环氧合酶抑制剂NS-398增强放射诱导的肝癌细胞凋亡

目的：探讨环氧合酶-2（COX-2）选择性抑制剂NS-398对放射诱导的人肝癌细胞HepG2凋亡的影响及可能作用机制。 方法:应用MTT 法检测NS-398对细胞的抑制率;透射电子显微镜观察细胞凋亡的形态学变化,流式细胞术(FCM)定量检测细胞凋亡;实时荧光定量PCR检测凋亡相关基因bcl-2、bax及caspase-3 mRNA表达;Western blotting检测Bc1-2、Bax蛋白表达;比色法分析caspase-3酶活性变化。 结果:NS-398对HepG2细胞的生长抑制作用呈时间与剂量依赖性;电镜下处理组细胞呈现典型的凋亡形态学变化,NS-398显著增加放射诱导的细胞凋亡,上调bax mRNA、Bax蛋白及caspase-3mRNA 表达,并增强caspase-3酶活性,而Bcl-2 表达无明显变化（P>0.05）。 结论:NS-398能增加放射诱导的HepG2细胞凋亡,其机制可能与上调Bax、 caspase-3表达,上升Bax／Bcl-2比例,激活线粒体凋亡通路,活化caspase-3,最终诱导细胞凋亡相关。     

环氧合酶-2选择性抑制剂NS-398抑制肿瘤细胞的作用机制

目的:探讨COX-2选择性抑制剂NS-398对肿瘤细胞抑制的作用机制。方法:选择持续表达COX-2的人食管癌细胞株EC9706和不表达COX-2的肝癌细胞株SMMC7721作为研究对象，采用［3H］-TdR掺入法检测不同浓度（10、20、50、100 μmol/L）NS-398和作用24 h、48 h、72 h对细胞的增殖抑制效应；流式细胞术（FCM）及DNA片段分析法检测NS-398诱导的细胞凋亡情况；免疫细胞化学方法检测NS-398作用后细胞内survivin表达变化。结果:经不同浓度的NS-398处理，EC9706及SMMC7721的［3H］-TdR掺入量均明显少于空白对照组（P<0.05或P<0.01），具有时间和剂量-效应关系。FCM检测发现EC9706在G1期前出现亚倍体凋亡峰，细胞凋亡率达(45.23±1.08)%，并出现典型的细胞凋亡梯带；而SMMC7721无凋亡峰出现，细胞凋亡率为(3.05±0.15)%，两组比较有显著性差异（P<0.01）。经100 μmol/L NS398作用24 h后，EC9706细胞内survivin表达与未经NS-398作用的EC9706细胞表达明显减少，而SMMC7721表达无变化。结论:NS398通过不同作用机制对肿瘤细胞发挥抑制作用，对COX-2表达阳性的肿瘤细胞具有诱导凋亡作用，与抑制survivin表达有关，而对无表达COX-2的肿瘤细胞无诱导凋亡作用。     

选择性环氧合酶-2抑制剂NS-398对肝星状细胞凋亡的影响

目的:观察选择性环氧合酶-2抑制剂NS-398对肝星状细胞(HSC)凋亡及凋亡相关基因的影响.方法:采用不同浓度的NS-398作用于HSC-T6, 应用流式细胞术和透射电镜检测HSC凋亡, 细胞免疫化学法检测凋亡HSC中凋亡相关基因p53、 bcl-2蛋白表达的变化.结果:90、 120、 150 μmol/L NS-398作用HSC-T6 48 h后, 流式细胞术检测到HSC凋亡, 各组凋亡指数分别为(10.5±0.015)%、 (13.2±0.010)%和(17.3±0.012)%, 与对照组(4.3±0.006)%比较, 差异有统计学意义(P<0.01); 透射电镜观察到细胞皱缩、 核染色质浓缩沿核膜排列等细胞凋亡特征性改变; 以120 μmol/L NS-398作用HSC-T6 48 h后, 凋亡相关蛋白p53、 bcl-2的阳性细胞百分率分别为(82.06±0.14)%、 (34.20±0.77)%, 与对照组(14.06±0.24)%、 (96.66±0.79)%比较, 差异有统计学意义(P<0.01).结论:NS-398可以剂量依赖性诱导HSC凋亡; 上调凋亡相关基因p53的表达, 下调bcl-2的表达可能是NS-398诱导HSC凋亡的机制之一.     

选择性环氧合酶2抑制剂塞来昔布对人子宫内膜癌细胞的凋亡诱导

目的 研究环氧合酶2(COX-2)选择性抑制剂塞来昔布诱导人子宫内膜癌细胞凋亡作用.方法 体外培养的人子宫内膜癌细胞HEC-1-B经塞来昔布处理后,采用Giemsa染色、流式细胞术和DNA Ladder观察HEC-1-B细胞凋亡变化;通过半定量RT-PCR方法检测HEC-1-B细胞COX-2及凋亡相关基因Fas、survivin的表达.结果 20 μmol/L塞来昔布处理HEC-1-B细胞后,Giemsa染色即可见细胞核固缩、碎裂,出现凋亡小体等细胞凋亡形态变化;流式细胞学检测示50 μmol/L塞来昔布可使HEC-1-B细胞凋亡率达46.9%,PI荧光直方图出现凋亡细胞峰,DNA电泳可见典型的细胞凋亡梯形条带.塞来昔布处理HEC-1-B细胞后,COX-2 mRNA表达下降,细胞凋亡相关基因Fas表达增加,细胞凋亡抑制基因surviyin表达下降,50 μmol/L塞来昔布可使survivin表达难以检出.结论 塞来昔布对HEC-1-B细胞有明显的凋亡诱导作用,通过抑制COX-2表达进而使Fas表达上调,survivin表达下调可能是其诱导细胞凋亡机制之一.     

选择性环氧合酶2抑制剂塞来昔布对人子宫内膜癌细胞的凋亡诱导

Objective To investigate the apoptosis- inductive effects of celecoxib, a selective inhibitor of cyclooxygenase-2 (COX-2), on human endometrial carcinoma cells. Methods After treating human endometrial carcinoma cell HEC-1-B with celecoxib in vitro, apoptosis of HEC-1-B cells was observed by Giemsa staining, flow cytometry and DNA ladder. Semi-quantitative RT-PCR was used to test the expression of COX-2, apoptosis-related Fas and survivin in HEC-1-B. Results Apoptotic morphological changes such as karyopyknosis, nuclear fragmentation and appearance of apoptotic bodies were noted by Giemsa staining after treating HEC-1-B cells with 20 μmol/L celecoxib. Flow cytometry analysis indicated apoptotic rate of HEC-1-B cells was as high as 46.9% after treated with 50 μmol/L celecoxib. Apoptotic peak was found in PI fluorescence histogram. Genome DNA electrophoresis further confirmed the formation of typical apoptotic DNA ladder. After HEC-1-B cells treated with celecoxib, the expression of COX-2 mRNA and apoptosis- related suppressor gene survivin declined, and expression of apoptosis- related gene Fas increased. 50 μmol/L celecoxib impeded detection of survivin expression. Conclusions Celecoxib induces apoptosis of HEC- 1B cells. By inhibiting COX-2 activity, the expression of Fas increases and survivin expression decreases, which may be one of the mechanisms of apoptosis induction.     

阿司匹林与氟尿嘧啶协同抑制结肠癌细胞生长增殖的机制研究*

 目的：检测阿司匹林与氟尿嘧啶协同抑制结肠癌细胞生长增殖的能力及相关作用机制。方法：将体外培养的结肠癌细胞分为4组：空白对照组、阿司匹林组、氟尿嘧啶组和阿司匹林+氟尿嘧啶组,采用MTT法检测阿司匹林和氟尿嘧啶抑制结肠癌细胞增殖的效果,采用Hoechst 33258染色、caspase活性检测和流式细胞术检测研究药物诱发凋亡的作用及机制,采用real-time PCR和Western blotting方法检测药物对凋亡相关蛋白表达的调控作用。结果：氟尿嘧啶有效抑制HCT116和SW620结肠癌细胞增殖,且低浓度阿司匹林具有协同抑制的效果。氟尿嘧啶诱发HCT116细胞核出现明显的凋亡形态,caspase酶活性增高及sub-G1期比例增加。阿司匹林协同作用明显提高HCT116细胞凋亡的比例和caspase酶活性。此外,低浓度阿司匹林可以显著增强氟尿嘧啶抑制Bcl-2 mRNA及蛋白表达的效果。结论：阿司匹林和氟尿嘧啶具有协同抑制结肠癌细胞生长增殖的效果,且主要通过诱发细胞凋亡发挥作用。     

β-拉帕醌对胃癌细胞生长与侵袭的抑制作用及机制

目的：探讨β-拉帕醌体外抑制胃癌细胞增殖和迁移及诱导凋亡的作用及机制。方法应用噻唑蓝（ MTT）及平板克隆实验检测β-拉帕醌对SGC-7901与AGS胃癌细胞增殖的影响,划痕实验检测β-拉帕醌抑制胃癌细胞的迁移能力,流式细胞术检测β-拉帕醌诱导胃癌细胞凋亡的作用。应用Western b1ot法检测β-拉帕醌处理胃癌细胞前后其增殖、迁移、上皮-间质转化（ epithe1ia1-mesenchyma1 transition,EMT）及凋亡分子标志物的变化。结果β-拉帕醌可显著抑制SGC-7901和AGS胃癌细胞的增殖能力,并下调增殖与周期相关Skp2和DEK蛋白的表达（ P均<0.05）;经β-拉帕醌处理后,胃癌细胞的迁移能力明显下降,且显著下调MMP-2/9和Ezrin蛋白以及EMT间质标志物的表达,上调EMT上皮标志物表达水平;另外,β-拉帕醌增加胃癌细胞的凋亡,下调BCL-2/Bax比值以及上调活化型Caspase-3/8/9的表达。结论β-拉帕醌对胃癌细胞有明显的抑制增殖及诱导凋亡的作用,并可通过MMPs和EMT途径抑制胃癌细胞的迁移能力。     

浅蓝菌素对人结肠癌细胞LoVo在裸鼠体内生长的抑制作用

目的 研究脂肪酸合酶抑制剂－浅蓝菌素对人结肠癌细胞ＬｏＶｏ在裸鼠体内生长的抑制作用。方法 建立人结肠癌裸鼠移植瘤模型,浅蓝菌素每次８０ｍｇ／ｋｇ体重、１６０ｍｇ／ｋｇ体重腹腔注射１０次,动态观察肿瘤体积及抑瘤率,治疗后１７ｄ处死并解剖动物,瘤组织做形态学观察和免疫组织化学ＳＰ法检测。结果 不同浓度浅蓝菌素处理人结肠癌细胞ＬｏＶｏ裸鼠移植瘤模型,低剂量和高剂量浅蓝菌素的体积抑瘤率分别为３７．７％和６３．８％,后者接近常规化疗药物５－Ｆｕ治疗对照组（６５．８％）。瘤体组织学显示为人未分化结肠腺瘤,浅蓝菌素处理的移植瘤组织内瘤细胞出现明显的细胞凋亡的超微结构改变,免疫组织化学显示ｂｃ１－２蛋白表达率低于对照组,ｂａｘ基因蛋白的表达结果则相反。结论 浅蓝菌素能够选择性地抑制人结肠癌细胞ＬｏＶｏ细胞在裸鼠体内的生长,这种     

选择性环氧合酶-2抑制剂Celebrex对胰腺癌新生血管生成的影响

探讨选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂Celebrex对裸鼠胰腺癌PC-3细胞移植瘤生长和肿瘤组织新生血管生成的影响,为Celebrex的临床应用提供依据.本文采用体外观测Celebrex对移植瘤生长的影响,并选用Ⅳ型胶原作为肿瘤微血管标记物,测定移植瘤中微血管密度(MVD).结果显示,治疗组移植瘤生长曲线较对照组明显低平,对照组移植瘤近似体积为0.438 cm3,治疗组为0.212 cm3(抑瘤率为51.6%,P＜0.05).对照组肿瘤组织MVD为63.87±13.67,治疗组32.25±12.99,两组间差异有非常显著性(P＜0.01).表明COX-2可能参与了肿瘤新生血管的生成,选择性COX-2抑制剂Celebrex则具有抑制肿瘤生长和对抗肿瘤新生血管生成的作用.     

环氧合酶-2研究的新进展

环氧合酶 2 (COX 2 )为一种诱导酶 ,在正常组织中很少表达 ,当细胞受到炎症等刺激时可高表达。COX 2的高表达除参与炎症、疼痛的调节外 ,还与肿瘤、老年性痴呆等疾病密切相关 ,同时 ,COX 2也与某些组织的正常生理功能有关。     

Stat5b/Survivin信号转导通路调控结肠癌细胞凋亡的机制

目的: 探讨Stat5b/Survivin信号转导通路调控结肠癌细胞凋亡的作用机制。方法: 用阳离子脂质体介导Stat5反义寡核苷酸转染人结肠癌HT29细胞，MTT法检测细胞增殖状态；流式细胞术检测细胞周期与凋亡；EMSA检测Stat5活性；Western blotting检测Stat5、p-Stat5、cyclin D1、Survivin与Bcl-2凋亡家族成员Bcl-2和Bcl-x_L的表达。结果: 转染Stat5反义寡核苷酸后HT29细胞增殖受抑制，凋亡细胞增多，Stat5、p-Stat5与Survivin表达下降，Bcl-2与Bcl-x_L变化不明显。结论: 阻断Stat5通路可以抑制靶基因Survivin表达并诱导结肠癌细胞凋亡。     

结肠癌的蛋白质组学研究

目的： 通过比较结肠癌组织与正常结肠组织的蛋白质组表达差异，寻找结肠癌相关的蛋白质，选择敏感的分子标志物。方法： 运用蛋白质组学技术，对8例结肠癌患者的结肠癌组织和正常结肠组织进行胶内差异双向电泳（2-D），选择差异表达超过2倍的蛋白质进行MALDI-TOF质谱分析和生物学信息分析。结果： 成功建立结肠癌和正常结肠组织的双向凝胶电泳图谱，结肠癌组织和正常组织凝胶电泳图谱中平均蛋白质斑点数分别为3289和3066，其中表达差异超过2倍的斑点共有31个，质谱分析和数据库检索共鉴定出18种蛋白质，包括keratin 8、S100A6、protein disulfide isomerase等。从功能分析，这些差异蛋白质与癌细胞的发生、增殖、分化、转移等相关。结论： 蛋白质组学能很好地显示结肠癌组织与正常结肠组织间的蛋白质表达差异，本研究鉴定的18种差异蛋白质有可能为研究结肠癌的生物学行为提供新的分子标记物。     

结肠癌细胞获得性5氟尿嘧啶耐药的机制研究

目的： 探讨结肠癌细胞获得性5氟尿嘧啶耐药的机制。 方法： 建立5-FU耐药的结肠癌细胞，通过免疫印迹法检测多种耐药相关蛋白的表达，分析耐药的可能机制。 结果： 反复用5-FU处理结肠癌DLD1和DLD1-TRAIL/R细胞，得到5-FU耐药的DLD1-5-FU/R和DLD1-TF/R细胞，进一步研究发现,5-FU不能诱导耐药细胞发生S期停滞和DNA损伤。接着发现耐药细胞中有过表达的Bik、Bcl-Xs和Bcl-XL蛋白，而DLD1亲代细胞过表达Bcl-XL后，能够部分抵抗5-FU诱导的凋亡，但仍不能耐受5-FU诱导的S期停滞和DNA损伤。结论： 过表达的Bcl-XL蛋白对结肠癌细胞获得性5-FU耐药具有一定作用，但过表达Bcl-XL不影响5-FU诱导的DNA损伤和细胞周期的改变，这提示结肠癌获得性5-FU耐药还存在着Bcl-XL之外的其它机制。     

DPC4基因转染对结肠癌细胞生长的抑制作用及其作用机制

目的 研究DPCA基因转染对结肠癌细胞生长及p21^WAFI mRNA表达的影响。方法 构建pcDNA3．1-DPCA真核表达质粒．利用脂质体转染技术将pcDNA3．1质粒和pcDNA3．1-DPCA质粒分别导入结肠癌细胞系SW620;采用免疫细胞化学和Western蛋白印迹检测细胞中DPCA基因的表达;通过检测细胞生长曲线、克隆形成实验研究DPCA基因转染对SW620细胞生长的抑制作用。通过逆转录．聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组细胞内p21^WAFI mRNA的表达。结果 转染DPC4基因后,在SW620细胞中可检测到高表达的DPCA蛋白;细胞生长倍增时间(74h)明显延长;细胞克隆形成率(21％)明显降低。DPCA基因转染后SW620细胞p21^WAFI mRNA含量增加。结论 DPC4基因的高表达能够抑制结肠癌细胞的生长,DPCA基因可能通过诱导p21^WAFI基因的表达而抑制结肠癌细胞的生长。     

表达GFP基因的溶瘤腺病毒对大肠癌细胞的体外杀伤作用

目的： 研究在端粒酶启动子驱动下表达绿色荧光蛋白（GFP）及 5型腺病毒早期基因（E1A）基因的腺病毒Ad/hTERT-GFP-E1对大肠癌细胞的杀伤作用及其可能的机制。方法:将不同滴度Ad/hTERT-GFP-E1感染大肠癌及正常细胞,以巨细胞病毒（CMV）启动子驱动下表达GFP基因的腺病毒Ad/CMV-GFP作为载体对照,通过半数组织培养感染量（TCID50）法测定病毒滴度及体外复制能力,然后用MTT法及细胞克隆形成试验评价该病毒在体外对肿瘤细胞及正常细胞的杀伤作用,并对病毒感染后的细胞进行原位凋亡检测。结果:Ad/hTERT-GFP-E1能够在DLD1细胞内持续复制,GFP的表达能够对病毒的感染和复制起到监测作用;MTT结果显示该病毒对于结直肠肿瘤细胞有显著杀伤作用,而对于正常细胞没有明显的杀伤作用;对病毒感染后的DLD1进行细胞凋亡检测发现Ad/hTERT-GFP-E1所引起的凋亡率显著高于对照组(P＜0.01)。结论:溶瘤腺病毒Ad/hTERT-GFP-E1能够选择性地在肿瘤细胞内复制并杀伤肿瘤细胞,其机制与细胞凋亡的途径有关。