血管活性肠肽在胃腺癌组织及细胞中的表达及意义

目的:研究胃腺癌组织和细胞中是否存在分泌血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)的肿瘤细胞,以探讨VIP在胃腺癌发生及发展中所起的作用.方法:通过免疫组织化学和RT-PCR检测正常胃组织、胃腺癌组织和培养的胃腺癌细胞中VIP蛋白和mRNA表达情况.结果:胃腺癌组织出现VIP免疫反应阳性细胞,相对正常的胃组织中均未见VIP阳性细胞,胃腺癌组织中无阳性神经纤维,而相对正常的胃组织中均有阳性神经纤维存在,有显著性差异(P＜0.01).培养的胃腺癌细胞中均有VIP免疫阳性细胞染色;胃癌组织和培养的胃腺癌细胞中均有VIPmRNA表达.结论:胃腺癌组织和细胞中含有分泌VIP的肿瘤细胞,VIP在胃腺癌的发生和发展中起着至关重要的作用.     

加味四逆散对身心应激模型大鼠胃组织GASR、空肠组织VIPR2含量及其基因表达的影响

目的 观察加味四逆散对慢性身心应激胃溃疡模型大鼠胃黏膜超微结构、胃窦组织胃泌素受体（GASR）、空肠组织血管活性肠肽受体2（VIPR2）含量及其基因表达的影响,并阐明其机制。方法 将Wistar大鼠60只随机分为正常组,模型组,加味四逆散大、中、小剂量组,奥美拉唑组,每组10只。除正常组外,其余5组均采用慢性身心应激方法建立应激性胃溃疡大鼠模型。加味四逆散小、中、大剂量组大鼠每日分别灌胃0.25、0.5、1.0 g/mL浓度的中药煎剂2 mL,奥美拉唑组大鼠每日灌胃0.3 mg/mL的奥美拉唑溶液2 mL,正常组及模型组每日灌胃生理盐水2 mL,造模结束后,透射电镜法观察腺胃区胃黏膜组织细胞及细胞间连接的超微结构改变,免疫组化法和Real time-PCR法检测胃窦组织细胞GASR、空肠组织细胞VIPR2蛋白含量及其基因表达的变化。结果 电镜观察显示正常组大鼠胃黏膜上皮细胞间连接紧凑,胞膜完整,胞核形态及大小正常;模型组大鼠胃黏膜细胞受损严重;其余治疗组均较模型组不同程度好转。使用加味四逆散及奥美拉唑治疗后,各组胃窦组织GASR蛋白和mRNA的表达均较模型组增加(P<0.05),空肠组织VIPR2蛋白和mRNA的表达均较模型组降低(P<0.05)。其中加味四逆散大剂量组GASR、VIPR2蛋白和mRNA的表达接近正常组水平,两者相比差异无统计学意义(P>0.05)。与奥美拉唑组与加味四逆散小剂量组相比,加味四逆散大剂量组大鼠GASR蛋白和mRNA的表达均增高(P<0.05),VIPR2蛋白和mRNA的表达降低(P<0.05)。结论 加味四逆散可改善慢性身心应激胃溃疡模型大鼠胃黏膜组织细胞的微观病理形态,并可调整胃组织GASR和空肠组织VIPR2的含量及其基因表达。     

胃腺癌组织中cFLIP mRNA的表达及细胞凋亡检测

目的:检测胃腺癌组织中cFLIP mRNA的表达及胃腺癌细胞的凋亡.方法:采用原位杂交技术检测45例胃腺癌、23例癌旁不典型增生及21例正常胃黏膜组织中cFLIP mRNA的表达;运用TUNEL法检测胃腺癌细胞凋亡情况,计算凋亡指数(AI).结果:胃腺癌组织中cFLIP mRNA的阳性表达率高于正常黏膜及不典型增生组织...     

TGF-β信号转导通路相关蛋白Runx3、Smad4在胃腺癌组织中的表达及意义

目的 研究Runx3、Smad4蛋白在胃腺癌组织中的表达及意义.方法 应用免疫组织化学法检测Runx3、Smad4蛋白在56例胃腺癌组织(胃腺癌组)及40例正常胃黏膜组织中(正常对照组)的表达,分析其与胃腺癌分化程度的关系.结果 (1)胃腺癌组织中Runx3和Smad4蛋白阳性表达率分别为37.5%和44.6%,在正常胃黏膜组织中的阳性表达率分别为92.5%和87.5%,2种蛋白在正常胃黏膜组织与胃腺癌组织中表达差异有统计学意义(P<0.05).Smad4和Runx3的表达与胃腺癌不同分化程度有关,高中分化组阳性率高于低分化组(P<0.05);(2)Runx3与Smad4在胃腺癌组织中的表达呈正相关(r=0.426 4,P<0.05).结论 Runx3、Smad4的低表达与胃腺癌的发生及分化程度密切相关.     

胃腺癌组织中Ets-1及微血管密度检测

目的:研究转录调节因子Ets-1(E26 transformation specific-1)及微血管密度(MVD)在胃腺癌组织中的表达及意义.方法:采用免疫组织化学SP法检测Ets-1和MVD在28例正常胃黏膜、40例不典型增生胃黏膜及70例胃腺癌组织中的表达.结果:胃腺癌组织中Ets-1阳性表达率(87.1%)明显高于癌旁病变组织(57.5%)和正常胃黏膜(32.1%)(P均<0.05);CDl05标记的MVD均值(30.16±3.92)明显高于癌旁病变组织(12.98 ±1.62)和正常胃黏膜(11.29 ±1.08)(P均<0.05).胃腺癌组织中Ets-1的表达和MVD均值与胃腺癌浸润深度、淋巴结转移及临床分期有关(P均<0.05).与年龄和性别无关(P均>0.05).胃腺癌组织中MVD值随着Ets-1表达增强而增高(P<0.05).结论:高表达的Ets-1参与胃腺癌浸润和淋巴道转移,并与胃腺癌组织中微血管生成有关,Ets-1可作为判断胃腺癌恶性行为的重要生物学标记物之一.     

胃黏膜不典型增生中血管活性肠肽表达的研究

目的探讨血管活性肠肽（VIP）在胃黏膜不典型增生中的表达及其相互关系。方法运用RT—PCR和免疫组织化学的方法,分别检测正常胃黏膜和胃黏膜不典型增生各30份组织中VIP表达的情况。结果RT—PCR分析显示,胃黏膜不典型增生中VIPmRNA表达的V／β的值为（0．923±0．264）;正常胃黏膜为（0．904±0．242）,两者差异无统计学意义（P=0．772）;免疫组化结果显示,胃黏膜不典型增生的阳性表达率为13．3％（4／30）,其中轻度阳性率为11．1％（1／9）,中度为10．0％（1／10）,重度为18．1％（2／11）,三者间差异无统计学意义（P=1．000）;正常胃黏膜的阳性表达率为10．0％（3／30）,正常胃黏膜与胃黏膜不典型增生的表达率差异无统计学意义（P=1．000）。结论VIP的表达与胃黏膜不典型增生的发生可能无关。     

PINCH蛋白在胃腺癌中的表达及临床意义

目的 探讨PINCH(particulary interesting new cysteine-histidine rich protein,PINCH)蛋白在胃腺癌和胃黏膜非典型增生、正常胃黏膜中的表达情况,分析PINCH蛋白表达与患者年龄、性别、肿瘤大小、部位以及淋巴结转移的关系.方法 采用免疫组织化学SP法,检测30例正常胃黏膜、36例非典型增生胃黏膜及70例胃腺癌石蜡包埋标本中PINCH蛋白的表达,并分析其临床意义.结果 PINCH蛋白在胃腺癌组织相关间质中呈异质型表达,其阳性率为74.28%(52/70),明显高于正常胃黏膜组织,差异有统计学意义(P＜0.05);而PINCH蛋白胃黏膜非典型增生中的表达阳性率为38%(14/36),与正常胃黏膜相比,差异无统计学意义(P＞0.05);而且PINCH蛋白在肿瘤浸润的边缘阳性更为明显;在胃腺癌中,淋巴结转移组阳性表达率为77.78%(35/45),淋巴结无转移组表达率为48.00%(12/25),二者比较,差异有统计学意义(P＜0.05);PINCH蛋白的表达与患者性别、年龄、肿瘤大小、部位无相关性(P＞0.05).结论 PINCH蛋白在胃腺癌的发生、发展中可能起着重要作用,并与肿瘤的浸润和转移有关.     

表皮生长因子受体在子宫内膜样腺癌中的表达及意义

目的：研究表皮生长因子受体（EGFR）在子宫内膜样腺癌中的表达及意义。方法采用免疫组化、原位杂交和实时荧光定量PCR方法检测正常子宫内膜组织20例、不典型增生子宫内膜组织20例、子宫内膜样腺癌组织60例的EGFR蛋白、mRNA和基因表达。结果子宫内膜样腺癌组EGFR蛋白和mRNA表达高于正常子宫内膜组,差异有统计学意义（P＜0.01）;不典型增生子宫内膜组EGFR蛋白和mRNA表达高于正常子宫内膜组,但差异无统计学意义（P＞0.05）;子宫内膜样腺癌组EGFR蛋白和mR-NA表达高于不典型增生子宫内膜组,但差异无统计学意义（P＞0.05）。子宫内膜样腺癌组EGFR相对表达量高于正常子宫内膜组,差异有统计学意义（P＜0.05）,但不典型增生子宫内膜组和正常子宫内膜组比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 EGFR的过度表达参与子宫内膜样腺癌的发生、发展过程。     

Caveolin-1基因mRNA和蛋白在胃癌组织的表达

目的:通过研究Caveolin-1 mRNA及蛋白在胃不同病变组织中的表达,对mRNA及蛋白表达的相关性及与胃癌临床病理参数间的关系进行分析.方法:25例正常胃黏膜、65例不典型增生胃黏膜及71例胃癌组织,采用免疫组化SP法检测蛋白的表达情况;依据GenBank中Caveolin-1基因序列(NC-000007),设计并合成全长21 bp的寡核苷酸探针,运用原位杂交技术对Caveolin-1 mRNA的表达进行检测.结果:Caveolin-1 mRNA和蛋白在正常胃黏膜、不典型增生胃黏膜及胃癌细胞胞浆中的阳性表达率呈递减趋势,阳性率分别为:92.0%,83.1%,38.2%和88.0%,83.1%,28.2%.Caveolin-1 mRNA和蛋白表达在不同浸润深度、有无淋巴结转移组、有无脉管侵犯组内表达率的差异有统计学意义(P＜0.05),在年龄及性别组内表达率的差异无统计学意义(P＞0.05).Caveolin-1 mRNA和蛋白表达呈正相关(rs=0.967,P＜0.05).结论:Caveolin-1 mRNA和蛋白在正常胃黏膜、不典型增生胃黏膜、胃癌中阳性表达率均逐渐降低,两者在不同病变组织中表达的一致性提示该基因在癌组织中的低表达发生于转录或以上水平的抑制.     

胃腺癌组织MTDH的表达与临床病理特征

目的 检测和分析异黏蛋白（metadherin,MTDH）在人胃腺癌组织和癌旁正常胃黏膜组织中蛋白和mRNA表达情况,探讨MTDH的表达与临床病理特征的关系.方法 选取169例胃腺癌组织（胃腺癌组）和110例癌旁正常组织（正常组）,采用免疫组化法检测两组MTDH蛋白表达,RT-PCR法检测MTDH mRNA相对表达量,并分析MTDH蛋白、mRNA表达与胃腺癌临床病理特征的相关性.结果 胃腺癌组及正常组MTDH蛋白表达阳性率及mRNA的相对表达量分别为85.2％、22.7％和0.86±0.05、0.30±0.04,两组MTDH蛋白和mRNA表达有显著差异（P＜O.05）.不同的病理分级分期的胃腺癌MTDH蛋白和mRNA表达有显著差异（P＜0.05）,而不同的性别、年龄的胃腺癌MTDH蛋白、mRNA表达无显著差异（P＞0.05）.Sperman等级相关分析法分析显示MTDH蛋白和mRNA表达呈正相关.结论 胃腺癌组织中MTDH较癌旁正常组织中高表达;分期越高分化程度越低及发生淋巴结转移的胃腺癌组织中MTDH的表达越高.提示MTDH和胃腺癌的恶性程度和转移密切相关.     

兔抗VIP抗体制备及特性研究

用碳二亚胺制备血管活性肠肽(VIP)一牛血清白蛋白连接物免疫新西兰白兔,获得优质抗体R3-6,最终滴度为1:450,000,亲和常数为5.05 x 10~10M-1,结合位点数为88.07pM.该抗体与促胰液素、胰高糖素等7种胃肠激素在浓度为10~-8M时无明显交叉反应,与VIP10～28的反应表明本抗体为抗整个VIP分子的抗体。应用该抗体进行人血浆VIP的放射免疫分析,其灵敏度、精确度及回收率均较满意。     

重组VIP腺病毒载体的构建及其在293细胞的表达

目的 构建血管活性肠肽重组腺病毒载体,以期用于体内实验研究.方法 利用RT-PCR扩增小鼠大脑VIP mRNA,亚克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV,在pAdeasy内同源重组,筛选阳性克隆,酶切、测序鉴定正确,线性化后脂质体法转染293 细胞进行包装、扩增,利用报告基因EGFP对病毒滴度进行监测.PCR、免疫荧光鉴定pAdeasy-VIP感染293 细胞后VIP基因的表达,ELISA检测重组病毒转染后293细胞上清中的表达.结果 测序、酶切证实VIP基因重组腺病毒载体构建成功.RT-PCR,免疫荧光检测pAdeasy-VIP病毒感染的293细胞,均有VIP的表达.与对照组相比,重组病毒转染后293细胞上清中VIP多肽的表达明显增高.结论 成功构建了含小鼠VIP基因的重组腺病毒载体,并成功表达VIP多肽.     

血管活性肠肽在单眼视觉剥夺性弱视幼猫 外侧膝状体中的表达

目的 比较视觉剥夺性弱视幼猫和正常幼猫外侧膝状体中血管活性肠肽（VIP）的表达差异,探 讨外侧膝状体中VIP 在弱视发病中的意义。方法 健康3 周龄幼猫30 只,排除屈光介质混浊及眼底异常。 随机分为对照组和剥夺组,每组15 只,均饲养在光照充足环境中。麻醉剥夺组幼猫后,予以黑色不透光眼罩 遮盖右眼。定期行图形视觉诱发电位（PVEP）检测。6 周龄时经PVEP 检测弱视模型复制成功后,根据猫脑 Sinder 立体定位图,切取对照组及剥夺组幼猫的右侧外侧膝状体,分别行VIP 免疫组织化学和VIP mRNA 原 位杂交。利用数据分析软件统计阳性细胞数和阳性细胞数平均光密度值。结果 6 周龄时,剥夺组右眼P100 波 潜伏期较对照组右眼和剥夺组左眼延长（P <0.05）,而振幅降低（P <0.05）。剥夺组VIP 免疫组织化学和VIP mRNA 原位杂交的阳性细胞数及阳性细胞平均光密度值降低（P <0.05）。结论 视觉剥夺导致外侧膝状体中 VIP 表达下降,VIP 减少又影响外侧膝状体中神经元功能的正常表达,表明VIP 在视觉发育中有重要作用。     

胃大部切除术对血管活性肠肽释放的影响

本文对B Ⅰ式(n=10)、B Ⅱ式(n=15)及保留幽门胃窦浆肌瓣式胃切除术(PAFPG n=15),术后1月～24月病人及健康对照者(n=8)的血管活性肠肽进行动态测定,发现服高渗葡萄糖液后,B Ⅰ组与B Ⅱ组血管活性肠肽浓度显著高于PAFPG组(P<0.05),而PAFPG组与对照组无显著差异(P>0.05)。B Ⅰ组与B Ⅱ组中倾倒综合征发作患者的血管活性肠肽浓度显著高于两组中无倾倒综合征患者(P<0.05)。造成术后激素水平的差异性可能与胃肠吻合方式有关。     

基于VIP/PACAP介导的肠道免疫功能失调探讨强的松治疗免疫性血小板减少症的效应机制

目的 通过检测脑、结肠、血清中血管活性肠肽（VIP）、垂体腺苷酸环化酶激活多肽（PACAP）水平,探讨强的松治疗免疫性血小板减少症（ITP）的潜在机制。方法 BALB/c小鼠18只,SPF级,体重18～22 g,雌雄各半,采用全自动血细胞计数仪检测血小板计数,依据血小板计数采用区间分组法随机分为正常组、模型组及强的松组,每组6只。正常组注射生理盐水,模型组和强的松组注射抗小鼠血小板血清（APS）复制ITP动物模型。强的松组在模型复制第8天起开始强的松干预,正常组和模型组则予以生理盐水;注射APS前、注射后第4天、实验第8天（给药第1天）、实验第12天（给药第5天）、实验第15天（给药第8天）动态检测血小板计数;实验结束后采用酶联免疫吸附试验（ELISA）分别检测小鼠脑、结肠、血清中VIP、PACAP含量;用免疫组织化学法观察小鼠肠系膜淋巴结淋巴细胞P53蛋白表达的变化;原位末端转移酶标记法（TUNEL）检测小鼠肠系膜淋巴结淋巴细胞凋亡率的变化。采用ELISA检测小鼠脾脏中γ干扰素（IFN-γ）、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-17A(IL-17A...     

狗烧伤早期血管活性肠肽的变化

本实验动态观察了狗３０％Ⅲ度烧伤早期血管活性肠肽（ＶＩＰ）变化规律，证明ＶＩＰ能神经在体内不同血管分布的密度不同，以冠状血管较丰富，肾动脉、脾动脉分布较少；烧伤后各部位血管ＶＩＰ能神经膨体吸光率增加，血浆ＶＩＰ浓度持续上升。结合狗烧伤早期血流动力学变化分析，ＶＩＰ作为维持血管舒缩功能的重要因素之一，可能参与了烧伤早期血流动力学紊乱，特别是ＶＩＰ能神经在局部分布的差异，对保证供给休克的重要器官的血流     

肝硬化和消化性溃疡患者血浆血管活性肠肽水平的变化

为了探讨肝硬化和消化性溃疡患者血管活性肠肽的变化及其调节机制。方法测定了２０年例肝硬化和２０例消化性溃疡患者的血浆ＶＩＰ水平。     

多囊卵巢综合征患者血浆血管活性肠肽水平变化及其潜在病理意义

目的　比较多囊卵巢综合征（PCOS）患者与正常女性对照人群两组之间血浆血管活性肠肽（VIP）水平的差异,初步探讨VIP在PCOS发生、发展中的潜在病理意义。方法　检测体重指数、血浆VIP和性激素水平,分析血浆VIP水平与体重指数、性激素水平的相关性。结果　PCOS患者血浆VIP水平显著低于健康对照女性（408.49±25.80　vs　663.85±71.17　ng/L,P<0.05）。所有受试者血浆VIP水平与体重指数、LH/FSH比值、血浆睾酮浓度呈显著负相关（P<0.05）。结论　VIP可能参与PCOS的病理生理过程,能否作为诊断PCOS或判断其预后的一种新的血浆生物标记物,并成为潜在的治疗新靶点,有待进一步研究证实。     

大鼠小肠胆碱能神经及血管活性肠肽的正常分布

本实验用组化和免疫组化方法研究了大鼠小肠胆碱能神经及血管活性肠肽(VIP)的正常分布。结果表明,粘膜下层有大量胆碱能神经干和神经纤维交织而成神经丛,但神经节较少。在肌层间有大量神经丛和神经节。VIP能神经分布在小肠各层,并以腺泡周围和肌层内较多。本文着重对胆碱能神经和VIP的关系进行了讨论。     

肺卫失宣与血管活性肠肽及血栓素B2水平变化的临床研究

目的:探索肺卫失宣的病理本质,并为卫分证的辨证提供客观实验指标.方法:按完全随机设计,采用放免法共检测19例卫分证及13例气分证患者血浆血管活性肠肽(vasoactive mtestmal peptide,VIP)、血栓素B2(thromboxane B2,TXB2)浓度,观察不同病位、不同病程阶段卫分证、气分证患者血浆VIP、TXB2水平的变化.结果:血浆VIP水平在卫分证及卫分证热退后不同病程及不同病位与气分证阶段及正常组比较均有显著性差异(P《0.01),而血浆TXB2水平仅在卫分证热退后有显著性差异(P《0.01);不同病位的卫分证间血浆VIP、TXB2水平均无明显差异(P》0.05).结论:VIP可能为反映卫分证实质的客观实验指标及肺卫失宣的物质基础,且与病位无关;TXB2在卫分证热退后才升高,不能作为卫分证早期辨证的依据,气分证同样不升高,其机制有待探讨.