人参皂苷对体外培养低氧海马神经元的保护作用

目的 观察人参皂苷（Rg2）对大鼠低氧海马神经元的保护作用及其机制。方法 取新生Wistar大鼠海马神经元体外培养14d,随机分为对照组、5μmol/L尼莫地平组（尼莫地平组）、Rg2 0．025mmol/L组（Rg2 1组）、Rg2 0．050mmol/L组（Rg2 2组）。将相应药物加入到培养液中孵育4h后,连续充以体积分数0．95N2＋体积分数0．05CO2混合气体,建立急性低氧细胞模型。台盼蓝染色计数存活细胞,吉姆萨染色观察细胞形态,荧光分光光度计法测细胞内Ca^2＋浓度。结果 尼莫地平组、Rg2两个剂量组的细胞死亡率均明显低于对照组,以Rg2 2组最低,差异均有显著性（X^2=3．37,P〈0．05）。海马神经元细胞内Ca^2＋浓度在尼莫地平组、Rg2两个剂量组均明显低于对照组,以Rg2 2组最低,差异均有显著性（F=466．58,q=6．76～48．82,P〈0．01）。结论 Rg2可显著降低体外培养大鼠低氧海马神经元的细胞死亡率,其机制可能是通过减少Ca^2＋内流而发挥作用。     

GM-1对培养的人胚神经干细胞增殖和分化的影响

目的：观察不同剂量神经节苷脂（GM－1）对神经干细胞增殖和分化的影响。方法：从人胚胎脑组织分离出神经干细胞，培养于含bFGF（阳性对照组）和B27（阴性对照组）的DMEM／F12细胞培养液中，实验组培养液中分别加入0．335μg/L，3．35μg/L及33．5μg/L的GM－1，用MTT比色分析法测定细胞增殖能力，用含体积分数3％血清的DMEM／F12培养液诱导细胞分化，每间隔6h于倒置显微镜下观察细胞分化情况，结果：5d,10dMTT比色显示，GM－1（33．5μg/L）组与阳性对照组比较，P均＞0．05，与阴性对照组比较，P均＜0．05，GM－1（0．335μg/L）组，GM－1（3．35μg/L）组与阴性对照组比较，P均＞0．05。分化实验发现，接种6h后，体积分数3％血清＋DMEM／F12组神球周边可见明显的细胞突起，呈放射状向周围伸出，而3个实验组和阴性对照组的细胞突起短且细小，随着培养时间的延长，各组的细胞突起逐渐伸长，3个实验组分化能力低于对照组，与阴性对照组之间无明显差异，结论：GM－1能够维持神经干细胞的原始神经状态，促进神经干细胞的增殖，对神经干细胞无明显的诱导分化作用。     

肢体缺血预处理对脑梗死后大鼠海马神经干细胞激活增殖的研究

目的：研究肢体缺血预处理（1imb ischemic preconditioning,LIP）对成年大鼠脑梗死后海马区神经干细胞的激活增殖作用。方珐：建立大鼠脑梗死模型,观察LIP后不同时段的脑梗死大鼠海马神经干细胞数量的变化。48只大鼠随机分为4组：（1）对照组（n=12）,假预处理＋脑梗死;（2）LIP＋脑梗死,根据LIP与脑梗死间隔时间不同,分为12、24、48h组。所有大鼠在脑梗死后24h,断头取脑组织切片,免疫组化染色,高倍镜下观察梗死侧海马Nestin阳性细胞数,随机3个视野,取其平均数。结果：对照组Nestin阳性细胞数为（27．33±3．38）;LIP12、24、48h组分别为（32．94±6．12）、（50．61±6．11）和（52．17±6．80）,与对照组比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）,表明LIP后使脑梗死大鼠海马的神经干细胞数量增加,且在12～48h内持续增加。结论：LIP后12～48h可以激活脑梗死大鼠海马的神经干细胞增殖,可能对脑梗死后机体自我修复有潜在的治疗作用。     

叶酸对缺氧新生鼠神经干细胞体外增殖的影响

目的：探讨叶酸（FA）对缺氧条件下体外新生大鼠神经干细胞（NSCs）增殖的影响。方法：取24h内新生SD大鼠大脑半球,进行NSCs原代培养。分为正常对照组、缺氧模型组、缺氧叶酸添加组、缺氧叶酸缺乏组共4组。培养第3天除正常对照组外其他3组进行缺氧处理,造成缺氧损伤：培养6d后收集细胞,进行MTT法、5-溴脱氧尿苷（BrdU）掺入法和免疫组化双标记法检测叶酸对缺氧NSCs增殖的影响。结果：MTT检测显示,正常对照组细胞OD值较缺氧模型组高,差异有统计学意义（P〈0．05）;缺氧叶酸添加组OD值明显高于其它缺氧组,差异均有统计学意义（P〈0．05）;免疫组化双标阳性率比较,缺氧模型组双标阳性率明显下降,与正常对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）,缺氧叶酸添加组明显高于其它几组,差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论：长时间持续缺氧可造成神经干细胞缺氧损伤;添加叶酸使缺氧神经干细胞增长率增加．提示叶酸能促进体外缺氧新生鼠神经干细胞的增殖。     

间歇低氧幼鼠8-异前列腺素F2α变化及芹菜素的干预效果

目的：观察间歇低氧幼鼠血清及海马8-异前列腺素F2α（8-ISO—PGF2α）的变化及芹菜素的干预效果。方法：取3～4周龄健康雄性SPF级SD幼鼠32只，随机分为间歇低氧组（IH）、空气对照组（C）、芹菜素十二甲基亚矾组（Q）和二甲基亚砜组（R），每组8只，以间歇低氧舱建立间歇低氧幼鼠模型，99．99％的纯氛和99．50％的医用氧交替输入舱内，90s为一次低氧-复氧循环；间歇低氧2周后，ELISA法测定各组血清及海马8-ISO—PGF2α水平。结果：血清中，IH组和R组8-ISO—PGF2α的含量分别高于C组和Q组（均P〈0．01），而C组与Q组比较差异无显著性（均P〉0．05），IH组与R组比较差异无显著性（均P〉0．05）；在海马中，结果类似；血清和海马组织中8-ISO—PGF2α含量呈正相关（r=0．818，P〈0．01）。结论：间歇低氧后幼鼠血清及海马中8-ISO—PGF2α表达均升高，芹菜素可降低血清和海马中的8-ISO—PGF2α水平，在治疗间歇低氧造成的损伤中具有应用前景。     

内皮素-1刺激对血管平滑肌过氧化物酶体增殖物激活受体γ表达的作用

目的研究ET-1对血管平滑肌过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPAR-1）表达的影响以及与血管平滑肌增殖的关系。方法以成年16m周Wistar大鼠为研究对象，采用主动脉血管平滑肌原代培养技术，培养大鼠腹主动脉血管平滑肌1～3代，然后加入ET-1进行刺激．使用RT—PCR和Western blot技术观察ET-1作用后0、12、24、48、72h以及不同浓度ET—1刺激48h后PPAR-γ mRNA和蛋白表达变化，同时用MTT法检测血管平滑肌（VSMCs）增殖。结果ET-1刺激后12h．PPAR-γ在mRNA和蛋白水平表达上未见明显变化（P〉0．05），而24h时出现了表达轻度下调，与对照组（无ET-1刺激）差异具有显著性（P〈0．05），48～72h下降更加明显，与对照组相比差异具有高度显著性（P〈0．01）。不同浓度ET-1刺激48h后，随着浓度的增加．PPAR-1表达减低，各组相比具有显著性差异（P〈0．01）。而血管平滑肌的增殖在12h就出现，且随着时间的延长，增殖增强而且随着ET-1浓度的增加，VSMCs增殖增加。结论ET-1在引起VSMCs增殖的同时，可引起PPAR-γ在mRNA和蛋白水平的表达减低，提示ET—1导致的VSMCs增值可能与PPAR-γ有一定的关系。     

卤米松乳膏联合紫外负离子喷雾治疗局限性神经性皮炎的临床研究

目的评价0．05％卤米松乳膏联合紫外负离子喷雾治疗局限性神经性皮炎的疗效。方法80例局限性神经性皮炎患者随机分成观察组和对照组。对照组：0．05％N米松乳膏。观察组：0．05％卤米松乳膏联合紫外负离子喷雾治疗。结果观察组总有效率为95．00％高于对照组总有效率80．00％,具有显著性差异（P〈0．05）;观察组半年内复发率为5．00％,小于对照组半年内复发率20．00％,具有显著性差异（P〈0．05）。两组均未见明显不良反应。结论0．05％卤米松乳膏联合紫外负离子喷雾治疗局限性神经性皮炎患者疗效可靠,安全性高,具有重要的临床价值。     

小站台水环境应激不同时间对小鼠胸腺细胞凋亡的观察

目的探讨小站台水环境应激不同时间对小鼠胸腺细胞的破坏及凋亡的影响。方法利用小站台水环境诱发的应激模型，观察应激12h、24h、48h组和对照组在站台前后体重、胸腺重量、胸腺指数的变化以及胸腺细胞凋亡的状况。结果站台前后小鼠体重改变与对照组相比差异无显著性（P〉0．05），但有降低趋势，应激48h组胸腺重量、胸腺指数改变与对照组相比有极为显著性（P〈O．001），而应激24h组、12h组无显著性（P〉O．05），应激48h、24h、12hAnnexin-v凋亡蛋白增加与照组相比差异极为显著性（P〈O．001），应激12h出现TFAR19蛋白的百分率为96％左右，与对照组相比有极显著性（P〈0．001）．结论小站台水环境应激不同时间都可促进胸腺细胞的凋亡。     

Notch信号通路参与外源性碱性成纤维细胞生长因子对神经干细胞辐射损伤保护作用的实验研究

目的观察外源性碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对有DAPT存在情况下辐射诱导的C17．2神经干细胞凋亡的影响,探讨Nocth信号通路与bFGF之间的关系。方法MTF法检测细胞的活性,培养贴壁后的细胞按照试验设计加入不同浓度的DAPT,培养24h后,直线加速器进行照射,5min后加入40ng／ml的bFGF,培养48h后分别利用流式细胞仪检测细胞的凋亡。结果加入DAPT后,细胞的生长受到抑制,与对照组相比各组均有统计学意义（P〈0．05）,加入bFGF组与DAPT组相比各组均有统计学差异（P〈0．05）;流式细胞技术结果显示,各组与正常对照组相比差异均有统计学意义（P〈0．05）,辐射组的凋亡率为（11．53±0．81）％,辐射＋bFGF组的凋亡率为（7．18±0．94）％,单纯DAPT（50μmol／L）组的凋亡率为（9．8±0．77）％,辐射＋DAPT（50μmol／L）组的凋亡率为（21．45±0．98）％,辐射＋DAPT（50μmol／L）＋bFGF组的凋亡率为（10．26±1．03）％。辐射＋bFGF组与辐射组相比差异有统计学意义（P〈0．05）,单纯DAPT组与辐射＋DAPT组间相同DAPT浓度两两比较差异均有统计学意义（P〈0．05）,辐射＋DAPT组与辐射＋DAPT＋bFGF组间相同DAPT浓度两两比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论外源性bFGF对放射诱导的C17．2神经干细胞凋亡有抑制作用,Notch信号通路阻断剂DAPT促进辐射后神经干细胞的凋亡,bFGF抑制DAPT凋亡的作用。bFGF对放射诱导的神经干细胞的保护作用可能与Notch信号通路有关。     

硫酸镁对新生大鼠神经干细胞辐射损伤的保护作用

目的研究硫酸镁对电离辐射所致的神经干细胞损伤的保护作用。方法取新生大鼠神经干细胞进行培养,分为正常对照（空白对照）组、实验对照（单纯照射）组和实验（照射＋硫酸镁）组0＾60CoΥ射线照射2Gy后透射电镜下观察神经干细胞的凋亡形态;＾60C0Υ射线分别照射2Gy、4Gy后24h、48h用流式细胞仪检测细胞周期分布情况。结果与正常对照组相比,实验对照组的神经干细胞可见明显凋亡,细胞周期出现明显G1期、G2期阻滞（均P〈0．05）。实验组的神经干细胞凋亡数量较实验对照组明显减少,神经干细胞的周期阻滞也较实验对照组明显减轻（均P〈0．05）。结论硫酸镁可降低电离辐射对神经干细胞的损伤作用,辐射后的细胞凋亡、细胞周期阻滞情况都有所缓解。     

低氧对鼠雪旺氏细胞增殖的影响

目的观察低氧对鼠雪旺氏细胞体外增殖的影响,为雪旺氏细胞扩增培养探索新方法。方法原代分离培养雪旺氏细胞并鉴定,将培养至第三代的细胞分为3组,分别为对照组,10%02组和3%O2组。对各组细胞记数;测定培养液中氧含量和乳酸浓度及各组细胞的增殖指数。结果随着环境氧浓度的下降,细胞培养液中的氧含量也逐渐下降（P〈0.05）,而乳酸浓度逐渐升高（P〈0.05）。低氧组雪旺氏细胞数目比常氧组明显增加,尤以10%O2组更为明显（P〈0.05）,3%O2组在低氧1d和2d时增殖指数低于常氧组,低氧4时,增殖指数增加;而10%O2组增殖指数一直高于常氧组（P〈0.05）。结论轻中度低氧有利于鼠雪旺氏细胞的体外增殖。     

三七总皂苷对HB-EGF诱导的系膜细胞增殖作用研究

目的：观察三七总皂苷对肝素结合性表皮生长因子样生长因子（HB-EGF）诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖的作用。方法：以原代培养大鼠肾小球系膜细胞为细胞模型,以400ng／mL三七总皂苷和100ng／mLHB-EGF为干预因素,实验分对照组、100ng／mLHB-EGF纽和400ng／mL三七总皂苷＋100ng／mLHB-EGF组,刺激系膜细胞24、36、48h,采用MTT方法,观察三七总皂苷对重组HB-EGF诱导系膜细胞增殖的作用情况。结果：HB-EGF刺激36h时,系膜细胞明显增殖,与对照组比较,P〈0．05;三七总皂苷能抑制HB-EGF诱导的系膜细胞的增殖,与HB-EGF组比较,P〈0．05。随着刺激时间的延长,三七总皂苷对HB-EGF诱导系膜细胞增殖的抑制作用增强,但36h与24h比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;与48h比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：三七总皂苷能抑制HB-EGF诱导的系膜细胞增殖作用,且作用随着刺激时间延长而增强。三七总皂苷可能通过抑制HB-EGF对系膜细胞增殖作用而延缓肾小球硬化。     

间歇低氧大鼠神经元特异性烯醇化酶蛋白的表达及其对学习记忆功能的影响

目的 通过观察间歇低氧后大鼠脑内及血清神经元特异性烯醇化酶（NSE）蛋白表达及学习记忆功能的影响,探讨NSE蛋白表达与学习记忆功能改变的关系.方法 成年雄性Wistar大鼠48只,采用随机数字表法分为2组：空白对照组（UC组）、7.5％慢性间歇性低氧组（7.5％CIH组）.采用自制低氧舱模拟7.5％慢性间歇低氧模型.分别在第2,4,6,8周应用Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆功能;采用免疫组化法检测海马CA1区神经细胞NSE蛋白表达,同时采用酶联免疫吸附法检测大鼠血清NSE蛋白表达.结果 与空白对照组比较,7.5％ CIH组在2,4,6,8周大鼠逃避潜伏期时间分别为（44.13±2.84）s、（50.35±1.96）s、（57.47±1.66）s、（62.85±1.80）s,从第2周起随低氧时间延长大鼠逃避潜伏期时间延长（P＜0.05）;跨越目标象限时间分别为（48.81±2.09）s、（42.04± 1.84）s、（36.82±2.07）s、（31.81士1.68）s,从第2周起随低氧时间延长大鼠跨越目标象限时间缩短（P＜0.05）.7.5％CIH组海马CA1区神经细胞NSE蛋白表达在2,4,6,8周分别为（9.69±1.37）、（17.10±1.87）、（24.79±3.51）、（34.16±5.35）,血清NSE蛋白表达在2,4,6,8周分别为（6.03±0.91） μg/L、（11.04±1.89）μg/L、（16.39±1.00） μg/L、（24.22±3.73） μg/L,均多于空白对照组,差异有统计学意义（P均＜0.05）;7.5％CIH组海马CA1区神经细胞及血清NSE蛋白表达均有明显的时间差异性,均随时间的延长逐渐升高,差异有统计学意义（均P＜0.05）,海马CA1区NSE蛋白的阳性表达相对值与血清NSE蛋白的表达呈正相关（r=0.94、P＜0.01）;空白对照组NSE蛋白表达无时间差异性（均P＞0.05）.结论 间歇低氧可引起血清及脑组织NSE水平明显升高,两者动态变化均可以反映大鼠学习记忆功能下降的严重程度.     

PFT-α对脑缺血后神经干细胞移植中PUMA的调控研究

目的探索p53抑制剂(PET-α)对脑缺血后神经干细胞(NSCs)中p53下游促凋亡基因(PuMA)的表达影响。方法利用SD仔鼠分离NSCs,原代及传代培养,经氧糖剥夺(OGD)处理6 h后分为OGD+二甲基亚砜(DMSO)组和OGD+PFT-α组,采用免疫印迹技术比较2组p53蛋白及PUMA的表达变化。体内实验中采用Longa法建立经CT证实的大脑中动脉栓塞模型大鼠48只,随机分为PFT-α+NSCs移植组(n=24)和DMSO+NSCs移植组(n=24);采用免疫荧光技术检测不同移植组中PUMA的表达。结果 (1)体外实验中氧糖剥夺6 h后OGD+PFT-α组中p53蛋白入核水平下调,胞浆内表达上调,而OGD+DMSO组主要表达位于胞核;PUMA的表达水平明显低于OGD+DMSO组(P<0.05);(2)体内实验中,与DMSO+NSCs组相比,PIT-α+NSCs移植组中PUMA表达阳性的细胞明显减少[(38.9±4.3)%vs.(29.4±5.6)%,P<0.01]。结论 PFT-α与神经干细胞联合应用后,可明显抑制PUMA的表达,这可能是PFT-α促进移植后神经干细胞在脑缺血区存活的重要机制。     

己烯雌酚对胎鼠海马神经干细胞增殖与分化的影响

目的:探讨己烯雌酚对胎鼠海马神经干细胞(neural stem cells,NSCs)的促增殖、分化作用及其机制。方法:取孕16天SD胎鼠海马NSCs培养,分别设空白对照组,己烯雌酚1×10-7 mol/L组、1×10-8 mol/L组、1×10-9 mol/L组,以及脑源性神经营养因子(BDNF)5×10-2 mg/L组;免疫荧光化学方法检测Nestin、神经元特异烯醇化酶及神经胶质酸性蛋白的表达,RT-PCR检测BDNF mRNA的含量。结果:不同剂量己烯雌酚处理各组神经球面积、积分光密度值、平均突起长度与平均突起数均增加,其中10-8 mol/L组海马NSC增殖与分化最明显,BDNF mRNA表达量亦最高(P<0.01)。结论:己烯雌酚对海马NSCs的增殖分化具有促进作用,且可能与上调BDNF的表达有关。     

钾通道阻断剂四乙铵对氧葡萄糖剥夺诱导大鼠海马神经元死亡的保护作用

目的研究钾通道阻断剂四乙铵(TEA)对氧葡萄糖剥夺(OGD)诱导的培养海马神经元死亡的保护作用。方法培养12 d的海马神经元培养基更换为Earle′s平衡盐溶液(EBSS)后置于37℃三气缺氧(N2:CO2:O2=94%:5%:1%)培养箱内培养,4 h后恢复正常条件培养,同时在培养液内加入不同浓度钾通道阻断剂TEA,继续培养24 h后噻唑蓝(MTT)比色法检测神经元死亡情况。结果OGD组、OGD+不同浓度TEA组与对照组比较,海马神经元细胞存活率明显降低(P<0.05);OGD+10μmol.L-1TEA组和OGD+500μmol.L-1TEA组与OGD组比较,海马神经元细胞存活率明显升高(P<0.05);而OGD+1μmol.L-1TEA组和OGD+5 mmol.L-1TEA组与OGD组比较,海马神经元细胞存活率差异无统计学意义(P>0.05)。结论钾通道阻断剂TEA能保护OGD诱导的培养海马神经元免于死亡,提示某些类型的钾通道活动增强可能参与了OGD诱导的培养海马神经元死亡。     

急性低氧环境下热休克蛋白72在大鼠肾脏中的表达及意义

目的 探讨急性低氧环境下大鼠肾脏热休克蛋白72（heat shock protein,HSP72）的表达.方法 将30只雄性SD大鼠随机分为急性低氧组：12 h、24 h、48 h、72 h、1 w组,同时设立对照组（西宁地区）.将五组大鼠放入低压氧舱建立急性低氧模型,分别在不同时间段取大鼠肾脏组织用蛋白免疫印迹（Western Blotting）法检测HSP72表达水平;收集大鼠尿液,用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测尿微量白蛋白及尿肌酐浓度.结果 大鼠急性缺氧后,其肾组织中HSP72蛋白的表达随着缺氧时间的延长逐渐升高,72 h达最高水平（2.68±0.08）,到1 w时其表达水平有所下降（1.59±0.17）,各组与对照组（0.19±0.12）比较差异均有统计学意义（P＜0.01）;大鼠尿微量白蛋白与尿肌酐比值从48 h开始升高,48 h组（235.40±20.60）与对照组（169.63±17.45）比较差异有统计学意义（P＜0.05）,72 h（378.12±61.31）、1 w组（504.55±48.77）与对照组比较差异均有统计学意义（P＜0.01）.结论 急性低氧可以引起大鼠尿微量白蛋白排泄量增加,并随着缺氧时间的延长而增加,同时伴有肾脏HSP72表达的增加,但二者表达呈现不一致性.提示缺氧是引起肾脏损伤的重要原因,虽然HSP72升高是机体保护性应激反应,但在急性缺氧时,并不能充分缓解缺氧引起的脏器损伤,其保护作用可能具有一定的滞后性.     

染料木素和大豆黄素对海马神经细胞H19—7增殖和神经营养因子表达的影响

目的 探讨染料木素和大豆黄素对海马神经细胞的活性和增殖作用及其可能机制.方法 H19-7/IGF-IR神经细胞在无酚红无血清DMEM培养液中培养72h后,分别加入一定浓度的染料木素、大豆黄素和雌二醇,用MTT和BrdU法分别检测细胞的活性和增殖,流式细胞术检测神经细胞周期,ELISA和RT-PCR法检测脑源性神经营养因子（BDNF）的表达.结果 处理细胞72h后,与对照组相比,20nM、200 Nm雌激素组H19-7细胞增殖分别提高了33%、36%;20 Nm、200 Nm染料木素组H19-7细胞增殖分别提高了15%、13%;200nM大豆黄素组H19-7细胞增殖分别提高了11%,差异有显著性（P＜0.05）.200nM染料木素和大豆黄素的S期细胞比例[分别为（17.64±0.43）%,（19.48±1.01）%]显著高于对照组（14.21 ± 1.75）%,差异具有显著性（P＜0.05）.染料木素和大豆黄素显著增加海马神经细胞成熟型BDNF水平及其Mrna的表达（P＜0.05）.酪氨酸激酶受体阻断剂K252a能阻断染料木素和大豆黄素的促海马神经细胞增殖作用.结论 染料木素和大豆黄素改善海马神经细胞的增殖和活性能力,其作用与促进海马细胞BDNF的表达有关.     

低氧促进人脐带血间充质干细胞向神经细胞分化

目的探讨低氧环境对脐带血间充质干细胞诱导分化成神经细胞的促进作用。方法收集4例志愿者脐带血,分离获得间充干细胞,体外扩增培养。研究分为常氧组、常氧诱导组、低氧组、低氧诱导组。研究低氧诱导培养的脐带血间充质干细胞组与对照组比较在细胞生物学特征、诱导分化能力等方面的差异。结果在5%含氧量条件下细胞的增生能力不同程度的提高;在诱导成神经细胞的过程中,低氧诱导的间充质干细胞向神经细胞的分化能力增强。神经细胞表面标记Nestin、NF-M表达阳性。与常氧诱导的脐带血间充质干细胞组比具有显著性差异（P〈0.05）。结论低氧条件可以提高脐带血间充质干细胞向神经细胞分化的产率。