胶原刺激后血小板细胞骨架成分分布的变化

将正常血小板与用胶原刺激的血小板的胞浆部分与膜部分进行SDS-聚丙酰胺凝胶电泳(PAGE),并测定各部分的肌动蛋白激活的肌球蛋白Mg～(2+)-ATPase活力(AM-Mg～(2+)-ATPase)后发现:正常血小板膜部分所连接的肌球蛋白与肌动蛋白分别占血小板中此两种蛋白总量的26.40％)和31.55％。血小板受胶原刺激后则分别变为87.83％和42.17％。胞浆中的AM-Mg～(2+)-ATPase活力从正常的1.43±1.37nmolPi/min(每毫克肌球蛋白)升高到刺激后的4.66±1.51nmol Pi/min(每毫克肌球蛋白)。这些结果表明;血小板的胶原受体被结合后,有大量肌球蛋白和较少量肌动蛋白连接到胞膜上。另一方面,胞浆中的AM-Mg～(2+)-ATPase活力也明显增加。这些变化可能与血小板的形态变化和功能变化有密切关系。     

刺激型抗人血板McAb对人血小板细胞骨架蛋白的影响

The effects of monoclonal antibodies HIP2, APT4 and HI117 on the platelet cytoskeleton were investigated. The results showed that HIP2, APT4 and HI117 could induce an increase of platelet cytoskeleton materials in PRP. The action of HIP2 and APT4 could be obviously inhibited by the calmodulin inhibitor EBB. The inhibition rates of EBB were 76.3% and 48.95%, respectively. But EBB couldn't inhibit the HI117-induced an increase of platelet cytoskeleton materials. EBB could completely inhibit APT4-induced platelet aggregation(100%) and partially inhibit HIP2-induced platelet aggregation (14.26%). It couldn't inhibit HI117-induced platelet aggregation. These McAbs couldn't induce aggregation and actin mobilization in washed platelets in the presence of EDTA. The results indicate that platelet aggregation and the increase of actin induced by these McAbs, in addition to Ca2+, could be related to a factor or factors in the plasma. The Ca(2+)-CM system might play an important role in platelet aggregation and actin mobilization induced by HIP2 and APT4.     

刺激型抗人血小板McAb对人血小板细胞骨架蛋白的影响

本实验观察到HIP_2、APT_4和HI1173种刺激型McAb均能使PRP中血小板细胞骨架蛋白的主要成分肌动蛋白(actin)含量增加,而钙调蛋白抑制剂(EBB)则能显著抑制HIP_2和APT_4引起的肌动蛋白增加,抑制率分别为76.3％和48.95％,但不抑制HI117引起的肌动蛋白增加。此外,EBB能完全抑制APT_4引起的血小板聚集,部分抑制HIP_2引起的血小板聚集,不抑制HI117引起的血小板聚集。将3种刺激型McAb加入经0.3mmol/L EDTA溶液洗涤过3次的血小板悬液中,无透光度改变,也没有肌动蛋白动员,提示此3种McAb引起的血小板聚集及肌动蛋白动员除与Ca~(2+)有关外,还与血浆中某种(些)因子有关,Ca~(2+)—钙调蛋白系统在HIP_2,APT_4引起的血小板聚集及肌动蛋白动员中起着重要的作用。     

血小板胶原受体糖蛋白Ⅵ体外表达

目的利用基因重组技术体外表达血小板糖蛋白Ⅵ(GPⅥ)胞外区片段。方法采用PCR方法扩增GPⅥ胞外区片段cDNA，构建表达载体pET-20b( )-GPⅥ，转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS，经IPTG诱导表达。表达产物经Ni—NTA Resir。纯化后复性；使用Western blot方法鉴定重组蛋白性质。结果 PCR扩增产物经测序证明与GPVI胞外区cDNA序列完全一致；酶切分析证明成功构建了表达载体pET-20b( )-GPⅥ；原核细胞经诱导表达后出现新的相对分子量为32kd的蛋白条带，诱导产物以包涵体形式存在；Western印迹分析表明重组蛋白可与抗Penta-His抗体和抗GPⅥ多抗特异性结合。结论正确构建了GPⅥ表达载体并成功表达重组蛋白，纯化、复性后的重组蛋白具有良好的抗原性。     

~(60)钴全身照射对大鼠血小板细胞骨架与功能的影响

对血小板细胞骨架在照射后发生的变化及辐射对血小板功能的影响进行了研究. 大鼠经全身~(60)钴源丙种射线照射,当用ADP作诱导剂时,照射后3、6、9d的富血小板血浆(PRP)聚集率分别为对照组的135％、96％和O％;用胶原为聚集剂时,照射后的PRP均明显降低聚集能力。在照射后3d,大鼠的细胞骨架数量与成分大大增加。其中肌动蛋白与肌球蛋白等组分增加最为明显,同时还出现一些未知蛋白带。这些结果表明,照射后3d大鼠血小板处于激活态。照射后6d大鼠血小板细胞骨架成分和数量与对照组差别不大,而照射9d者的细胞骨架数量大大降低。     

血小板膜糖蛋白与胶原受体

血小板在止血、凝血反应中起重要作用,本文就粘附蛋白和血小板激动剂的胶原与血小板膜受体的相互作用进行了总结,重点介绍了三种主要胶原受体GPⅠa/Ⅱa、GPⅣ、GPⅥ.     

钙离子对血小板细胞骨架各组分相互作用的影响

为了研究血小板在受到刺激时细胞骨架排列变化的机理,作者研究了在有钙与无钙缓冲液中,肌动蛋白结合蛋白(ABP)、α-辅肌动蛋白和肌动蛋白三者的相互作用。结果表明,在无钙溶液中,α-辅肌动蛋白能增加ABP和肌动蛋白的相互作用。在有钙条件下,则可减弱ABP和肌动蛋白的相互作用。钙也能减弱与膜相连的细胞骨架成分的相互作用,因而增加了它们在含钙缓冲液中的溶解度。 根据这些结果,作者提出如下设想:在血小板活化时,胞浆内的Ca~(2+)浓度上升,可能通过减弱ABP、α-辅肌动蛋白和肌动蛋白微丝的相互作用,从而导致细胞骨架短暂解聚。这种解聚过程有利于细胞骨架微丝的重组和伪足形成。     

普鲁卡因胺对胶原和血小板激活因子诱导血小板聚集的影响

普鲁卡因腹对血小板聚集诱导剂ADP、花生四烯酸、凝血酶、CaCl2和α－受体激动剂可乐定等诱导的血小板聚集有明显的抑制作用，同时抑制花生四烯酸诱导血小板聚集后产生的TXB。。普鲁卡因腹也能降低血小板粘附，还能改善小鼠肺栓塞和降低MDA的产生。胶原和PAF是比较强的血小板聚集诱导剂。作者观察了普普卡因胺封胶原和PAF诱导兔血小板聚集的影响。1材料和方法普鲁卡因胺由北京制药厂生产。胶原和血小板激活困子（PAF）购自Sigma。新西兰免由第一军医大学实验动物中心提供。BS631型血小板聚集仪由北京生化仪器厂生产。胶原诱导血小…     

力学刺激对软骨细胞细胞骨架的影响

目的 探讨不同应力刺激下软骨细胞细胞骨架的荧光强度和形态分布的变化。方法 取新西兰兔关节软骨细胞,分离传代增殖然后将第3代软骨细胞分别给以3组不同的动态（1Hz,500με 1000με 1500με）和静态（0Hz,500με 1000με 1500με）力学刺激分组培养,然后行细胞骨架肌动蛋白（actin）、中间丝波形蛋白（vimentin）、微管（tubulin）的免疫荧光染色,吸光法对标本进行测定,分析荧光强度和细胞骨架分布的变化。结果 软骨细胞在未受到应力刺激时其分布相对分散并显示比较均匀,在力学刺激后,细胞骨架发生的排列和强度均发生了变化。vimentin在动态的力学刺激下荧光强度逐渐增强,Actin先减弱后逐步增强,而Tublin是先增强在减弱再增强。vimentin、actin和tublin的荧光强度在静态的力学刺激下有明显的一致性的变化,随压力的增加其强度明显的下降,其排列疏松变化明显。结论 在力学刺激下,细胞骨架发生的明显的变化,而在各种变化中,其变化和力学刺激的大小和时间和刺激的方式有关系。     

ITP的胶原诱导血小板聚集及出血时间的研究

目的:研究ITP的血小板聚集功能以及改良的模式法出血时间测定。方法:以正常人洗涤血小板悬浮于ITP患者PPP中,测定其对Adr、SJAMP、Ristocetin、collagen的诱导的聚集功能。结果:ITp患者血小板聚集功能障碍,模式法出血时间延长。结论:ITP患者血浆中有在抗血小板膜蛋白抗体,特别是与抗胶原受体(GPⅥ)抗体。     

免疫组织化学研究流行性出血热肾组织中细胞骨架蛋白和Ⅳ型胶原的改变

目的：研究流行性出血热（ＥＨＦ）尸检肾脏中细胞骨架蛋白和Ⅳ型胶原的变化以客观反映肾脏的损伤．方法：应用免疫组化方法，以抗平滑肌特异性肌动蛋白α链（α－ＳＭａｃｔｉｎ），结蛋白（Ｄｅｓｍｉｎ），波形蛋白（Ｖｉｍｅｎｔｉｎ），Ⅳ型胶原单克隆抗体评价肾小球的损伤；以抗Ⅳ型胶原、Ｖｉｍｅｎｔｉｎ单克隆抗体显示肾小管基底膜、血管和间质的改变；以抗细胞角蛋白（ＣＫ），角蛋白（Ｋｅｒａｔｉｎ），上皮细胞膜抗原（ＥＭＡ）单克隆抗体判断肾小管的损伤；ＰＣＮＡ和Ｖｉｍｅｎｔｉｎ显示肾小管的增生和分化．结果：ＥＨＦ肾脏肾小球固有细胞和基底膜中无显著的Ｄｅｓｍｉｎ，Ｖｉｍｅｎｔｉｎ和Ⅳ型胶原的变化；α－ＳＭａｃｔｉｎ和ＰＣＮＡ可作为增殖性或硬化性肾小球疾病中有用的诊断和判断预后的指标，在ＥＨＦ肾小球中几乎为阴性．在肾髓质严重出血部位，肾小管和血管基底膜的连续性破坏，结构消失，Ⅳ型胶原和Ｖｉｍｅｎｔｉｎ均为阴性，该部位大多数集合管被破坏，ＣＫ，Ｋｅｒａｔｉｎ和ＥＭＡ阳性染色消失．而梗死样坏死部位的肾小管基底膜Ⅳ型胶原染色均匀一致．间质中Ｖｉｍｅｎｔｉｎ，Ⅳ型胶原染色无明显异常．Ｖｉｍｅｎｔｉｎ在上皮细胞中表达是作为细胞增殖分化的标志     

血小板胶-胶原复合膜修复大鼠牙周组织缺损的疗效观察

目的探讨血小板胶（APG）．胶原（co）复合膜对大鼠牙周组织缺损的修复作用。方法将co分别裁成5mm×2mm及7mmx4mm大小,抽取大鼠全血10rnl制作富血小板血浆（PRP）,再将5mm×2mmCo浸润于PRP中制备APG-Co复合膜。将16只成年雄性Wistar大鼠随机平均分为实验组和对照组,分别制作大鼠下颌牙周骨缺损模型（缺损大小为5mm×2mm,磨除牙根面牙骨质）。实验组置APG-Co复合膜于缺损内,并于缺损表面覆盖7mm×4mm的Co。对照组仅用7mm×4mmCo覆盖缺损表面。术后4、6周每组分别处死4只,HE染色观察牙周组织缺损修复效果,Image-ProPlus对术后6周HE染色结果进行分析,计算出新生牙周骨面积,应用SPSS13．0软件对新生牙周骨面积进行统计学分析。结果实验组新生牙槽骨和牙骨质样组织的生成量和成熟度均优于对照组,术后6周实验组新生牙周骨面积显著高于对照组[（56533．04±2673．61）傩（23006．05±2198．10）μm^2,P〈0．05]。结论APG-Co复合膜有显著的促进牙周骨组织缺损修复的作用。     

修饰胶原的止血活性研究

目的探讨通过胶原侧链修饰,提高胶原材料的快速止血能力。方法通过胶原侧链修饰,制备带不同电荷的胶原,运用血小板聚集及动物创面止血模型评价材料止血活性。结果通过zeta电位分析表明,侧链修饰制得带不同电荷的胶原。血小板聚集实验表明甲基化胶原(MC)可以显著增强胶原同血小板之间的作用,其血小板聚集率均显著高于未改性胶原(NC)(P<0.001),而带负电荷的琥珀酰化胶原(SC)不能诱导血小板聚集(P<0.001)。动物创面止血模型中,MC的止血时间和出血量明显优于SC、明胶和NC。结论带正电荷的甲基化胶原可以有效促进血小板聚集活化,缩短材料的凝血时间,极大提高胶原材料的止血性能。     

细胞骨架在牵张刺激心肌细胞肥大过程中的作用

探讨细胞骨架在牵引刺激心肌细胞肥大过程中的作用。方法可变形膜上培养心肌细胞,采用＾３Ｈ－亮氨酸掺入法反映心肌细胞肥大指标和放射免疫测定培养上清血管张紧素Ⅱ和内皮素的含量,观察细胞骨架解 牵张刺激心肌细胞肥大的影响,结果４μｍｏｌ／Ｌ秋水仙素即可部分地抑制牵张刺激诱导的＾３Ｈ－亮氨酸反掺入,而细胞松驰素Ｂ对牵张刺激诱导的＾３Ｈ－亮氨酸反入无影响。牵张刺激细胞骨架解聚剂处理后后的培养上清刺激心肌细胞＾     

细胞骨架与牵张刺激诱导心肌细胞分泌生长因子的关系

目的：探讨细胞骨架与牵张刺激诱导心肌细胞分泌生长因子中的关系。方法：在可变形膜上培养心肌细胞,采用放射免疫法测定培养上清血管紧张素Ⅱ和内皮素的含量,观察细胞骨架解聚剂对牵张刺激心肌细胞分泌生长因子的影响。结果：牵张刺激可诱导心肌细胞c—fos蛋白、β—MHCmRNA表达显著升高,同时心肌细胞分泌血管紧张素Ⅱ和内皮素明显升高。而细胞骨架解聚剂不仅可显著抑制c—fos蛋白、β—MHCmRNA表达,同时,也明显抑制牵张刺激心肌细胞分泌血管紧张素Ⅱ和内皮素。结论：细胞骨架可能是介导牵张刺激诱导心肌细胞分泌细胞生长因子的重要途径。     

免疫组织化学研究流行性出血热肾组织中细胞骨架蛋白和Ⅳ型…

研究流行性出血热尸检肾脏中细胞骨架蛋白和Ⅳ型胶原的变化以客观反映肾脏的损伤。应用免疫组化方法，以抗平滑肌特异性肌动蛋白α链，结蛋白，波形蛋白，Ⅳ型胶原单克隆抗体评价肾小球的损伤，以抗Ⅳ型胶原，Ｖｉｍｅｎｔｉｎ单克隆抗体显示肾小管基底膜，血管和间质的改变；以抗细胞角蛋白，角蛋白，上皮细胞膜抗原单克隆抗体判断肾小管的损伤；ＰＣＮＡ和Ｖｉｍｅｎｔｉｎ显示肾小管的增生和分化。结果：ＥＨＦ肾脏肾小球固有细胞     

机采血小板献血者单采后血小板数量的变化

目的分析机采血小板人群的献血间隔和频采后的血小板数量改变,确保血小板的采集质量和献血者的自身健康。方法收集该站2010—2011年机采血小板献血者1 449例,检测第1次采集血小板和最后1次采集血小板的血小板数量。结果第一组(2～4次)降低了(5 042±1 282)/μL,第二组(5～7次)降低了(8 363±2 591)/μL,第三组(8～10次)降低了(12321±1 914)/μL,第四组(>10次)降低了(14 732±2 275)/μL。45岁以下年龄单采者平均降低了(14 768±2 865)/μL,45岁以上的单采者平均降低了(10 387±2 391)/μL。结论所有单采血小板者血小板数量降低,不过降低的血小板数量不足以引起临床症状,目前研究没发现对身体有何影响。     

大鼠减体积肝移植术后肝脏细胞骨架差异蛋白的表达变化

目的 利用蛋白质组学及相关技术研究大鼠减体积肝移植术后肝脏参与细胞骨架差异蛋白的表达变化.方法 实验首先用改良法建立Lewis-Wistar大鼠减体积肝移植模型,然后在术后1,3和7d获取移植术后肝脏组织,最后应用蛋白组学技术与预先获取的供、受体原肝脏组织建立双向凝胶电泳图谱,再利用串联质谱(MS-MS)分析及数据库对胶上差异表达的蛋白质点进行鉴定.结果 本次实验中所有蛋白质点采用变化倍数大于10倍为标准进行差异蛋白点的选择,结果总共发现了72个差异点,应用串联质谱分析和数据库等对差异质点进行分析和鉴定,发现有32个蛋白的功能比较明确,其中有3个差异表达的蛋白在减体积移植术后肝脏参与细胞骨架的过程,表达变化比较明显,差异蛋白质点总数占所有差异表达质点的7％.结论 应用蛋白质组学的技术研究大鼠减体积肝移植术后肝脏病理生理过程中细胞骨架差异蛋白的变化,对于进一步研究细胞骨架蛋白在肝移植术后肝脏病理生理过程中的作用及作用机理有重要的意义.     

低压缺氧大鼠肺外动脉胶原分布的变化

观察模拟５０００ｍ连续低压缺氧７ｄ肺动脉高压大鼠肺外动脉形态学的变化及Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维分布的变化，并观察川芎嗪、７６４－３两种中药的疗效。结果显示，低压缺氧在鼠肺外动脉以中、外膜增厚为主。苦味酸天狼星红－偏振光法观察表明肺外动脉主干事 膜浅黄色、黄色、约色Ｉ型和绿色Ⅲ型胶原纤维均增多，外膜以Ⅲ型胶原纤维增多最显著。川芎嗪治疗能部分缓解肺动脉主干和肺外分支增厚，并对主干的Ｉ、Ⅲ型胶原纤维的增加具有一