PCR动力学数学模型在PCR产物直接核酸序列分析中的应用

使用ＰＣＲ动力学数学模型提供的ＰＣＲ产物数量计算方法计算经ＰＣＲ扩增获得的产物数量，纯化后用於ＰＣＲ产物的核酸序列分析。由於ＰＣＲ动力学数学模型提供了比较准确的产物数量计算，使测序模扳数量总能保持在比较适当的范围，因此测序结果的可读性、自显影条带的清晰度保持了较好的水平。提示了ＰＣＲ动力学数学模型是基本正确的。说明准确的定量计算ＰＣＲ产物数量对ＰＣＲ产物直接核酸序列分析是有益的。     

实时定量PCR技术在病毒学研究中的应用

近年来发展起来的实时定量PCR技术与传统PCR技术相比,具有灵敏度和特异性高、重复性好、检测范围宽的优点,且极大降低了交叉污染的可能性。广泛应用于病毒感染的定量检测、临床疗效和药物评价、感染人群的普查以及感染源的监测、病毒与疾病之间关系的研究等方面。     

PCR技术改建基因的研究

利用ＰＣＲ（多聚酶链式反应）技术删除大麻哈鱼生长激素（ＧＨ）基因的启动序列，结果表明：ＰＣＲ方法能够删除大麻哈鱼ＧＨ基因的启动序列，而且非常快捷、这为ＰＣＲ技术的应用增添了新内容。     

实时定量PCR技术在病毒学研究中的应用

近年来发展起来的实时定量PCR技术与传统PCR技术相比，具有灵敏度和特异性高、重复性好、检测范围宽的优点，且极大降低了交叉污染的可能性。广泛应用于病毒感染的定量检测、临床疗效和药物评价、感染人群的普查以及感染源的监测、病毒与疾病之间关系的研究等方面。     

差异PCR技术检测乳腺癌C—erbB2癌基因扩增的研究

为探讨癌基因扩增在乳腺癌中的临床意义，应用差异ＰＣＲ技术检测Ｃ－ｅｒｂＢ２基因在７５例人乳腺癌中扩增情况。结果：３４．７％的乳腺癌存在该基因扩增，且以ＥＲ阴性或腋淋巴结转移〉３枚者明显，而与其它因素关系不大。通过Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交对原样本再次检测，结果与上述基本一致，并发现一例基因重排，表明应用差异ＰＣＲ技术检测Ｃ－ｅｒｂＢ２ｘ扩增具有快速，简单，可靠，无放射性污染，有助于乳腺癌预后及转移潜     

菌落PCR和质粒PCR对转化菌的筛选

为建立简便,可靠转化菌的筛选方法。方法应用菌落ＰＣＲ和重组质粒ＰＣＲ方法对转化菌进行筛选和ＤＮＡ序列分析。克隆载体和表达载体筛选及鉴定采用与载体多克隆插入位眯序列互补的通用引物或免疫球蛋白家族特异性引物。结果菌落ＰＣＲ和质粒ＰＣＲ技术可作为基因克隆筛选和鉴定的方法。结论菌落ＰＤＲ和质粒ＰＣＲ方向简便,快速,可靠,其产可作为模板直接用于序列分析。     

UT—PCR——一种扩增未知序列微量DNA片段的方法

ＵＴ－ＰＣＲ——一种扩增未知序列微量ＤＮＡ片段的方法夏庆杰张思仲肖翠英武辉在致病基因的突变分析、分离克隆等医学分子生物学研究中，常常遇到这样的问题：虽然已经获得感兴趣的某ＤＮＡ片段，但由于量太微而难以继续进行克隆、测序、探针制备等操作。我们介绍一种能...     

差别PCR及在癌相关基因扩增和缺失研究中的进展

基因的扩增与缺失是癌基因等活化、抑制基因等失活的常见机制之一，差别－ｄ－ＰＣＲ为上述遗传学改变了提供了简便并较敏感的非同位数技术，本文简述了近年严ｄ－ＰＣＲ方法学和用于肿瘤研究的进展。     

自主序列复制系统

自主序列复制系统北京铁路总医院分子生物室吴澄宇，王宏银，石征综述徐道振审校核酸扩增技术正在迅速成为分子生物学研究的重要工具之一。扩增技术控温度要求可以分为需要温度循环系统，如聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ），连结...     

差异PCR技术检测乳腺癌C－erbB_2癌基因扩增的研究

为探讨癌基因扩增在乳腺癌中的临床意义，应用差异ＰＣＲ技术检测Ｃ－ｅｒｂＢ２基因在７５例人乳腺癌中扩增情况。结果：３４．７％（２６／７５）的乳腺癌存在该基因扩增，且以ＥＲ阴性或腋淋巴结转移＞３枚者明显，而与其它因素关系不大。通过Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交对原样本再次检测，结果与上述基本一致，并发现一例基因重排。表明应用差异ＰＣＲ技术检测Ｃ－ｅｒｂＢ２扩增具有快速、简单、可靠、无放射性污染，有助于乳腺癌预后及转移潜力之判断，临床应用价值较大。     

运用巢式PCR方法进行无创性产前诊断的研究

目的探讨巢式PCR方法应用于胎儿无创性产前诊断的可行性。方法巢式PCR扩增SRY基因。结果实验共检查62例孕妇,阳性结果 29例,阴性结果 33例。与羊水细胞核型结果对照,特异度100%,灵敏度96.67%。结论运用巢式PCR方法进行无创性产前诊断准确度高,具有可行性,并能为产前无创伤性诊断胎儿常见非整倍体打下基础。     

PCR基因扩增分析前的质量保证

医学检验的目的是为临床提供可靠的实验诊断依据 ,为了保证检验结果的准确性 ,必须对检测的全过程 (分析前、分析中、分析后 )进行质量控制。在实际工作中对于分析中的质量控制一般比较重视 ,但对分析前的质量控制往往有所忽视 ,例如患者标本留取时机 ,标本收集、处理、储存和运输等是否符合实验要求 ,实验室设置是否合理 ,这些均为影响实验结果的直接因素。文献报告在实验误差中分析前误差约占 70 % ,能否正确规范化收集处理标本是分析前质量保证的重要内容[1 ] ,也是减少实验误差、确保准确及时为临床提供检测结果的重要环节。本文现就临…     

用降解的DNA PCR扩增LDLR基因片段的观察

随着分子生物学研究的进展，基因诊断技术得到了越来越广泛的应用，特别是PCR技术，以其快速、高灵敏度及简便地检测目的DNA特异序列易迅速被推广，已应用于很多领域。     

荧光PCR法检测石蜡标本中结核分枝杆菌的流程改进

<正>结核分枝杆菌的检测对于有肉芽肿性炎特征组织病变的病理诊断具有重要的参考意义。目前,病理科常用的检测方法有基于细菌学的抗酸染色、金胺O荧光染色,基于分子病理学的PCR、Xpert MTB/RIF检测^[1-2]等。其中荧光PCR技术具有敏感性高、特异性好、速度快,且价格实惠的特点,被广泛应用于大中型医院病理科福尔马林固定石蜡包埋（formalin-fixed paraffin-embedded,FFPE）组织的结核分枝杆菌的检测中^[3-6]。由于石蜡组织标本中的病菌分布不稳定,     

甜菜碱促进高GC含量p16基因的PCR扩增

GC含量高的DNA序列在基因组中广泛存在,它们特别容易形成二级结构干扰PCR扩增,难以得到所需目的基因。为解决此问题,采取了各种措施如增加变性及退火温度;用NaOH进行DNA模板变性;加入DMSO、甘油、甲酰胺等溶剂破坏碱基配对;加入dGTP类似物以降低熔解温度Tm等。但上述办法只对部分GC丰富DNA的扩增有效,许多情况下完全无效。近年研究发现甜菜碱能克服这个困难[1-3],我们参考国外报道在PCR中加入甜菜碱,结果成功地扩增出用标准PCR扩增失败的高GC含量的p16全长cDNA序列。1　材料与方法用淋巴细胞分层液从正常人外周血中分离出单…     

高G+C含量靶基因的PCR扩增方法

自从１９８５年Ｍｕｌｉｓ等［１］发明了聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）以来，ＰＣＲ及其衍生物的分子生物学方法无论在人类基因组研究，还是在疾病的病因、诊断及治疗等方面的研究中均有举足轻重的地位。然而ＰＣＲ技术也不是...     

用巢式PCR扩增ZFY基因产前诊断胎儿性别

近年来的研究表明,Ｙ染色体上锌指结构基因（ｚｉｎｃ－ｆｉｎｇｅｒ－Ｙｇｅｎｅ,ＺＦＹ）是继ＳＲＹ之后又一与性分化有关的单拷贝基因,并与精子的发生有关［１,２］。为此,我们利用巢式ＰＣＲ技术,以ＺＦＹ作为检测指标,参考有关文献自行设计内外两侧两对巢式Ｐ...