HA1077对骨髓间质干细胞促愈作用的影响

目的 探讨HA1077对骨髓间质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)促愈作用的影响及其机制. 方法 (1)体外实验:体外分离培养大鼠BMSCs,随机分为正常对照组、诱导组和HA1077组.对照组加入DMEIM完全培养液;诱导组:70%DMEM完全培养液+30%大鼠成纤维细胞上清液+含8 μg/L表皮细胞生长因子(EGF)的培养液;HA1077组:在诱导组培养液基础上加入终浓度为10 μmol/L的HA1077.取培养7 d的细胞,流式细胞检测CK19表达,细胞周期和核增殖抗原(PCNA)表达.(2)在体实验:按前述方法 制备兔BMSCs.取新西兰大耳白兔8只,在背部制备6个直径为3 cm的圆形皮肤缺损(每侧各3个),深至皮下.创面随机分为空白对照组(A组):创面应用等渗盐水;EGF对照组(B组):创面外用EGF,50 U/cm2;BMSCs治疗组(C组):除用EGF外,创面注射BMSCs细胞悬液1 ml,2×106/ml;BMSCs+HA1077治疗组(D组):除应用C组措施外,创面注射0.5 ml HA1077,浓度为20 μmol/L.伤后3,7,14 d计算愈合指数(WCI). 结果 (1)体外实验:诱导组CK19的阳性率为(11.13±2.14)%,HA1077组为(40.31±0.81)%,明显高于诱导组(P<0.01).HA1077组PCNA阳性率明显高于诱导组,细胞周期分析显示S期细胞数量最多.(2)在体实验:D组伤后14 d的创面愈合指数为86.20±1.92,效果明显好于B组、C组和对照组. 结论 HA1077可以促进BMSCs细胞表达PCNA进入S期,进而分化表达CK19;在体表联合应用HA1077和BMSCs,可以明显促进创面愈合.     

食蟹猴骨髓基质干细胞体外诱导分化的实验研究

为观察食蟹猴骨髓基质干细胞（BMSC）体外培养及诱导分化情况，分离食蟹猴的BMSC，以神经干细胞培养液和分化诱导因子进行体外培养和诱导分化。结果发现，分离得到的食蟹猴BMSC能在体外培养中增殖，分化，这些具有克隆能力的BMSC能表达神经干细胞特异性抗原Nestin，并能进一步诱导分化出胶质细胞样细胞和神经元样细胞，免疫细胞化学检测可见有GFAP和NSE抗原表达。提示灵长类BMSC是多分化潜能细胞，具有较强的自我更新和多分化能力，在适当的诱导分化条件下可形成具有神经系细胞（神经元和神经胶质细胞）特征的细胞；BMSC可作为神经干细胞的种子细胞。     

表皮干细胞及其与创面修复的研究进展

创面修复主要包括肉芽组织增生、创面再上皮化及瘢痕形成与创面愈合改建等过程。表皮干细胞作为皮肤组织的特异性干细胞 ,不仅是维持皮肤新陈代谢的主要功能细胞 ,而且与创面修复紧密相关 ,是皮肤及其附属器发生、修复、改建的基础[1 ] 。研究和应用干细胞的无限增殖和多向分化     

恒河猴骨髓基质细胞体外诱导分化成神经干细胞的实验研究

为研究恒河猴骨髓基质细胞（BMSC）体外培养及诱导分化为神经干细胞的可行性，分离恒河猴BMSC，在体外应用神经干细胞培养液和细胞因子进行诱导分化，利用免疫细胞化学方法进行鉴定。结果发现，恒河猴BMSC能在体外培养中增殖，分化和表达干细胞特异性抗原神经巢蛋白（Nestin)，并最终能分化为胶质细胞样细胞和神经元样细胞；免疫细胞化学检测可见有神经元特异性烯醇化酶（NSE）和胶质原性纤维酸性蛋白（GFAP）抗原表达；未发现维甲酸（RA），表皮生长因子（EGF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)对骨髓基质干细胞的诱导分化具有明显影响作用。提示恒河猴BMSC是具有较强的自我更新能力和多分化潜能的细胞，在一定条件下，可分化为表达神经系细胞（神经元和神经胶质细胞）抗原的细胞，可作为神经细胞的种子细胞。     

感觉神经肽SP对创面表皮干细胞迁移影响的实验研究

目的　探讨感觉神经肽P物质 (SP)对创面表皮干细胞迁移的影响。方法　新生 3～ 4天Wistar大鼠 90只 ,随机分为正常组、SP组、辣椒素组 ,采用BrdU标记干细胞结合检测表皮干细胞特异性标记蛋白K19和β1整合素表达 ,观察皮肤全层缺损后 2 1天伤口局部应用SP对伤口表皮干细胞迁移及伤口愈合的影响 ,并与预先注射辣椒素毁损感觉神经元 (辣椒素组 )和单纯皮肤损伤 (正常组 )比较。结果　致伤后 18天SP组伤口闭合 ,较正常组提前 3天 ,而辣椒素组仅闭合创面面积的 2 5 5 4%。伤后SP组创缘及肉芽组织出现较多表皮干细胞 ;而抑制感觉神经肽SP的辣椒素组仅在创缘观察到少量表皮干细胞 ;正常组在肉芽组织中尚未发现表皮干细胞 ,在创缘的表皮干细胞数介于SP组和辣椒素组之间。结论　感觉神经肽SP能明显加快创面愈合速度 ,并具有诱导表皮干细胞向创缘和肉芽组织中迁移的作用。     

应用人脐带血间充质干细胞修复小鼠皮肤缺损创面

目的 探讨人脐带血间充质干细胞(hUCB MSCs)在体分化为皮肤细胞、修复皮肤缺损创面的可能性. 方法 分离hUCB MSCs,体外培养、扩增并用BrdU标记后,种植于重症联合免疫缺陷(SCID)小鼠背部全层皮肤缺损创面(治疗组),并设同体PBS对照组.于术后7,14 d观察并比较愈合率;于术后7,14,28 d创面活检,行常规病理组织切片HE染色、免疫组织化学染色检测BrdU及人角蛋白19的表达. 结果 术后7,14 d治疗组创面愈合率为(56.06±3.04)%和(94.75±1.89)%,对照组为(36.99 ±2.17)%和(84.63 ±2.28)%,治疗组高于对照组(P＜0.01).HE染色显示治疗组活检组织表皮层明显增厚,细胞及表皮嵴数目显著增多;在再生表皮的毛囊内层以及表皮基底层、棘层可见BrdU阳性标记细胞连续分布,且有部分细胞表达人角蛋白19;并在治疗组活检组织中发现有皮肤附属器形成. 结论 hUCB MSCs可在体分化为皮肤细胞与组织,可应用于皮肤创面的修复.     

感觉神经肽P物质在损伤修复中的作用及分子机制

为探讨感觉神经肽P物质(SP)在损伤修复中的作用,围绕感觉神经与修复进程中创面/伤口SP代谢的关系、SP在修复细胞表达生长因子及受体、表皮干细胞迁移、分化等方面的作用开展了研究.研究证实感觉神经释放的SP可上调成纤维细胞表达神经肽,诱导成纤维细胞表达生长因子及受体,凋控表皮干细胞迁移、分化的作用,进入肉芽组织内的表皮干细胞可跨胚层向血管内皮细胞和成纤维细胞分化,提示感觉神经肽SP参与介导感觉神经调控损伤修复.     

体外诱导骨髓基质细胞向神经干细胞和成熟神经细胞分化的实验研究

探索骨髓基质细胞（BMSCs）分化为神经干细胞和成熟神经细胞的可行性，为BMSCs在神经科学领域的应用提供依据。以犬的BMSCs为实验对象，利用bFGF、RA、GDNF等作为增殖或分化诱导因子，对各阶段细胞进行免疫细胞化学鉴定。结果发现，增殖培养24－72h见细胞分裂像和克隆单位；诱导培养3天，部分细胞开始表达NSE或GFAP，继续增殖培养仍可见细胞克隆（干细胞特性）；诱导培养第10天有成熟神经细胞形成（成分鉴定证实）。说明BMSCs在体外培养条件下，经过多种因子的“程序性”作用，可以向神经干细胞、成熟神经元及胶质细胞方向分化。提示BMSCs可作为“种子细胞”在神经科学领域加以利用。     

细胞外信号调节激酶信号通路在血小板源生长因子促进糖尿病大鼠创面愈合中的作用

目的观察重组人血小板源生长因子(rhPDGF)促进糖尿病大鼠全层皮肤缺损创面修复可能涉及的信号通路：方法26只糖尿病大鼠背部各制备4个全层皮肤缺损创面，创面随机分成A和B两组，A组对照组，B组为rhPDGF(7．0μg／Cm2)治疗组。观察伤后3，7，14d创面肉芽形成、胶原沉积、再上皮化速率以及炎症细胞浸润情况，并采用免疫荧光技术观察创周和创基修复细胞内细胞外信号调节激酶1／2(extracellular signal—regulated kinase1／2，ERK1／2)的表达，用免疫组织化学方法检测原癌基因e—fos、增殖细胞核抗原(proliferation cell nuclear antigen，PCNA)、黏着斑激酶(focal adhesion kinase，FAK)的变化情况。结果组织学检查显示，rhPDGF治疗的创面大量的炎症细胞浸润，毛细血管胚芽与成纤维细胞数量显著多于对照组，胶原沉积明显，肉芽组织生长活跃，创面收缩显著。免疫学研究显示，伤后3d，rhPDGF治疗组ERK1／2和c—fos的表达明显增强，7d时，ERK1／2和c—fos进一步增强，14d后开始减弱。rhPDGF治疗组各时相点修复细胞PCNA和FAK的表达明显强于对照组：结论ERK1／2信号通路在rhPDGF促糖尿病大鼠创面愈合中起一定作用，并在细胞增殖与迁移中充当重要角色。     

改良胎鼠视网膜干细胞的分离培养方法

目的 对大鼠胚胎视网膜干细胞的培养方法进行改良,并观察其生长及分化特性,以期寻求有效的视网膜干细胞培养方法. 方法 取18d孕龄的SD大鼠视网膜睫状缘(CMZ)色素上皮层组织,通过剪切、吹打、胰酶消化、过滤、离心后,在DMEM/F12培养基中加入碱性成纤维细胞生长因子(bFGF),用无血清培养技术扩增视网膜干细胞;传代后离心收集培养细胞,以5%胎牛血清诱导细胞分化;用免疫细胞化学技术对十细胞及诱导分化的细胞进行鉴定,确定所培养细胞是否为干细胞且具有分化潜能. 结果 从SD胚胎大鼠视网膜中分离的细胞在体外悬浮生长,形成致密的球形细胞团,传代后能够牛成新的细胞团,免疫细胞化学染色显示原代和传代细胞中Nestin和掺入BrDU均呈阳性表达.诱导分化后的细胞经鉴定证明部分表达胸腺细胞表面糖蛋白(Thy1.1). 结论 SD胎鼠视网膜内存在视网膜干细胞,通过改良方法可以进行体外培养和扩增,产生分化,部分分化细胞具有视网膜神经细胞特性,包括分化形成节细胞.     

血管内皮祖细胞对骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞脂肪化的影响

 目的 探讨血管内皮祖细胞(endothelial progenitor cell,EPC)对骨质疏松(OP)大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)自主脂肪化的影响。方法 选6周龄雌性 SD 大鼠,建立OP模型。体外分离、培养大鼠EPC、BMSC。分别取第3、6代BMSC及原代EPC,建立EPC/BMSC 间接共培养体系。实验分组:假手术组BMSC(BMSC sham)、OP组BMSC(BMSC ovx)、OP BMSC /EPC共培养组(BMSC ovx/EPC);MTT法检测细胞增殖情况;油红 O染色检测成脂分化情况,real- time PCR检测成脂分化标志物PPARγ2的mRNA表达水平。结果 BMSC ovx/EPC 组BMSC的增殖能力显著高于BMSC ovx组;BMSC ovx/EPC组自主脂肪细胞分化水平明显低于BMSC ovx组。结论 EPC可通过间接接触提高骨质疏松大鼠BMSC的增殖能力,并能有效抑制OP大鼠BMSC的自主脂肪化。     

骨髓基质干细胞移植对脑挫伤大鼠神经行为学和Bax表达的影响

目的 探讨骨髓基质干细胞(bone morrow stromal cells,BMSCs)移植对脑挫伤大鼠神经功能的影响,并探讨其分子机制。方法 24只SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、脑挫伤组（采用自由落体砸伤制备大鼠运动皮质区脑损伤模型）和BMSCs移植组（将培养纯化的BMSCs移植入损伤位点周围）,每组8只大鼠。术后对动物进行神经损伤严重程度评分(neurological severity scores,NSS);14 d后取脑组织观察移植细胞在体内存活、迁移情况;用RT - PCR技术检测宿主脑组织内凋亡基因Bax的表达变化。结果 脑挫伤组NSS为(12±3)分,较BMSCs移植组NSS(7±1)分明显升高(P＜0.05)。移植的BMSCs能在宿主脑内存活并迁移;RT - PCR显示BMSCs移植组凋亡基因Bax表达（0.9±0.1）较脑挫伤组(1.1±0.2)明显减少(P＜0.05)。结论 BMSCs移植能有效促进脑挫伤大鼠神经功能恢复,其作用机制可能与抑制促凋亡基因Bax表达有关。     

骨髓间充质干细胞经肾动脉途径不同移植次数对大鼠阿霉素肾病的修复作用比较

目的 比较分析骨髓间充质干细胞(BMSC)经肾动脉途径单次或多次移植于阿霉素肾病大鼠后对其肾功能的改善作用.方法 以阿霉素经尾静脉输入构建大鼠慢性肾病模型32只,随机分为M0、M1、M2、M3组(4×n,n=8),另选8只为正常对照组(N组).以2×106个/ml、单次0.5 ml分别移植BMSC细胞0次(M0组)、1次(Ml组)、2次(M2组)、3次(M3组),不进行BMSC移植组别每次操作以L-DMEM培养基0.5 ml作为安慰剂对照,移植间隔为1周.移植前及末次移植后1、2周末检测大鼠血尿素氮、血肌酐、24 h尿蛋白、24 h尿微量蛋白,末次移植l周末制作病理片并于激光聚焦显微镜下观察大鼠肾脏病理和BMSC细胞在肾脏内分布情况.结果 M0、M1、M2、M3组在各观察点血尿素氮、血肌酐、24 h尿蛋白总量、24 h尿微量蛋白均明显高于N组(P＜0.001),末次移植第1周末M2、M3组24 h尿蛋白总量、24 h尿微量蛋白明显低于M1组(P＜0.05),M2、M3组间差异无统计学意义(P=0.063).结论 BMSC经肾动脉途径移植2次治疗大鼠阿霉素肾病效果最宜.     

骨形成蛋白-2和地塞米松对骨髓基质细胞的联合生物学效应

探讨重组人骨形成蛋白－2（rhBMP-2）的地塞米松（Dex）单独和联合作用对骨髓基质细胞（BMSC）增殖和分化的影响。利用四唑盐比色法（MTT）、细胞总蛋白考马斯亮蓝测定法及碱性磷酸酶（ALP）检测试剂盒分别测定不同浓度的rhBMP-2和Dex单独和联合作用后BMSC的增殖和分化情况。结果显示,rhBMP-2对BMSC的增殖和ALP的表达均有促进作用,Dex促进ALP的表达,但高浓度的Dex对BMSC有增殖抑制,rhBMP-2和Dex联合作用后BMSC的增殖和ALP活性较单独作用有更明显的作用。提示 rhBMP-2和Dex联合作用对于促进BMSC的增殖和向成骨细胞分化有协同作用。     

基质细胞衍生因子-1α在诱导骨髓来源细胞到达皮肤创面中的作用

目的 探讨皮肤创面基质细胞衍生因子-1α(stromal cell derived factor-1α,SDF-1α)在诱导骨髓来源细胞(bone marrow derived cells,BMDCs)向创面募集过程中的作用.方法分离培养小鼠BMDCs,并通过CXCR=4(SDF-1d特异性受体)免疫荧光鉴定BMDCs.培养的BMDC8分为正常培养组(BMDCs组)和CXCR4抗体共孵育组(100 ng/ml,anti-CXCR4组),用CM-DiI标记后分别将各组BMDC8注入全层皮肤缺损伤小鼠模型的尾静脉,同时以注射DMEM/F12无血清培养基作为对照组,观察创面标记的BMDCs数量及创面愈合率. 结果 (1)BMDCs均表达CXCR4;(2)在伤后7和14 d BMDCs组的创面愈合率分别为(41.3±4.6)%和(92.3±2.1)%,显著高于相应时相点对照组[(29.3±2.3)%、(77.3±2.5)%]和anti-CXCR4组[(30.7±4.6)%、(85.7±1.5)%](P＜0.05),而anti-CXCR4组的创面愈合率仅在伤后14 d显著高于对照组(P＜0.05);(3)在伤后7和14 d,BMDCs组创面标记的BMDCs数目分别为(535±84)个/每张切片和(769±124)个/每张切片,显著高于相应时相点的anti-CXCR4组[(335±97)个/每张切片;(521±127)个/每张切片](P＜0.05). 结论 BMDCs参与并促进皮肤创面愈合;SDF-1α在诱导BMDCs到达创面过程中有重要作用.     

Autologous mesenchymal stem cell endografting in experimental cerebrovascular aneurysms

Introduction

Coiling is the gold standard for the treatment of intracranial aneurysms. However, some issues associated with endovascular treatment limit its long-term efficiency. Recanalization with coil compaction is certainly the most important. New approaches may be considered to promote thrombus colonization by mesenchymal cells and aneurysm healing. In the present study, we have percutaneously delivered autologous bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) to an elastase-induced rabbit carotid aneurysm model in vivo.

Methods

Autologous mesenchymatous stem cells were obtained after femoral puncture and bone marrow aspiration. After 2 weeks of in vitro cell culture, five million BMSCs were grafted in the carotid aneurysm using an endovascular approach.

Results

We demonstrated the feasibility of in vivo percutaneous seeding of autologous BMSCs in the aneurysm by positive Hoechst fluorostaining. Two weeks later, conventional angiography showed an increase in median aneurysmal surface in the sham group, whereas this surface was decreased in the group treated with BMSCs, +28.4 versus ?26.4 %, respectively (p?=?0.01). BMSC seeding resulted in intimal hyperplasia with cell colonization and disappearance of the thrombus.

Conclusion

In conclusion, percutaneous seeding of BMSCs may colonize and heal the arterial wall thus limiting aneurysm expansion.     

17β-雌二醇对大鼠骨髓基质干细胞成骨分化初期细胞骨架的影响

目的研究17β-雌二醇（17β-estriol,17β-E2）促进体外培养的大鼠骨髓幕质干细胞（bone mesenchymal stem cells,BMSCs）骨向分化过程中细胞骨架的变化。方法采用全骨髓培养法体外培养大鼠BMSCs,分为阴性对照组、阳性对照组（成骨细胞诱导液）和雌激素处理组（成骨细胞诱导液＋10^-6。mol／L。17β-E2）,使用碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,AI,P）试剂盒检测BMSCs的ALP活性,激光扫描共聚焦显微镜观察各组BMSCs成骨分化初期的细胞骨架。结果BMSCs细胞ALP活性随时间的增加而增强,雌激素处理组表达ALP活性明显高于阴性对照组和阳性对照组（P〈0．01）;细胞骨架荧光强度定量分析显示,雌激素处理组（26．56％±9．87％）较阳性对照组（18．31％±5．76％）和阴性对照组（8．12％土4．42％）明显增强（P〈0．05）。结论17β—E2可能通过早期调节细胞骨架微丝聚合改变细胞形态,从而促进骨髓基质干细胞向成骨分化。     

小鼠急性皮肤缺损创面粒-巨噬细胞集落刺激因子表达特点及其作用机制

目的 探讨创面愈合过程中粒-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)的表达变化及其在创面愈合中的作用和机制.方法采用小鼠全层皮肤缺损伤模型.肌肉麻醉后在背部中线近颈侧制作1.0 cm×1.0 cm大小皮肤缺损伤创而.50只雄性...     

大鼠骨髓间充质干细胞移植治疗喉返神经损伤实验研究

目的通过建立喉返神经损伤(recurrent laryngeal nerve injury)动物模型,探讨自体骨髓间充质干细胞(BMSC)移植对喉返神经损伤的治疗效果。方法随机数字表法将40只SD大鼠分成两组,每组20只。对全部大鼠手术复制喉返神经损伤动物模型。一组大鼠骨髓,培养、分化骨髓间充质干细胞后,自体进行干细胞移植为实验组。另一组为生理盐水注射对照组。建立模型3 d后,将BMSC诱导后的类神经细胞0.2 ml注射移植至大鼠左侧喉返神经损伤处,于移植后7、14、21、28、60 d,观察喉返神经电生理指标。结果实验组和对照组喉返神经损伤后均有不同程度的失神经和神经再生现象。移植14 d后实验组与对照组喉返神经电生理检测的潜伏期和波幅平均值分别为(1.78±0.41)ms与(2.36±0.16)ms(t=5.72、P<0.01)和(0.69±0.09)mV与(0.46±0.07)mV(t=8.18、P<0.01),差异有统计学意义。60 d后实验组与对照组喉返神经电生理检测的潜伏期和波幅分别为(0.93±0.03)ms与(1.16±0.18)ms(t=5.50,P<0.01)和(1.33±0.18)mV与(1.04±0.20)mV(t=4.64、P<0.01),差异有统计学意义。结论自体骨髓间充质干细胞移植对喉返神经损伤有促修复作用,治疗效果明显。