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1.
目的建立双抗体夹心ELISA法检测广州管圆线虫循环抗原(Cag)。方法采用两株抗广州管圆线虫成虫可溶性抗原单克隆抗体,应用双抗体夹心ELISA法检测广州管圆线虫CAg,并摸索该法的最佳实验条件。对感染大鼠、小鼠、疑似和确诊广州管圆线虫病病例血清进行检测,评价方法的敏感性;对日本血吸虫、肺吸虫、旋毛虫、囊虫病人血清进行交叉反应试验,评价方法的特异性。结果10μg/ml单抗包被,酶标记单抗1∶1 600稀释为最佳工作浓度。利用该法检测不同血清广州管圆线虫循环抗原的敏感性为84.2%~87.2%,特异性为100%。结论建立的双抗体夹心ELISA法检测广州管圆线虫循环抗原具有敏感性高、特异性强和经济、简便易行等优点。  相似文献   

2.
目的 用Em18重组抗原ReEm18制备特异性抗体,建立双抗体夹心ELISA,检测患者血清中的循环抗原.方法 ReEm18经亲和纯化,免疫BALB/c小鼠和新西兰兔,分别制备单克隆抗体(单抗)和多克隆抗体(多抗).用获得的单抗和多抗建立双抗体夹心ELISA,检测患者血清中Em18循环抗原.结果 免疫兔血清抗ReEm18抗体效价达1∶204 800以上.经ReEm18和多房棘球蚴病(AE)患者血清及健康人血清阻断ELISA试验双重筛选融合细胞,共获得14株抑制率>50%的特异性阳性细胞克隆.将特异性单抗和多抗自由组合进行双抗体夹心ELISA,结果以9号单抗与多抗的配对检测抗原为最优,检测ReEm18的灵敏度达3 ng/m1.用建立的双夹心ELISA方法检测血清,11份AE血清中6份为阳性.结论 获得针对ReEm18的特异性单抗和多抗,建立了敏感的双抗体夹心ELISA方法,血清学初步检测结果表明AE血清中存在可检测的Em18循环抗原.  相似文献   

3.
目的 建立抗戊型肝炎病毒 (HEV)抗体检测的双抗原夹心ELISA(DS -ELISA) ,并应用于多种动物血清的检测。方法 将大肠杆菌表达的一段HEVORF2区重组抗原分别包被微孔板和进行辣根过氧化物酶 (HRP)标记 ,利用 5份阳性血清和 4 0份阴性血清建立双抗原夹心ELISA ;用 4 0 0份义务献血员血清比较双抗原夹心ELISA与间接法IgG抗体ELISA的符合情况 ;用 3只HEV感染猴系列血清比较双抗原夹心ELISA试剂和Genelabs公司HEVIgG试剂 ;用双抗原夹心ELISA试剂检测新疆地区的部分牛、绵羊、山羊、猪血清和上海地区的部分鸡血清中的HEV抗体。结果 建立了检测HEV抗体的双抗原夹心ELISA方法 ,对 4 0 0份义务献血员血清的检测表明其与间接法IgG抗体ELISA试剂的符合情况良好 ,并且有更高的s/co比值 ;与Genelabs公司HEVIgG试剂的比较表明双抗原夹心ELISA试剂的检出更早 ,尤其是持续时间及强度明显优于Genelabs试剂 ;在所检测的各种动物中均发现了HEV抗体 ,其中猪抗体的阳性率最高 ,表明双抗原夹心ELISA试剂可同时用于不同动物的抗HEV抗体检测。结论 利用大肠杆菌表达的HEV重组抗原建立了双抗原夹心法ELISA ,并可同时用于不同动物的抗HEV抗体检测。  相似文献   

4.
戊型肝炎病毒抗体双原夹心法ELISA的建立与初步应用   总被引:2,自引:2,他引:2  
目的 建立抗戊型肝炎病毒(HEV)抗体检测的双抗原夹心ELISA(DS-ELISA),并应用于多种动物血清的检测。方法 将大肠杆菌表达的一段HEVORF2区重组抗原分别包被微孔板和进行辣根过氧化物醇(HRP)标记。利用5份阳性血清和40份阴性血清建立双抗原夹心ELISA;用400份义务献血员血清比较双抗原夹心ELISA与间接法IgG抗体ELISA的符合情况;用3只HEV感染猴系列血清比较双抗原夹心ELISA试剂和Genelabs公司HEVIgG试剂;用双抗原夹心ELISA试剂检测新疆地区的部分牛,绵羊,山羊,猪血清和上海地区的部分鸡血清中的HEV抗体。结果 建立了检测HEV抗体的双抗原夹心ELISA方法,对400份义务献血员血清的检测表明其与间接法IgG抗体ELISA试剂的符合情况良好,并且有更高的s/co比较;与Genelabs公司HEVIgG试剂的比较表明双抗原夹心ELISA试剂的检出更早,尤其是持续时间及强度明显优于Genelabs试剂;在所检测的各种动物中均发现了HEV抗体,其中猪抗体的阳性率最高,表明双抗原夹心ELISA试剂可同时用于不同动物的抗HEV抗体检测。结论 利用大肠杆菌表达的HEV重组抗原建立了双抗原夹心法ELISA,并可同时用于不同动物的抗HEV抗体检测。  相似文献   

5.
急性期并殖吸虫病检测循环抗原的诊断价值   总被引:1,自引:1,他引:0  
采用纯化的抗卫氏并殖吸虫成虫抗体进行双抗体夹心HLISA,检测并殖吸虫病人体内特异的循环抗原。检测累计阳性率82.4%(75/91),假阳性率为4.9%(3/61)。其中感染3个月以上的病人血清测得阳性率为51.9%(14/27),感染不足3个月的急性期病人阳性率为85.9%(55/64)。表明此法对并殖吸虫病,尤其是急性期的诊断具有价值。此外还比较了斑点ELISA法与双抗体夹心ELISA法检测循环抗原的效果,发现斑点ELISA法检出率不低于双抗体夹心ELISA法。而且更为简便、省材,在并殖吸虫病诊断和流行病学调查中具有推广应用意义。  相似文献   

6.
包虫病人循环抗原的检测及应用价值的探讨   总被引:1,自引:1,他引:1  
利用亲和层析纯化的抗包虫免疫球蛋白以双抗体ELISA法检测包虫抗原,对经亲和层析纯化的包虫抗原的检出下限可达40ng/ml。以1:2健康人混合血清稀释抗原时,检出下限为2.5μg/ml。用此法检测79例包虫病人的循环抗原,阳性率为40.51%。其中肝包虫病人阳性率为38.98%,肺包虫病人为33.33%。血清抗体阳性的包虫病人循环抗原检出率为33.33%,抗体阴性者中为43.75%。在抗体阴性的肺包虫病人中循环抗原的阳性率可达50%。循环抗原的测定在血清抗体阴性包虫病人的免疫学诊断中具有辅助意义。  相似文献   

7.
目的制备人艰难梭菌TcdB抗原表位抗体,建立针对人艰难梭菌TcdB双抗体夹心ELISA检测方法。方法通过生物信息学等方法预测人艰难梭菌TcdB蛋白的抗原表位,固相多肽合成法合成抗原并制备抗体Anti-TcdB1和Anti-TcdB2,ELISA检测效价并验证其特异性。用辣根过氧化物酶(Horseradish peroxidase,HRP)标记TcdB2抗体,建立ELISA双抗体夹心法。利用棋盘滴定法筛选一抗最佳包被浓度、最佳样品稀释倍数及最适二抗工作浓度等条件,优化ELISA检测方法并确定临界值,用已知阳性、阴性标本及重组B蛋白验证该方法的特异性、灵敏度和重复性。结果间接ELISA确定Anti-TcdB1的效价为1∶512 000,抗TcdB2抗体为1∶2 048 000。棋盘滴定等方法确定ELISA一抗最佳包被浓度0.5μg/ml,样品最佳稀释倍数1∶2,酶标抗体最佳稀释度为1∶20 000。该诊断方法特异,不与其它肠道细菌感染出现交叉反应;重组B蛋白最低检测限为32.25ng/ml;试验的重复性良好,批内和批间变异系数均小于10%。结论本研究建立的检测人艰难梭菌TcdB的ELISA双抗体夹心法敏感、特异,重复性良好,可用于鉴别产毒素B艰难梭菌。  相似文献   

8.
量化检测日本血吸虫循环抗原的初步研究   总被引:3,自引:0,他引:3  
目的探索量化检测日本血吸虫循环抗原的方法。方法用AWA-PcAb/MG2双抗体夹心ELISA(S-ELISA)检测SEA-TCA抗原,并根据测得的OD490值和相应抗原浓度计算回归方程式,再用该法和fSjc26GST-PcAb双抗体夹心ELISA方法检测急慢性日本血吸虫病人的血清循环抗原。并初步应用于检测流行区和传播阻断地区的人群血清循环抗原。结果AWA-PcAb/MG2双抗体夹心ELISA测得SEA-TCA浓度(y)与OD490值(x)呈明显的正相关(r=0.981,y=128.08x-46.95);血清循环抗原的平均含量,急性血吸虫病人(206.27±36.62 ng/ml)显著高于慢性血吸虫病人(122.88±75.13 ng/ml)。两组双抗体S-ELISA检测急性血吸虫病人循环抗原的阳性率均为100%(34/34),慢性血吸虫病人循环抗原的阳性率则分别为87.50%(70/80)和78.57%(63/80),特异性分别为90.74%(98/108)和92.59%(100/108)。用以上两法对流行区和传播阻断地区的人群血清进行循环抗原检测,其阳性率分别为34.52%(87/252)和9.72%(49/504),具有显著性差异。结论两组双抗体S-ELISA用于检测日本血吸虫循环抗原均有较好的效果,其中AWA-PcAb/MG2双抗体夹心ELISA能量化检测日本血吸虫循环抗原。  相似文献   

9.
目的用42#抗弓形虫SAG3单抗为捕获抗体、29#抗弓形虫SAG3单抗作为检测抗体建立检测犬弓形虫感染的双抗体夹心ELISA方法。方法利用HRP标记检测29#抗弓形虫SAG3单抗;采用棋盘滴定法确定捕获抗体42#抗弓形虫SAG3单抗的包被浓度和弓形虫阳性血清稀释度;对封闭剂、检测抗体的工作浓度等条件进行优化,并进行敏感性、特异性、重复性以及稳定性测定。用所建立的双抗体夹心ELISA方法对76份犬待检血清进行检测,计算阳性率。结果最佳优化条件为捕获抗体包被浓度为1∶800稀释(0.34μg/孔),弓形虫阳性血清稀释度为1∶12,封闭剂为10%FBS溶液,最佳封闭时间为2h,参考阳性血清最佳作用时间为2h,检测抗体稀释度1∶3 000,TMB底物最佳显色时间为10min。优化的ELISA敏感性为1∶48;与犬心丝虫阳性血清、犬等孢球虫阳性血清、犬蛔虫阳性血清及犬巴贝斯虫阳性血清之间均无交叉反应;批内、批间重复性试验的CV均15%;保存于4℃中的包被板稳定性90d。用该方法检测76份犬血清中的弓形虫抗原,阳性率为5.26%。结论建立的双抗体夹心ELISA方法特异、敏感,重复性好,可用于犬弓形虫感染的早期检测。  相似文献   

10.
目的比较ELISA双抗原夹心法与IHA法检测人血清中鼠疫FI抗体的最低检出限,符合率以及检测ELISA的特异性,以确定ELISA检测技术能否在鼠疫监测、诊断和流行病学调查中得到应用。方法分别用ELISA双抗原夹心法和IHA(间接血凝法)检测血清298份和鼠疫阳性诊断血清1份。结果ELISA双抗原夹心法检出4份阳性血清,IHA也检出4份阳性血清,2种方法阳性检出率无差别,符合率为75%,最低检出限均为1:160。结论ELISA特异性强,阳性检出率与IHA相当,结果容易判定,可以在鼠疫病例诊断及鼠疫监测中作为常规方法推广使用。  相似文献   

11.
We studied the establishment of enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) using amoebic antigen for complement fixation (CF) test. Optimal dilution for ELISA of sera from patients was 1:100, and that of CF-antigen was 1:400. The upper limit of the 99% critical range of the reaction of negative sera was 0.068 (cut-off level). Absorbance of sera from patients diluted 1:100 to antigen and antibody titers of ELISA were strongly correlated, so it was possible to estimate antibody titers from absorbance of serum diluted 1:100. ELISA and CF test were done to compare sensitivity of the tests using 63 sera from patients with invasive amoebic disease. The sensitivity of ELISA compared well with CF test (62 sera were positive by ELISA and 61 by CF test). Only one sample was both positive by ELISA and negative by CF test. This sample had low ELISA titers, so this discrepancy was mainly due to the sensitivity of CF test in detecting lower levels of antibody. These results suggested that the amoebic antigen for CF test can be applicable to ELISA, and this method was so sensitive and specific.  相似文献   

12.
目的 观察己酮可可碱(PTX)和阿苯达唑(ABZ)单独及联合用药对小鼠继发性泡球蚴病的疗效。 方法 对小鼠继发性泡球蚴病进行药物治疗,各治疗组药物用量分别为:ABZ组 50 mg/(kg·d);PTX高剂量组360 mg/(kg·d);PTX低剂量组180 mg/(kg·d);联合组 ABZ 50 mg/(kg·d) + PTX 180 mg/(kg·d);感染对照组(未治疗组)和空白对照组均给予等体积生理盐水,用小鼠灌胃针经口每天灌胃给药1次,连续治疗100 d后 (其间14只死亡),检测各小鼠泡球蚴湿重、抑囊率及小鼠血清细胞因子转化生长因子?鄄β (TGF-β)、白细胞介素?鄄2 (IL-2)和IL?鄄10;并对泡球蚴组织进行病理组织学和超微结构观察。 结果 PTX在体外能有效地杀灭原头节(高剂量组为100%), 在体内对泡球蚴抑制作用虽较弱(高剂量组为37%),但能增强小鼠的免疫力。联合用药对泡球蚴有明显的抑制作用,抑囊率为88 %,ABZ抑囊率为58 % (P<0.05)。 结论 PTX联合ABZ治疗小鼠继发性泡球蚴病疗效明显优于ABZ。  相似文献   

13.
亲和素—生物素化辣根过氧化物酶复合物法诊断...   总被引:2,自引:0,他引:2  
The Avidin-Biotin-Peroxidase Complex enzyme-linked immunosorbent assay (ABC-ELISA) with antigen from gerbils infected with alveolar hydatid (GAH) was performed on the sera of 54 patients with multilocular echinococcosis, 107 patients with other diseases and 102 healthy adults. All the sera were diluted 1:200 and an S/N value greater than 2.2 was taken as positive. Both the sensitivity and specificity were 98.1%. The S/N value (mean +/- SD) of sera of the patients with multilocular echinococcosis, other parasitic diseases, tuberculosis, other diseases and healthy adults were: 5.9 +/- 3.0, 1.1 +/- 0.4, 1.4 +/- 0.8, 1.1 +/- 0.5 and 1.0 +/- 0.4. The geometric mean titre (GMT) of antibody measured by ABC-ELISA was 13.7 times that of ELISA. The quantity of serum used in ELISA was 8 times that of ABC-ELISA. ABC-ELISA might be particularly helpful to identify cases with low immune responsiveness. In the detection of alveolar hydatidosis and cystic disease with GAH antigens, the positivity was 98.1 and 67.1% with 87 and 25.6% having S/N greater than 5, respectively. It is suggested that in the diagnosis of hydatid diseases by ABC-ELISA, homologous antigen should be used. The temperature and the incubation time needed for the present assay are practical, for the total time requires only 55 minutes.  相似文献   

14.
目的:建立检测感染宿主血清中循环抗原的简易免疫学试验方法。方法:从国产的工业染料中首次筛选出 1 种能用于免疫显色反应的淡紫色染料莲( H F R L),用 Ig M 类别抗日本血吸虫组合单抗 D H C 标记染料,并探索最适标记条件。建立浸棒 夹心 胶体染料免疫试验( D S D I A),检测宿主血清中日本血吸虫循环抗原。结果: D S D I A检测日本血吸虫 S E A 的最低检出极限为 5 ng/m l,分别检测急性血吸虫病患者 14 例及慢性血吸虫患者 113 例的血清,其阳性率分别为 100% 和 52.2% ,检测正常学生血清 113 例,特异性为 92.9% 。该法的敏感性及特异性与dot E L I S A 相似,且两法联合检测可提高检出率,而特异性不变,提示两法有一定的诊断互补叠加效应。标记染料室温下保存 1 w k 活性不变。结论: D S D I A 操作简便、试剂价廉,有广泛的应用潜力。  相似文献   

15.
Objectives: To compare the quantitative performance for measuring anti-MDA5 antibody titer of two enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) systems: an in-house ELISA and the commercial MESACUPTM anti-MDA5 test.

Methods: Anti-MDA5 antibody titer was measured in sera from 70 patients with dermatomyositis using an in-house ELISA and the MESACUPTM anti-MDA5 test side-by-side. For the commercial ELISA kit, serum samples diluted 1:101 were used according to the manufacturer’s protocol, but serial dilutions of sera were also examined to identify the optimal serum dilution for quantification.

Results: The anti-MDA5 antibody titers measured by the in-house and commercial ELISAs were positively correlated with each other (r?=?0.53, p?=?.0001), but the antibody titer measured by the commercial ELISA was less sensitive to change after medical treatment, and 37 (80%) of 46 anti-MDA5-positive sera had antibody titer exceeding the quantification range specified by the manufacturer (≥150 index). Experiments using diluted serum samples revealed that diluting the sera 1:5050 improved the quantitative performance of the MESACUPTM anti-MDA5 test, including a better correlation with the in-house ELISA results and an increased sensitivity to change.

Conclusion: We improved the ability of the commercial ELISA kit to quantify anti-MDA5 antibody titer by altering its protocol.  相似文献   

16.
The immunological properties of the purified alkaline phosphatase (pAP) of Echinococcus multilocularis metacestodes have been investigated using alveolar echinococcosis (AE) patient sera in ELISA tests. A comparative study was done with EmC-Ag (crude antigen) and pAP-Ag (purified antigen). When the parasite purified enzyme pAP was used as antigen, the specificity of the ELISA was markedly increased since it reached 100% without any decrease of its sensitivity (100%). The serologic follow-up of AE patients was conducted during several months with these two antigens in three categories of patients: cured, stabilized and aggravated. There was a good correlation between clinical and serologic data when the pAP was used as antigen in ELISA tests. The anti-pAP antibodies titres did change more rapidly than anti-EmC antibodies titres when a recurrence occurred. Modifications of the anti-pAP antibodies levels were also observed during the patient's therapy: mebendazole, albendazole and Isoprinosine®. These results suggest that pAP-Ag should be used for the diagnosis and the follow-up of AE patients.  相似文献   

17.
目的 目的 建立基于A1E3及B1C4单克隆抗体检测日本血吸虫循环抗原的夹心酶联免疫吸附试验 (ELISA), 并对其 应用情况进行初步评价。 方法 方法 采用十二烷基磺酸钠?聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS?PAGE) 和免疫印迹试验 (Western blot? ting) 对A1E3及B1C4单克隆抗体进行特性分析, 用ELISA 法测定B1C4、 A1E3单克隆抗体效价。采用棋盘格滴定法确定双 单抗夹心ELISA法检测循环抗原的最佳工作浓度。在最佳条件下, 分别检测20份急性血吸虫病病人血清、 46份慢性血吸 虫病病人血清及20份正常人血清, 评价其检测敏感性和特异性。用建立的双单抗夹心ELISA法和市售检测血吸虫循环抗 原的ELISA试剂盒检测湖北省江陵县IHA阳性血吸虫病病人血清72份, 以评估双单抗夹心ELISA法的检测效能。 结果 结果 经SDS?PAGE和Western blotting分析, 纯化后的A1E3及B1C4在相对分子质量 (Mr ) 88 000和52 000处各有一条清晰重链, 在Mr 20 000处有一条相同的轻链, 且A1E3及B1C4可与可溶性虫卵抗原 (SEA) 及急性血吸虫病病人血清发生特异性反 应。B1C4单抗效价可达1∶105 , A1E3单抗效价可达1∶30 000。用B1C4、 A1E3双单抗夹心ELISA法检测急、 慢性血吸虫病 病人血清阳性率分别为100%和86.9%, 检测20份正常人血清特异性为100%。双单抗夹心ELISA法及市售ELISA试剂盒 检测日本血吸虫循环抗原阳性率分别为45.8%及43.1%。 结论 结论 成功建立了基于A1E3及B1C4双单抗夹心ELISA法, 该 法检测日本血吸虫循环抗原具有较高的敏感性及特异性。  相似文献   

18.
目的建立基于AlE3及B1C4单克隆抗体检测日本血吸虫循环抗原的夹心酶联免疫吸附试验(ELISA),并对其应用情况进行初步评价。方法采用十二烷基磺酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹试验(Westernblot-ring)对A1E3及B1C4单克隆抗体进行特性分析,用ELISA法测定B1C4、A1E3单克隆抗体效价。采用棋盘格滴定法确定双单抗夹心ELISA法检测循环抗原的最佳工作浓度。在最佳条件下,分别检测20份急性血吸虫病病人血清、46份慢性m吸虫病病人血清及20份止常人血清,评价其检测敏感性和特异性。用建立的双单抗夹心ELISA法和市售检测血吸虫循环抗原的ELISA试剂盒检测湖北省江陵县IHA阳性血吸虫病病人血清72份,以评估双单抗夹心ELlSA法的检测效能。结果经SDS-PAGE和Westernblotting分析,纯化后的A1E3及B1C4在相对分子质量(M,)88000和52000处各有一条清晰重链,在吖.20000处有一条相同的轻链,且A1E3及B1c4可与可溶性虫卯抗原(SEA)及急性血口发虫病病人血清发牛特异性反应。BlC4单抗效价可达1:10^5,A1E3单抗效价可达1:30000。用B1C4、A1E3双单抗夹心ELISA法检测急、慢性血吸虫病病人粗清阳性率分别为100%和86.9%,检测20份正常人血清特异性为100%。双单抗夹心ELISA法及市售EIJJsA试剂盒检测日本血吸虫循环抗原阳性率分别为45.8%及43.1%。结论成功建立了基于A1E3及B1C4双单抗夹心ELISA法,该法检测日本m吸虫循环抗原具有较高的敏感性及特异性。  相似文献   

19.
目的改进可溶性虫卵抗原-酶联免疫吸附试验(SEA-ELISA),进一步提高其诊断血吸虫病的敏感性、特异性及疗效考核价值。方法应用过碘酸钠(sodiumPerodate,SP)处理SEA,氧化其糖基化表位,建立SP-SEA-ELISA,检测血吸虫病患者血清中的特异性抗体,并与常规SEA-ELISA进行比较。结果分别用两种方法检测患者血清,其中慢性血吸虫病64例、华支睾吸虫病34例、卫氏并殖吸虫病33例、囊尾蚴病36例,检测健康人血清119例。SP-SEA-ELISA特异性为99.2%,高于SEA-ELISA,敏感性为98.4%,与SEA-ELISA比较无明显降低。用SP-SEA-ELISA及SEA-ELISA检测治疗后12个月的慢性血吸虫病患者血清,阴性率为89.0%,明显优于SEA-ELISA(42.1%)。结论过碘酸钠处理SEA,可提高免疫诊断特异性,降低交叉反应,有一定的疗效考核价值。  相似文献   

20.
日本血吸虫感染中循环抗原动态变化及其机制研究   总被引:10,自引:0,他引:10  
探讨日本血吸虫感染中循环抗原动态变化及其机制。感染日本血吸虫的BALB/c小鼠淋巴结B细胞和小鼠骨髓瘤细胞融合,制备抗血吸虫循环抗原不同表位的单克隆抗体组合后为探讨针,检测日本血吸虫病患者和健康人血清;晚期血吸虫病患者脾血和外周血;感染日本血吸虫兔和小鼠的门脉血和外周血。  相似文献   

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