共查询到17条相似文献,搜索用时 218 毫秒
1.
为探讨阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)患血清对造血干/祖细胞增殖的影响,应用单个细胞培养及液体、半固体群体细胞培养方法,将病人血清与正常人血清分别加入培养体系中,观察不同血清对正常人及病人正常及异常表型的CD34^ 细胞的直接影响。发现在单个细胞培养条件下,加入PNH血清与加入正常人血清时,正常人及PNH两种表型的CD34^ 细胞在细胞分裂、集落形成、较大集落形成的比例、单个细胞扩增能力及细胞总数诸方面均无明显差别(P>0.05)。在半固体集落培养时,加入病人或正常人血清,对正常人及病人正常表型CD34^ 细胞的集落形成能力的影响无显差异(P>0.05),而病人CD34^ CD59^-造血干/祖细胞的集落形成率在加入病人血清组高于加入正常人血清组(P<0.05)。结果说明,在单个细胞及群体细胞液体培养条件下,加入病人血清与加入正常人血清,对正常人以及病人正常或异常表型造血干/祖细胞和长的影响无显差别,而在半固体培养条件下,则显示病人血清更有利于患的异常表型CD34^ 细胞的集落生成。 相似文献
2.
为了利用磁力搅拌悬浮培养装置大规模体外扩增脐血造血祖细胞,从脐血分离单个核细胞,以无血清培养基stemspan添加干细胞因子、FLT-3配基及血小板生成素为培养体系进行培养。先研究磁场(25和50mT)对静态扩增培养的造血祖细胞生长和集落形成能力的影响,再研究磁力搅拌悬浮大规模培养对造血细胞总数扩增、造血集落形成和表面分子标志表达变化。结果表明,在0,25和50mT磁场组和磁转子组,细胞总数扩增倍数和造血集落形成数在各组间均无明显区别(P〉0.05)。经过7天的扩增培养,磁力搅拌悬浮大规模培养细胞总数扩增倍数为2.8±0.45,高于静态培养细胞总数扩增倍数(2.1±0.48)(P〈0.01);磁力搅拌悬浮培养组形成的红系集落数(1983.5±582.6)、粒-巨噬细胞集落数(186.4±62.7)明显高于静态培养形成的相应的造血集落数(分别为1396.2±425.7和136.5±40.8)(P均〈0.05):磁力搅拌悬浮扩增后造血干细胞(CD34^+、CD34^+/CD38^-或CD133^+)比例分别为(0.9±0.34)%、(0.7±0.21)%和(1.1±0.35)%,低于静态培养的干细胞比例[分别为(1.4±0.35)%、(1.2±0.34)%和(1.6±0.68%)](P均〈0.05);但是,归巢相关分子CD184和CD62L高于静态扩增培养..结论:磁力搅拌悬浮装置可能有利于脐血造血祖细胞规模扩增,本研究结果还有待于动物实验及临床移植试验进一步验证. 相似文献
3.
本研究应用BALB/c裸鼠为移植模型探讨阵发性睡眠性血红蛋白尿症(paroxysmal nocturnal hemoglobin—uria,PNH)患者CD34^+CD59^+的增殖和重建造血的能力,为实现PNH患者自体骨髓移植或自体外周血造血干细胞移植提供实验依据。利用免疫磁珠双阳性分选法,从正常人及PNH患者骨髓中分离出两组CD34^+CD59^+细胞,分别进行体外扩增,并将体外扩增的正常人和PNH患者骨髓CD34^+CD59^+细胞分别输注给接受亚致死剂量照射的BALB/c裸鼠。应用流式细胞技术和DNA检测技术检测受鼠骨髓、脾脏和外周血中人CD45^+细胞。结果表明:PNH组的CD34^+CD59^+细胞在体外生存、扩增能力似弱于正常人对照组。但CD34^+CD59^+细胞输注给受鼠后6周,在受鼠骨髓、脾脏和外周血中可检测到人CD45^+细胞,PNH组受鼠CD45^+细胞水平与正常人对照组相比,无统计学差异。结论:PNH患者CD34^+CD59^+细胞仍具有同正常人CD34^+CD59^+细胞相同的生物特性,能体外扩增并能保持正常干/祖细胞的特性。 相似文献
4.
PNH患者外周血及骨髓正常和异常造血干/祖细胞组成分析 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 研究阵发性睡眠性血红蛋白尿症 (PNH)患者外周血及骨髓造血干 祖细胞的组成及含量。方法 用流式细胞仪测定 2 1例PNH患者外周血及骨髓造血干 祖细胞 (以CD3 4+为标志 )锚连蛋白CD59的表达 ,并将患者造血干 祖细胞总数与正常人进行比较。结果 PNH患者骨髓及外周血CD3 4+细胞总量均明显低于正常人 (P <0 .0 0 1) ,但在疾病缓解时总量与正常对照差异无显著性 (P >0 0 5 )。PNH患者外周血CD3 4+细胞主要以CD59+表型为主 [CD3 4+CD59+细胞占总CD3 4+细胞的 (81.4±16 1) % ],临床未缓解或骨髓中CD3 4+细胞以CD59- 表达为主的患者 ,其外周血CD3 4+细胞仍以CD59+表型为主。结论 PNH患者造血干 祖细胞含量明显减少 ,但在外周血中以正常表型为主 相似文献
5.
阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者骨髓CD34+CD59+细胞与CD34+CD59-细胞生物学性能的研究 总被引:5,自引:0,他引:5
目的 探讨阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)患CD34^ CD59^ 细胞的特性及PNH克隆呈优势造血的可能原因,以探索PNH发病的内在机制。方法 用免疫磁珠吸附法富集纯化CD34^ 细胞,再用流式细胞仪分选出PNH患的CD34^ CD59^ 细胞、CD34^ CD59^ 细胞及正常对照CD34^ 细胞。分别进行体外扩增液体培养2周,并对扩增前、后的细胞进行半固体培养。结果 ①PNH患CD34^ CD59^ 细胞与正常对照CD34^ 细胞形成集落形成单位(CFU)均在第7天达到扩增高峰,并且扩增后的细胞仍能保持CD59抗原,无GPI锚连蛋白的丢失。②正常对照的CD34^ 细胞在生存、增殖、形成CFU及扩增能力上均明显强于FHN患的CD34^ CD59^ 细胞及CD34^ CD59^-细胞.③PNH患CD34^ CD59^ 细胞及CD34^ CD59^ 细胞体外半固体培养,其形成CFU的能力无明显差异。④PNH患CD34^ CD59^ 细胞及CD34^ CD59^ 细胞在SCF IL3 IL6 FL Tpo及SCF IL3 IL6 FL Tpo Epo组合下液体培养,其生存、增殖、扩增等能力上均无明显差异。但在SCF IL3 IL6 FL Tpo Epo GM-CSF组合下液体培养,CD34^ CD59^ 细胞的生存、增殖、扩增能力均明显强于CD34^ CD59^ 细胞。结论 ①正常对照的CD34^ 细胞在生存、增殖、形成CFU及扩增能力上均明显强于PNH患的CD34^ CD59^ 细胞。②PNH患CD34^ CD59^ 细胞及CD34^ CD59^ 细胞体外半固体培养,以及在SCF IL3 IL6 LF Tpo及SCF IL3 IL6 FL Tpo Ep组合下液体培养,其生存、增殖、扩增等能力上均无明显差异,说明CD34^ CD59^ 细胞在造血能力上并无内在的优势。GM—CSF或许是使PNH克隆呈造血优势的原因之一。 相似文献
6.
裸鼠腹腔输注体外扩增的阵发性睡眠性血红蛋白尿症病人骨髓CD34+CD59+细胞的研究 总被引:1,自引:1,他引:1
应用BALB/c裸鼠为移植模型,将在体外扩增的阵发性睡眠性血红蛋白尿症(paroxysmal nocturnal hemoglobinuria,PNH)病人的CD34^+CD59^+细胞进行移植。研究其增殖能力和重建造血的情况,为实现PNH患者进行临床自体骨髓移植(ABMT)或自体外周血干细胞移植(APBSCT)奠定基础。本研究利用免疫磁珠双阳性分选法。从PNH患者骨髓中分离出足够数量的CD34^+CD59^+细胞进行体外扩增,并将体外扩增的细胞输注给接受亚致死剂量照射的BALB/c裸鼠。结果显示:移植6周后,用流式细胞术和DNA检测方法均检测到裸鼠骨髓、脾脏和外周血中人的CD45^+细胞,而接受PNH病人CD34^+CD59^+细胞移植后的裸鼠,其血常规指标有一定恢复,但并未完全恢复。结论:PNH病人骨髓CD34^+CD59^+细胞体外扩增后仍能保持造血祖细胞的生物特性,在照射的裸鼠中能重建造血。 相似文献
7.
间充质干细胞对脐血CD34^+细胞扩增及其细胞特性变化的影响 总被引:1,自引:1,他引:1
本研究探讨脐带间充质干细胞(MSC)对CD34^+细胞(HSPC)体外扩增的支持作用及对CD34^+细胞表面标志、归巢黏附分子、集落形成能力等干细胞特征变化的影响。用免疫磁珠法从新鲜分离的脐血单个核细胞分离CD34^+造血干祖细胞(HSPC);用MSC饲养层(feeder)制备经^137Cs照射的间充质干细胞饲养细胞(MSC feeder cells)。将CD34^+细胞接种在不同的培养体系中,实验分为3组:HSPC+CK组为培养液中加入细胞因子组合(SCF、FL和TPO),HSPC+MSC组为CD34^+细胞接种在MSC feeder上,HSPC+MSC+CK组同时加入细胞因子组合及MSC饲养细胞。培养后4、7、10、14天计数有核细胞总数(MNC),计算细胞扩增情况;用流式细胞术检测不同处理组间CD34^+细胞及亚群免疫表型、归巢黏附分子和集落形成能力。结果表明:在2周的培养时间里,3组MNC和CD34^+细胞均明显增加,MNC扩增数依次HSPC+MSC+CK组〉HSPC+CK组〉HSPC+MSC组。体外扩增10天内HSPC+MSC+CK组MNC得到大量的扩增,同时CD34^+细胞的扩增亦较高。培养4天3组细胞CD34^+比例较0天有明显下降(P〈0.01);扩增后CD34^+细胞比例:HSPC+MSC组〉HSPC+MSC+CK组〉HSPC+CK组(P〈0.01);各组CD34^+细胞亚型细胞比例有所不同,HSPC+CK组4天时CD34^+CD38^-细胞有一过性升高(62.71%),之后迅速降低,7天时为0.05%;HSPC+MSC组7天时CD34^+CD38^-细胞比例为18.92%,与HSPC+CK组比较差异有统计学意义(P〈0.05)。从集落形成分析结果看出:MSC、细胞因子混合组扩增后细胞集落形成能力在不同时间点均维持在较高水平。结论:脐血CD34^+细胞在体外短期培养(〈7天)下,MSC和细胞因子联合应用能同时使CD34^+细胞得到明显的扩增并维持造血干祖细胞的生物学特征。 相似文献
8.
脐血和骨髓均富含造血干/祖细胞,但二者在造血干/祖细胞的含量上存在差别。脐血中各CD34^ 细胞亚群有着独特的免疫表型。脐血造血干/祖细胞能在体外扩增,扩增后的CD34^ 细胞能在SCID小鼠体内造血,由脐血CD34^ 细胞可以生成淋巴细胞和内皮细胞。脐血造血干/祖细胞移植与骨髓造血干/祖细胞移植在患者的生存率、复发率及移植免疫排斥等方面均具有可比性,有着极大的潜在价值。 相似文献
9.
不同细胞因子组合对人脐血单个核细胞体外扩增及CD49d和CXCR4表达的影响 总被引:2,自引:0,他引:2
为了探讨不同的细胞因子组合对脐血单个核细胞体外的扩增作用及扩增后CD49d和CXCR4的变化,将新鲜脐血标本分离的单个核细胞接种于含有不同细胞因子组合的无血清无基质培养体系中培养7天,在0天,7天检测有核细胞数,CD34^+细胞数及CD34^+CXCR4^+,CD34^+CD49d^+的细胞数和集落形成单位(CFU)数.根据不同细胞因子组合实验分组为:对照组;SF组(SCF+FL);SFT组(SCF+FL+TPO)和SFT6组(SCF+FL+TP0+IL-6)。结果表明,和对照组相比,SF组合仅能低水平支持脐血造血细胞扩增,加入TPO后即SCF/FL/TPO组合能有效的扩增脐血细胞,但SFT和SFT6两组之间差异却无明显发生(P〉0.05);SF,SFT和SFT63组的细胞因子组合均可提高脐血CD34^+细胞CD49d,CXCR4的表达,但3组之间差异无显著性(P〉0.05)。结论:SF组合可协同扩增人造血细胞,但协同作用较弱;TPO在脐血造血干/祖细胞体外扩增中起重要调节作用,而IL-6作用不显著;SCF/FL/TPO 3种因子组合不仅可促进脐血造血祖细胞的扩增,而且可上调脐血造血细胞CD49d,CXCR4表达。 相似文献
10.
11.
阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者骨髓CD34+CD59+细胞的体外扩增 总被引:2,自引:0,他引:2
目的研究阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)患者CD34+CD59+细胞的分离、纯化及其体外扩增的条件和性能,为探索PNH新的治疗途径提供实验依据.方法利用免疫磁珠-流式细胞仪二步分选法,从PNH患者骨髓中分选出CD34+CD59+细胞,然后对CD34+CD59+细胞在不同造血生长因子组合条件下,进行体外扩增培养2周.结果体外扩增的最适宜的生长因子组合为SCF+IL-3+IL-6+FL+Tpo+Epo,最适宜的扩增时机为第7天,在此条件下,CD34+CD59+细胞的扩增倍数为22.42±3.73倍.CD34+CD59+细胞在扩增以后,仍保持较好的形成集落形成单位的能力,但是其向多系分化的潜能有所下降.结论 PNH患者CD34+CD59+细胞能够进行体外扩增.按照最佳扩增条件,在对PNH患者进行自体骨髓移植或自体外周血干细胞移植时有一定的应用价值. 相似文献
12.
目的 探讨CD34+ 富集细胞和单个核细胞 (MNC)的体外扩增特性。方法 利用Min iMACS系统富集CD34+ 细胞 ,在相同条件下与同批MNC进行对照培养 ;观察了再次富选和MNC培养上清 (MNC SN)对CD34+ 富集细胞扩增的影响 ;并尝试了MNCCD34- 细胞的培养。结果 虽然CD34+ 富集细胞具有很高的扩增潜力 ,但在培养过程中 ,其集落密度和CD34 + 细胞含量却始终呈下降趋势 ,而MNC在培养中却出现了一个上升的趋势 ,集落密度和CD34+ 细胞含量分别由第 0天的 (4 12± 16 7) 10 5细胞和 (1.12± 0 .4 2 ) %增至第 7天的 (116 2± 5 6 6 ) 10 5细胞和 (4 .17± 1.4 4 ) % ;再次富选可以使培养过的CD34+ 富集细胞的总细胞和CD34+ 细胞扩增能力大大提高 ;MNCCD34- 细胞具有集落形成和转化为CD34+ 细胞的能力 ;MNC SN对CD34+ 富集细胞的集落形成有促进作用 ,而同时又对CD34+ 细胞有促分化作用。结论 CD34+ 富集细胞在体外大量扩增的同时存在大量分化 ,其在培养过程中产生的CD34-细胞对CD34+ 细胞的扩增有抑制作用 ;脐血MNC中大量的CD34- 细胞含有造血干 祖细胞 ,其分泌的细胞因子有促进CD34+ 细胞向较为成熟的集落形成祖细胞分化的作用。 相似文献
13.
磁珠双阳性分选法在阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者骨髓CD34+CD59+细胞体外扩增的应用 总被引:1,自引:2,他引:1
应用磁珠双阳性分选法在体外扩增阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)患的CD34 CD59 细胞,为实现PNH患进行临床自体骨髓移植(ABMT)或自体外周血干细胞移植(APBSCT)奠定基础。流式细胞术分选虽然经常用于细胞纯化,但难于满足大规模临床细胞分选的需要。本研究利用免疫磁珠系统,应用隔夜孵育法去除第一次分选时CD34 细胞吸附的磁珠,经过两次磁珠双阳性分选,从PNH患骨髓中分离出足够数量的CD34 CD59 细胞,用于体外培养扩增。结果显示:磁珠双阳性法分选的CD34 CD59 细胞与磁珠—流式细胞术二步分选法比较,在细胞生存、增殖、扩增及形成造血集落形成单位(CFU)的能力上均无显性差异。结论:磁珠双阳性分选法可能推广应用于其它双阳性或多阳性细胞的分离纯化,尤其是造血干/祖细胞的分离纯化。 相似文献
14.
阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者外周血T淋巴细胞亚群及活化分子表达的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 探讨阵发性睡眠性血红蛋白尿症 (PNH)患者T淋巴细胞的功能及活化状态与PNH临床的关系。方法 应用流式细胞术及免疫磁珠分选术 ,测定了 18例PNH患者外周血单个核细胞 (PBMNC)及CD59+ 和CD59-PBMNC中CD3 + 、CD4+ 及CD8+ 细胞表型 ,并测定了新诊断的未经治疗的 6例PNH患者外周血中NK细胞及CD4+ CD2 8+ /CD4+ 、CD8+ CD2 8+ /CD8+ 、CD4+ HLR DR+ /CD4+ 、CD8+HLR DR+ /CD8+ 及CD8+ CD3 8+ /CD8+ 淋巴细胞表面分子表达比值。结果 PNH患者PBMNC中CD3 +CD8+ /CD3 + CD4+ 细胞比值增加 ,为 1.2 2± 0 .5 1,对照组为 0 .86± 0 .2 7,两者比较 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。分选后PNH患者CD59-PBMNC中CD3 + CD8+ /CD3 + CD4+ 细胞比值增加 ,为 2 .31± 1.5 6 ,CD59+PBMNC为 0 .6 2± 0 .2 7,两者比较 ,差异有统计学意义 (P <0 .0 1)。CD3 + CD8+ /CD3 + CD4+ 细胞比值与骨髓衰竭 (BMF)的级差相关分析呈正相关。PNH患者CD4+ CD2 8+ /CD4+ 细胞比值明显减少 ,为 0 .5 2±0 .11(对照为 1.0 0± 0 .0 6 ) ,而CD8+ HLR DR+ /CD8+ 增加 ,为 0 .4 5± 0 .2 6 (对照为 0 .10± 0 .0 6 )。结论 PNH患者CD3 + CD8+ /CD3 + CD4+ 细胞比值增加 ,病变表型细胞更易发生在CD8+ 细胞群中。CD4+ 细胞中CD2 8+ 辅助刺激因 相似文献
15.
目的 观察阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)患者骨髓造血细胞对粒细胞集落刺激因子(G CSF)的反应并研究其机制。方法 ①用半固体培养基体外培养17例PNH患者和12名正常人骨髓单个核细胞(BMMNC),观察加与不加G CSF两组粒单核细胞集落(CFU GM)和集簇(cFU GM)形成情况。PNH患者骨髓GPI+CD34+和GPI-CD34+细胞表达粒细胞集落刺激因子受体(G CSFR、CD114)和干细胞生长因子受体(C KIT、CD117)的差异。②用流式细胞术检测20例初发PNH患者和12名正常对照BMMNC和CD34+细胞表面GPI锚定蛋白CD59以及CD114和CD117的表达。结果 ①无G CSF及加G CSF培养PNH组cFU GM数量分别为( 112. 41±22. 74 )和( 133. 82±25. 85 ) /105BMMNC,均较正常对照的(190. 33±36. 05)和(309. 42±92. 94) /105 BMMNC少(P<0. 05);无G CSF及加G CSF培养PNH组CFU GM数量分别为(24. 29±9. 05)和(27. 53±10. 65) /105 BMMNC,也较正常对照的(77. 42±36. 01)和(98. 00±43. 14) /105 BMMNC少(P<0. 05 )。PNH组加G CSF后,cFU GM增加率为(20. 29±6. 82)% (P<0. 05),CFU GM增加率为(16. 45±3. 28)% (P>0. 05)。正常对照加G CSF后,cFU GM增加率为(56. 11±37. 59)%,CFU GM增加率为(48. 03±13. 60)% (P值均<0. 05),PNH组增加率均低于正常对照(P<0 相似文献
16.
Impaired growth and elevated fas receptor expression in PIGA(+) stem cells in primary paroxysmal nocturnal hemoglobinuria 总被引:2,自引:0,他引:2
Chen R Nagarajan S Prince GM Maheshwari U Terstappen LW Kaplan DR Gerson SL Albert JM Dunn DE Lazarus HM Medof ME 《The Journal of clinical investigation》2000,106(5):689-696
The genetic defect underlying paroxysmal nocturnal hemoglobinuria (PNH) has been shown to reside in PIGA, a gene that encodes an element required for the first step in glycophosphatidylinositol anchor assembly. Why PIGA-mutated cells are able to expand in PNH marrow, however, is as yet unclear. To address this question, we compared the growth of affected CD59(-)CD34(+) and unaffected CD59(+)CD34(+) cells from patients with that of normal CD59(+)CD34(+) cells in liquid culture. One hundred FACS-sorted cells were added per well into microtiter plates, and after 11 days at 37 degrees C the progeny were counted and were analyzed for their differentiation pattern. We found that CD59(-)CD34(+) cells from PNH patients proliferated to levels approaching those of normal cells, but that CD59(+)CD34(+) cells from the patients gave rise to 20- to 140-fold fewer cells. Prior to sorting, the patients' CD59(-) and CD59(+)CD34(+) cells were equivalent with respect to early differentiation markers, and following culture, the CD45 differentiation patterns were identical to those of control CD34(+) cells. Further analyses of the unsorted CD59(+)CD34(+) population, however, showed elevated levels of Fas receptor. Addition of agonist anti-Fas mAb to cultures reduced the CD59(+)CD34(+) cell yield by up to 78% but had a minimal effect on the CD59(-)CD34(+) cells, whereas antagonist anti-Fas mAb enhanced the yield by up to 250%. These results suggest that expansion of PIGA-mutated cells in PNH marrow is due to a growth defect in nonmutated cells, and that greater susceptibility to apoptosis is one factor involved in the growth impairment. 相似文献
17.
阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者外周血淋巴细胞增殖、杀瘤活性及其对正常表型骨髓造血细胞的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
阵发性睡眠性血红蛋白尿症 (PNH)克隆可能由于缺乏GPI锚连蛋白而逃脱免疫攻击 ,形成生长优势。本研究测定PNH患者淋巴细胞增殖反应及对K5 6 2细胞的杀伤作用 ,并与正常对照比较 ,观察其淋巴细胞功能。采用体外液体培养体系 ,应用免疫磁珠技术分选PNH患者骨髓CD34+ 及CD34- 细胞 ,分别向 2组细胞及对照细胞加入自身CD5 9+ 或CD5 9- 淋巴细胞及其培养上清液、外源性IFN γ及IL 2。培养 10天后 ,测定骨髓细胞中PNH细胞 (CD5 9- )百分数 ,观察淋巴细胞对骨髓中CD34+ 及CD34- 细胞中PNH细胞含量的影响。研究结果表明 ,对PHA的增殖反应 ,PNH患者未分选的淋巴细胞与健康对照比较、PNH患者自身CD5 9+ 与CD5 9- 淋巴细胞之间比较均无统计学差异 ,但对K5 6 2细胞的杀伤作用PNH患者未分选的淋巴细胞明显低于健康对照组 ,分别为 (5 0 .0 0± 2 8.6 7) %及 (76 .13± 10 .15 ) % (P <0 .0 5 ) ,而PNH患者CD5 9- 淋巴细胞与CD5 9+ 淋巴细胞之间无显著性差异。PNH患者骨髓细胞中加入自身CD5 9- 淋巴细胞或其培养上清液、CD5 9+ 淋巴细胞或其培养上清液、外源性IFN γ和IL 2培养后 ,CD5 9+ 细胞均有不同程度下降 ,除CD5 9+ 淋巴细胞组外 ,其他各组CD5 9+ 细胞下降与培养前比较有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,IFN γ及IL 2组 相似文献