水通道蛋白-1,5在干燥综合征小鼠下颌下腺中的表达

目的：探讨水通道蛋白-1和-5（AQP1、AQP5）在干燥综合征（Sjoegren syndrome，SS）小鼠下颌下腺中的表达及其意义。方法：选用BALB／c小鼠10只，用完全弗氏佐剂＋同种鼠下颌下腺抗原诱导、使之产生在临床表现、病理损害和免疫特征上都类似于人SS的动物模型．对照组10只均注射等体积的生理盐水。用免疫组化和Western印迹方法研究SS小鼠下颌下腺AQP1、AQP5表达的变化特点。结果：SS小鼠下颌下腺组织中AQP1和AQP5的表达量均显著减少（P〈0．01），主要分布在导管部位：AQP5在腺泡顶膜表达减少，而基侧膜的表达增强。结论：AQP1和AQP5表达量减少以及分布部位的异常改变，可能是SS患者口干的重要原因之一。     

腺病毒介导CTLA4Ig对舍格伦综合征小鼠颌下腺AQP5表达的影响

目的：观察CTLA4Ig-重组腺病毒载体（Ad-CTLA4Ig）对SS颌下腺AQP5表达的影响。方法：采用完全弗氏佐剂＋同种鼠颌下腺抗原激发诱导小鼠舍格伦综合征（SS）。实验组在激发前30min予以Ad-CTLA4Ig腹腔注射,未转CTLA4IgcDNA的腺病毒载体（Adv）及SS作对照。比较各组动物颌下腺形态学改变,并采用Western blot分析SS小鼠颌下腺AQP5表达变化。结果：CTLA4Ig-重组腺病毒实验组颌下腺病理学改变不明显。并且删表达量明显高于对照组（P〈0．05）。结论：Ad-CTLA4Ig可正向调节小鼠颌下腺AQP5的表达,并可有效抑制小鼠合格伦综合征的发生。     

AQP6和AQP5在人下颌下腺上的免疫组化定位

目的检测水通道蛋白亚型AQP6和AQP5在人下颌下腺的分布情况。方法对源自10例行颈淋巴清扫术患者的正常颌下腺组织,通过免疫组织化学染色方法,标记确定人下颌下腺组织中AQP6和AQP5的分布情况。结果 AQP6在部分颌下腺腺泡细胞质中表达。AQP5在浆液性腺泡和粘液性腺泡顶膜以及分泌小管均有表达,而闰管和纹状管未见表达。结论 AQP6在部分颌下腺腺泡细胞中表达,与AQP5相协调,参与唾液中水和阴离子的分泌调节。     

水通道基因治疗小型猪腮腺放射损伤的研究

目的研究腺病毒介导水通道基因对小型猪腮腺放射损伤的治疗效果及其相应表达关系.方法19只实验用小型猪一侧腮腺给予20Gy放射剂量照射,照射后17周,转导不同浓度的水通道蛋白基因、荧光素酶基因和病毒缓冲液,分析唾液流率变化和目的基因表达.结果109pfu AdCMVhAQP1转导后3天和7天腮腺唾液流率明显增加,分别恢复到放射前腮腺唾液流率81±18%(P=0.024)和69±20%(P=0.058),14天下降到转导前水平,对照组均未见腮腺唾液流率明显变化.转导109pfu AdCMVhAQP1组免疫组织化学显示,AQP1主要表达在导管上皮,Western blotting分析有外源性水通道蛋白表达,而对照组未见AQP1表达.结论109pfu AdCMVhAQP1明显增加小型猪腮腺放射损伤唾液流率,转导的水通道基因具有潜在治疗涎腺放射损伤的临床应用价值.     

水通道蛋白在干燥综合征患者唇腺中表达的实验研究

目的 :初步探讨水通道蛋白 -1和 -5 (AQP1、AQP5)在干燥综合征 (Sj grensyndrome ,SS)患者唇腺中的水代谢障碍发生机制 ,为SS涎腺的基因治疗提供理论依据。方法 :用免疫组化和Westernblot方法研究SS患者唇腺AQP1、AQP5表达变化特点。结果 :SS患者唇腺组织中AQP1和AQP5的表达量均显著减少 (P <0 .0 1) ,主要分布在导管部位 ,AQP5在腺泡顶膜表达减少 ,而基侧膜的表达增强。结论 :AQP1和AQP5表达量减少以及分布部位的异常改变是SS患者口干的重要原因之一。     

α1-肾上腺素受体在颌下腺的表达及苯肾上腺素对唾液分泌调节的动物实验

目的研究α-肾上腺素受体亚型在家兔颌下腺的表达和分布，及其激动剂——苯肾上腺素促家兔颌下腺唾液分泌的相关机制。方法应用RT—PCR和Western blot检测家兔正常颌下腺α1-肾上腺素受体亚型mRNA及蛋白质的表达；免疫组化法检测颌下腺α1-肾上腺素受体亚型的分布及水通道蛋白5的表达；经颌下腺导管插管给予（1×10^-8）-（1×10^-6）moL／L的苯肾上腺素，观察家兔心率和血压的变化及促颌下腺唾液分泌的量效关系。结果家兔颌下腺有α1A-α1B和α1D-肾上腺素受体3种亚型的mRNA及蛋白质的表达，并广泛分布于导管和腺泡细胞的胞膜及胞质中。给予1×10^-7moL／L苯肾上腺素7d，促进颌下腺唾液分泌增加，而对心率、血压无明显影响；水通道蛋白5在腺泡及导管细胞的顶膜和侧膜的表达增加。结论家兔颌下腺存在α1A-、α1B-和α1D-肾上腺素受体3种亚型的mRNA和蛋白质的表达。经颌下腺导管给予低剂量苯肾上腺素促进唾液分泌是安全有效的；水通道蛋白5的表达增加可能与苯肾上腺素促唾液分泌的机制有关，该研究为临床治疗领下腺功能低下提供了初步依据。     

大鼠腮腺及颌下腺唾液的收集

目的:探讨大鼠腮腺及颌下腺唾液的收集方法。方法:采用微型Lashley吸盘法收集大鼠腮腺唾液,经口内颌下腺导管口直接插管法收集颌下腺唾液。毛果芸香碱刺激唾液分泌,假设唾液的比重为1.0 g/cm3,以唾液重量代表其体积,记录唾液流率。结果:大鼠腮腺唾液流率(9.9±1.4)μL/m in,颌下腺导管插管唾液流率(19.9±10.8)μL/m in。结论:可以采用微型吸盘法收集大鼠腮腺唾液,经口内颌下腺导管口直接插管法收集大鼠颌下腺唾液。     

"益肾清火"方对大鼠牙周炎症和免疫功能的影响

目的观察中药“益肾清火”方对大鼠牙周炎症和免疫功能的影响。方法选择12个月龄SD大鼠,分为A、B、C、D共4组。A组为空白对照组,B组为牙周炎造模组,C组为造模后灌服中药高剂量组,D组为造模后灌服中药等效剂量组。牙周炎造模成功后,A、B组动物灌喂生理盐水,C、D组动物灌喂中药3个月。分别采用脱钙骨切片、流式细胞术及ELISA法测定用药前后动物牙周组织、外周血中T细胞的分类及比值、IL-2和IL-1β水平的变化,并采用SAS6.04软件包对数据进行单因素方差分析。结果牙周炎大鼠灌服“益肾清火”方3个月后,与B组相比,C、D组的牙周组织炎症明显改善;各组外周血中CD4 T/CD8 T的比值分别为3.55±0.94、2.42±0.75、3.23±1.14和3.29±0.83,B组比其余3组低(P<0.05);IL-2与IL-1β分别为(36.03±2.63/179.04±17.29)pg/ml、(25.18±3.08/306.09±13.38)pg/ml、(38.44±2.58/176.33±45.38)pg/ml和(36.81±2.45/182.13±43.97)pg/ml。与其余3组相比,B组IL-2水平显著下降,IL-1β显著升高(P<0.01),但以上指标在两用药组之间无显著差别(P>0.05)。结论中药“益肾清火”方能改善实验性牙周炎动物的牙周炎症,对动物机体免疫有一定的调节作用。     

重组质粒pEGFP-N1-Srv+免疫SD大鼠后对龋齿的影响

目的:将已构建的变形链球菌表面蛋白可变区重组质粒pEGFP-N1-Srv+经不同途径免疫SD大鼠,观察其在大鼠体内的原位表达,免疫定菌鼠后的特异性抗体形成及对龋齿的影响.方法:20只SD大鼠随机分为4组,重组质粒pEGFP-N1-Srv+经股四头肌肌肉注射和下颌下腺区皮下注射2种途径免疫大鼠,免疫组化观察重组质粒的原位表达;24只SD大鼠随机分为4组,免疫途径同上,免疫剂量为100μg/只,2周后加强免疫1次.应用间接酶联免疫吸附法检测血清特异性IgG抗体和唾液特异性sIgA抗体,Keyes龋齿计分法评估磨牙的患龋情况.采用SPSS 17.0软件包对数据进行统计学分析.结果:①大鼠股四头肌细胞、下颌下腺组织内均见重组质粒的阳性表达.②重组质粒pEGFP-N 1-Srv+经不同途径免疫定菌SD大鼠后,可检测到血清特异性IgG抗体和唾液特异性sIgA抗体水平升高,均于首次免疫后第4周达到高峰;该时段各组间的抗体水平,实验组均显著高于对照组(P＜0.01);经下颌下腺区皮下注射后的sIgA抗体水平显著高于肌肉注射组(P＜0.05).③重组质粒免疫定菌鼠后,实验组和对照组间的龋齿计分无显著差异(P＞0.05).结论:重组质粒pEGFP-N1-Srv+能够在动物体内原位表达,并能诱导SD大鼠血清特异性IgG和唾液特异性sIgA抗体增高;经下颌下腺区皮下注射后的sIgA抗体水平显著高于肌肉注射,具有一定的免疫优势.但该区域单独的龋齿预防效果不明显.     

ʵ�������򲡴������ٳ�΢�ṹ�۲�

目的    观察糖尿病大鼠腮腺、颌下腺、舌下腺超微结构变化。方法    雄性Wistar大鼠20只,随机分对照组和实验组,各10只。实验组：腹腔注射四氧嘧啶制作糖尿病大鼠模型;对照组：正常饲养。动物模型建成后第8周时称重并测定各组大鼠空腹血糖,然后取材制片,应用透射电镜观察大鼠腮腺、颌下腺、舌下腺超微结构变化。结果    建模后第8周时对照组大鼠体重（282.40±14.00）g,血糖（5.50±0.40）mmol／L;实验组大鼠体重 （148.45±8.45）g,血糖（25.20±4.10）mmol／L,组间比较差异有统计学意义（P < 0.05）。实验组大鼠腮腺细胞细胞核轮廓不规则,线粒体肿胀,粗面内质网扩张;颌下腺细胞细胞核固缩,线粒体出现空泡变性、嵴断裂;舌下腺细胞未见明显改变。结论    糖尿病可导致腮腺和颌下腺分泌功能受损而出现口干症状,但未影响舌下腺功能,舌下腺可能起到一定的代偿作用。     

一次性18Gy放射对大鼠颌下腺损伤的实验研究

目的:观察一次性18 Gy放射对大鼠颌下腺组织学形态和唾液流率的改变。方法:40只大鼠随机分为实验组和对照组,每组20只。实验组一次性18 Gy局部照射大鼠颌下腺区域,对照组只麻醉不放射。8周后处死所有大鼠,处死前插管法提取大鼠颌下腺唾液,称取其质量,计算唾液流率,比较两组唾液流率的改变。处死后取颌下腺组织,经4%多聚甲醛固定,切片,HE染色,镜下观察颌下腺的组织学形态。结果:放射后实验组进食进水量下降、活动减少。实验组饮水频率高于对照组。对照组的唾液流率为(18.64±8.23)μL/min,实验组的唾液流率是对照组的57.42%,为(10.70±2.22)μL/min。HE染色显示,放射后实验组颌下腺细胞变性,间质血管充血,腺泡细胞内的空泡数量明显增多。结论:放射后大鼠颌下腺唾液流率明显降低,放射后8周,组织学形态出现显著变化。放疗对大鼠颌下腺组织学形态和唾液分泌功能的远期影响,尚需进一步观察和研究。     

舍格伦综合征的病因和治疗进展

舍格伦综合征又称干燥综合征,是一种系统性自身免疫性疾病,主要累及唾液腺、泪腺等外分泌腺,局部组织出现淋巴细胞浸润,影响腺体的正常功能。临床上除因唾液腺和泪腺受损,而出现口干、眼干外,可同时伴有全身多系统损害症状。患者血清中存在多种自身抗体和高免疫球蛋白。该疾病在病因、发病机制方面尚未完全明确,诊断标准和治疗等仍有待进一步研究。     

Effect of cevimeline on radiation-induced salivary gland dysfunction and AQP5 in submandibular gland in mice

The aim of this study was to clarify the effects of the muscarinic receptor agonist, cevimeline, on saliva flow and expression of aquaporin5 (AQP5) in submandibular gland after X-ray irradiation. Using a previously established radiation-induced xerostomia model mouse, saliva flow from at 7 days before irradiation to at 28 days after irradiation was investigated in mice that were treated with cevimeline before or after irradiation. Radiation caused a significant decrease in saliva flow compared with nonirradiated salivary glands. Cevimeline post-treatment also caused a significant decrease in saliva flow. In contrast, cevimeline pre-treatment did not significantly decrease saliva flow. Expression of AQP5 fluorescent intensity and mRNA were also analyzed. Irradiation significantly decreased expression of AQP5 in submandibular gland. However, pre-treatment with cevimeline prevented this decrease in AQP5 expression. These data suggest that pretreatment with cevimeline prevents radiation-induced xerostomia and radiation-induced decrease in expression of AQP5 in submandibular gland.     

Relationship between aquaporin‐5 expression and saliva flow in streptozotocin‐induced diabetic mice?

Oral Diseases (2012) 18 , 501–505 Objective: To investigate the expression and distribution of AQP5 in submandibular acinar cells from sham‐ and streptozotocin (STZ)‐treated mice in relation to the salivary flow. Methods: Mice were sham or STZ injected. Distribution of AQP5 subcellular expression in submandibular glands was determined by immunohistochemistry. AQP5 labelling indices (LI), reflecting AQP5 subcellular distribution, were determined in acinar cells. Western blotting was performed to determine the expression of AQP5 in submandibular glands. Blood glycaemia and osmolality and saliva flow rates were also determined. Results: AQP5 immunoreactivity was primarily located at the apical and apical‐basolateral membranes of submandibular gland acinar cells from sham‐ and STZ‐treated mice. No significant differences in AQP5 protein levels were observed between sham‐ and STZ‐treated mice. Compared to sham‐treated mice, STZ‐treated mice had significant increased glycaemia, while no significant differences in blood osmolality were observed. Saliva flow rate was significantly decreased in STZ‐treated mice as compared to sham‐treated mice. Conclusions: In STZ‐treated mice, significant reduction in salivary flow rate was observed without any concomitant modification in AQP5 expression and localization.     

Rad50在放射后大鼠涎腺中的表达

目的:检测Rad50在放射后大鼠涎腺组织中的表达水平。方法:选用60只Wistar大白鼠,随机分成6组,每组10只。分为对照组(未照射)、3 Gy组、6 Gy组、9 Gy组、12 Gy组、15 Gy组。放射组大白鼠用60Co一次性照射后2 h内处死,立即取出其腮腺、下颌下腺组织备用。用电镜观察放射后各组涎腺组织超微结构的变化,用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Rad50基因表达水平的变化,用免疫组织化学法观察其蛋白表达水平的变化。结果:各放射组涎腺组织中Rad50的表达均高于对照组(P<0.05),但不同放射剂量的各放射组之间Rad50的表达无明显差异(P>0.05)。透射电镜下可见大鼠腮腺、下颌下腺细胞超微结构随着放射剂量的增加,发生较明显改变。结论:放射可引起涎腺组织Rad50表达水平增高,但其表达水平并未随放射剂量的增加而增高,提示Rad50在涎腺放射损伤修复中的表达水平有限,这可能是涎腺放射敏感性机制之一。     

Activation of innate immune responses through Toll-like receptor 3 causes a rapid loss of salivary gland function

Background:  Recent studies have demonstrated the expression of Toll-like receptor 3 (TLR3) in salivary glands and epithelial cell lines derived from Sjögren's syndrome (SS) patients. As viral infections are considered to be a trigger for SS, in this study we investigated whether in vivo engagement of TLR3 affects salivary gland function.
Methods:  Female New Zealand Black/WF1 mice were repeatedly injected with polyinosinic:polycytidylic acid [poly(I:C)]. TLR3 expression within submandibular glands was studied using immunohistochemistry. RNA levels of inflammatory cytokines in the submandibular glands were determined by real time polymerase chain reaction. Pilocarpine induced saliva volume was used as an index of glandular function.
Results:  Immunohistochemical analysis of submandibular glands showed TLR3 expression in epithelium of serous and mucous acini, granular convoluted tubules, and ducts. Poly(I:C) treatment rapidly up-regulated the mRNA levels of type I interferon (IFN) and inflammatory cytokines in the submandibular glands. One week after treatment, the saliva volumes in poly(I:C) treated mice were significantly reduced in comparison with the phosphate-buffered saline (PBS) treated mice. Hematoxylin and eosin staining showed that salivary gland histology was normal and lymphocytic foci were not detected. Glandular function recovered after poly(I:C) treatment was stopped.
Conclusions:  Our results demonstrate that engagement of TLR3 within the salivary glands results in a rapid loss of glandular function. This phenomenon is associated with the production of type I IFN and inflammatory cytokines in the salivary glands. Restoration of glandular function suggests that for viral etiology of SS, a chronic infection of salivary glands might be necessary.     

超声弹性成像在干燥综合征唾液腺病变中的应用价值

目的: 探讨超声弹性成像技术中应变率比值法（SR）和声辐射力脉冲成像法（ARFI）在干燥综合征（SS）唾液腺病变诊断中的应用价值。方法: 收集 2017年1月—2017年7月上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔外科门诊确诊的干燥综合征患者36例,健康对照病例25例。对双侧腮腺及下颌下腺进行SR及ARFI检查,获得双侧腮腺及下颌下腺的SR和剪切波速度（SWV）。比较同一组内腮腺、下颌下腺左侧与右侧之间以及不同组间同侧腮腺、下颌下腺 SR和SWV 的差异。采用SPSS 22.0软件包对数据进行统计学分析。结果: ①无论SS组还是健康对照组,左、右侧腮腺及下颌下腺之间SR值和SWV值差异均无显著性（P>0.05）;组间双侧腮腺、下颌下腺SR值差异均有显著性（P<0.05）;组间腮腺、下颌下腺SWV值差异均有显著性（P<0.05）。②以0.8962为截断值,采用SR检测腮腺、诊断SS的敏感度为77.8%,特异度为88.0%,曲线下面积达0.844;以0.8987为截断值,采用SR检测下颌下腺、诊断SS的敏感度为47.22%,特异度为84.0%,曲线下面积达0.652。③以1.6288为截断值,采用ARFI技术检测腮腺、诊断SS的敏感度为91.7%,特异度为88.0%,曲线下面积达0.943;以1.8788为截断值,采用ARFI技术检测下颌下腺、诊断SS的敏感度为44.4%,特异度为96.0%,曲线下面积0.614。结论: 超声弹性成像技术SR及ARFI可以提供腮腺及下颌下腺SR及SWV值,定量分析SS患者的腺体硬度,在临床诊断干燥综合征中有很好的应用价值。