CTLL_2细胞增殖检测单核/巨噬细胞ADCC效应方法的应用研究

探讨ＣＴＬＬ２细胞增殖检测单核／巨噬细胞ＡＤＣＣ效应方法的应用价值，利用此方法检测比较了健康志愿者外周血单核细胞ＡＤＣＣ效应和非特异杀伤效应，ＬＰＳ刺激单核细胞前后其ＡＤＣＣ效应变化。结果表明检测单核细胞ＡＤＣＣ效应和非特异杀伤效应不存在相关性（Ｐ＞０．０５），活化后单核细胞ＡＤＣＣ效应较活化前明显增强（Ｐ＜０．０１），提示ＣＴＬＬ２细胞增殖检测单核／巨噬细胞ＡＤＣＣ效应方法是特异、灵敏的实验方法，为临床广泛研究单核／巨噬细胞ＡＤＣＣ效应提供一种可靠的检测手段。     

急性上呼吸道感染病人单核细胞ADCC效应的研究

目的；探讨急性上呼吸道感染病人单核细胞ＡＤＣＣ效应的变化，方法：利用细胞增殖检测单核／巨噬细胞ＡＤＣＣ效应方法，测定急性上呼吸道感染病人单核细胞ＡＤＣＣ效应及非特异杀伤效应，并以健康人作为对照组，结果：急性上感伴发热病人单核细胞活化前ＡＤＣ（ｎＡＤＣＣ）效应高于健康对照组（Ｐ〈０．０５），而活化后ＡＤＣＣ（ｓＡＤＣＣ）效应无明显变化；上感不伴发病热病人ｎＡＤＣＣ效应低于健康对照线（Ｐ〈０．０１），     

急性上呼吸道感染病人单核细胞ADCC效应的研究

目的：探讨急性上呼吸道感染病人单核细胞ADCC效应的变化。方法：利用细胞增殖检测单核／巨噬细胞周ADCC效应方法，测定急性上呼吸道感染病人单核细胞ADCC效应及非特异杀伤效应，并以健康人作为对照组。结果：急性上感伴发热病人单核细胞活化前ADCC（nADCC）效应高于健康对照组（P＜0．05），而活化后ADCC（sADCC）效应无明显变化；上感不伴发热病人nADCC效应低于健康对照组（P＜0．01）；上感病人无论发热与否其单核细胞非特异杀伤效应均高于健康对照组（P＜0．01）。结论：急性上呼吸道感染时发热者与无发热者ADCC效应不一致，单核细胞ApeC效应与非特异性杀伤效应功能状态可不一致。     

螺旋藻多糖对小鼠巨噬细胞及K细胞ADCC活性的影响

Ｃ（５７）ＢＬ／６Ｊ小鼠腹腔注射ＰＳＰ１００ｍｇ·ｋｇ（－１），连续１２ｄ，可明显促进小鼠Ｋ细胞ＡＤＣＣ活性，ＰＳＰ组Ｋ细胞毒指数（ＣＩ）比对照组升高５４．７％。在５ｍｇ／Ｌ～３２０ｍｇ／Ｌ浓度范围内，ＰＳＰ可促进体外培养的Ｃ（５７）ＢＬ／６Ｊ小鼠腹腔巨噬细胞ＡＤＣＣ活性，最适浓度为８０ｍｇ／Ｌ其ＣＩ值为对照孔的５．１４倍。     

单核巨噬细胞的计数方法研究

目的 摸索一种准确、简单、快速的计数单核巨噬细胞的方法，并对贴壁的单核巨噬细胞计数方法作了探讨。方法 用单核巨噬细胞染色液对鼠腹腔及肺泡灌洗细胞进行染色后计数。比较：(1)通过贴壁前后细胞总数的变化来计数贴壁的单核巨噬细胞数量。(2)通过四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT比色法)获得贴壁的单核巨噬细胞数量这两种计数方法的优缺点。结果 用单核巨噬细胞染色液计数，单核巨噬细胞被染成红至红褐色，而其它细胞不显颜色，计数比较容易，且具有良好的重复性。MTT法计数中，单核巨噬细胞数在10^3—10^5之间时与吸光度值成比较明显的直线关系。血细胞计数板计数贴壁细胞数比MTT。比色法具有更好的重复性。结论 单核巨噬细胞染色液是一种比较理想的计数单核巨噬细胞的方法。利用血细胞计数板计数贴壁前后白细胞总数的变化是一种最简单便捷的获得贴壁单核巨噬细胞数的方法。     

恒河猴外周血单核巨噬细胞体外培养方法的建立

目的 建立一种简单、经济、高效的培养恒河猴外周血单核巨噬细胞(monocyte-derived macrophage,MDM)的方法。方法 用肝素钠抗凝管采集成年恒河猴(Macaca mulatta)全血,密度梯度离心法分离外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)。同时用无抗凝剂采血管采集同一只猴外周血,自凝后分离血清。将猴PBMCs置于CellBIND Surface的96孔(0.8×10⁶个细胞/孔)或48孔培养板(3×10⁶个细胞/孔)中,用含不同百分比的猴自体血清或胎牛血清(fetal calf serum,FCS)的RPMI 1640培养液培养24 h后洗弃未贴壁细胞,加入含有猴自体血清或FCS的新鲜培养基继续培养7 d后观察细胞形态学。分化良好的猴单核巨噬细胞贴壁能力强,占据板底大部分区域。胞体形态多样,多数呈长梭形。用巨噬细胞标记受体(CD14)抗体染色判断细胞纯度。并用细菌内毒素(LPS)刺激分化的巨噬细胞,检测巨噬细胞炎性因子的表达。此外,用猴艾滋病毒(SIVmac17E-Br、SIVmac251)和人-猴嵌合体艾滋病毒(SHIV KU-1)感染分化良好的猴巨噬细胞,检测病毒在猴巨噬细胞中的复制。结果 在含2%猴自体血清的RPMI 1640培养条件下,大多数(>85%)猴单核细胞能在24 h内贴壁,体外分化5～7 d后,猴巨噬细胞纯度大于96%。相比而言,含较高浓度(4%,8%或10%)猴自体血清或FCS的RPMI 1640 培养基对猴单核细胞的贴壁和分化作用较差。分化良好的猴巨噬细胞对LPS刺激敏感,可产生多种巨噬细胞炎性因子。此外,这些细胞对SIV或SHIV均易感,产生感染性病毒。结论 含2%猴自体血清的RPMI 1640培养基适于原代猴单核细胞的贴壁和分化。该方法简单、花费少,无需生长因子,且分化效果好,是培养猴艾滋病毒及开展相关免疫学实验的重要手段。     

体外培养恒河猴外周血单核巨噬细胞的研究

目的：建立一种简单、经济、高效地培养恒河猴外周血单核巨噬细胞（monocyte-derived macrophage,MDM）的方法。方法：用肝素钠抗凝管采集健康成年中国恒河猴（Macaca mulatta）全血,密度梯度离心法分离外周血单核细胞（peripheral blood mononuclear cells, PBMCs）。同时用无抗凝剂采血管采集同一只猴外周血,自凝后分离血清。将猴PBMCs置于CELLBIND Surface的96孔（0.8×106个细胞/孔）或48孔培养板（3×106个细胞/孔）中,用含不同百分比的猴自体血清或胎牛血清（fetal calf serum,FCS）的RPMI 1640培养液培养24h后洗弃未贴壁细胞,加入含有猴自体血清或FCS的新鲜培养基继续培养7天后观察细胞形态学。分化良好的猴单核巨噬细胞贴壁能力强,占据板底大部分区域。胞体形态多样,多数呈长梭形。用巨噬细胞标记受体（CD14）抗体染色判断细胞纯度。并用细菌内毒素（LPS）刺激分化的巨噬细胞,检测巨噬细胞炎性因子的表达。此外,用猴艾滋病毒（SIVmac17E-Br、SIVmac251）和人-猴嵌合体艾滋病毒（SHIV KU-1）感染分化良好的猴巨噬细胞,检测病毒在猴巨噬细胞中的复制。结果：在含2%猴自体血清的RPMI 1640培养条件下,大多数（>85%）猴单核细胞能在24h内贴壁,体外分化5-7天后,猴巨噬细胞纯度大于96%。相比而言,含较高浓度（4%,8%或10%）猴自体血清或FCS的RPMI 1640 培养基对猴单核细胞的贴壁和分化作用较差。分化良好的猴巨噬细胞对LPS刺激敏感,可产生多种巨噬细胞炎性因子。此外,这些细胞对SIV或SHIV均易感,产生感染性病毒。结论：含2%猴自体血清的RPMI 1640培养基适于原代猴单核细胞的贴壁和分化。该方法简单、花费少,无需生长因子,且分化效果好,是培养猴艾滋病毒及开展相关免疫学实验的重要手段。     

哮喘患者CD8+T细胞对单核/巨噬细胞抗原递呈功能的影响

目的：探讨支气管哮喘患者CD8⁺T细胞对单核/巨噬细胞抗原递呈功能的影响。方法：哮喘患者20例，健康对照22例，分别取静脉血5 mL，并分离MΦ、CD8⁺T细胞和B细胞。每份血样分成4组：MΦ递呈抗原组、CD8⁺T细胞参与MΦ递呈抗原组、CD8⁺T细胞体外活化后对MΦ递呈抗原影响组及自然状态下CD8⁺T细胞对MΦ细胞递呈抗原影响组。各组用CTLL₂P抗原刺激18 h后，洗去刺激原，与自体B细胞共同孵育10 d，吸取上清液，测定特异性IgM、IgE、IgG含量。 结果:①哮喘患者MΦ单独递呈抗原，自体B细胞特异性IgM(A490值)（0.034±0.022）明显低于健康人(0.116±0.080)（P<0.05）；CD8⁺T细胞与MΦ共同培养递呈抗原时，产生的特异性IgM(A490值)(0.031±0.021)低于健康人(0.079±0.064)（P<0.05）；②哮喘患者CD8⁺T细胞与MΦ共同培养递呈抗原时，产生的特异性IgG(A490值)(0.102±0.041)明显高于健康人(0.081±0.067)（P<0.05），自然状态下及体外活化后CD8⁺T细胞与递呈抗原MΦ共同培养，产生的特异性IgG(A490值)(0.105±0.066, 0.079±0.059)与健康人(0.066±0.038, 0.069±0.047)无明显差别(P>0.05)；③哮喘患者CD8⁺T细胞与MΦ共同培养递呈抗原产生的特异性IgE(A490值)(0.171±0.154)高于健康人(0.147±0.059)（P<0.05）。 结论:哮喘患者CD8⁺T细胞对MΦ递呈抗原产生免疫球蛋白有调节作用,而且参与哮喘发病。     

Tuftsin对脾巨噬细胞、单核细胞表达HLA和B7-2的影响

本实验拟在国内首次化学合成Ｔｕｆｔｓｉｎ(Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ｐｒｏ Ａｒｇ)的基础上 ,初步探讨其对单核细胞和巨噬细胞表达ＨＬＡ ＤＲ、ＨＬＡ ＡＢＣ和Ｂ7 2功能的影响。1　材料和方法　　Ｔｕｆｔｓｉｎ按Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ｐｒｏ Ａｒｇ的结构由我校免疫学教研室在多肽合成仪上采用Ｆｍｏｃ保护固相法进行合成 ,合成Ｔｕｆｔｓｉｎ经毛细管电泳检测 ,纯度达 99.9% (详见文献 [1] )。取正常人新鲜血和切除人脾脏分离单核细胞和脾巨噬细胞 ,然后把细胞置于含 15 %小牛血清的 164 0培养液的 6孔培养板中 ,培养过夜后 ,洗去非粘附细胞 ,计数单…     

大肠癌患者手术前后NK和ADCC活性,sIL—2R表达水平的动态研究

肿瘤宿主的免疫功能常常受到一定程度的损害，且以细胞免疫功能受损为主。患者免疫功能的降低，常使病情进行性发展，导致肿瘤的转移、复发以及预后差[1]。为了研究大肠癌患者手术前后免疫功能变化的规律，以及这种变化对预后的影响，为临床更有效和合理地开展大肠癌的免疫治疗提供参考。我们对35例大肠癌患者手术前后NK（自然杀伤细胞）活性、ADCC（抗体依赖性细胞毒性）活性和sIL—2R（可溶性白细胞介素2受体）表达水平进行了动态研究。1材料与方法1.1观察对象：大肠癌患者35例，男24例，女11例，年龄37-70岁。全部病例经手术根治性切…     

应用胞浆乳酸脱氢酶检测法对乙肝患者ADCC和NK活性的研究

本文报导了应用胞浆乳酸脱氢酶检测法(LDH法)对各类乙型肝炎患者及慢性无症状携带者ADCC和NK效应进行研究,其结果表明在急性乙型肝炎的急性期,慢性迁移性肝炎、慢性活动性肝炎的活动期患者的ADCC和NK活性均显著低于健康对照组,而在各类乙肝患者的恢复期,ADCC和NK活性又回升到正常水平,和健康对照组无显著差异(P>0.05)。     

IL-2基因修饰对巨噬细胞杀瘤活性的影响

目的;观察ＩＬ－２基因修饰对小鼠腹腔巨噬细胞免疫效应功能的影响。方法：通过重组腺病毒介导,在体外将ＩＬ－２基因转染至小鼠腹腔巨噬细胞,检测ＩＬ－２基因修饰的巨噬细胞ＴＮＦ,ＩＬ－１和ＮＯ分泌水平及其杀伤活性。结果：ＩＬ－２基因修饰的巨噬细胞ＴＮＦ,ＩＬ－１和ＮＯ分泌水平显著提高,对巨噬细胞敏感株Ｌ１２１０细胞以及Ｒｅｎｃａ细胞的杀伤活性增强。结论：ＩＬ－２基因居噬细胞的细胞毒效应。本研究为ＩＬ－２     

靶向M2巨噬细胞的纳米药物体内抗肿瘤效应的初步研究

目的:探索靶向M2巨噬细胞的纳米复合物(MICE-NPs)在BALB/c小鼠肿瘤模型中的抑瘤效应及其相关机制。方法:建立BALB/c小鼠肿瘤模型,通过免疫组化法观察癌巢周围肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)的聚集情况;采用不同浓度纳米药物在小鼠体内进行急性毒性实验,从而获得后续实验纳米药物的合适浓度;利用荧光显微镜观察纳米药物在小鼠不同组织中的分布情况;通过肿瘤控制率的计算,评估MICE-NPs对小鼠肿瘤生长的抑制作用;采用流式细胞技术观察MICE-NPs对荷瘤小鼠病灶内免疫细胞组成的影响。结果:免疫组化结果表明,模型小鼠肿瘤微环境(TME)中存在大量TAMS及M2型巨噬细胞。急性毒性实验表明,MICE-NPs急性期毒性不明显,MICE-NPs具较好的安全性。荧光显微镜观察到在给药后24 h仍可于肿瘤组织中观察到较高水平的荧光显示,证明MICE-NPs可在肿瘤组织中蓄积。MICE-NPs的抑瘤实验证明高浓度MICE-NPs抑瘤效果良好。流式细胞仪结果显示,与对照组相比,纳米药物组小鼠的肿瘤组织中M2、Treg的比例下降,M1、CTL比例升高。结论:MICE-NPs体内实验未见明显毒副作用,抑...     

巨噬细胞TREM2信号通路与动脉粥样硬化的研究进展

动脉粥样硬化是大中动脉的慢性炎症性疾病,是众多心血管疾病的病理生理基础.巨噬细胞通过调节脂质浸润和炎症反应参与动脉粥样斑块的形成和发展.髓样细胞触发受体2(TREM2)是一种单次跨膜的免疫球蛋白超家族跨膜受体,能够增强巨噬细胞吞噬能力并抑制其炎性激活,促进巨噬细胞中的胆固醇流出,抑制其向泡沫细胞的转变.泡沫状TREM2...     

高糖对体外培养巨噬细胞MIP-2和MCP-1表达的影响

目的 观察高糖环境对体外培养巨噬细胞中趋化因子巨噬细胞炎症蛋白-2(MIP-2)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达的影响.方法 自小鼠腹腔灌洗液中提取巨噬细胞,分别用高糖型(含葡萄糖25.5 mmol/L,高糖组)和正常糖型(含4.5mmol/L葡萄糖,正常组)DMEM培养基进行体外培养,于不同时间点(0、2、4、8、12、24、48 h)收集上清及细胞,分别采用ELISA法和RT-PCR技术检测MCP-1、MIP-2蛋白和mRNA的表达,并进行统计学分析.结果 正常组巨噬细胞MIP-2、MCP-1蛋白和mRNA表达在各时间点无统计学差异(P>0.05).培养后4 h时,高糖组MIP-2蛋白和mRNA表达明显增高,以后逐渐下降;培养后8 h时,高糖组MCP.1蛋白和mRNA表达开始显著增高,12 h时达高峰,24、48 h时略有下降.结论 高糖环境可使体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞中MIP.2、MCP-1表达明显增加.提示在糖尿病创面愈合过程中,高糖可能通过刺激创面局部巨噬细胞表达趋化因子并导致炎症细胞持续存在而影响其愈合进程.     

高糖对体外培养巨噬细胞MIP-2和MCP-1表达的影响

目的 观察高糖环境对体外培养巨噬细胞中趋化因子巨噬细胞炎症蛋白-2(MIP-2)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达的影响.方法 自小鼠腹腔灌洗液中提取巨噬细胞,分别用高糖型(含葡萄糖25.5 mmol/L,高糖组)和正常糖型(含4.5mmol/L葡萄糖,正常组)DMEM培养基进行体外培养,于不同时间点(0、2、4、8、12、24、48 h)收集上清及细胞,分别采用ELISA法和RT-PCR技术检测MCP-1、MIP-2蛋白和mRNA的表达,并进行统计学分析.结果 正常组巨噬细胞MIP-2、MCP-1蛋白和mRNA表达在各时间点无统计学差异(P>0.05).培养后4 h时,高糖组MIP-2蛋白和mRNA表达明显增高,以后逐渐下降;培养后8 h时,高糖组MCP.1蛋白和mRNA表达开始显著增高,12 h时达高峰,24、48 h时略有下降.结论 高糖环境可使体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞中MIP.2、MCP-1表达明显增加.提示在糖尿病创面愈合过程中,高糖可能通过刺激创面局部巨噬细胞表达趋化因子并导致炎症细胞持续存在而影响其愈合进程.