Toll样受体与缺血-再灌注损伤

Toll样受体能识别病原相关分子模式和损伤相关分子模式,在启动固有免疫反应中发挥重要作用,并通过结合内源性配体物质在缺血-再灌注损伤中发挥一定作用.深入研究Toll样受体与缺血-再灌注损伤的关系可能有助于对移植、心血管手术、休克等过程中缺血-再灌注损伤的防治.     

雷公藤内酯醇对大鼠肾缺血再灌注损伤时Toll样受体4表达的影响

目的 观察雷公藤内酯醇(TRI)对大鼠肾缺血再灌注损伤时肾组织中Toll样受体4(TLR4)表达的影响.方法 随机将51只Wistar大鼠分为3组.(1)阴性对照组(n=15):游离双侧肾脏,切除右肾,缝合腹壁.(2)缺血再灌注组(n=18):实验过程与阴性对照组相同,但在切除右肾和游离左肾之后,将左肾动、静脉夹闭45 min,然后开通.(3)TRI处理组(n=18):肾缺血再灌注前3 d经大鼠腹腔注射TRI 0.4 mg/kg,每天1次,连续3 d,其他实验过程与缺血再灌注组相同.肾缺血再灌注1、3、5 d后,分别采用全自动生化分析仪检测血清尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)的含量;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肾组织中TLR4 mRNA的表达水平;免疫印记法(Western blot)检测肾组织中TLR4表达水平.结果 肾缺血再灌注1、3、5 d后,缺血再灌注组和TRI处理组血清BUN及Cr均明显高于阴性对照组(P＜0.01),肾组织中TLR4 mRNA和TLR4的表达也明显高于阴性对照组(P＜0.05);但与缺血再灌注组比较,TRI处理组血清BUN和Cr明显降低(P＜0.01),肾组织中TLR4 mRNA和TLR4的表达也显著降低(P＜0.05).结论 雷公藤内酯醇可以减轻肾缺血再灌注损伤,其机制可能是通过抑制TLR4的表达而发挥作用的.     

七氟醚预处理对大鼠心肌缺血再灌注时Toll 样受体4表达的影响

目的 探讨七氟醚预处理对大鼠心肌缺血再灌注时Toll样受体4(TLR4)表达的影响.方法 清洁级健康雄性SD大鼠30只,体重250～300 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为3组(n=10):假手术组(S组)开胸暴露30 min,左冠状动脉前降支仅穿线不结扎;心肌缺血再灌注组(IR组)采用结扎左冠状动脉前降支30 min,再灌注2 h的方法 制备大鼠心肌缺血再灌注模型;七氟醚预处理组(SP组)吸入2.5%七氟醚30 min,洗脱15 min后制备模型.于再灌注2 h时处死大鼠取心脏,观察心肌组织病理学结果,采用Western blot法检测TLR4、NF-κB和TNF-α的蛋白表达水平.结果 与S组比较,IR组和SP组TLR4、NF-κB和TNF-α的蛋白表达上调(P＜0.05);与IR组比较,SP组TLR4、NF-κB和TNF-α的蛋白表达下调(P＜0.05).病理学结果 显示:SP组心肌细胞损伤较IR组减轻.结论 七氟醚预处理可通过抑制TLR4表达上调降低炎性反应,从而减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤.

Abstract：

Objective To investigate the effect of sevoflurane preconditioning on the expression of Toll-like receptor 4(TLR4) during myocardial ischemia reperfusion(IR) in rats.Methods Thirty male SD rats weighing 250-300 g were randomly divided into 3 groups (n=10 each):sham operation group (S group) , IR group and sevoflurane preconditioning group(SP group).Myocardial ischemia was produced by temporary ligation of anterior descending branch of left coronary artery for 30 min followed by 2 h reperfusion. In SP group, the animals inhaled 2.5% sevoflurane for 30 min followed by 15 min washout before ischemia. The rats were sacrificed at 2 h of reperfusion, hearts removed and myocardial tissues obtained for microscopic examination.The expression of TLR4, NF-κB and TNF-α was detected using Western blot. Results The expression of TLR4, NF-κB and TNF-α was significantly up-regulated in IR and SP groups compared with group S (P＜0.05).The expression of TLR4, NF-κB and TNF-α was significantly down-regulated in group SP compared with group IR (P＜0.05).The myocardial injury was attenuated in group SP.Conclusion Sevoflurane preconditioning can attenuate myocardial IR injury by inhibiting the up-regulation of TLR4 expression and reducing the inflammatory response.     

Toll样受体在肝脏缺血-再灌注损伤中的作用研究进展

Toll样受体家族作为模式识别受体对大量的高度保守的配体反应.这些基质包括病原体相关分子模式激活识别入侵的病原体,以及损伤相关分子模式识别内生组织损伤.Toll样受体家族在激活天然免疫中发挥着重要作用而且还调节获得性免疫,是连接先天免疫和获得性免疫的桥梁.虽然Toll样受体家族的功能多样,它们在肝脏和其他器官缺血-再灌注损伤中的作用已经受到了广泛的关注,Toll样受体家族作为干预治疗的潜在措施开始受到人们青睐.我们总结Toll样受体家族的生物学功能,介绍Toll样受体家族在肝缺血-再灌住损伤中作用的最新研究结果.     

舒芬太尼预处理对大鼠心肌缺血再灌注时心肌Toll样受体4表达的影响

目的 探讨舒芬太尼预处理对大鼠心肌缺血再灌注时心肌Toll样受体4(TLR4)表达的影响.方法 雄性SD大鼠36只,体重250～ 300 g,采用随机数字表法,将大鼠分为3组(n=12):假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)和舒芬太尼预处理组(SPC组).采用结扎冠状动脉左前降支的方法建立心肌缺血再灌注模型.SPC组于心肌缺血前经股静脉输注舒芬太尼0.2 μg·kg-1·min-1,输注5min,停止5 min,重复3次进行预处理;S组和I/R组输注等容量生理盐水.于心肌缺血前30 min(T0)、缺血前即刻(T1)、缺血30 min(T2)、再灌注30 min(T3)和再灌注120 min(T4)时记录HR及MAP.再灌注120 min时,取血样,测定血清TNF-α浓度;然后处死大鼠,测定心肌梗死体积以及心肌TLR4和NF-κB p65的表达.结果 3组间不同时点HR比较差异无统计学意义(P＞0.05).与S组比较,I/R组和SPC组T2-4时MAP降低,血清TNF-α浓度升高,心肌TLR4和NF-KB p65表达上调(P＜0.01);与I/R组比较,SPC组MAP各时点差异无统计学意义(P＞0.05),心肌梗死体积减少,血清TNF-α浓度降低,心肌TLR4和NF-κB p65表达下调(P＜0.01).结论 舒芬太尼预处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤的机制可能与下调心肌TLR4的表达有关.     

小鼠肝缺血再灌注后Toll样受体2在缺血肝组织中的激活及其意义

目的　探索小鼠肝缺血再灌注后缺血肝组织中Toll样受体 2 (TLR2 )的激活及其与肝功能损伤之间的关系。方法　缺血再灌注损伤组 (I/R组 ),假手术对照组 (S组 )均采用实时荧光定量多聚酶链反应检测肝组织中TLR2mRNA及TLR2蛋白的表达,同时检测门静脉血浆丙氨酸氨基转移酶(ALT)、肿瘤坏死因子α(TNF α)及门静脉血清内毒素 (endotoxin, EN)水平。结果　肝脏部分缺血1h再灌注 4h后,I/R组与S组小鼠缺血肝组织TLR2 mRNA的表达 (ΔCt值 )分别为 1. 0 6±0. 9 1和5. 0 8±1. 3 2, 两组间差异有显著性 (P < 0. 0 1 ),I/R组缺血肝组织TLR2 蛋白的表达 (OD值 )( 4 3 3. 9 1±2 5. 5 3 )水平较S组 ( 1 0 2. 8 6±1 3. 5 8 )显著升高 (P< 0. 0 1 )。I/R组门静脉血清TNF α[ ( 1 1 2. 5 2±1 4. 4 1 )pg/mL]较S组 [ ( 5. 9 6 ±4. 4 3 )pg/mL]显著升高 (P < 0. 0 1 );I/R组ALT[ ( 8 4 8. 3 3±2 7 1. 3 7 )U/L]较S组 [ ( 4 2. 3 9±1 4. 7 5 )U/L]显著升高 (P < 0. 0 1 );而门静脉血清内毒素水平组间差异无显著性 (P> 0. 0 5 )。结论　TLR2mRNA及蛋白在肝脏缺血再灌注过程中缺血肝组织的表达增强, 此变化伴有TNF α的升高及肝功能的损伤。     

Toll样受体4蛋白在小鼠肝脏缺血再灌注损伤中的表达及与肝脏损伤的关系

肝脏缺血再灌注损伤常见于肝脏移植、失血性休克、创伤等情况,其发生机制复杂,尚未完全明确。我们通过动态观察小鼠肝脏部分缺血再灌注情况下,不同的灌注时间点,Toll样受体4(TLR4)蛋白在缺血肝叶的表达变化,探讨TLR4的激活机制及其信号系统在肝脏缺血再灌注损伤中的作用。 一、材料与方法 1.材料:一抗TLR4多克隆抗体(Santa Cruz),二抗兔抗羊单克隆抗体(博士德公司),硝基蓝四氮唑/5-溴-4-氮-3-吲哚磷酸盐(NBT/BCIP)显色试剂盒     

Toll样受体在肝脏缺血再灌注损伤中的作用及机制研究进展

Toll样受体是一个新的细胞受体蛋白家族,参与病原相关的炎症反应,近年来发现其同样参与损伤诱导的炎症反应。而缺血再灌注导致的病理反应就是一个过度的炎症反应。Toll样受体在肝脏缺血再灌注中具有重要作用。就其作用及机制作一综述。     

肝脏缺血/再灌注后Toll样受体4表达情况及丙泊酚对其表达的影响

Objective To observe the changes in TLR4 expression during hepatic ischemia/reperfusion (I/R) and the effects of propofol on the expression of TLR4 induced by I/R injury in rats.Methods Fifty six male SD rats were randomly divided into min before isehemia in P groups,and the same volume of sodium lactate Ringer's solution was infused in sham group and I/R groups.Plasma ALT,AST,TNF-α levels were measured,and the expression of Tlr4 was detected 2,6,24 h after reperfusion.Results The levels of plasma ALT,AST and TNF-α were lower,and Tlr4 expression was weaker in P groups than those in I/R groups (P＜0.05).Conclusion Propofol decreases hepatic ischemia/reperfusion (I/R)-induced Tlr4 expression and exerts property of liver protection.     

TLR4 对缺血再灌注损伤作用机理的研究进展

Toll 样受体 (TLRs) 属于模式识别受体 (PRRs) 家族，识别高度保守的微生物组分 - 病原相关分子模式 (PAMPS)。关于缺血再灌注损伤的具体机理，至今尚未明确。越来越多的研究提出，与先天免疫的重要组成部分 TLRs 相关， 其中对 TLR4 在缺血再灌注损伤中所起作用的研究最为普遍。     

N-乙酰半胱氨酸对大鼠肝缺血-再灌注损伤的保护作用及机制

目的探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对肝缺血-再灌注损伤的保护作用及机制。方法60只Wistar大鼠随机分为3组:假手术组(P组),只开腹不阻断肝血流,I/R组和I/R-NAC组均阻断大鼠肝70%的血流,45min后恢复再灌注,其中I/R-NAC组再灌注前5min经尾静脉注射NAC300mg/kg。在再灌注后1、3、6、24h时,采取血液及肝组织,分别检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、脂多糖(LPS)、Toll样受体4(TLR4)mRNA及其蛋白的表达。结果I/R组和I/R-NAC组ALT、AST及LPS的含量均在6h达高峰,但组内在各时间点比较,ALT、AST及LPS含量的差异并无统计学意义(P>0.05);I/R组同一时间点的ALT、AST及LPS含量均高于I/R-NAC组(P<0.05)。I/R组肝组织TLR4mRNA的表达从再灌注3h起明显增强(P<0.01),并维持高表达,而I/R-NAC组TLR4mRNA的表达在各时间点无显著变化(P>0.05)。I/R组和I/R-NAC组TLR4蛋白表达在再灌注1、3h时类似于P组,但在6、24h时显著增强。结论TLR4参与了肝缺血-再灌注损伤的病理过程,NAC可通过抑制TLR4mRNA表达而减弱肠源性内毒素血症对肝脏的损伤。     

TLR4信号转导通路活化在皮瓣缺血再灌注损伤中的作用

目的 探讨Toll样受体4(Toll-like receptors 4,TLR4)在皮瓣缺血再灌注(ischmeia-reperfusion,I/R)损伤中的意义.方法 将50只雄性SD大鼠进行编号,盲视下随机分为:假手术组(10只)、I/R组(20只)、TLR4抑制剂组(20只).制备右下腹岛状皮瓣I/R模型.TLR4抑制剂组处理组于再灌注前静脉注射E5564(5 mg/kg),分别于缺血再灌注后1、2、4和6h,采用免疫组化学法检测TLR4在皮瓣组织中的表达及分布,并行组织学观察.于术后7d,应用图像分析软件计算皮瓣存活比例.应用SPSS 18.0进行统计分析,两组间比较采用F检验.结果 免疫组织化学法显示I/R组比TLR4抑制组TLR4表达明显增强,且阳性部位主要是血管壁细胞及中性粒细胞.TLR4抑制剂组再灌注后TLR4活性受到抑制,中性粒细胞浸润及组织水肿程度较I/R组明显改善.术后7 d I/R组皮瓣存活比例为(51.70 ±7.62)％,TLR4抑制剂组皮瓣存活比例明显增高,达(80.31±11.63)％,与I/R组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 大鼠皮瓣缺血再灌注损伤后,皮瓣组织TLR4的表达上调中性粒细胞浸润增多.E5564能通过抑制TLR4活化,减少中性粒细胞浸润,减轻皮瓣I/R损伤.     

外源性硫化氢抑制TLR2和TLR4表达并减轻大鼠肾脏缺血再灌注损伤

目的观察外源性硫化氢(H₂S)供体硫氢化钠(NaHS)能否抑制Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)表达、减轻大鼠肾脏缺血再灌注损伤(IRI)。 方法24只6~8周龄雄性SD大鼠随机分为3组：假手术(Sham)组、肾脏缺血再灌注(I/R)组、NaHS+I/R组。采用右肾切除联合左肾动脉夹闭45 min后再灌注24 h的方法诱导肾IRI。夹闭左肾动脉前，NaHS+I/R组给予NaHS(300 nmol/min)连续输注10 min，Sham组和I/R组则给予等体积生理盐水。分别留取各组腹主动脉血及肾组织标本。Western印迹法检测肾组织TLR2、TLR4蛋白的表达；免疫组织化学法检测肾组织白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达；比色法检测血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)。HE染色观察肾脏组织学改变；TUNEL法检测肾组织细胞凋亡。 结果与Sham组比较，I/R组的TLR2、TLR4、IL-6、TNF-α表达均增加(P<0.05)，BUN、Scr亦明显升高(P<0.05)，肾小管上皮损伤评分较高(P<0.05)，肾组织凋亡细胞增加(P<0.05)。与I/R组比较，NaHS+I/R组的TLR2、TLR4、IL-6、TNF-α表达均减少(P<0.05)，BUN、Scr亦明显下降(P<0.05)，肾小管上皮损伤评分较低(P<0.05)，肾组织凋亡细胞减少(P<0.05)。 结论外源性H₂S可以抑制TLR2、TLR4途径，减少炎症因子释放及细胞凋亡，减轻大鼠肾脏IRI。     

异氟醚预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注时TLR4和MyD88表达的影响

目的 评价异氟醚预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注时Toll样受体4(TLR4)和髓样分化因子88(MyD88)表达的影响.方法 雄性成年SD大鼠54只,体重250～300 g,随机分为3组(n=18):假手术组(S组)仅分离血管,不留置线栓;脑缺血再灌注组(IR组)采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,缺血2 h,再灌注24 h;异氟醚预处理(IP组)吸入2%异氟醚,1h/d,连续5 d,处理结束后24 h时制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型.再灌注24 h时进行神经功能缺陷评分,然后每组处死3只大鼠,测定脑梗死体积.分别于再灌注24、48和72 h时,处死5只大鼠,取右侧大脑缺血部位额叶皮质,采用Western blot法测定TLR4、MyD88和NF-κB的表达水平.结果 与S组比较,IR组和IP组神经功能缺陷评分升高,脑梗死体积增大,IR组TLR4、MyD88和NF-κB的表达均上调,IP组MyD88和NF-κB的表达上调(P＜0.05);与IR组比较,IP组神经功能缺陷评分降低,脑梗死体积减小,TLR4、MyD88和NF-κB的表达均下调(P＜0.05).结论 异氟烷预处理可通过抑制脑组织TLR4和MyD88的表达,减轻炎性反应,从而减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤.     

猪活体肾移植模型中腹腔镜手术对移植肾缺血再灌注损伤的影响

目的观察猪活体肾移植手术中腹腔镜手术对移植肾缺血再灌注损伤的影响。方法用猪同种肾移植模型（白色小型猪CEMP-III黑色小型猪CEMP-I），分腹腔镜组和开放手术组活体取肾。移植后1、3d观察移植肾组织学分析了解缺血再灌注损伤的程度，实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测TLR4（Toll-like receptor）mRNA的表达了解导致缺血再灌注损伤差异的机制。结果组织学分析发现移植后1d两组移植肾以肾小管浊肿为主，移植后3d腹腔镜组移植肾肾小管多见片状坏死，而开放手术组仅见肾小管浊肿和局灶性坏死；检测移植肾中11LR4mRNA表达，发现移植后第1天两组11LR4mRNA表达指数差异无统计学意义（11．934-3．66比12．464-2．60，P〉0．05），移植后第3天两组TLR4mRNA表达指数差异有统计学意义（30．164-6．19比61．534-9．47，P〈0．01）。结论腹腔镜活体取肾手术中C02气腹引起腹内压增加影响供肾血流，导致早期移植肾有加重缺血再灌注损伤的风险，11LR4表达增加可能发挥重要作用。     

TOLL样受体4在糖尿病肾病大鼠肾小球中的表达变化及其意义

目的初步探讨TOLL样受体4（TLR4）在糖尿病肾病肾小球硬化发生发展中的作用及其机制。方法试验分对照组和模型组。通过链脲佐菌素（STZ）腹腔注射建立糖尿病大鼠模型。模型成功后2、4、6、8、12周分别测定两组24h尿蛋白排泄量、血肌酐、尿素氮、肾重／体重;观察肾脏病理形态学变化,测定细胞外基质增生程度;应用免疫组化法检测肾小球TLR4、转化生长因子-β1（TGF-β1）、核因子KB（NF-κB）、纤维连接蛋白（FN）的表达。结果模型组大鼠24h尿蛋A、血肌酐、尿素氮、肾重／体重明显升高,肾小球肥大,细胞外基质增生,PAS阳性物质沉积增多。肾小球TLR4、TGFβ1、NF-κB、FN表达亦明显增加,分析提示TLR4的蛋白表达与多项肾小球硬化相关因素呈正相关关系。结论TLR4可能通过调节炎症反应参与了糖尿病肾病肾小球硬化的发生和发展。     

保达新对缺血再灌注损伤大鼠心肌的影响

目的 观察保达新对缺血再灌注损伤心肌的保护作用.方法 将24只左冠状动脉前降支(LAD)结扎大鼠分成3组(假手术组、对照组、治疗组),分别在心肌缺血30 min后再灌注60min,复灌前5 min静脉注射0. 9%生理盐水0.25 ml/kg;或保达新0 .5 μg/kg,检测血液中乳酸脱氢酶(LDH)、血浆丙二醛(MDA)、白细胞介素(IL)-6及IL-8的差异和各组间bcl-2、bax蛋白表达的差异.结果 对照组与其他两组比较LDH、MDA、IL-6及IL-8明显增加(P＜0.05),治疗组中LDH、MDA、IL-6及IL-8较空白组明显增加(P＜0.05).对照组与假手术组比较bcl-2、bax蛋白表达明显增加(P＜0.05),治疗组中bcl-2表达较其他两组明显增加(P＜0.05),bax表达较对照组明显减少(P＜0.05).结论 保达新可通过减少脂质过氧化物产生、减轻过氧化反应,抑制细胞凋亡来保护缺血再灌注损伤的心肌.     

caspase蛋白在肝脏缺血再灌注损伤中的研究进展

caspase蛋白在促进细胞凋亡过程中发挥关键作用,在肝脏缺血再灌注损伤和对细胞凋亡过程的实验研究时,常可检测到caspase蛋白.现就caspase蛋白在肝脏缺血再灌注损伤中的研究进展作一综述.     

E-64-D对大鼠脊髓缺血再灌注损伤中钙蛋白酶表达的抑制作用

目的观察脊髓缺血再灌注损伤后钙蛋白酶特异性抑制剂E-64-D对脊髓组织中钙蛋白酶表达和活性的抑制作用。方法纯种雄性成年SD大鼠，夹闭右肾动脉分支下方腹主动脉30min，造成动物脊髓缺血再灌注损伤，静脉应用E-64-D，观察再灌注后3、24、72h和7d钙蛋白酶Ⅰ的表达和68-KDNFP的降解。结果脊髓再灌注损伤后3h，出现钙蛋白酶Ⅰ阳性细胞，72h最明显。68000NFP的降解产物在再灌注损伤后3h出现，并在72h后达到高峰。应用E-64-D后，钙蛋白酶Ⅰ的表达和68-KDNFP的降解得到抑制，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论脊髓再灌注损伤后应用E-64-D，对脊髓中68-KDNFP降解具有明显保护作用。