睫状神经营养因子对严重烫伤大鼠纹状体及海马 NOS 阳性神经元的影响

目的：观察大鼠严重烫伤后纹状体和海马ＮＯＳ阳性神经元数目和阳性反应面积的变化及睫状神经营养因子（ＣＮＴＦ）对其的影响。方法：应用ＮＡＤＰＨ－ｄ酶组织化学的方法。结果：大鼠体表烫伤后３天,纹状体ＮＯＳ阳性神经元数目明显增加,梁色呈强阳性,阳性反应面积增加。海马ＮＯＳ阳性神经元数变化不明显,仅见阳性反应面积增加,睫状神经营养因子可降低纹状体的ＮＯＳ阳性神经元数目、阳性反应面积,ＮＯＳ阳性神经元着色较淡     

睫状神经营养因子对大鼠去神经骨骼肌的营养作用

目的：通过测定SD大鼠坐骨神经离断后比目鱼肌（SOL）和趾长伸肌（EDL）肌纤维横截面积,观察持续给睫状神经营养因子（CNTF）对神经骨骼肌萎缩的影响。结果：SD大鼠坐骨神经离断后,持续给0．2mg/kg.d的CNTF20天后,损伤侧SOL和EDL肌纤维横截面积分别比实验对照组高27％（P＜0．01）和14％,SOL肌纤维横截面积比EDL增加的幅度大,而给予0．05mg/kg.d的CNTF20天后,动物肌纤维横截面积与实验对照组无明显差异。结论：CNTF可显著改善坐骨神经离断后SD大鼠骨骼肌的萎缩,并且CNTF效应的强弱与用药剂量和肌肉类型有关,0．2mg/kg.dCNTF作用明显强于0．05mg/kg.dCNTF,慢肌（SOL）比快肌（EDL）对CNTF更敏感。     

睫状神经营养因子对谷氨酸引起海马神经细胞内游离Ca^2＋浓度和P …

目的：通过探讨睫状神经营养因子对谷氨酸引起海马神经细胞内游离Ｃａ＾２＋浓度和Ｐ５３蛋白表达的作用,提供睫状神经营养因子存在非基因组快速作用途径,并对基因组信号转导产生影响的证据。方法：用活细胞内荧光探针Ｆｕｒａ２／ＡＭ实时检测睫状神经营养因子对谷氨酸引起海马神经细胞内游离Ｃａ＾２＋浓度的影响,并用免疫组化方法观察睫状神经营养因子对谷氨酸引起海马神经细胞内Ｐ５３蛋白表达的作用。结果：谷氨酸可引起海马     

睫状神经营养因子对谷氨酸引起海马神经细胞内游离Ca~(2 )浓度和P53蛋白表达的作用

目的 :通过探讨睫状神经营养因子对谷氨酸引起海马神经细胞内游离 Ca2 浓度和 P53蛋白表达的作用 ,提供睫状神经营养因子存在非基因组快速作用途径 ,并对基因组信号转导产生影响的证据。方法 :用活细胞内荧光探针 Fura2 / AM实时检测睫状神经营养因子对谷氨酸引起海马神经细胞内游离 Ca2 浓度的影响 ,并用免疫组化方法观察睫状神经营养因子对谷氨酸引起海马神经细胞内 P53蛋白表达的作用。结果 :谷氨酸可引起海马神经细胞内游离 Ca2 浓度快速升高 ,并在 50 0μmol/ L-1范围内呈剂量依赖性。2 0 0μmol/ L-1的谷氨酸可上调 P53蛋白表达。睫状神经营养因子对静息条件下海马神经细胞内的游离 Ca2 浓度无显著改变。用睫状神经营养因子孵育 5min后 ,可快速压抑谷氨酸引起的胞内游离 Ca2 浓度升高 ,并下调 P53蛋白表达。结论 :睫状神经营养因子可能通过Ca2 信号的快捷途径 ,启动基因组的信号转导     

睫状神经营养因子对应激大鼠下丘脑、垂体精氨酸加压素含量的影响

目的：研究睫状神经营养因子（ＣＮＴＦ）对应激大鼠下丘脑、垂体精氨酸加压素（ＡＶＰ）含量及下丘脑ＡＶＰ阳性神经元的影响。方法：选用条件性足底电击应激大鼠模型，用放射免疫分析的方法观察双侧海马微量注射ＣＮＴＦ对应激大 下丘脑及垂体ＡＶＰ含量的影响，用免疫组织化学染色的方法结合光镜与图像分析观察下丘脑室旁核ＡＶＰ阳性神经元的变化。结果：应激大鼠下丘脑、垂体ＡＶＰ含量升高；下丘脑室旁核ＡＶＰ阳性神经元增多，染色变深，平均吸光度显著增加。给予ＣＮＴＦ的大鼠下丘脑、垂体ＡＶＰ含量明显降低；下丘脑室旁核ＡＶＰ阳性神经元减少，染色变浅，平均吸光度明显减少。结论：ＣＮＴＦ明显降低应激引起的下丘脑、垂体ＡＶＰ含量的升高。     

大鼠5—羟色胺能神经元相关营养因子的实验研究

本文从５．７－ＤＨＴ损伤的海马中制备了一种提取液，并测定了提取液对小脑内移植的胚胎５－ＨＴ神经细胞存活玫生长的影响，结果显示１：２００稀释的提取液能显著增加神经细胞的存取液对移植的中缝核神经细胞促进作用不明显，实验结果表明：（１）去５－ＨＴ神经的马提取液含有某种海马释放的物质，属于损伤诱发摧源性物质。（２）该营养物质可直接或间接地促进５－ＨＴ神经元的生长和促进５－ＨＴ神经递质的合成与代谢。（３）高     

睫状神经营养因子的cDNA克隆、表达、纯化及其生物活性鉴定

反转录ＰＣＲ扩增人睫状神经营养因子（ｈｕｍａｎｃｉｌｉａｒｙｎｅｕｒｏｔｒｏＰｈｉｃｆａｃｔｏｒ,ｈＣＮＴＦ）ｃＤＮＡ后,克隆进ｐＢＶ２２０,在大肠杆菌中实现原核高效表达,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ观察到分子量约为２４ｋＤ的预期表达产物,薄层扫描确定其表达量为２６％,制备电泳和凝胶过滤纯化后纯度达到９８％,生物活件分析表明,表达产物能刺激１０日龄鸡胚背根神经节细胞的生长,促进ＣＦＵ－ＧＭ的增殖。     

胰岛素对糖尿病大鼠海马内神经营养因子-3阳性神经元表达的影响

目的：观察糖尿病大鼠海马中神经营养因子-3(NT-3)的表达变化及胰岛素治疗对其表达的影响。方法：将雄性大鼠随机分为对照组,糖尿病1,3月组,胰岛素治疗1,3月组,STZ 腹腔注射制模,测体重与血糖值并取海马行 HE 和免疫组化 SABC 法染色,计算机图像分析系统测平均光密度值。结果：血糖在糖尿病组比对照组显著升高;胰岛素组与对照组无显著性差异。海马各区 NT-3免疫阳性神经元的数量及阳性强度在糖尿病组有不同程度降低,以 CA1区最明显。胰岛素组则不降低。结论：糖尿病大鼠海马神经元 NT-3表达减弱,胰岛素治疗可使海马神经元 NT-3表达恢复正常。     

睫状神经营养因子对谷氨酸引起海马神经细胞内游离Ca2+浓和P53蛋白表达的作用

目的通过探讨睫状神经营养因子对谷氨酸引起海马神经细胞内游离Ca2+浓度和P53蛋白表达的作用,提供睫状神经营养因子存在非基因组快速作用途径,并对基因组信号转导产生影响的证据。方法用活细胞内荧光探针Fura2／AM实时检测睫状神经营养因子对谷氨酸引起海马神经细胞内游离Ca     

脑源性神经营养因子在大鼠海马CA3区发育过程中的表达

采用免疫组织化学ＡＢＣ 法,研究脑源性神经营养因子在大鼠海马ＣＡ３ 区发育过程中的表达,观察其免疫反应产物的分布。结果表明：脑源性神经营养因子阳性物质在生后零天（Ｐ０）组位于ＣＡ３ 区细胞周围间质内;Ｐ１０,Ｐ１５ 和Ｐ２０ 组脑源性神经营养因子免疫反应产物位于锥体细胞内,幅射层内可见阳性苔藓纤维终末,这些终末随生后日龄增加而增加。Ｐ３０ 组脑源性神经营养因子免疫反应产物仅见于细胞周围间质内,未见细胞胞浆内有阳性物质分布,但偶见脑源性神经营养因子阳性细胞核位于ＣＡ３ 区锥体细胞层,辐射层内有较多的苔藓纤维阳性终末。本研究结果提示,发育早期大鼠海马ＣＡ３ 区脑源性神经营养因子分布于细胞周围间质而生后１０ 至２０ 天发育期间,ＣＡ３ 区锥体细胞合成脑源性神经营养因子并可沿神经元轴突顺行运输、传递信息。     

重组睫状神经营养因子对周围神经再生中多种细胞的作用

为了解重组睫状神经营养因子 ( CNTF)对周围神经再生中多种细胞的作用 ,用硅管套接切断的成年大鼠坐骨神经 ,在受损神经局部一次性给予重组睫状神经营养因子 :用免疫组织化学 ABC法结合计算机图像分析观测再生神经中 GAP-4 3、S10 0、CD68、MHC- 免疫反应阳性物质的变化。与生理盐水对照组相比 ,证明 CNTF组再生神经中上述四种物质显著增多。结果提示重组睫状神经营养因子能促进轴突的再生、Schwann细胞的迁入、单核细胞的渗出和活化     

人睫状神经营养因子基因在大肠杆菌中的表达

目的克隆人睫状神经营养因子（ｈＣＮＴＦ）基因，并在大肠杆菌宿主系统中高效表达出具有生物活性的ｈＣＮＴＦ蛋白。方法从人外周神经组织总ＲＮＡ经逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增得到编码人ＣＮＴＦ的全长ｃＤＮＡ片段，此片段经回收和纯化后克隆进ＰＧＥＭ－５Ｚｆ（＋）质粒载体，并进行了ＤＮＡ序列分析，然后进一步亚克隆进Ｔ７启动子表达载体，用ＩＰＴＧ在大肠杆菌宿主中诱导ｈＣＮＴＦ蛋白表达，并以体外培养的鸡胚背根神经节（ＤＲＧ）神经元测定了重组ｈＣＮＴＦ蛋白的神经营养活性。结果成功克隆了人ＣＮＴＦ基因，含重组ＣＮＴＦ质粒的大肠杆菌经０．４ｍｍｏｌ／ＬＩＰＴＧ诱导３小时后，靶蛋白占细菌总蛋白的２５％以上。结论ｈＣＮＴＦ基因的克隆和高效表达为进一步研究其结构功能关系和临床应用打下了基础     

重组睫状神经营养因子对受损周围神经施万细胞相关基因表达的作用

目的研究重组睫状神经营养因子(CNTF)对受损周围神经施万细胞基因表达的作用。方法用硅管套接切断的大鼠坐骨神经,在受损神经局部给予重组CNTF,术后用免疫组织化学ABC法结合计算机图像分析观测S100蛋白(S100)、生长相关蛋白-43(GAP-43)、磷酸化酪氨酸(PTyr)、信号转导子和转录激活子(STAT)3的免疫反应阳性物质在修复侧远段神经的分布和相对含量。结果CNTF组修复侧远段神经相应区域S100、GAP-43、PTyr、STAT3阳性物质的含量显著或非常显著高于生理盐水组。结论重组CNTF能上调受损神经施万细胞S100、GAP-43、PTyr和STAT3的表达,提示重组CNTF通过强化受损神经施万细胞JAK-STAT途径,E调其S100和GAP-43的基因表达。     

大鼠海马CA3区在学习记忆时突触可塑性的变化

目的：探讨学习记忆的形成和遗忘与突触可塑性的关系。方法：用水迷宫训练大鼠21天建立空间辨别性学习记忆模型,随后停止训练,时间分别为3天,7天及14天,用免疫组化方法和图像分析技术,检测了突触素在大鼠海马CA3区表达的变化。结果：对照组大鼠海马CA3区突触素的表达弱,免疫反应产物呈点状颗粒,沿辐射层长轴分布,多形层也有散在分布;模型组大鼠突触素染色明显比对照组的深,密集的小颗粒呈带状沿辐射层排列,在辐射层的底部可见一些大的阳性颗粒,随着停止训练时间的延长,突触素的表达逐渐减弱。结论：空间学习记忆导致海马CA3区辐射层新突触的形成,而随着空间学习记忆的遗忘,又致新形成突触的消退。     

睫状神经营养因子对体外培养的星形胶质细胞细胞周期及Fos蛋白表达的影响

目的研究睫状神经营养因子（CNTF）对体外培养的大鼠大脑皮质星形胶质细胞（Ast）细胞周期及Fos蛋白表达的影响。方法通过体外纯化培养获取大鼠大脑皮质Ast,将CNTF加入培养液,作用相应的时刻点后,应用流式细胞仪测定细胞周期的变化,采用免疫细胞化学方法研究Fos蛋白的表达。结果CNTF作用Ast6垢,可显著促进细胞周期进程,表现为G0／G1期细胞百分比降低;S期＋G2／M期细胞百分比（增殖指数,poliferation index,PI值）升高。12h促增殖作用达高峰,24h、48h有所恢复,但PI仍明显高于对照组。CNTF作用于Ast 2 h后即可引起Fos蛋白的显著表达,并持续至24h,而糖皮质激素预处理可明显抑制Fos蛋白表达。结论CNTF可促进Ast增殖及Fos蛋白表达。     

肌源性神经营养因子(MDNF)对体外培养的大鼠脊髓运动神经元缺氧时Bcl-2表达的影响

为证明大鼠肌源性神经营养因子对损伤神经的保护作用 ,本文观察了此因子对缺氧时体外培养的大鼠脊髓运动神经元Bcl-2表达的影响。本实验从成鼠和乳鼠骨骼肌中提取肌源性神经营养因子 ,取 10 0μl (0 .1μg/ml)加入培养的胚胎大鼠脊髓运动神经元的培养液中 ,对照组加入等量的 PBS。然后用液体石蜡封闭液面造成神经元缺氧损伤 ,3 d后行 Nissl染色和免疫组化反应 ,观察和计数大鼠脊髓运动神经元存活数以及 Bcl-2免疫反应阳性神经元数 ,并对 Bcl-2阳性神经元作平均光密度分析。结果发现 :经成鼠和乳鼠肌源性神经营养因子孵育的脊髓运动神经元缺氧后的神经元存活数、Bcl-2阳性神经元数以及平均光密度均明显高于对照组 ,但乳鼠肌源性神经营养因子的效果更好。提示 :大鼠肌源性神经营养因子能增强缺氧时脊髓运动神经元 Bcl-2的表达 ,抑制缺氧后运动神经元的死亡 ,以乳鼠肌源性神经营养因子的效果为最好     

肌源神经营养因子(MDNF)对体外培养的大鼠脊髓运动神经元缺氧时p53表达的影响

本研究目的是观察缺氧时肌源神经营养因子(MDNF)对体外培养的大鼠脊髓运动神经元p53蛋白表达的影响。从成鼠和胎鼠骨骼肌中提取MDNF。在胎鼠脊髓运动神经元培养第7 d时将其分成对照组和实验组(包括成鼠MDNF组和胎鼠MDNF组),取100μl MDNF(0.1μg/ml)加入培养大鼠脊髓运动神经元的培养液中,对照组加入等量的PBS。然后用液体石蜡封闭液面造成神经元缺氧损伤,缺氧3 d后,应用Nissl染色、原位末端标记、免疫组化方法,对损伤的大鼠脊髓运动神经元进行检测。结果表明:培养的大鼠脊髓运动神经元缺氧3 d后,经MDNF孵育可使脊髓运动神经元TUNEL、p53表达均较对照组明显减弱,神经元损伤程度减轻,神经元存活数明显高于对照组,且胎鼠MDNF的效果更好。提示:大鼠脊髓运动神经元缺氧后可出现神经细胞凋亡,但胎鼠MDNF较成鼠MDNF更能减弱缺氧时脊髓运动神经元p53的表达,抑制缺氧后神经元的死亡。     

周围神经再生时重组CNTF对受损神经元 STAT3表达和酪氨酸磷酸化的作用

目的 研究周围神经再生时，重组睫状神经营养因子(CNTF)对受损神经元JAK-STAT途径和酪氨酸磷酸化的作用。方法 用硅管套接切断的成年大鼠坐骨神经，术时在受损神经局部给予重组CNTF，用免疫组织化学ABC法结合计算机图像分析研究STAT3、磷酸化酪氨酸(PTyr)免疫反应阳性物质在L3～5段脊髓前角外侧核和L5脊神经节神经元中的分布和相对含量。结果 与生理盐水组相比，CNTF组脊髓前角外侧核神经元胞核STAT3和胞膜PTyr阳性物质的含量更高，脊神经节神经元胞浆和胞核，PTyr阳性物质的含量更高。结论 重组CNTF能激活和强化受损运动神经元的JAK-STAT途径，增强受损神经元的酪氨酸磷酸化。