抗氧化维生素对氧化低密度脂蛋白作用的主动脉内皮细胞脂质过氧化损伤的影响

为深入探讨抗氧化维生素（维生素Ｅ、维生素Ｃ及β－胡萝卜素）对氧化低密度脂蛋白（ｏｘＬＤＬ）损伤内皮细胞的防治作用及可能机理,我们以体外培养的小牛主动脉内皮细胞为模型、在培养的主动脉内皮细胞中加入不同剂量的抗氧化维生素,共同培养１２ｈ,再与终浓度为０．１ｇ／Ｌ的ｏｘＬＤＬ继续培养２４ｈ,取贴壁细胞及培养液,通过硫代巴比妥酸荧光比色法（ＴＢＡ）和单核细胞（ＨＬ６０）粘附计数法观察不同浓度的抗氧化维生素对ｏｘＬＤＬ损伤的内皮细胞脂质过氧化及单核细胞粘附性的影响。结果表明,抗氧化维生素各组细胞培养液中丙二醛（ＭＤＡ）含量以及内皮细胞粘附的ＨＬ６０细胞数均明显低于ｏｘＬＤＬ组,提示维生素Ｅ、维生素Ｃ及β－胡萝卜素三种抗氧化维生素均可减轻ｏｘＬＤＬ对内皮细胞的脂质过氧化损伤,阻止单核细胞的粘附。这些可能是抗氧化维生素防治动脉粥样硬化的重要机理之一。     

维生素E对体外氧化低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞损伤的保护作用

为探讨维生素E(VE)对体外氧化低密度脂蛋白 (ox LDL)所致血管内皮细胞 (VEC)氧化损伤的保护作用。利用体外培养人脐静脉血管内皮细胞 ,建立了氧化损伤模型。将细胞分为 5组 :对照组、ox LDL组、VE L +ox LDL组 ,VE M +ox LDL组和VE H +ox LDL组。各剂量组首先在含有不同浓度的VE培养液中孵育 ,2 4小时后加入ox LDL进行氧化损伤 ,继续培养 2 4小时后收集细胞 ,进行有关指标测定。结果显示 ,ox LDL组MDA含量高于对照组和各VE组 (P <0 0 5) ;ox LDL组SOD活性低于对照组和各VE组 (P <0 0 5) ;ox LDL组、VE L +ox LDL组GSH Px活性低于其它各组 (P <0 0 5)。提示维生素E对ox LDL诱导的血管内皮细胞损伤有一定的保护作用     

维生素E对肿瘤坏死因子损伤主动脉内皮细胞的防治作用

目的：观察维生素Ｅ对肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）损伤内皮细胞的保护作用,探讨维生素Ｅ抗动脉粥样硬化形成的可能机理。方法：以体外培养的小牛主动脉内皮细胞为模型,在培养的内皮细胞中分别加入浓度为１２．５、２５．０和５０．０μｍｏｌ／Ｌ的维生素Ｅ和浓度为４００Ｕ／ｍｌ的ＴＮＦα共同培养７２ｈ,收集培养的内皮细胞,分别观察维生素Ｅ对经ＴＮＦ作用的内皮细胞的形态、生长增殖、细胞周期及凋亡的影响。结果：１．相差显微镜观察可见,正常主动脉内皮细胞为多角形,呈单层铺石状紧密排列;而ＴＮＦ组,细胞普遍收缩、拉长,由原来的上皮型变为成纤维细胞型,有较多的细胞脱落并形成大片脱失区,细胞边界尚清楚,形状亦较规则;加维生素Ｅ组（ＴＮＦ＋ＶＥ）内皮细胞形态损伤程度明显轻于ＴＮＦ组,表明ＶＥ可显著减轻ＴＮＦ对内皮细胞形态的损伤作用;２．噻唑蓝比色分析法检测发现,ＴＮＦ组的细胞增殖抑制率为２３．１％,显著高于３个ＴＮＦ＋ＶＥ组（抑制率分别为１９．４％、１５．５％及１０．１％）,细胞抑制率随维生素Ｅ浓度的增加有降低趋势,表明维生素Ｅ可明显降低ＴＮＦ对内皮细胞增殖的抑制作用;３．流式细胞仪分析法检测细胞周期各时相发现,ＴＮＦ组处于Ｇ１期的细胞数要明?     

抗氧化营养素对主动脉内皮细胞脂质过氧化损伤的影响

探讨抗氧化营养素硒（Ｓｅ）、维生素Ｅ（ＶＥ）、维生素Ｃ（ＶＣ）及β－胡萝卜素（ＢＣ）防治动脉粥样硬化形成的可能作用及机制。方法：以原代培养的小牛主动脉内皮细胞（ＢＡＥＣ）为模型、以ｏｘＬＤＬ为损伤因素,利用硫代巴比妥酸荧光比色法（ＴＢＡ）和单核细胞（ＨＬ－６０）粘附计数法观察抗氧化营养素对ＢＡＥＣ脂质过氧化及单核细胞粘附性的影响。在体外培养的ＢＡＥＣ中加入不同剂量的抗氧化营养素：Ｓｅ的终浓度（μｍｏｌ）分别为１．０、５．０、１０．０;ＶＥ的终浓度（μｍｏｌ）分别为１２．５、２５．０、５０．０;ＶＣ的终浓度（μｍｏｌ）分别为２０．０、５０．０、１００．０;ＢＣ的终浓度（μｍｏｌ）分别为１．０、５．０、１０．０;共同培养１２ｈ后,再与终浓度为０．１ｍｇＰｒ／ｍｌ的ｏｘＬＤＬ继续培养２４ｈ,取贴壁细胞及培养液进行检测。结果：（１）抗氧化营养素组细胞培养上清液中脂质过氧化物（ＭＤＡ）的含量明显地低于ｏｘＬＤＬ组。其中Ｓｅ的三个剂量组培养上清液中ＭＤＡ分别降低了５．１１％、１５．２２％和１９．３６％;ＶＥ的三个剂量组降低１０．８９％、１８．０２％和２９．０９％;ＶＣ的三个剂量组降低了７．４２％、１７．２４％和２１．１?     

抗氧化维生素对内皮细胞增殖及凋亡的影响

目的：　观察氧化低密度脂蛋白（ｏｘＬＤＬ）对内皮细胞增殖与凋亡的影响以及抗氧化维生素（维生素Ｅ、维生素Ｃ及β－胡萝卜素）对内皮细胞的防治效应。方法：　在体外培养的小牛主动脉内皮细胞中分别加入不同浓度的抗氧化维生素,作用１２ｈ 后,再与终浓度为０．１ｇ Ｐｒ／Ｌ的ｏｘＬＤＬ共同培养２４ｈ,采用噻唑蓝比色分析法和流式细胞仪分析法对贴壁内皮细胞进行检测,分别观察抗氧化维生素对经ｏｘＬＤＬ作用的内皮细胞的形态、生长增殖、细胞周期及凋亡的影响。结果：　（１）维生素Ｅ和维生素Ｃ能显著减轻ｏｘＬＤＬ对内皮细胞形态的损伤作用;β－胡萝卜素作用稍弱。（２）三种抗氧化维生素均可降低ｏｘＬＤＬ对内皮细胞生长增殖的抑制作用,使其抑制率降低。（３）三种抗氧化维生素均可促进内皮细胞由Ｇ１ 期进入ＤＮＡ合成的Ｓ期,促进内皮细胞的增殖并阻止内皮细胞凋亡的发生。结论：　维生素Ｅ、维生素Ｃ及β－胡萝卜素均可减轻ｏｘＬＤＬ在形态、增殖及凋亡等方面对内皮细胞的损伤作用,这可能是抗氧化维生素加速内皮细胞损伤后修复、促进内皮细胞增殖,从而发挥其抗动脉粥样硬化形成的部分机制。     

维生素C、E对血管内皮细胞氧化损伤保护作用

目的 观察维生素C(VC)、维生素E(VE)对体外培养H₂O₂氧化损伤血管内皮细胞(VEC)超微结构的影响.方法 采用体外细胞培养方法,将血管内皮细胞分为正常对照组,H₂O₂氧化损伤对照组、VC+H₂O₂组(VC100μmol/L),VE+H₂O₂组(VE100μmol/L).分别将VC、VE加入到培养液中,预孵24h,再加入除菌后的H₂O₂进行损伤,终止培养后收集细胞,进行电镜观察.结果 透射电镜观察VEC,可见H₂O₂损伤对照组细胞超微结构明显异常,细胞表面呈光滑状,丢失特征性的细胞突起及微绒毛;胞质内线粒体损伤严重,形态模糊;粗面内质网明显扩张呈大囊泡状;溶酶体增多;少数细胞严重水肿,核形不规则,核内染色质部分溶解.VC+H₂O₂和VE+H₂O₂组血管内皮细胞超微结构仅有轻度损伤,多数细胞与正常对照组细胞相似;大部分细胞表面微绒毛和胞质突起均趋于正常,胞质内细胞器均在正常范围内;细胞核未见异常,核膜完好,核内染色质分布正常;仅有少数细胞粗面内质网有轻度扩张,线粒体结构模糊不清.结论 VC、VE可一定程度保护氧化损伤的血管内皮细胞的超微结构.     

维生素C、E对体外氧化血管内皮细胞保护作用的研究

目的观察维生素C(VC)、维生素E(VE)及其联合作用对体外氧化损伤血管内皮细胞抗氧化作用的影响。方法采用体外细胞培养方法,将血管内皮细胞分为正常对照组,H2O2氧化损伤对照组,损伤加VC低、中、高浓度组(VC-L、M、H组),损伤加VE低、中、高浓度组(VE-L、M、H组),损伤加VC、VE联合低、中、高浓度组(VC-L+VE-L、VC-M+VE-M、VC-H+VE-H组)。分别将不同剂量的VC、VE加入到培养液中,预孵24h,再加入除菌后的H2O2进行损伤,终止培养后收集细胞,测定各组细胞抗氧化指标。结果与H2O2氧化损伤对照组比较,VC、VE、VC+VE各组均能增强其SOD、GSH-PX及CAT活性,降低LDH释放率,差别有统计学意义。与正常对照组相比较,(VC+VE)-M、H组差别无统计学意义。此外,(VC+VE)-L组与VC、VE-L差别无统计学意义,但(VC+VE)-M、H组SOD均高于VC、VE-M、H组,(VC+VE)-H组LDH释放率低于VC、VE-H组,差别有统计学意义。结论VC、VE能够提高氧化损伤血管内皮细胞的抗氧化能力,且二者联合作用优于单独作用。     

抗氧化维生素对苯并(a)芘抑制内皮细胞HSP70表达的干预作用

[目的]研究抗氧化维生素C(Vitamin C，Vit C)和维生素E(Vitamin E，Vit E)对苯并(a)芘(benzo(a)pyrene，BaP)抑制内皮细胞热休克蛋白70(heat shock protein，HSP70)表达的干预作用。[方法]原代培养猪主动脉血管内皮细胞。对照组不染毒，染毒组以不同浓度BaP(0、0．1、0．5、1、5、10μmol/L)染毒24h，VitE和VitC预处理组以100μg／ml的VitE和VitC预处理6h后，再以不同浓度BaP(0、0．1、0．5、1、5、10μmol/L)染毒24h，用Western-blot法检测各组细胞HSP70表达的改变。[结果]BaP抑制了内皮细胞HSP70的表达；VitE和VitC预处理组内皮细胞HSP70表达与对照组相比差别无显著性。[结论]VitE和VitC具有抵抗BaP抑制内皮细胞HSP70表达的效应。     

抗氧化维生素对氧化低密度脂蛋白的影响

观察36例冠心病患者服维生素E（VE）和维生素C（VC）后血浆氧化低密度脂蛋白（oxLDL）水平的变化。实验组服维生素E和维生素C前后oxLDL水平分别为66.7±4.4μg／dl、59．1±3．7μg／dl（P＞0．01）。对照组服安慰剂前后oxLDL水平无明显变化（P＜0.05）。且冠心病患者血浆oxLDL水平高于正常人（P＜0．01）。结果提示：补充抗氧化维生素可以防止LDL氧化，且无不良反应。VE和VC将有益于冠心病的一级二级予防。     

维生素A缺乏对大鼠脂质过氧化和抗氧化系统的影响

目的 :　研究维生素 A(VA)缺乏对 3w龄大鼠的脂质过氧化和抗氧化系统的影响。方法 :　健康 Wistar雄性大鼠 33只 ,按体重随机分为 A(VA完全缺乏组 ) ,B(VA轻度缺乏组 ) ,C(VA正常对照组 )三组。每组 1 1只 ,实验期为 84d。观察指标有 :血清 VA,血清、肝脏及脑组织的超氧物岐化酶 (SOD)活性 ,全血、肝脏及脑组织的谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH- Px)活性 ,血清、肝脏及脑组织的丙二醛 (MDA)含量 ,并采用电子自旋共振 (electron spin resonance,ESR)和自旋捕捉技术直接测定大鼠肝组织中的氧自由基。结果 :　 A、B组大鼠血清、肝脏及脑组织 SOD活性明显下降 ,全血、肝脏及脑组织 GSH- Px活性明显降低 ,血清、肝脏及脑组织 MDA含量显著升高 ,ESR图谱出现了 N- H偶合的三组双峰波。结论 :　 VA完全或轻度缺乏均可以使大鼠脂质过氧化反应明显增强 ,而抗氧化能力明显减弱     

黑加仑提取物保护血管内皮细胞氧化损伤的实验研究

目的研究黑加仑提取物对过氧化氢所致血管内皮细胞ECV-304损伤的影响。方法建立体外过氧化氢损伤模型,测定细胞存活率、上清液中丙二醛(MDA)含量、乳酸脱氢酶(LDH)活力、一氧化氮(NO)、内皮素(ET)和前列环素(PGI2)含量,并运用流式细胞仪观察黑加仑提取物对过氧化氢对内皮细胞ECV-304凋亡的影响。结果黑加仑提取物各剂量都能显著提高H2O2损伤内皮细胞的存活率(P<0.05);显著抑制H2O2损伤引起内皮细胞的LDH和ET的释放(P<0.05);显著减少H2O2损伤的内皮细胞MDA的生成(P<0.05);增加H2O2损伤的内皮细胞NO和PGI2水平(P<0.05)。黑加仑提取物的各组、阳性对照组和正常对照组早期凋亡率和总凋亡率明显低于H2O2模型组(P<0.05)。结论黑加仑提取物对过氧化氢损伤的脐静脉内皮细胞ECV-304具有保护作用;黑加仑提取物可降低H2O2诱导的ECV-304凋亡的早期凋亡率和总凋亡率,以达到保护内皮细胞的作用。     

Effects of vitamins on lipid peroxidation and suppression of DNA synthesis induced by adriamycin in Ehrlich cells

The effects of various vitamins on lipid peroxidation and the suppression of DNA synthesis induced by adriamycin (ADR) in vitro using Ehrlich ascites carcinoma (EAC) cells were studied. ADR produced a concentration-dependent stimulation of lipid peroxidation in EAC cells. alpha-Tocopherol and coenzyme Q10 inhibited ADR-induced lipid peroxidation to about the same extent and these effects were the greatest for all antioxidants added. The inhibitory effect of riboflavin 2',3',4',5'-tetrabutyrate was greater than that of riboflavin 5'-phosphate. On measuring incorporation of [3H]thymidine into EAC cells, these vitamins did not alter appreciably the magnitude of the ADR-induced suppression of DNA synthesis in EAC cells.     

Kidney injury induced by lipid peroxide produced by vitamin E deficiency and GSH depletion in rats

Four-week-old Wistar male rats were fed a vitamin E (VE)-deficient (0E) or a VE-sufficient (10E) diet for 6 weeks and then intraperitoneally treated with buthionine sulfoximine (BSO) at 1 mmol/kg body weight once a day for 3 days. Glutathione (GSH) depletion by BSO treatment caused injuries especially in the kidneys of VE-deficient rats. The kidney weight increased in the VE-deficient rats after BSO treatment (0E-BSO). It was observed that the epithelial cells of the renal tubules in this group were strongly impaired and the injuries were necrosis and desquamation. No injury was observed in the kidneys of the BSO-untreated 0E group and the 10E groups. The TBA value of the kidney of 0E-BSO group was lower than that of the BSO-untreated 0E group, but the lipofuscin content of the kidney of the 0E-BSO group was 10 times higher than that of the BSO-untreated 0E group. These results suggest that the kidney injuries in rats may be caused by lipid peroxidation induced by vitamin E deficiency and glutathione depletion.     

氧化型低密度脂蛋白诱导内皮细胞基因表达

目的 通过研究氧化型低密度脂蛋白(Oxidized low density lipoprotein。Ox-LDL)诱导血管内皮细胞基因表达谱的改变，为阐明氧化型低密度脂蛋白致内皮细胞功能障碍及动脉粥样硬化形成的分子机制提供科学依据。方法 采用含有4000条全长已知人类基因cDNA，以及96条参照基因cDNA克隆制作的基因表达谱芯片，筛查氧化型低密度脂蛋白(100mg／L)作用6h对人脐静脉血管内皮细胞的基因表达谱改变的影响。结果 Ox-LDL可诱导3条基因表达下调，5条基因表达上调。结论 氧化型低密度脂蛋白的早期作用即可诱导内皮细胞相关基因的表达改变；首次发现氧化型低密度脂蛋白可诱导内皮细胞H731蛋白，ST2蛋白，CyclinB1(细胞周期蛋白B1)和KDRF(KM-102-derived reductase-like factor。KM-102源性还原酶样因子)等基因表达的改变，为揭示氧化型低密度脂蛋白引起血管内皮细胞功能障碍的机制提供线索。     

镁对氧化低密度脂蛋白致内皮细胞损伤的保护作用

为探讨镁对内皮细胞的保护作用 ,用一次性密度梯度超速离心法制备人低密度脂蛋白 (LDL) ,以共轭二烯法和改良八木法检测Mg2 +(0 3、0 6、1 2和 2 4mmol L)对Cu2 +介导LDL氧化反应潜伏期和氧化修饰程度的影响。另将传至 2～ 3代的人脐静脉内皮细胞分为正常对照组、ox LDL对照组、补镁组和ox LDL +Mg2 +组 ,改良八木法测定细胞脂质过氧化物水平 ,黄嘌呤氧化法测定细胞外SOD活性 ,DTNB法测定含硒和不含硒GSH Px活性。结果显示 ,(1)Mg2 +各剂量组明显延长Cu2 +介导LDL氧化反应潜伏期 ,0 3和 0 6mmol LMg2 +显著降低TBARS的生成 ;(2 )与ox LDL组相比 ,ox LDL +Mg2 +各剂量组TBARS生成量显著下降 ,SOD活性显著升高 ,含硒GSH Px酶活力显著升高 ,不含硒GSH Px活力显著升高。提示镁抑制LDL的氧化修饰 ,补镁能降低细胞脂质过氧化物水平 ,增强抗氧化酶的的活性     

甲基丙烯酸环氧丙酯诱导哺乳类细胞转化的实验研究

用人胚肺成纤维细胞的体外转化实验检测出甲基丙烯酸环氧丙酯可诱导人胚肺成纤维细胞形态学改变，转化细胞核浆比例增大，排列紊乱，交叉重叠生长。从转化集落分离的细胞可被较低浓度的刀豆凝集素Ａ凝集，在半固体琼脂内非贴壁依赖生长。转化细胞的染色体发生结构和数目改变。上述结果表明：甲基丙烯酸环氧丙酯具有诱导人胚肺成纤维细胞恶性转化的作用，预示它可能对人具有潜在的致癌危险性。     

SAH抑制内皮细胞增殖和ER-α表达作用

目的 探讨胞内S-腺苷同型半胱氨酸(SAH)升高抑制血管内皮细胞增殖和雌激素受体-α(ER-α)表达变化的关系.方法 以永生化的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)为研究对象,经不同浓度的S-腺苷同型半胱氨酸水解酶(SAHH)强效抑制剂3-deazaadenosine(DZA)处理24,48,72 h.利用细胞计数法、流式细胞仪和脱氧核糖核酸转移酶缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞的增殖凋亡能力,蛋白印迹法检测ER-α蛋白的表达,荧光定量-PCR(qRT-PCR)检测其mRNA表达,甲基化特异PCR法(MSP)检测ER-α基因启动子甲基化状态.结果 经DZA处理后,HUVEC增殖能力降低(主要受阻于G1/G0期),细胞凋亡率增加(P<0.05),ER-α mRNA和蛋白的相对表达量降低(P<0.05),但其启动子甲基化不发生改变.结论 胞内SAH升高抑制HUVEC的增殖能力与ER-α的表达变化有关,但这种作用不是通过改变ER-α基因启动子的甲基化而实现.     

铁负荷对大鼠脂质过氧化作用影响及抗氧化维生素对其抑制作用

目的研究铁负荷对大鼠脂质过氧化的影响及具有抗氧化作用的维生素 (维生素E和 β 胡萝卜素 )对铁负荷所产生影响的作用。方法将 80只雄性Wistar大鼠按体重随机分为 8组 ,前 4组给予的饲料铁浓度分别为 5 0、2 0 0、3 5 0和 5 0 0mg kg饲料。后 4组饲料铁浓度分别与前 4组相同 ,但同时在饲料中补充抗氧化剂(维生素E 10 0mg kg饲料、β 胡萝卜素 2 5mg kg .BW) ,喂养 8周。实验结束时 ,测定血清铁、血脂 (总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇 )、维生素E、维生素A ,血清丙二醛、氧化性低密度脂蛋白 ,超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶。结果铁负荷具有增加血清丙二醛、氧化性低密度脂蛋白及低密度脂蛋白胆固醇水平的趋势 ,5 0 0mg kg饲料组显著 ;各组谷胱甘肽过氧化物酶活性应激性增加 ,VE、VA含量下降。加入维生素类抗氧化剂可使丙二醛、氧化性低密度脂蛋白及低密度脂蛋白胆固醇降低 ,高密度脂蛋白胆固醇升高 ,超氧化物歧化酶降低。结论铁负荷可促进体内脂质过氧化反应 ,以十倍生理剂量最为显著 ,同时抗氧化酶类活性增加 ,以维持机体动态平衡 ;维生素类抗氧化剂可能通过非酶促反应体系发挥作用 ,抑制上述改变