。38、76、152、228、304μg／mL的培美曲塞作用24后,增殖抑制率分别为（7．24±3．78）％、（7．94±4．37）％、（11．10±2．86）％、（15．88±3．38）％、（16．52±2．54）％;其中38、76、152、228μg／mL培美曲塞抑制率两两比较的差异有统计学意义（P＜0．05）。联合用药组24 h抑制率[（49．95±5．76）％]高于β-榄香烯组[（24．36±5．59）％]和培美曲塞组[（10．69±1．37）％],差异有统计学意义（P＜0．01）。结论培美曲塞与β-榄香烯联合应用可抑制HeLa细胞的增殖,协同促进HeLa细胞的凋亡。     

榄香烯对淋巴细胞辐射抗生效应的研究

目的 观察榄香烯对淋巴细胞的辐射抗性效应。方法 采用人外周血体外培养法，应用^3H-TdR(^3H-胸腺嘧啶核苷）和^14C-UR(^14C-尿嘧啶核苷）作掺入实验。分别用0.5、1、2Gy^60Coγ射线照射样品，榄香烯药物剂量为每0．1ml血液0.25μl、0．5μl、1μl、2μl。结果表明：0．5Gy和1Gy照射，药物剂量0．5μl和1μl榄香烯显著提高淋巴细胞DNA的辐射抗性（P＜0．05和P＜0．01），而0．25μl和2μl效应不显著（P＞0．05）。榄香烯同样表现出对0．5Gy和1Gy照射的淋巴细胞RNA的保护作用（P＜0．01）。未见榄香烯对离体淋巴细胞显著的毒性作用和免疫增强效应（P＞0．05）。结论 榄香烯对淋巴细胞DNA和RNA合成有一定辐射保护作用。     

连翘挥发油的成分分析及抗病毒活性的考察

目的：考察连翘挥发油及其主要成分α-蒎烯及β-蒎烯对甲、乙型流感病毒与乙肝病毒的活性。方法：①通过GC—MS分析翘挥发油的化学成分；②以2．2．15细胞为乙型肝炎病毒载体，分别测定它们抑制乙型肝炎病毒进行DNA复制和产生HBsAg、HBeAg的能力；③以MDCK（狗肾）细胞为病毒宿主，分别测定它们抑制病毒引起细胞病变的程度（CPE）。结果：①在最大无毒剂量时，即在连翘挥发油258．69μg／ml、α-蒎烯258．69μg／ml、β-蒎烯192．45μg／ml时，均无抗乙肝病毒活性；②连翘挥发油α-蒎烯、β-蒎烯的浓度分别是192．5μg/ml时，均无抗甲、乙型流感病毒活性；③连翘挥发油的主要成分是α-蒎烯及β-蒎烯，总相对含量为71．48％。结论：连翘挥发油、α-蒎烯及β-蒎烯均无抗甲、乙型流感病毒与乙肝病毒的活性。     

β-榄香烯联合卡铂对结肠癌SW480细胞放疗增敏作用的实验研究

目的探讨β-榄香烯联合卡铂对结肠癌SW480细胞放疗增敏作用。方法 2019年3—5月于海南省第三人民医院肿瘤中心分子生物实验室进行实验。收集SW480细胞分为SW480细胞组(培养环境为37℃、5%CO_2、20%O_2)、放疗组(放射剂量为8 Gy,时间为24 h)、β-榄香烯组(80.0μg/ml)、卡铂组(100μg/ml)、β-榄香烯联合卡铂+放疗组(β-榄香烯、卡铂浓度分别为80.0μg/ml、100μg/ml,放射能量为8 Gy,时间为24 h);培养结束后,MTT法测定细胞SW480细胞增殖情况、培养计数细胞克隆形成数目,流式细胞仪测定细胞凋亡水平、细胞周期、Matrigel跨膜细胞侵袭,RT-PCR法测定SW480细胞Caspase-3、Caspase-6基因表达,Western-blot法测定SW480细胞Caspase-3、Caspase-6蛋白表达。结果与SW480细胞组比较,放疗组、β-榄香烯组、卡铂组、β-榄香烯联合卡铂+放疗组SW480细胞OD值、存活率水平、克隆形成数目降低,凋亡率、G1期比例及Caspase-3、Caspase-6 mRNA/蛋白表达水平升高(F=16.365、21.654、25.654、15.654、18.598、19.987、25.654、32.365、26.987,P均=0.000);与放疗组、β-榄香烯组、卡铂组比较,β-榄香烯联合卡铂+放疗组SW480细胞OD值、存活率水平、克隆形成数目降低,G1期比例、凋亡率及Caspase-3、Caspase-6 mRNA/蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论β-榄香烯联合卡铂能增加结肠癌SW480细胞放疗敏感性,抑制结肠癌SW480细胞增殖、侵袭水平,提高凋亡水平,其机制与β-榄香烯联合卡铂能增促进SW480细胞Caspase-3、Caspase-6 mRNA和蛋白高表达有关。     

蚂蚁提取液对DNA-蛋白质交联修复能力的研究

目的探讨蚂蚁提取液（antextract,AE）对DNA-蛋白质交联（DPC）的修复能力。方法以甲醛为染毒液,预处理小牛胸腺DNA和卵清蛋白混合液,使之形成DPC,再用不同浓度的AE处理,最后采用SDS—KCl沉淀法来检测不同处理组的DPC修复情况。结果当甲醛染毒浓度为0．544mol／L时,10μg／ml的小牛胸腺DNA和10μg／ml的卵清蛋白DNA-蛋白质交联程度最高;制备2％的AE时,选择pH7．6的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液作为组织匀浆液,AE具有最强的DPC修复能力,且用pH3．6的柠檬酸一柠檬酸三钠缓冲液制备的AE也具有部分DPC修复能力;0．002％、0．02％、0．2％和2％的AE具有一定的DPC修复能力,且存在明显的浓度-效应关系。结论本研究确定了蚂蚁提取液制备过程中缓冲液的最佳pH值,并证明了蚂蚁提取液具有一定的DPC修复能力。     

奈达铂联合β-榄香烯对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨奈达铂（nedaplatin,NDP）联合β-榄香烯（β-elemene）对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响. 方法 体外培养宫颈癌HeLa细胞,分别将奈达铂（浓度为7.5,15,30,45,60 μg/ml）,β-榄香烯（浓度为25,50,100,150,200 μg/ml）,单独作用于HeLa细胞后24h、48h用MTT比色法检测细胞的增殖情况,并选取合适的药物浓度（奈达铂15μg/ml,β-榄香烯150 μg/ml）,进行联合用药,加药24 h、48 h后用MTT法检测细胞的增殖情况,用流式细胞术检测24 h细胞的凋亡率.结果 ①MTT法显示不同浓度β-榄香烯作用HeLa细胞24 h、48 h后,其增殖抑制率均明显高于正常对照组（P＜0.05）.奈达铂组除24h时7.5 μg/ml和15 μg/ml无显著差异外,其余各组增殖抑制率均明显高于相应正常对照组（P＜0.05）.②联合用药（奈达铂15 μg/ml,β-榄香烯150 μg/ml）时,对HeLa细胞的抑制作用显著高于单独用药（P＜0.01）. 结论 奈达铂、β-榄香烯单独或二者联合作用均能抑制HeLa细胞的增殖,且联合应用的作用显著高于单独用药,可协同促进HeLa细胞的凋亡.     

1,8-二羟基蒽醌修饰的钌配合物的合成及其与DNA相互作用的研究

目的用1,8-二羟基-9,10-蒽醌-醛-3与cis-Ru(bpy)2Cl2.2H2O为原料合成钌多吡啶配合物[Ru(bpy)2HAIP]2 (HAIP=(1,8-二羟基-9,10-蒽醌)咪唑[4,5-f][1,10]菲咯啉)(1),并对其与DNA的识别机理进行初步研究。方法采用元素分析、电喷雾质谱以及电子吸收光谱对目标化合物进行了表征,并采用电子吸收光谱、荧光发射光谱及热变性实验研究配合物与小牛胸腺DNA的识别作用。结果电子吸收光谱研究表明,当[DNA]/[Ru]=0.1,钌配合物1的特征MLCT(metal to ligandcharge transfer)荷移跃迁和IL(intraligand charge transfer)荷移跃迁的减色率分别为9%(Δλ=2 nm)和15%(Δλ=1 nm),根据EB-荧光淬灭实验结果计算得到了钌配合物1与DNA相互作用的表观结合常数约为5.13×104,热变性实验结果表明在钌配合物1存在下,小牛胸腺DNA的熔点温度升高约4.8℃,结论目标化合物1可能以非经典的插入模式与DNA分子结合。     

榄香烯对淋巴细胞辐射抗性效应的研究

目的　观察榄香烯对淋巴细胞的辐射抗性效应。方法　采用人外周血体外培养法 ,应用3 H -TdR(3 H-胸腺嘧啶核苷 )和14 C -UR(14 C -尿嘧啶核苷 )作掺入实验。分别用 0 .5、1、2Gy 60 Coγ射线照射样品 ,榄香烯药物剂量为每 0 .1ml血液 0 .2 5 μl、0 .5 μl、1μl、2 μl。结果表明 :0 .5Gy和 1Gy照射 ,药物剂量 0 .5 μl和 1μl榄香烯显著提高淋巴细胞DNA的辐射抗性 (P <0 .0 5和P <0 .0 1) ,而 0 .2 5 μl和 2 μl效应不显著 (P >0 .0 5 )。榄香烯同样表现出对 0 .5Gy和 1Gy照射的淋巴细胞RNA的保护作用 (P <0 .0 1)。未见榄香烯对离体淋巴细胞显著的毒性作用和免疫增强效应 (P >0 .0 5 )。结论　榄香烯对淋巴细胞DNA和RNA合成有一定辐射保护作用     

榄香烯对多药耐药人红白血病细胞株的影响

[目的]探讨抗肿瘤药β-榄香烯对多药耐药细胞系的影响。[方法]利用MTT,荧光染料Hoechst33342染色、透射电镜的方法观察β-榄香烯对多药耐药性(mdr)人红白血病细胞株K562/ADM细胞的生长和凋亡的影响。[结果]β-榄香烯对K562/ADM细胞的抑制作用在5~40μg/mL的药物浓度范围内呈上升趋势,加药组24~72 h范围内细胞凋亡率不断增加,浓度40μg/mL 72 h时达高峰62.73%±,二者呈现药物浓度和作用时间依赖性(P<0.05或P<0.01)。[结论]诱导细胞凋亡是β-榄香烯抗肿瘤细胞作用机制之一。     

β-榄香烯诱导人脑胶质瘤U251细胞凋亡的机制研究

[目的]探讨β-榄香烯（β-elemene,β-ELE）对人脑胶质瘤细胞株U251凋亡的诱导作用及对c-myc、hTERT、microRNA分子表达的影响。[方法]用β-榄香烯处理U251细胞株24小时,流式细胞术检测细胞凋亡;RT-PCR法检测c-myc、hTERT基因的表达;Western-blot检测cmyc、hTERT蛋白的表达;基因芯片检测β-榄香烯处理对细胞表达microRNA的影响,并以Real time-PCR法验证其中miR-654-3p、miR-431、miR-150和miR-1976的表达水平。[结果]β-榄香烯明显诱导U251细胞的凋亡,与对照组（0μg·ml-1β-ELE）相比,实验组（100,200,300μg·ml-1β-ELE）的细胞凋亡有所增加,凋亡程度随着β-ELE的浓度增大而增加,具有统计学差异;β-榄香烯抑制了c-myc、hTERT基因mRNA和蛋白的表达,与对照组（0μg·ml-1β-ELE）相比,实验组（50,100,150μg·ml-1β-ELE）的c-myc、hTERT基因mRNA和蛋白的表达水平都有所下降,下降程度随着β-ELE的浓度增大而增加,具有统计学差异;基因芯片和Real time-PCR[结果]显示,与对照组（0μg·ml-1β-ELE）相比,实验组（150μg·ml-1β-ELE）miR-654-3p、miR-431、miR-150和miR-1976的表达有所上调,具有统计学差异。[结论]β-榄香烯诱导了U251细胞凋亡抑制了c-myc、hTERT基因mRNA与蛋白的表达,显著上调了miR-654-3p、miR-431、miR-150和miR-1976的表达水平。因此,β-榄香烯诱导U251细胞凋亡的作用可能是通过其抑制c-myc、hTERT基因mRNA和蛋白的表达及上调microRNA来实现的。此机制为抗肿瘤药物的发展提供了一定的理论基础,值得进一步深入探讨。     

p38在榄香烯致鼠胶质瘤C6细胞周期阻滞中的作用

目的探讨莪术提取物——榄香烯对神经胶质瘤细胞的细胞周期的影响及相关机制。方法采用流式细胞分析、免疫印迹等方法分别检测榄香烯对大鼠胶质瘤细胞的细胞周期的影响和p38蛋白表达的变化,并观察p38抑制剂和其显性失活突变体对榄香烯作用的影响。结果经榄香烯40、60及80μg/ml处理后,细胞周期结果显示G0／G1期细胞百分数依次增加11％、16．95％、19．57％,且榄香烯可明显上调磷酸化p38蛋白表达,呈时间、剂量依赖性。SB203580及转染DN—p38能抑制p38的激活,阻断榄香烯的作用。结论榄香烯能诱导胶质瘤细胞的G0／G1期的阻滞,上调磷酸化p38蛋白质表达可能是榄香烯诱导C6细胞周期阻滞的机制。     

沉默Beclin1基因对β-榄香烯抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖与诱导自噬的影响

目的探讨Beclin1基因对β-榄香烯抗人胃癌SGC-7901细胞增殖及自噬诱导的影响。方法用前期实验构建成功的GV112-Beclin1-shRNA1(short hairpin RNA,短发夹RNA)慢病毒载体感染人胃癌SGC-7901细胞。采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测β-榄香烯对SGC-7901细胞增殖的抑制作用,以及沉默Beclin1基因后对β-榄香烯抗增殖能力的影响。免疫蛋白印迹(Western blot)检测自噬相关蛋白LC3-II、P62的表达,评价β-榄香烯作用SGC-7901后的自噬水平和Beclin1基因沉默对β-榄香烯诱导自噬的影响。结果 MTT法显示,β-榄香烯能够抑制胃癌SGC-7901细胞增殖,抑制作用随浓度的增加而递增(浓度为20、50、100μg/mL比0μg/mL时,抑制率为21.5%、31.7%、37.4%比0,P<0.05);沉默Beclin1基因后β-榄香烯抑制胃癌SGC-7901细胞抑制率增加(42.3%比36.1%,P<0.05)。Western blot法显示,β-榄香烯能诱导SGC-7901细胞发生保护性自噬,自噬相关蛋白LC3-Ⅱ表达上调,P62蛋白表达下降,沉默Beclin1基因可抑制β-榄香烯对SGC-7901细胞保护性自噬的增强,LC3-Ⅱ蛋白表达水平下降,P62蛋白表达增加。结论β-榄香烯可诱导胃癌SGC-7901细胞发生保护性自噬,下调Beclin1基因有助于降低保护性自噬的发生,从而增强β-榄香烯的抗癌效果。     

β—榄香烯抗癌作用与诱发肿瘤细胞凋亡的研究

β－榄香烯是从中药莪术中提取的抗癌有效成分。试验用ＭＴＴ方法、Ｈｏｅｃｈｓｔ３３３４２和ＰＩ荧光染色法及流式细胞术分析法，检测β－榄香烯乳剂对Ｋ５６２细胞生长的影响。结果提示：β－榄香烯明显抑制Ｋ５６２细胞的生长和诱导细胞凋亡，呈浓度和时间依赖性。对Ｋ５６２细胞的半数生长抑制剂量（ＩＣ５０）为１７．１４μｇ／ｍｌ。提示β－榄香烯诱导肿瘤细胞凋亡是其抗肿瘤作用的重要机制之一。     

β-榄香烯抗肿瘤作用和抑制微管蛋白体外聚合的研究

目的探讨β-榄香烯对微管蛋白体外聚合作用的影响，阐明其抗肿瘤的作用机制。方法采用MTT法测定β-榄香烯对体外培养的A549、WI38细胞增殖、生长的抑制作用；用浊度法测定β-榄香烯对提取的牛脑微管蛋白体外聚合的抑制作用。结果β-榄香烯能明显抑制A549、WI38细胞增殖、生长。其抑制作用呈浓度与时问依赖性；对A549、WI38细胞增殖的半数抑制率(1C50)分别为2．73μmol/L、3．53μmol/L。β-榄香烯明显抑制体外微管蛋白的聚合，并与药物浓度呈一定的线性关系，对微管蛋白体外聚合的半数抑制率(IC50)为5．12μmol/L。结论β-榄香烯对A549、WI38细胞增殖、生长有明显的抑制作用．β-榄香烯抑制微管蛋白的聚合是其抗肿瘤作用的重要机制之一，并与微管蛋白稳定剂紫杉醇的作用机理不同。     

β-榄香烯对人涎腺腺样囊腺癌SACC-83细胞中VEGF蛋白表达的影响

目的探讨β-榄香烯对人涎腺腺样囊腺癌SACC-83细胞中血管内皮细胞生长因子（VEGF）蛋白表达的影响。方法分别用浓度为40、60和80mg／L的β-榄香烯乳剂处理人涎腺腺样囊腺癌SACC-83细胞12h和24h。对照组仅换培养液，不加β-榄香烯。应用免疫组织化学S—P法检测VEGF在人涎腺腺样囊腺癌细胞中的表达。结果不同浓度的β-榄香烯对SACC-83细胞中VEGF蛋白的表达均有影响，与对照组两两相比，差异均有统计学意义（P均〈0．05）；以浓度为60mg／Lβ-榄香烯作用24h最强，但与其他实验组两两相比，差异均无统计学意义（P均〉0．05）。结论β-榄香烯可下调人涎腺腺样囊腺癌SACC-83细胞中VEGF蛋白的表达，为临床进一步防治涎腺腺样囊腺癌浸润转移奠定一定的理论基础。     

羊成骨蛋白对L929纤维母细胞DNA合成和细胞分裂作用的观察

本文报告羊成骨蛋白(sBMP)对L929纤维母细胞培养的DNA合成和细胞分裂作用结果。所加sBMP浓度为1～10μg/ml时,L929纤维母细胞培养72小时后,细胞计数明显高于对照组,可达对照组的1.5～1.8倍,其细胞DNA合成过程中~3H胸腺嘧啶摄入量显著增加,可为对照组的145～164％。sBMP浓度5μg/ml和10μg/ml组中,细胞连续培养10天,未见其形态发生异常变化。实验结果表明sBMP对纤维母细胞DNA的合成和细胞的有丝分裂有显著的促进作用,但无促分化的作用。     

β-榄香烯抑制人骨髓瘤细胞RPMI-8226增殖的实验研究

目的 研究β-榄香烯对人骨髓瘤RPMI-8226细胞增殖、周期和凋亡的影响.方法 用噻唑蓝(MTT)法检测β-榄香烯对骨髓瘤RPMI-8226细胞增殖的影响;Annexin V/ PI双标流式术检测β-榄香烯对骨髓瘤RPMI-8226细胞周期、细胞凋亡的影响;Hoechst33342/PI 双染荧光显微镜观察β-榄香烯处理后骨髓瘤RPMI-8226细胞形态学变化.结果 β-榄香烯对RPMI-8226骨髓瘤细胞生长具有显著抑制作用,呈浓度和时间依赖性.β-榄香烯处理后,与对照组相比G0/G1细胞比例显著升高,而S、 G2/M细胞比例降低.β-榄香烯作用48 h可诱导骨髓瘤细胞凋亡,凋亡率随药物浓度而递增.结论 β-榄香烯可有效抑制人骨髓瘤细胞增殖;其抑制作用与细胞周期阻滞和细胞凋亡激活有关.     

乌苯美司对JAR,SKOV3和3AO细胞体外生长的抑制作用

目的：观察乌苯美司对人绒毛膜癌和卵巢癌细胞体外生长的抑制作用。方法：应用MTT比色法观察不同浓度的乌苯美司(0．5g／L、1g／L、5g／L、10g／L、15g／L、20g／L)对人绒毛膜癌JAR细胞、卵巢癌3AO细胞和SKOV3细胞的生长抑制作用,溴乙啶和丫啶橙荧光染色荧光显微镜观察凋亡细胞DNA结构改变。结果：乌苯美司能抑制JAR细胞、3AO细胞和SKOV3细胞的生长,且对JAR和SKOV3细胞的抑制作用呈时效(r=0．412,r=0．339．P均=0.000)和量效(r=0.704,r=0．753,P均=0．000)关系、5g／L乌苯美司作用48h后荧光显微镜下见细胞染色质边聚,细胞核碎裂等凋亡改变。结论：乌苯美司通过细胞凋亡途径可抑制绒毛膜癌和卵巢癌细胞的生长。     

β─榄香烯抗肿瘤作用的实验研究──I β─榄香烯体外对L615白血病细胞直接作用的实验研究

本实验观察了β─榄香烯、莪术油及Ｔｗｅｅｎ８０在体外对Ｌ６１５细胞的直接作用。结果表明三种药物对Ｌ６１５细胞均有直接细胞毒作用，ＬＤ５０：β─榄香烯为２．５７μｇ／ｍｌ，莪术油为３１．２μｇ／ｍｌ、Ｔｗｅｅｎ８０为２９１．３μｇ／ｍｇ，三种药物都可致肿瘤细胞变性坏死，且有一定的灭能效果。     

β-榄香烯对肿瘤细胞上清液诱导的大鼠骨髓来源内皮祖细胞VEGF及VEGFR-2表达的影响

目的 观察β-榄香烯对肿瘤细胞上清液诱导的大鼠骨髓来源内皮祖细胞(EPCs)血管内皮生长因子(VEGF)及其受体mRNA表达的影响,进一步探讨β-榄香烯在抑制肿瘤血管形成过程中的作用.方法 原代培养大鼠EPCs.胃腺癌细胞株SGC-7901培养上清液诱导EPCs 12 h后,分别用0、5、10、20 μg/mL β-榄香烯干预48 h,用20 μg/mL β-榄香烯干预0、12、24、48 h.采用RT-PCR法检测各组EPCs VEGF和VEGFR-2的mRNA表达水平.结果 随着β-榄香烯浓度及作用时间的增加,EPCsVEGFR-2的表达明显下降;当β-榄香烯浓度增加至10 μg/mL及作用时间延长至24 h,EPCs VEGF的表达水平较对照组明显降低(P＜0.05).结论 β-榄香烯可降低EPCs VEGF及VEGFR-2 mRNA的表达水平,从而减少EPCs的动员,进一步抑制EPCs参与肿瘤血管的形成.