荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒DNA

目的 建立检测HBV病毒DNA的荧光定量PCR法（FQ-PCR）,并与运用常规凝胶电泳技术观察特异扩增带检测的结果加以比较。方法 合成扩增HBV DNA314bp特异保守序列的1对引物及1条带2个荧光基团的寡核苷酸探针。用PE-5700型定量PCR仪完成PCR反应及产物的荧光定量检测。同是PCR产物经琼脂糖凝胶电泳,EB染色,UVP（凝胶成像仪）检出有314bp带者为阳性或弱阳性。结果 建立了检测HBVDNA的荧光定量PCR技术,用已知HBV阳性模板不同拷贝数的标准溶液测得标准曲线Ct,原始拷贝数在10^5/ml以上者为阳性,用定量及定性PCR2种方法检测698例血清标本的结果表明：用FQ-PCR技术共检测出204例为阳性,阳性率29.2%;用定量及定性PCR2种方法检测698例血清标本的结果表明：用FQ-PCR技术共检测出204例为阳性,阳性率29.2%;用定性PCR观察到193例有阳性特异带,阳性检出率为27.65%。没有发现用定性PCR检测为阳性而用FQ-PCR检测为阴性者。结论 FQ-PCR检测HBVDNA较普通定性PCR技术具有操作简便,灵敏度更高、减少发生污染可导致假阳性结果的可能性及自动化程度高等优点,值得在临床检验中推广应用。     

用聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒DNA

我们采用聚合酶链反应(ＰＣＲ)技术检测乙型肝炎患者血清乙型肝炎病毒(ＨＢＶ)ＤＮＡ,并用酶标法检测ＨＢＶＭ,从乙型肝炎临床分型和实验室ＨＢＶＭ分组两个角度时行回顾性比较与分析。1　材料和方法1.1　病例选择　168例乙型肝炎病例均来自嘉兴市第二医院和协作单位住院病人,全部检测过ＨＢＶＤＮＡ和ＨＢＶＭ,男106例,女62例;年龄4～71岁,平均35.4岁。其中急性乙型肝炎26例,慢性乙型肝炎72例,重型肝炎9例,淤胆型肝炎24例,肝炎后肝硬化37例。诊断标准依据1995年北京第五次全国传染病寄生虫病学术会议修订的病毒性肝炎诊断标准。1.2　试剂和…     

聚合酶链反应定量检测乙型肝炎病毒DNA及其临床意义分析

乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染时,外周血中ＨＢＶＤＮＡ是病毒复制最直接和可靠的标志。自１９８５年以来,国外应用核酸分子杂交法、定量聚合酶链反应（ＰＣＲ）法检测ＨＢＶＤＮＡ含量［１］,国内也有一些报道［２］。北京佑安医院自１９９６年１月至１９９７年８月采用...     

聚合酶链反应检测血清HBV—DNA方法的建立及实验条件分析

本文报道了我室建立的一种利用聚合酶链反应检测血清乙肝病毒(HBV)DNA 的新方法。该方法用血清单纯热处理法代替酚氯仿抽提,简化了操作步骤,节省了时间。该法经溴乙啶染色可检出100fg水平的HBV-DNA,经狄高辛-HBV 探针杂交可检出10fg 水平HBV-DNA.灵敏度高。对228名急、慢性乙肝患者和20名健康志愿者血清HBV-DNA 的检测结果表明:该方法简便、快速、灵敏、可靠,适合于临床应用.     

用热启动聚合酶链反应检测血清中乙型肝炎病毒DNA技术的建立和应用

建立了热启动聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测乙型肝炎病毒ＤＮＡ（ＨＢＶＤＮＡ）的技术。ＰＣＲ所有反应成分被２次加样。先加Ａ液（含ｄＮＴＰｓ、一对引物和ＭｇＣｌ＿２）与一粒石蜡珠。７０℃加热后冷却至室温，使蜡珠先融化后凝固形成蜡盖封住Ａ液，然后在向其上加入Ｂ液（含耐热性ＤＮＡ聚合酶、ＨＢＶＤＮＡ模板和ＫＣｌ）并开始循环扩增。当反应管内第一次变性温度升至６０℃以上时，中隔蜡层融化，蜡上浮形成防蒸发屏障，Ａ、Ｂ两液则由于热分子运动而混匀，从而保证引物与靶基因在较高温度下严格退火以减少错导非特异性扩增和引物聚体形成。提高了ＰＣＲ的特异性和灵敏性，应用这种技术对７６例肝炎血清进行了检测，结果ＨＢＶＤＮＡ检出率为６８％，其中ＨＢｓＡｇ（＋）、ＨＢｅＡｇ（＋）、抗－ＨＢｃ（＋）血清检出率为１００％；ＨＢｓＡｇ（＋）、抗－ＨＢｅ（＋）、抗－ＨＢｃ（＋）血清检出率为７０％；ＨＢｓＡｇ（＋）、抗－ＨＢＣ（＋）血清检出率为８９％；抗ＨＢＣ（＋）血清检出率为对％；标记全阴性血清检出率为３３％。     

定量聚合酶链反应检测肝病患者血清中乙型肝炎病毒 …

目的 了解肝病患者血清乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ的含量，以便观察临床抗病毒治疗效果及血清ＨＢＶ ＤＮＡ水平与病情及预后的关系。方法 应用荧光素标记的半巢式引物在扩增中能量转移的定量聚合酶 链反应（ＱＰＣＲ），对６３例肝功能异常的肝病患者血清进行ＨＢＶ ＤＮＡ含量测定，并与普通ＰＣＲ及酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）进行比较。结果 ＱＰＣＲ阳性率为８２。５４％，普通ＰＣＲ法为７１．４３％，ＥＬＩＳＡ     

聚合酶链反应检测HBV DNA与乙肝病毒血清标志物的对比研究

聚合酶链反应检测ＨＢＶＤＮＡ与乙肝病毒血清标志物的对比研究袁晓璞，丁雁本文用套式ＰＣＲ检测３１８例患者血清乙肝病毒ＤＮＡ，同时用酶联免疫分析检测乙肝血清标志物二对半，以探讨乙肝病毒的感染与机体免疫反应的关系。材料和方法１．血清标本来源门诊及住院病人，...     

聚合酶链反应检测乙型肝炎患者肾组织中的HBV DNA

应用巢式聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对１１例乙型肝炎患者石蜡包埋的肾、肝组织中的ＨＢＶＤＮＡ进行了检测，并与其免疫组化及原位杂交结果作了比较。二组引物检测的结果表明：在肝组织中均有ＨＢＶ的感染，其中５例存有ＨＢＶ的复制；倚组织中ＨＢＶＤＮＡ的检出率为８／１１（７２．７％），未检测出有ＨＢＶ的复制，包括２例有膜性肾炎和膜增生性肾炎病变的病例。ＨＢＶ可以感染肾组织但并不在肾组织中复制。这一实验结果较为支持乙型肝炎患者肾脏出现的病变可能系沉积于肾小球内的免疫复合物介导损伤的结果。     

锁核酸捕获TaqMan探针实时聚合酶链反应构建及检测乙型肝炎病毒DNA

建立和检测新型乙型肝炎病毒(HBV)DNA检测技术锁核酸(LNA)捕获TaqMan探针实时聚合酶链反应(PCR)。方法 2009年8月至2010年3月选取本院20例健康献血者和肝病专科住院的75例经COBAS Amplicor检测HBV DNA阳性慢性乙型肝炎(CHB)患者,分别采集血液样本进行LNA捕获TaqMan探针实时PCR特异性试验。同时对LNA-实时PCR方法的重复性、特异性和线性范围等进行分析。结果 其线性范围为10～2.3×109 IU/ml。将10 IU/ml作为检测下限,具有95％可信区间。线性回归分析显示其斜率接近1.0 (R2=0.999)。批内变异值为3.88％～4.36％,批间变异值为8.5％～11.7％。20例健康献血者的阴性对照血清HBV-DNA检测均为阴性,而75例经COBAS Amplicor检测HBV DNA阳性患者的血清样本除1例阴性外,其余都为阳性。结论 LNA捕获TaqMan探针实时PCR方法为HBV-DNA检测的一种快捷灵敏、准确度高的新方法,值得临床实验室推广应用。     

不同慢性肝病患者血清中乙型肝炎病毒DNA定量检？…

目的 探讨乙型肝炎病毒ＤＮＡ含量的临床意义。了解乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）免疫标志不同状态的慢性肝病患者血清ＨＢＶＤＮＡ浓度及共临床意义。方法 应用建立的竞争性聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法定量检测慢性肝炎（ＣＨ）５１例、肝硬化（ＬＣ）３６例、原发性肝癌（ＰＨＣ）３８例的血清ＨＢＶ ＤＮＡ浓度。结果 ＨＢＶＤＮＡ阳性的ＣＨ患者血清ＨＢＶ ＤＮＡ浓度为４．３６ｌｏｇ１０ＨＢＶＤＮＡ拷贝／５０μｌ，ＬＣ为４．     

竞争性聚合酶链反应法定量检测慢性乙型肝炎患者血…

设计了以内参照为基础的竞争性聚合酶链反应方法，同时定量检测ＨＢｅＡｇ阴性的慢性乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒基因前Ｃ区野毒株及变异株，并观察了在应用α干扰素治疗以后的变化。结果发现干扰素治疗有效者中，病毒核酸量迅速下降至转阴；而干扰素治疗无效者中，病毒核酸量也可有所下降，但仍高于检测水平甚至反跳。     

聚合酶链反应技术结合酶切杂交研究单项抗乙型肝炎…

以聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增单项抗乙型肝炎病毒核心抗原阳性血清的乙型肝炎病毒ＤＮＡ。内外两对引物均选自ａｄｒ、ａｄｗ和ａｙｗ３种亚型ＨＢＶ基因组Ｃ基因区的共有序列，扩增产物分别长４２８ｂｐ和６６４ｂ０ｐ，共含一个Ｂｇ１Ⅱ酶切点，酶切后前者产生２９９ｂｐ和１２５ｂｐ、后者产生４０６ｂｐ和２５４ｂｐ各一个限制性片段。以另一条基因位置处于内引物对之间的寡核苷酸制备３２ｐ－５’末端标记的探针对之进行Ｓｏｕ