人脐血造血祖细胞体外培养的研究

应用体外培养方法对人脐血造血祖细胞（ＣＦＵ－ＧＭ、ＣＦＵ－Ｅ、ＢＦＵ－Ｅ、ＣＦＵ－Ｆ）数量及其特征进行观察，并与成人外周血及骨髓相比较。结果显示：①脐血中ＣＦＵ－ＧＭ、ＣＦＵ－Ｅ、ＢＦＵ－Ｅ数量约相当于成人外周血的７～１８倍；ＣＦＵ－ＧＭ及ＣＦＵ－Ｅ数量与骨髓相比无统计学差异，但ＢＦＵ－Ｅ低于骨髓；②脐血中ＣＦＵ－ＧＭ的集落大小、细胞构成、集落生长曲线明显不同于成人外周血及骨髓；③脐血红系祖细胞生长模式近似于骨髓；④脐血中可培养出ＣＦＵ－Ｆ，其数量约为骨髓的２／５，而外周血中则无ＣＦＵ－Ｆ形成。提示人脐血中富含造血干／祖细胞，而且在数量和特征上明显不同于外周血和骨髓，在移植中可能更具有重建骨髓造血的能力。     

脐血中造血细胞的分离与祖细胞培养

目的 通过脐血粒单系造血祖细胞（ＣＦＵ－ＧＭ）培养，探讨其临床应用前景与价值。方法 琼脂半固体培养法，比较脐血、骨髓、外周血ＣＦＵ－ＧＭ，比较脐血４℃保存２，４，６天后，ＣＦＵ－ＧＭ回收率。结果 脐血ＣＦＵ－ＧＭ的平均产率接近骨髓，明显高于成人外周血，脐血４℃保存，ＣＦＵ－ＧＭ回收率２天为８５．５％，４天为３５．１％，６天为１０．１％，结论：脐血中富含造血干／祖细胞，为造血细胞移植提供新的来源。脐     

脐血造血干细胞特性研究

应用造血祖细胞体外培养和流式细胞术（ＦＣＭ），观察了脐血中粒一单系祖细胞（ＣＰＵ－ＧＭ）、红系祖细胞（ＢＦＵ－Ｅ）的数量和特性，并对其细胞增殖周期和骨贿及成人外周血做了比较，实验提示脐血中含丰富的ＣＦＵ－ＧＭ和ＢＦＵ－Ｅ，其数量低于成人骨髓而大大超过外周血水平，脐血红系祖细胞对ＥＰＯ、ＢＰＡ表现出更高的敏感性，而粒系祖细胞对ＣＳＦ的敏感性和骨髓比较似无明显差别．脐血Ｓ期、Ｇ２＋Ｍ期，及Ｓ＋Ｇ２Ｍ期细胞数均明显低于骨髓，虽略高于外周血各期细胞数，但差别无显著性意义．     

脐血清体外对急性白血病病儿化疗后造血细胞增殖的影响

①目的 探讨脐血清体外对急性白血病化疗后骨髓抑制期造血细胞增殖的影响。②方法 采用体外粒单细胞集落形成单位（ＣＦＵ－ＧＭ）培养法,观察正常成人血清和脐血清,对正常造血细胞和急性白血病化疗后抑制期骨髓造血细胞增殖的影响。③结果 脐血清组的正常骨髓ＣＦＵ－ＧＭ产率明显高于成人血清组（t＝６．９９３,Ｐ＜０．０１）,脐血清组的 白血病化疗后骨髓ＣＦＵ－ＧＭ产率亦高于成人血清组（t=３．０６０,Ｐ＜０．０５）。     

脐血清体外对急性白血病病儿化疗后造血细胞增殖的影响

①目的　探讨脐血清体外对急性白血病化疗后骨髓抑制期造血细胞增殖的影响。②方法　采用体外粒单细胞集落形成单位（ＣＦＵ－ＧＭ）培养法,观察正常成人血清和脐血清,对正常造血细胞和急性白血病化疗后抑制期骨髓造血细胞增殖的影响。③结果　脐血清组的正常骨髓ＣＦＵ－ＧＭ 产率明显高于成人血清组（ｔ＝ ６．９９３,Ｐ＜０．０１）,脐血清组的白血病化疗后骨髓ＣＦＵ－ＧＭ 产率亦高于成人血清组（ｔ＝ ３．０６０,Ｐ＜ ０．０５）。④结论　脐血清体外能促进正常骨髓和白血病化疗后抑制期骨髓造血细胞的增殖。     

脐带血、成人外周血的干祖细胞检测及CFU-GM与CD34~+细胞百分率相关性研究

本文利用桥联酶标ＡＰＡＡＰ技术，用ＣＤ３４＋单抗ＱＢＥＮＤ１０标记脐血和外周血造血干细胞，同时采用体外半固体培养法检测脐血和外周血ＣＦＵ－ＧＭ产率血，并对两者的相关性进行了分析。结果表明：（１）体外培养ＣＦＵ－ＧＭ产率，脐血为９６．０６±６３．３７，外周血为７．２４±６．２０，两者差异显著，Ｐ＜０．０１。（２）ＣＤ３４＋细胞百分率，脐血为１．６９±１．０６％，外周血为０．００６５＋０．００４７％，两者差异显著，Ｐ＜０．０１。（３）脐血ＣＦＵ－ＧＭ产率与ＣＤ３４＋细胞百分率呈正相关，Ｒ＝０．７５９，Ｐ＜０．０１，回归方程Ｙ＝０．０１２７Ｘ＋０．４６４９。外周血不相关Ｒ＝０．０４４７，Ｐ＜０．０５。提示采用桥联酶标法检测ＣＤ３４＋细胞百分率可以代替ＣＦＵ－ＧＭ用于预测脐血造血重建能力，由于该法简便、快速、敏捷，不需昂贵设备，值得推广和应用     

脐带血,成人外周血的干祖细胞检测及CFU—GM与CD34^＋细胞百分率？…

本文利用桥联酶标ＡＰＡＡＰ技术，用ＣＤ３４＾＋单抗ＱＢＥＮＤ１０标记脐血和外周血造血干细胞，同时采用体外半固体培养法检测脐血和外周血ＣＦＵ－ＧＭ产率血，并对两者的相关性进行了分析。结果表明：（１）体外培养ＣＦＵ－ＧＭ产率，脐血为９６．０６±６３．３７，外周血为７．２４±６．２０，两者差异显著，Ｐ〈０．０１。（２）ＣＤ３４＾＋细胞百分率，脐血为１．６９±１．０６％，外周血为０．００６５＋０．００４７     

人脐血粒单系及成纤维系祖细胞的体外培养

采用体外单层半固体琼脂培养法及液体培养法检测了脐血中CFU—GM和CFU－F，并与成人骨髓和外周血对照。结果显示：脐血培养7dCFU－GM产率约相当于成人外周血的5～6倍，但低于骨髓；培养14d的产率略高于骨髓，与骨髓培养7d结果相比无统计学差异；脐血中CFU－GM的集落大小、细胞构成明显不同于成人外周血及骨髓；脐血中可培养出CFU—F，但产率仅为骨髓的1／5，而外周血中则无CFU－F形成。提示人脐血富含造血祖细胞，且有不同于骨髓及外周血的性质。     

脐血血清对正常及白血病骨髓粒－单祖细胞生长的影响

利用粒－单祖细胞集落（ＣＦＵ－ＧＭ）的体外培养，观察脐血血清（ＵＣＳ）对正常及白血病骨髓造血祖细胞生长的影响，结果表明：ＵＣＳ对正常及急性白血病（ＡＬ）患者完全缓解的骨髓ＣＦＵ－ＧＭ形成有一定增殖作用，而对初发／复发未治ＡＬ患者的骨髓ＣＦＵ－ＧＭ形成无类似作用。     

当归注射液对正常人和再生障碍性贫血患者造血祖细胞的 …

本文采用体外造血祖细胞集落形成技术，观察了当归注射液对正常人和再生障碍性贫血（再障）患者骨髓红系（ＣＦＵ－Ｅ，ＢＦＵ－Ｅ）、粒系（ＣＦＵ－ＧＭ）的刺激增殖作用。实验结果表明：在正常骨髓培养体系中加入当归注射液后ＣＦＵ－Ｅ、ＢＦＵ－Ｅ、ＣＦＵ－ＧＭ产率均明显提高，以终浓度为５０μｇ／ｍｌ时最佳，以此浓度加入再障患者骨髓常规培养体系中，后者的ＣＦＵ－Ｅ、ＢＦＵ－Ｅ、ＣＦＵ－ＧＭ产率分别提高３６．２％、     

细胞因子及4℃保存对脐血造血干/祖细胞的影响

应用体外半固体培养方法,研究了粒巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭＣＳＦ）、白细胞介素３（ＩＬ３）、白细胞介素６（ＩＬ６）和促红细胞生成素（Ｅｐｏ）的不同组合及４℃保存对脐血造血干／祖细胞ＣＦＵＧＭ和ＨＰＰＣＦＣ产率的影响。结果表明：在琼脂半固体培养体系中,在不同组合的细胞因子作用下,脐血ＣＦＵＧＭ产率有明显差异;以ＧＭＣＳＦ组最低,ＧＭＣＳＦ＋ＩＬ３＋ＩＬ６＋Ｅｐｏ组最高。脐血置４℃保存４ｄ后,ＣＦＵＧＭ和ＨＰＰＣＦＣ产率明显降低。     

细胞因子及4℃保存对脐血造血干／祖细胞的影响

应用体外半固体培养方法,研究了粒巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、白细胞介素３（ＩＬ－３）、白细胞介素６（ＩＬ－６）和促红细胞生成素（Ｅｐｏ）的不同组合及４℃保存对脐血造血干／祖细胞ＣＦＵ－ＧＭ和ＨＰＰ－ＣＦＣ产率的影响。结果表明：在琼脂半固体培养体系中,在不同组合的细胞因子作用下,脐血ＣＦＵ－ＧＭ产率有是明显差异;以ＧＭ－ＣＳＦ组最低、ＧＭ－ＣＳＦ＋ＩＬ－３＋ＩＬ－６＋Ｅｐｏ组最高。脐血置４     

用小鼠骨髓内皮细胞条件培养液代替造血刺激因子培养CFU— …

利用大于１０ｋＤ组分的小鼠骨髓内此细胞条件培养液（ｍＢＭＥＣ－ＣＭ）作刺激物体外琼脂培养ＣＦＵ－ＧＭ,与ｍＧＭ－ＣＳＦ合用培养ＨＰＰ－ＣＦＣ获得成功。就培养ＣＦＵ－ＧＭ和ＨＰＰ－ＣＦＣ而言,用细胞因子作刺激物与并用大于１０ｋＤ组分的ｍＢＭＥＣ－ＣＭ作刺激物相比较,以后者的ＣＦＵ－ＧＭ及ＨＰＰ－ＣＦＣ产率最高。     

5．0 Gy放射损伤对小鼠早期骨髓造血基质细胞周期及其DNA含量的影响

取５．０Ｇｙγ射线照射后３ｄ和７ｄ的小鼠骨髓体外液体培养１４ｄ和２１ｄ，显示骨髓基质细胞仍能贴壁生长，但骨髓基质细胞集落（ＣＦＵ－Ｆ）数量显著低于正常，照后７ｄ的ＣＦＵ－Ｆ数量虽比照后３ｄ的ＣＦＵ－Ｆ数量有所增加，但恢复缓慢；延长培养时间，显示照射鼠的骨髓基质细胞增殖受抑。流式细胞仪检测结果表明Ｇ２＋Ｍ期细胞和ＤＮＡ含量显著低于正常对照组；随着照后时间的延长，Ｓ、Ｇ２＋Ｍ期含量有所恢复，但仍显著低于正常对照组。说明骨髓造血基质细胞具有较高的辐射敏感性且对辐射损伤持续较久。     

骨髓增生异常综合征的造血抑制性T细胞

以体外培养的方法，对１５例骨髓增生异常综合征患者的骨髓，用社体介异的单克隆抗体选择性去除Ｔ细胞亚群，通过粒－单核祖细胞集落产率的变化，观察Ｔ细胞亚群对造血细胞的抑制活性，结果发现１５例ＭＤＳ骨髓去除ＣＤ４细胞前后ＣＦＵ－ＧＭ集落产率无明显变化；去除ＣＤ８细胞后，１１例ＭＤＳ骨髓ＣＦＵ－ＧＭ集落产率无明显变化，４例ＭＤＳ骨髓ＣＦＵ－ＧＭ集落产率增加３８％－７１％，与未去除ＣＤ８细胞组有明显差（Ｐ＜０     

白血病相关抑制物对CFU－GM增殖的抑制作用

用半固体双层琼脂培养法，将白血病细胞植入底层，正常ＣＦＵ－ＧＭ植入上层，作白血病细胞与正常ＣＦＵ－ＧＭ的共同培养。结果发现，底层琼脂中加入０．５×１０５／ｍｌ的白血病细胞后，上层琼脂中的ＣＦＵ－ＧＭ从对照组的１９３．５下降至１２３．１／１×１０５个骨髓有核细胞（ＢＭＮＣ），加入底层的白血病细胞增加时，ＣＦＵ－ＧＭ生成进行性受抑制，当植入的白血病细胞数达１５×１０５／ｍｌ时，几乎无ＣＦＵ－ＧＭ生成。此抑制作用亦见于白血病细胞的培养上清液中。量－效关系测定发现，正常ＣＦＵ－ＧＭ培养体系中加入１０％的白血病细胞培养上清液时，ＣＦＵ－ＧＭ生成率从对照纪的１１２．２下降到８８．６／１×１０５ＢＭＮＣ，以后抑制效应不再增加。以上结果揭示，白血病细胞对ＣＦＵ－ＧＭ的抑制是经某种体液因子实现的。     

外周血干细胞体外扩增的研究

本文对１０例经动员后的正常外周血造血细胞进行体外扩增研究，结果发现在ＳＣＦ与ＧＭ－ＣＳＦ共同作用下，不仅培养细胞总数明显增加，且ＣＦＵ－ＧＭ平均增加２６．７倍，ＣＤ３４细胞增加１９．６倍；ＣＤ３４细胞数与ＣＦＵ－ＧＭ呈正相关。     

RhIL—2对人骨髓CFU—GM,CFU—E和BFU—E的影响

采用甲基纤维素体外半固体培养法证明，５０－１０００Ｕ／ｍｌ ｒｈＩＬ－２单用对人骨髓造血祖细胞的ＣＦＵ－ＧＭ〉ＣＦＵ－Ｅ及ＢＦＵ－Ｅ无直接刺激增生作用；当与ＧＭ－ＣＳＦ联用，１００－４００Ｕ＝ｍｌｒｈＩＬ－２其ＣＦＵ－ＧＭ集落形成率明显高于单用ＧＭ－ＣＳＦ的对照组；当与ＥＰＯ联用时，其ＣＦＵ－Ｅ及ＢＦＵ＝Ｅ集落形成率 于单用ＥＰＯ对照组，而１０００Ｕ／ｍｌｒｈＩＬ－２期 ３咱集落形成数目呈下降趋势     

脐带血粒－巨噬细胞集落刺激因子水平的实验研究

采用骨髓ＣＦＵ—ＧＭ单层琼脂半固体培养和四甲基偶氮唑盖比色法研究脐带血清（ＣＢｓ）中粒－巨噬细胞刺激因子（ＧＭ—ＣＳＦ）的水平。结果表明，ＣＢｓ中含有较高水平的ＧＭ－ＣｈＦ分别是Ｘ±Ｓ２７．７１±１２．９９ｋＵ／Ｌ和Ｘ±Ｓ２２．２３±９．８８ｋＵ／Ｌ），明显高于正常成人外周血（Ｘ±Ｓ１０．９７±４．１８ｋＵ／Ｌ和Ｘ±Ｓ９．８０±２．５４ｋＵ／Ｌ）（Ｐ＜０．００１）。提示ＣＢｓ所含有的内源性ＧＭ一ＣＳＦ对骨髓造显祖细胞具有促进增殖和分化作用。     

微量元素硒与白细胞介素—6对小鼠环磷酰胺注射后造血的影响

小鼠腹腔注不同剂量环磷酰胺后，于不同时间在ＣＦＵ－ＧＭ培养体系中加入Ｎａ２ＳｅＯ４，ＩＬ－６或Ｎａ２ＳｅＯ４＋ＬＩ－６。结果：各组均能明显提高ＣＦＵ－ＧＭ产率，且联合用药有效时间更长，预先给予上述药物，用药组较对照组的ＣＦＵ＿ＧＭ产率增高。提示Ｎａ２ＳｅＯ４、ＬＩ－６三定时间和浓度范围内均能减轻环磷酰胺所致骨髓造血损伤。