酒精对星形胶质细胞和少突胶质细胞膜脂质流动性的影响

为探讨酒精所致的神经元分化成熟迟滞和髓鞘形成受阻机制,本文以ＤＰＨ荧光探针研究了酒精对与神经元和髓鞘发育相关的星形胶质细胞、少突胶质细胞膜脂质流动性的影响。结果表明５ｍｍｏｌ／Ｌ酒精可导致星形胶质细胞、少突胶质细胞ＤＰＨ荧光探针的荧光偏振度（Ｐｒ）降低,膜脂质流动度（ＬＦＵ）增高,呈明显的剂量－反应关系,并发现酒精对星形胶质细胞作用强于少突胶质细胞。上述结果揭示酒精能改变两种胶质细胞的膜脂质流动性。它可能在酒精所致的神经元和髓鞘功能发育异常中起重要作用。     

星形胶质细胞研究概述

神经系统的细胞主要由神经元和神经胶质细胞组成。传统认为星型胶质细胞没有动作电位,在神经系统内主要对神经元起到结构和功能上的支持作用,但随着研究的深入发现,Ast在中枢神经系统的发育及病理生理过程中都起到重要作用。本文就星型胶质细胞生物学特性、体外培养、与脑缺血的关系方面做一简要概述。     

磷酸三邻甲苯酯诱导少突胶质细胞空泡样变及突起变性损伤

目的研究磷酸三邻甲苯酯（tri-ortho-cresyl phosphate，TOCP）处理是否对培养鸡少突胶质细胞产生直接损伤。方法利用细胞培养结合四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）试验，观察TOCP不同剂量处理鸡大脑皮质少突胶质细胞形态及突起的时间-效应关系。结果TOCP能导致培养成熟少突胶质细胞突起出现空泡状膨出、不连续继而逐渐消失，最后胞体周围只见点状颗粒沉积，胞体开始出现空泡样变，继而被多个空泡状结构占据。在0．5～1．5μg／ml浓度范围内存在明显的剂量-效应关系。MTT试验结果表明，TOCP能剂量依赖性抑制少突胶质细胞代谢速率。结论TOCP能直接作用于少突胶质细胞，引起突起变性损伤，胞体空泡样变；提示少突胶质细胞损伤可能与TOCP的迟发性神经病理损伤（OPIDN）发病机制有关。     

少突胶质细胞的特性及与新生儿相关疾病的研究

少突胶质细胞是中枢神经系统的髓鞘形成细胞。近年研究表明，少突胶质细胞除形成中枢神经系统的髓鞘，营养和保护轴突的功能外,尚有为中枢神经系统提供神经营养因子和生长因子，表达轴突抑制分子等其他作用，在临床上与一些中枢神经系统疾病密切相关。本文综述少突胶质细胞特性、生物学功能及与新生儿疾病的关系。     

星形胶质细胞与神经轴突再生

神经元是难再生细胞,神经组织损伤后神经再生主要表现为神经轴突的延长与神经突触的重塑,而神经轴突再生受胶质瘢痕、神经营养因子及轴突生长抑制因子等因素的影响,其中胶质瘢痕形成及神经营养因子的产生与星形胶质细胞密切相关。中枢神经系统损伤后星形胶质细胞分泌神经营养因子、形成胶质瘢痕形成,对神经轴突再生有利弊双重作用。     

母婴分离对大鼠成年后海马星形胶质细胞的影响

[目的]研究生后早期长期反复母婴分离对子代大鼠成年后海马星形胶质胶质细胞的影响.[方法]新生大鼠分为母婴分离组和对照组,每组分别有雄性和雌性大鼠各10只.母婴分离组大鼠于生后第2 d至生后第14 d每日与母鼠分离3 h,对照组大鼠不受干扰.各组大鼠于生后第60 d处死.采用免疫组化方法分析各组大鼠背侧和腹侧海马星形胶质细胞标记物(GFAP和S100β)的表达.[结果]双因素方差分析显示:与对照组相比,母婴分离组雄性大鼠成年后腹侧海马GFAP和S100β染色阳性细胞数显著减少(P＜0.05);背侧海马星形胶质细胞中GFAP和S100β平均光密度明显下降(P＜0.001).[结论]母婴分离可使子代雄性大鼠成年后腹侧海马星形胶质细胞数量减少,背侧海马星形胶质细胞中GFAP和S100β含量下降.     

003 有机磷农药对星形胶质细胞的影响

有机磷农药是我国生产和使用最多的农药，对神经的损伤是有机磷农药中毒患者致死的主要原因。研究表明星形胶质细胞可能是有机磷农药除乙酰胆碱酯酶之外的作用靶点。有机磷农药能够激活星形胶质细胞，反应性胶质化在有机磷农药的神经毒性中具有两面性，研究者们更倾向于认为它对有机磷农药神经毒性的保护作用。     

新生大鼠大脑皮质星形胶质细胞纯化及培养方法的改进

目的快速纯化大鼠大脑皮质原代星形胶质细胞并进行传代培养。方法取新生2日龄SD大鼠大脑皮层,每2只为一组,将剥除软脑膜的大脑皮层剪碎,添加0. 25%胰蛋白酶-EDTA溶液500μL,37℃消化15 min,将细胞悬液接种于未用多聚赖氨酸处理过的培养瓶中,37℃、5%CO_2细胞培养箱中孵育15 min后,将细胞以5×10~6个/m L接种于L-多聚赖氨酸包被的T75培养瓶中。待细胞长满瓶底,200 r/min 37℃恒温摇18 h,加入1 m L 0. 25%胰蛋白酶,待大部分细胞悬浮后收集细胞。在倒置相差显微镜下对细胞进行形态学观察,胶质纤维酸性蛋白免疫荧光染色法进行星形胶质细胞纯度鉴定,并以MTS法测定传代后细胞增殖活力。结果星形胶质细胞纯度达到(97. 86±0. 91)%,细胞传代后生长情况及增殖活力良好。结论该方法可以高效获取原代及传代的大鼠大脑皮质星形胶质细胞。     

星形胶质细胞培养方法的改进

目的改进大鼠大脑皮质星形胶质细胞的体外培养方法,为研究星形胶质细胞的生物学作用提供实验模型。方法新生1～3d的大鼠,无菌操作下取双侧大脑皮质,机械吹打使细胞分散成悬液,差速粘附处理以去除成纤维细胞成分,细胞悬液原代培养9～14d,待细胞融合成单层并铺满瓶底后,4次消化传代,GFAP免疫组化染色鉴定星形胶质细胞。结果这种改进的星形胶质细胞培养方法,分离培养出星形胶质细胞,纯化率达95%以上。结论采用本实验改进的方法,培养的大鼠星形胶质细胞生长良好,纯度高,为后续实验对星形胶质细胞的生物学作用研究奠定实验基础。     

有机磷农药对星形胶质细胞的影响

有机磷农药是我国生产和使用最多的农药,对神经的损伤是有机磷农药中毒患者致死的主要原因。研究表明星形胶质细胞可能是有机磷农药除乙酰胆碱酯酶之外的作用靶点。有机磷农药能够激活星形胶质细胞,反应性胶质化在有机磷农药的神经毒性中具有两面性,研究者们更倾向于认为它对有机磷农药神经毒性的保护作用。     

大鼠胚胎脑新皮质神经干细胞的体外分离培养方法研究

目的建立大鼠胚胎脑新皮质神经干细胞的体外分离培养方法。方法从孕14天SD大鼠胚胎脑分离新皮质,通过机械吹打改善细胞分散状态、优化无血清培养基条件,从而改进神经干细胞的培养方法。利用神经干细胞标志蛋白(nestin和SOX2)、增殖和克隆成球能力以及多向分化能力测试三方面对神经干细胞进行鉴定。结果以该法培养的神经干细胞nestin蛋白呈强阳性表达,SOX2阳性表达率达99%以上,BrdU掺入阳性,培养3天后细胞量为接种量的10.55倍,6日克隆成球率为(33.00±4.40)%。经相应特异性标志蛋白检测证实神经干细胞经诱导分化后可形成神经元(MAP2)、星形胶质细胞(GFAP)和少突胶质细胞(O4)。结论获得的神经干细胞纯度和细胞产出率高,具有强自我更新和多向分化能力。     

流感病毒咽拭子处理方式对其病毒分离率影响的研究

目的 通过采用咽拭子中加入青链霉素混合液或使用过滤器直接过滤标本的方式,对比两种处理方法对流感病毒分离率的影响。 方法 选择2017年10月1日至12月31日贵阳市哨点医院及各区、市、县疾控中心采集的流感样病例(ILI)咽拭子中PCR核酸检测阳性的标本200份,将同一份标本分为两份,一份加入青链霉素混合液（双抗）4℃过夜,另一份使用0.22μm的过滤器直接过滤标本,采用 MDCK 细胞进行流感病毒的分离培养,通过观察CPE（细胞病变效应）确定病毒收获时间进行HA（血凝）试验,并对病毒液进行无菌试验。 结果 （1）200份标本经两种方法分别处理后,双抗组病毒液受细菌污染数为37瓶,病毒液污染率为18.5%;过滤膜处理组病毒液受细菌污染数为4瓶,病毒液污染率为2%,双抗处理组污染率高于过滤膜处理组,差异有统计学意义（〖XC小五号.EPS;P〗=29.594, P=0.000<0.05）;（2）去除污染的毒株后,双抗处理组分离流感病毒97株,分离率为48.5%;过滤膜处理组成功分离流感病毒102株,则病毒分离率为51.0%,滤膜处理组病毒分离率与双抗处理组比较,差异无统计学意义（〖XC小五号.EPS;P〗=0.250,P=0.617>0.05）。 结论 两种方法处理流感病毒咽拭子标本后,病毒分离率无明显差异,但使用过滤器直接过滤标本的方式可显著降低病毒分离期间被细菌污染的风险。     

Performance characteristics of qualified cell lines for isolation and propagation of influenza viruses for vaccine manufacturing

Cell culture is now available as a method for the production of influenza vaccines in addition to eggs. In accordance with currently accepted practice, viruses recommended as candidates for vaccine manufacture are isolated and propagated exclusively in hens’ eggs prior to distribution to manufacturers. Candidate vaccine viruses isolated in cell culture are not available to support vaccine manufacturing in mammalian cell bioreactors so egg-derived viruses have to be used. Recently influenza A (H3N2) viruses have been difficult to isolate directly in eggs. As mitigation against this difficulty, and the possibility of no suitable egg-isolated candidate viruses being available, it is proposed to consider using mammalian cell lines for primary isolation of influenza viruses as candidates for vaccine production in egg and cell platforms.     

上海地区SARS患者冠状病毒样颗粒培养与分离

目的 对上海地区SARS患进行病原体的培养10分离。方法 复旦大学公共卫生学院与上海市疾病预防控制中心合作,对上海地区第1例、第2例SARS确诊病例咽拭标本接种多种细胞,进行病原分离、观察。结果 在第1例SARS确诊病例咽拭标本感染的Vero E6细胞观察到CPE;经超速离心、电镜负染观察见到了直径在60～100nm的冠状病毒样颗粒;感染的VeroE6细胞和病人血清间接荧光抗体显示阳性。此株冠状病毒样颗粒暂时命名为SARS—CoV—Fudan I株。结论 在上海市的第1例确诊SARS病例的咽试培养中,见到新型冠状病毒样的颗粒。     

Resveratrol prevents ammonia-induced mitochondrial dysfunction and cellular redox imbalance in C6 astroglial cells

Background: Resveratrol is a polyphenolic compound that presents several protective effects in the central nervous system, including gliotoxicity associated to hyperammonemia, a key element for the development of hepatic encephalopathy. In this condition, mitochondrial dysfunction leads to a reactive oxygen species (ROS) overproduction, which, in turn, exacerbates mitochondrial failure and causes cellular damage.

Objective: This study sought to determine whether prevention of mitochondrial dysfunction and the maintenance of cellular redox status by resveratrol contribute to its protective action toward ammonia toxicity.

Methods: C6 astrocyte cell line was pre-incubated in the presence or absence of resveratrol (100?μM) for 1 hour. After pre-incubation, resveratrol was maintained and 5?mM ammonia was added for 24 hours, followed by the evaluation of ROS production, mitochondrial functionality, antioxidant enzymatic and non-enzymatic defenses, energy metabolic parameters, and genotoxicity.

Results: We showed that resveratrol prevented the increase in ROS production, the decrease of mitochondrial membrane potential (ΔΨ_m), and bioenergetics deficit caused by ammonia in C6 astroglial cells. In addition, resveratrol avoided the ammonia-induced upregulation of NOX activity and impairment in enzymatic and non-enzymatic antioxidant defenses. Ammonia also induced DNA damage that was prevented by resveratrol, indicating its genoprotective effect.

Conclusions: In summary, our study demonstrates that resveratrol prevents ammonia-induced cytotoxicity, as well as supports the role of resveratrol on mitochondrial/cellular redox functionality.     

乳酸杆菌分离鉴定技术研究进展

乳酸杆菌(Lactobacillus)作为一种重要的益生菌在食品工业中的应用日益广泛,鉴于乳酸杆菌的作用及其安全性具有株的特异性,菌种的正确使用是保障其产品食用安全性的重要基础。表型和基因型分析是目前乳酸杆菌鉴定的重要技术。本文就乳酸杆菌的分离培养技术及其属、种、株水平上鉴定技术的研究进展进行综述。     

小鼠肝星状细胞分离与鉴定

目的 探讨小鼠肝星状细胞的分离、培养方法,提高其分离效率.方法 取体重约30 g的雄性ICR小鼠,用Ⅳ型胶原酶、Dnase Ⅰ进行体内门静脉灌注消化小鼠肝脏细胞,经过Percoll不连续密度梯度离心法分离小鼠肝星状细胞.台盼蓝拒染方法鉴定细胞存活率,紫外激发下观察自发荧光,油红O染色和结蛋白细胞免疫荧光染色鉴定细胞.结果 小鼠肝星状细胞得率为6.5×105/只,存活率在91％以上,纯度大于92％.结论 该实验建立了简便而有效的小鼠肝星状细胞分离与鉴定方法.     

基于微课的BOPPPS教学模式在医学生隔离防护技术教学中的应用

目的 探讨微课联合导学互动的叠加式教育(BOPPPS)的教学模式在医学生隔离防护技术实践教学中的应用效果。方法 选取安徽中医药大学2020级规范化培训的医学生作为研究对象,以小组为单位采取整群随机抽样法分为试验组和对照组。对照组采用传统多媒体结合现场实操演示的教学模式授课,试验组则采用微课联合BOPPPS的教学模式。课后分别对两组进行理论和实践考核,并采用无记名问卷方式进行教学效果的满意度调查。结果 共选取医学生454名作为研究对象,其中试验组240名,对照组214名。试验组年龄(23.92±3.84)岁,对照组(23.60±3.21)岁。理论考核成绩试验组[(89.44±8.41)分]高于对照组[(82.76±10.08)分],差异有统计学意义(P<0.001)。实践技能考核成绩试验组[(96.01±1.62)分]高于对照组[(95.42±2.35)分],差异有统计学意义(P=0.002)。试验组学生在激发学习兴趣,提高自主学习能力两方面的满意度高于对照组学生,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论 微课联合BOPPPS的教学模式能有效改善学生学习效果,激发学习兴趣,培...     

粒细胞集落刺激因子对大鼠体内外源性人神经干细胞存活分化的影响

目的 观察缺氧缺血脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage, HIBD)新生大鼠应用粒细胞集落刺激因子(granulocyte-colony stimulating factor, G-CSF)对移植的人神经干细胞(human neural stem cells, hNSCs)体内存活及分化成少突胶质细胞的影响。方法 新生1周的Wistar大鼠HIBD模型后分成两组:NSCs移植组(A组, n=24)和NSCs移植+G-CSF治疗组(B组, n=24), 其中B组建模后1 h即开始皮下注射G-CSF, 每天1次, 移植前后连续5 d注射G-CSF。两组均于建模后第2天经脑室移植hNSCs。移植后3 d用TUNEL法检测植入细胞凋亡情况, 并于移植后1周、2周分别用免疫荧光法检测植入细胞在大鼠脑内的存活及向少突胶质细胞方向分化情况。结果 移植后3 d, A组大脑皮层见大量的植入细胞处于凋亡状态, 而B组的植入细胞凋亡明显减少(t=68.36, P<0.01)。移植后1周及2周, 可见植入细胞分布以额叶皮层和海马多见, 纹状体亦有少许植入细胞分布, A组的植入细胞数少于B组(t=14.07和2.5, P<0.05)。而移植后1周及2周, hNSCs几乎不能分化成少突胶质细胞。结论 G-CSF能减少植入细胞的凋亡, 提高植入细胞的存活率, 但对植入细胞向少突胶质细胞方向的分化无影响。