1998～1999年北京地区流感病毒监测及血凝素基因分析

目的　监测北京地区流感病毒流行 ,探讨其流行规律及血凝素抗原基因变异特征。方法　在 1998年冬北京地区流感病毒暴发流行期间 ,于首都儿科研究所附属医院门诊及北京市防疫站采集标本进行病毒分离、鉴定 ,并对其中 3株病毒的血凝素重链区 (HA1)进行了核苷酸和氨基酸序列分析。结果　共分离到流感病毒 88株 ,经血清学鉴定为甲 3型。与参考株A/Nanchang/ 933/ 95的核苷酸同源性为 (97.0～ 97.7) % ,氨基酸同源性为 (94.2～ 95 .4) % ;与参考株A/Sydney/ 0 5 / 97的核苷酸同源性为 (98.0～ 98.9) % ,氨基酸同源性为 (96 .4～ 97.6 ) %。结论　本次北京地区流行的流感病毒为甲 3型。与近年国内甲 3流行参考株A/Nanchang/ 933/ 95相比 ,其HA1区发生了较大变异 ,而与国际上新出现的A/Sydney/ 0 5 / 97株相近 ,提示本次流行的毒株可能与国外有共同的起源。这是国内首次报道此次流行变异株的核苷酸序列。     

猪型流感病毒血凝素基因的核苷酸全序列分析

对我国大陆首次从猪群中分离到的猪型（Ｈ１Ｎ１）流感病毒血凝素（ＨＡ）基因核苷酸全序列进行了测定，其长度为１７７８ｂｐ，共编码５６６个氨基酸，其中信号区１７个，ＨＡ１区３２６个，多肽连接区１个，ＨＡ２区２２２个。与Ａ／ＮＪ／１１／７６（Ｈ１Ｎ１）毒株ＨＡ蛋白分子上氨基酸序列相比，其同源性多１个糖基化点，然而其余的包括２个重叠的糖基化点均相同。     

甲1型流感病毒新分离株HA基因的序列分析

目的 研究新分离的H1N1亚型流感病毒株的HA1基因序列。方法 甲型流感病毒通过鸡胚增殖后提取RNA、逆转录合成cDNA,经PCR扩增和产物纯化构建重组质粒,用双脱氧链终止法进行核苷酸序列测定;并进行基因特性分析。结果 新分离到的3株流感病毒株（H1N1）HA1区基因长度为981bp,编码327个氨基酸;与A/桂防/10/94和A/Bayern/07/95（H1N1）标准株比较其同源性分别为92.8%和91.3%,丢失了第130位氨基酸和304位糖基化位点;新分离的3株甲型流感病毒（H1地）标准株比较其同源性分别为92.8%和91.3%,丢失了第130位氨基酸和304位糖基化位点,新分离的3株甲型流感病毒株（H1N1）HA1区氨基酸同源性高达98%;A/桂防/10/94和A/Bayern/07/95(H1N1)毒株HN1氨基酸的同源性高达96%。结论 新分离到的3株H1N1毒株HA编码氨基酸不同于A/Baydrn/07/95(H1N1)和A/桂防/10/94（H1N1）标准株,它们可能为新的甲型流感病毒变异性。     

流感病毒A／Guangdong／28／94HA1基因序列分析

自１９６８年流感病毒ＨａＮ２亚型首次引起人类暴发流行以来，该亚型病毒在人群中一直传播。我们在血清学抗原分析的基础上，采用ＲＴ－ＰＣＲ测序方法，对１９９４年广东地区的流行毒株Ａ／Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ／２８／９４ＨＡ１基因序列进行分析，了解其核苷酸的变异程度。材料与方法１．流感毒株：Ａ／Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ／２８／９４，由广东省卫生防疫站分离，并鉴定为甲型流感病毒Ｈ３Ｎ２亚型。毒株接种于鸡胚尿囊腔增殖，收获鸡胚尿囊液后，超速离心，并用３０％～６０％的蔗糖梯度离心纯化。２．提取病毒ＲＮＡ：ＲＮＡｚｏｌＴＭ…     

当前流行的乙型流感病毒血凝素蛋白抗原性及其基因特性

通过抗原性分析弄清了近年来连续２次乙型流感病毒在我国人群中造成流感流行，是由于乙型流感病毒株发生抗原性变异所造成。通过毒粒基因分析发现，我国人群中流行的Ｂ／Ｐａｎａｍａ／４５／９０类毒株，其ＨＡ１区氨基酸序列比国际代表性毒株Ｂ／Ｐａｎａｍａ／４５／９０病毒在１６５位点上多一个氨基酸，乙型流感病毒流行株可能具有地区性差异。     

H1N2新亚型流感病毒神经氨酸酶基因来源的进一步研究

对流感病毒Ｈ１Ｎ２亚型重组株Ａ／哈防／１／８８、Ａ／哈防／１２／９２以及Ｈ３Ｎ２亚型病毒株Ａ／雅防／２／８７、Ａ／京防／５７／８９８和Ａ／粤防／１／９２神经氨酸酶（ＮＡ）基因核苷酸全序列的测定，进一步弄清了Ａ／哈防／１／８８病毒株的ＮＡ基因确来自当时人群中流行的Ｈ３Ｎ２亚型病毒株，很可能是来自Ａ／雅防／２／８７类病毒株；而Ａ／哈防／１２／９２病毒株的ＮＡ基因可能是与Ａ／哈防／１／８８病毒株的ＮＡ基     

猪型(H1N1)流感病毒血凝素和神经氨酸酶基因来源的研究

目的 研究2002年我国内地从猪群中分离的猪型(H1N1)毒株HA和NA基因来源。及其使猪致病的原因。方法 用PCR扩增目的基因，用P^GEM-T Easy Vector，4℃过夜连接，重组质粒转入DH-10B细菌，筛选阳性菌落，酶切鉴定，送六合通公司自动测序，并作进化树分析。结果 3株猪型(H1N1)病毒的HA和NA基因属猪型(H1N1)流感病毒，而不同于其他禽或人的H1N1亚型流感病毒。2002年猪型毒株由1991年猪型毒株演变而来。近来我国内地猪群中猪型毒株活动增强，其对猪能致病是由于病毒粒HA和NA蛋白抗原性发生变异所造成。结论 3株猪型病毒的HA和NA基因来源于猪型(H1N1)毒株。近来猪型毒株对猪具有致病性和活动增强是由于其HA和NA蛋白分子上氨基酸序列发生替换所造成。     

当前我国流行的乙型流感病毒血凝素蛋白抗原性及基…

通过病毒血凝素蛋白抗原性分析，弄清楚了近年来连续几年在我国人嫩中造成乙型流感病毒流行和局部暴发由于乙型流感病毒发生抗原性变异和在我国人群中至少有两第抗原性明显不同的乙型流感病毒同时并存所造成。同时还发现乙型流感病毒的流行具有地区性差异。通过对乙型流感病毒血凝素重键区核甘酸和氨基酸序列的分析发现，近年来在我国分离的两系乙型流病毒毒株之间有高达３０－４２个氨基酸的差异，Ｂ／Ｙａｍａｇａｔａ／１６／８８     

1995-2007年深圳市H1N1流感病毒血凝素基因的序列分析

目的 研究1995-2007年深圳市流行的H1N1流感病毒血凝素(HA)的基因特性.方法 选取在该期间分离培养到的64株H1N1流感病毒,对其进行HA片段核苷酸序列测定并推导出其氨基酸序列,用Simmonic软件和Mega软件对其进行分析.结果 深圳市H1N1流感毒株在进化树上可以划分为A、B、C三个分枝.部分2005-2006年毒株与2001年毒株在同一分枝上.通过同源性分析发现部分WHO所推荐的疫苗株在时间上滞后于深圳株.深圳H1N1株的4个抗原决定簇及受体结合位点均发生了氨基酸的替换.除1995年外其余年份的毒株均在137位上发生了氨基酸的缺失.结论 1995-2007年深圳市H1N1毒株氨基酸的变异主要集中在抗原决定簇及受体结合部位.并且抗原决定簇的变异活跃区域随时间的推移发生了转移.     

当前流行的乙型流感病毒血凝素蛋白的抗原性及其基因特性

通过抗原性分析弄清了近年来连续２次乙型流感病毒在我国人群中造成流感流行，是由于乙型流感病毒株发生抗原性变异所造成。通过毒粒基因分析发现，我国人群中流行的Ｂ／Ｐａｎａｍａ／４５／９０类毒株，其ＨＡＩ区氨基酸序列比国际代表性毒株Ｂ／Ｐａｎａｍａ／４５／９０病毒在１６５位点上多一个氨基酸（天冬酰胺），乙型流感病毒流行株可能具有地区性差异。     

甲3(H3N2)亚型流感病毒相变异分子生物学基础的研究

目的弄清甲３（Ｈ３Ｎ２）亚型流感病毒相变异的分子生物学基础。方法病毒粒ＲＮＡ经逆转录合成ｃＤＮＡ,经聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增,产物纯化,采用双脱氧链末端终止法进行核苷酸序列测定。结果３５株甲３（Ｈ３Ｎ２）亚型流感病毒的ＨＡ１区基因长度均为９８４个核苷酸,它们间无发生任何核苷酸丢失或插入并发现ＨＡ１蛋白分子上氨基酸序列多变点主要在ＨＡ蛋白的顶部,尤其抗原决定簇Ｂ区和受体结合部位（ＲＢＳ）,这进一步证实了,ＨＡ蛋白分子上氨基酸替换主要是人群免疫压力所造成。同时还发现了半胱氨酸和脯氨酸具有高保守性及糖基化位点主要集中在ＨＡ１区的Ｎ和Ｃ端,尤其Ｎ端。糖基化位点如此分布在病毒基因进化和流行病学上意义至今不清楚。结论Ｈ３Ｎ２亚型病毒“Ｏ”相毒株的出现与其蛋白分子上第２２６位氨基酸发生替换密切相关并推测“Ｏ”相毒株ＨＡ蛋白三维结构与“Ｄ”相的不同。     

一株鹅H5N1亚型流感病毒基因特性的分析

目的 弄清了Ａ／鹅／广东／２／９６（Ｈ５Ｎ１）毒株对鹅致病的分子生物学基础 ，研究香港区人群中发生的禽（Ｈ５Ｎ１）流感的病因，方法 病毒ＲＮＡ经逆转录合成ｃＤＮＡ经聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增，产物纯化，采用双脱链末端终止法测定核苷酸序列，结果 Ａ／鹅／广东／２／９６（Ｈ５Ｎ１）与Ａ／ＨＫ／１５６／９７（Ｈ５Ｎ１）毒株ＲＮＡ４核苷酸序列有２２个位点不同（同源性为９８．８％）无任何掉失或插入。它与人和     

辽宁省甲3亚型流感病毒HAl基因特性分析

目的 了解2001-2006年间辽宁省甲3亚型流感病毒HAl基因变异特征.方法 采用辽宁省流感监测的咽拭分离株,对其中的7株甲3病毒核酸提取,经逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),扩增产物测序,推导出其氨基酸序列,并用DNA MAN软件包中的Alignment做了差异和同源性比较,用Mega软件包中的Neighbor Joining方法 ,通过与NCBI数据库中2000-2006年28株H3N2流感病毒同源比对后,制作种系进化树,进行基因进化特征分析.结果 序列分析发现,甲3亚型流感病毒与WHO当年的疫苗株M/California/7/2004比较,在其HA1核酸序列上有12处碱基不同,4个氨基酸位点发生了替换.基因及氨基酸序列同源性下降.与WHO北半球疫苗株A/Wisconsirn/67/2005序列更接近,但仍有4处碱基不同.结论 甲3亚型流感病毒基因序列发生了变异,与甲3亚型疫苗株A/California/7/2004同源性有下降趋势,提示其抗原可能发生部分漂移或更换,与南方浙江2005年株、WHO北半球2006-2007疫苗株A/Wiseonsin/6712005序列接近,提示南方春夏季流感流行株极有可能在北方秋冬季流行,对流感流行病学监测,疫苗株使用指导都具有重要意义.     

2001年中国新分离维多利亚系乙型流感病毒的抗原性及基因特性分析

目的：研究2001年中国新分离维多利亚（Victoria)系乙型流感病毒的抗原性及基因特性。方法：鸡胚传代流感病毒，从尿囊液中提取流感病毒的RNA，进行逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR），扩增产物用纯化试剂盒纯化后测序，然后用MegAlign软件进行基因种系发生树分析。结果：B／Sichuan/63/2001和B／Zhejiang/2/2001毒株的抗原性与B／Shandong/7/97毒株间存在有差异，编码血凝素重链区基因已发生了突变并导致了HA1蛋白抗原性表位两个位点（197和199）氨基酸不同于B／Shandong/7/97毒株，基因种系发生树分析同样也证明了它们的HA1基因不同于B／Shandong/7/97病毒。然而，B／Sichuan/63/2001与B／Zhejiang/2/2001毒株间无论抗原性还是HA1基因特性均很相似。结论：2001年我国人群中流行的乙型流感病毒维多利亚毒株系的抗原性已发生进一步的漂移。     

2009-2011年广东省甲型H1N1流感病毒血凝素基因的进化特征

目的 了解2009-2011年广东甲型H1N1流感病毒血凝素基因的HA1进化特征。方法 选取广东甲型H1N1流感病毒83株,提取病毒RNA,经RT-PCR反应扩增HA1并测序,测定的序列用生物信息软件分析,与GenBank中相关序列比较,并对推导的编码氨基酸序列进行进化分析。结果 2009-2011年广东甲型H1N1流感病毒HA1基因的进化速率是5.2× 10-3,高于人季节性H1N1病毒;变异氨基酸多数位于HA蛋白表面,其中部分位于抗原决定簇;在两例死亡病例分离株HA1的第222位氨基酸发生D222G/D222N变异。结论 遗传进化分析表明,甲型H1N1流感病毒发生了一定程度的变异,造成2011年初在广东的再次流行。HA1的第222位氨基酸变异可能与疾病的严重程度有关。     

两株京科猪H1N1亚型流感病毒内部基因来源的研究

目的通过内部基因研究了解两株猪(H1N1)亚型流感病毒内部基因是否含有禽流感病毒基因节段及是否与猪群中H9N2亚型毒株发生了基因重配。方法病毒在鸡胚中传代,从收获的尿囊液中提取RNA,通过逆转录合成cDNA,cDNA用PCR扩增。PCR产物用纯化试剂盒纯化,接着进行核苷酸序列测定,然后用MegAlign(Version1.03)和Editseq(Version3.69)软件进行基因进化树分析。结果两株京科猪H1N1病毒内部基因除PB2基因节段有所不同外,其余5个基因节段均相同,但与猪H1N1流感病毒内部基因相近,然而,与古典型猪H1N1毒株有差异。结论两株京科猪H1N1病毒不是基因重配株,它们的内部基因均属猪H1N1流感病毒基因系。     

唐山市甲型H1N1流感病毒血凝素基因序列分析

目的 分析2010—2016年唐山市甲型H1N1流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)基因序列进化特征.方法 选取唐山市3家哨点医院流感样病例分离到的24株甲型H1N1病毒,通过RT-PCR和测序方法获得HA基因的全长序列,运用分子生物学软件和统计学软件对序列进行拼接、比对和分析.结果 同源进化分析显示,24株甲型H1N1流感病毒HA基因与疫苗株A/California/7/2009的核苷酸和氨基酸的同源性分别为97.0%~99.0%和97.0%~98.5%.进化分析显示,2010—2016年唐山地区流行的甲型H1N1流感病毒属于1、7、6三个基因分支,其中6分支毒株分为6C、6B、6B.1和6B.2亚支.氨基酸位点分析显示,不同毒株与疫苗株比较存在8~16处氨基酸位点改变,其中7个变异涉及3个抗原表位:H138Q/Y和S203T突变位于Ca区,N125S、K153E、S162N、K163T/Q突变位于Sa区,S185T突变位于Sb区同时也位于受体结合部位;2015—2016流行季6B.1分支毒株抗原位点S162N突变增加了新的潜在糖基化位点.结论 与疫苗株比较,随着时间推移唐山地区甲型H1N1流感病毒发生了抗原漂变,未来仍应关注6B分支流行株的变化.