重组腺病毒介导CD自杀基因联合野生型p53基因对直肠癌细胞的杀伤作用

目的 观察重组腺病毒介导胞嘧啶氨酶（ＣＤ）基因和人野生型ｐ５３基因共转染对直肠癌细胞的杀伤作用。方法 用携带ＣＤ／ｐ５３、ＣＤ、ｐ５３基因腺病毒感染直肠癌细胞ＳＷ８３７,计数瘤细胞集落数,采用四唑蓝比色（ＭＴＴ法）检测瘤细胞存活率。于６０只裸鼠移植瘤内注射重组腺病毒、磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ）,测定肿瘤生长抑制率。结果 用ＣＤ／ｐ５３、ＣＤ、ｐ５３重组腺病毒感染ＳＷ８３７细胞,加５－ＦＣ后细胞集落形成分别为：６、３８、６９。裸鼠移植肿瘤生长抑制率分别为７８．６％、５６．５％、２２．３％。ＣＤ／ｐ５３重组腺病毒感染组肿瘤细胞集落形成和存活率下降最显著（Ｐ〈０．０１）,对肿瘤的抑制作用明显。结论 ＣＤ自杀基因与野生型ｐ５３基因共转染对肿瘤细胞有更强的杀伤作用。     

重组人p53腺病毒治疗晚期胰腺癌患者的护理

对21例晚期胰腺癌患者使用重组人p53腺病毒治疗,给药方法为静脉给药和瘤内注射,11例联合化疗.结果 临床观察13例自觉精神状态好转,疼痛缓解,食欲增加.疗效评定PR 9例(42.9%).SD 8例(38.1%),PD 4例(19.0%),未出现严重不良反应.提示晚期胰腺癌患者使用重组人p53腺病毒治疗安全有效,护理上需加强心理护理,做好治疗前的准备工作,严格按要求配备和输注药品,加强配置过程中工作人员的自身防护,输注过程中加强巡视,密切观察病情变化,对药物不良反应给予针对性处理.     

重组人p53腺病毒治疗晚期胰腺癌患者的护理

对21例晚期胰腺癌患者使用重组人p53腺病毒治疗，给药方法为静脉给药和瘤内注射．11例联合化疗。结果临床观察13例自觉精神状态好转，疼痛缓解，食欲增加。疗效评定PR9例（42．9％），SD8例（38．1%）．PD4例（19．0％）．未出现严重不良反应。提示晚期胰腺癌患者使用重组人p53腺病毒治疗安全有效．护理上需加强心理护理．做好治疗前的准备工作，严格按要求配备和输注药品，加强配置过程中工作人员的自身防护．输注过程中加强巡视，密切观察病情变化。对药物不良反应给予针对性处理。     

重组人p53腺病毒联合温热顺铂不同用药方式下对人结肠癌细胞株的抑制作用

目的研究rAd-p53与热化疗以不同序贯方式联合应用对不同p53基因状态的结肠癌细胞的抑制作用。方法通过体外细胞培养,采用PT-PCR和Western blot检测验证细胞内不同p53基因状态,利用MTT法检测rAd-p53与42℃热浴顺铂的IC30,以及用药物联合指数计算法观察rAd-p53与42℃热浴顺铂不同用药模式下对不同p53基因状态的结肠癌细胞的抑制作用。结果在p53基因野生型的HCT116+/+细胞中42℃热浴顺铂与rAd-p53同时给药表现为协同作用,42℃热浴顺铂序贯rAd-p53给药模式表现为近似叠加作用,rAd-p53序贯42℃热浴顺铂用药模式表现为拮抗作用。在p53基因敲除的HCT116-/-细胞中,42℃热浴顺铂与rAd-p53同时给药表现为强协同作用,42℃热浴顺铂序贯rAd-p53给药模式表现为协同作用,rAd-p53序贯42℃热浴顺铂用药模式表现为拮抗作用。结论在结肠癌细胞中42℃热浴顺铂与rAd-p53在同时给药的模式下疗效最好,然而不同结肠癌细胞中p53基因状况决定其产生不同作用效果,缺失型p53基因细胞协同效果优于野生型p53基因细胞。     

腺病毒介导p16和p53基因联合转导抑制人膀胱癌EJ细胞的增殖活性

目的：探讨p16和p53联合转导对膀胱癌EJ细胞增殖活性的影响。方法：用复制缺陷型腺病毒(Ad)将p16和p53表达质粒PUCl6和PC53—SD3导人细胞，通过细胞形态观察、MTT法、流式细胞术、免疫组织化学、克隆形成及裸鼠肿瘤模型，分析其对EJ细胞生长的影响及机制。结果：Ad-p16和Ad-p53单独应用可抑制EJ细胞体外增殖活性，Ad-p53诱导部分EJ细胞凋亡，Ad-p16感染3d后发生Gl期阻滞，而细胞凋亡不明显；Ad-p16和Ad-p53联合转导可使EJ细胞生长显著抑制、克隆形成率降低、大量EJ细胞凋亡；裸鼠体内肿瘤发生时间、4周后肿瘤体积与单独应用相比有显著性差异。结论：Ad-p16和Ad-p53联合应用可显著抑制膀胱癌EJ细胞的体内外生长。     

野生型p53基因对不同内源性p53状态的肝癌细胞株生长的影响

目的探讨外源性野生型p53(wild-type p53,WT-p53)基因对具有不同内源性p53功能状态肝癌细胞生长的影响.方法通过表达WT-p53的重组腺病毒载体(Ad-p53),将p53基因导入具有不同内源性p53功能状态的肝癌细胞株Bel-7402、QGY-7701和PLC/PRF/5中,用MTT法检测Ad-p53对各细胞株生长的影响,流式细胞仪分析各组细胞中DNA含量及凋亡的比例.结果当取40、200、800 MOI值的表达p53的腺病毒分别转染PLC/PRF/5、Bel-7402和QGY-7701细胞时,72 h后行MTT检测,OD值分别为在 PLC/PRF/5细胞,空载体(Ad-LacZ)组0.98±0.16,Ad-p53组0.02±0.00(P＜0.01);在Bel-7402细胞Ad-LacZ组1.04±0.23,Ad-p53组0.10±0.02(P＜0.01);而在QGY-7701细胞Ad-LacZ组1.88±0.24,Ad-p53组1.86±0.19(P>0.05).细胞周期分析显示,在PLC/PRF/5,表现为既诱导细胞凋亡,又诱导细胞周期阻滞.在Bel-7402,表现为诱导细胞周期阻滞.结论外源性p53对肝癌细胞生长的抑制可能与内源性p53功能状态无关.     

重组人p53腺病毒联合经肝动脉化疗栓塞治疗不同p53表达的中晚期肝细胞癌

目的观察重组人p53腺病毒（rAd-p53）基因联合经导管动脉栓塞化疗术（TACE）治疗不同p53表达的中晚期肝细胞癌的临床疗效。方法 rAd-p53注射液联合TACE治疗中晚期肝细胞癌患者共60例（治疗组）,其中p53表达阳性、阴性各30例;同期接受常规TACE治疗的中晚期肝细胞癌患者60例（对照组）,p53表达阳性、阴性各30例,并分别比较p53表达阳性和阴性的治疗组与对照组的疗效;同时检测各组患者治疗前后血管内皮生长因子（VEGF）水平,并进行比较。结果 p53表达阳性患者中,治疗组有效率为73.33%,明显高于对照组的46.67%（P〈0.05）;治疗前后VEGF升高的幅度比较,治疗组小于对照组（P〈0.05）。p53表达阴性患者中,治疗组及对照组有效率分别为66.67%和60.00%,差异无统计学意义（P〉0.05）;治疗组与对照组治疗前后VEGF升高的幅度差异较亦无统计学意义（P〉0.05）。结论 rAd-p53注射液联合TACE治疗中晚期肝细胞癌,能够提高p53表达阳性的患者的疗效,并能有效抑制TACE术后VEGF升高的幅度。     

重组人p53腺病毒治疗癌性胸水的疗效观察

目的探讨重组人p53腺病毒对肺癌癌性胸水患者胸膜腔内给药治疗的疗效。方法治疗组28例,经胸膜腔内留置中心静脉导管,每周1次,滴入重组人p53腺病毒注射液1×10^12VP,4周后评估体力状况变化,与对照组比较。结果治疗组治疗后61％（17／28）的患者体力状况明显改善,与对照组23％（7／30）比较差异有统计学意义（P〈0．01）。结论肺癌癌性胸水患者胸膜腔内重组人p53腺病毒治疗安全、有效。     

重组腺病毒介导的野生型p53基因对结直肠癌细胞的放射治疗增敏作用

目的探讨野生型p53基因通过重组腺病毒转染至结直肠癌细胞后对放射治疗（放疗）的增敏作用。方法将含野生型p53基因的重组腺病毒转染SW480结直肠癌细胞后,采用4、6Gy对其进行放疗。并通过噻唑蓝比色法检测生长抑制率、末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记检测细胞凋亡水平、免疫组化检测增殖细胞核抗原的表达。结果经4、6Gy放疗后,转染野生型p53基因的SW480细胞生长受到了明显的抑制（P〈0．05）,凋亡率增加,增殖细胞核抗原比率下降。结论野生型p53基因可增加p53突变的结直肠癌细胞对放射治疗的敏感性。     

p53凋亡刺激蛋白2对饥饿诱导的大肠癌HCT116 p53-/-细胞自噬和凋亡的影响

目的 探讨p53凋亡刺激蛋白2(apoptosis stimulating protein 2 0f p53,ASPP2)对饥饿诱导的大肠癌HCT116 p53-/-(p53缺失)细胞自噬和凋亡的影响.方法 实验分3组:(1)绿色荧光蛋白腺病毒(green fluorescent protein adenovirus,rAd-GFP)感染组(对照组);(2)自噬抑制剂LY294002处理组;(3) ASPP 2腺病毒(ASPP2 adenovirus,rAd-ASPP2)感染组.无血清培养基分别培养0、24、48 h诱导细胞自噬和凋亡.利用calcein/PI吸收试验观察各组细胞凋亡水平.细胞转染红色荧光蛋白自噬质粒Lc3(cerise fluorescent protein autophagy plasmid Lc3,CFP-Lc3),在荧光显微镜下观察各组细胞自噬水平.结果 rAd-GFP感染组饥饿24h细胞的自噬水平升高显著(0 h:1.04±0.24;24 h:12.17 ±0.86,P＜0.05),而凋亡水平改变差异无统计学意义(0 h:2.01％±0.06％;24 h:3.23％±0.34％,P＞0.05);饥饿时间延长至48 h,自噬水平(0 h:1.04±0.24;48 h:21.09±3.32)和凋亡水平(0h:2.01％±0.06％;48 h:30.20％±3.18％)升高,差异均具有统计学意义(均P＜0.05).使用LY294002抑制细胞自噬,饥饿24 h细胞凋亡显著增多(rAd-GFP组:3.23％±0.34％;LY294002组:15.68％±1.24％,P＜0.01),而饥饿48 h凋亡显著减少(rAd-GFP组:30.20％±3.18％;LY294002组:25.44％±3.01％,P ＜0.05).rAd-ASPP2感染组饥饿24 h自噬显著降低(rAd-GFP组:12.17±0.86;ASPP2组:1.45±0.45,P＜0.01),而凋亡显著升高(rAd-GFP组:3.23％±0.34％;ASPP2组:10.45％ ±0.81％,P＜0.05);饥饿48 h自噬(rAd-GFP组:21.09 ±3.32;ASPP2组:29.93±3.48)和凋亡(rAd-GFP组:30.20％±3.18％;ASPP2组:36.72％±2.74％)水平均显著升高(均P＜0.05).结论 ASPP2通过对自噬的双向调节促进饥饿诱导的大肠癌HCT116 p53-/-细胞凋亡.     

大肠癌细胞p53基因突变与细胞凋亡及细胞倍性的关系

目的　了解ｐ５３ 基因突变、细胞倍性、细胞凋亡三者的关系,探讨突变型ｐ５３ 基因在肿瘤发生中的作用机制。方法　采用 Ｐ Ｃ Ｒ Ｓ Ｓ Ｃ Ｐ（ 单链构象多态性） 检测ｐ５３ 基因突变,用流式细胞仪 Ｆａｃｓｃａｎ 检测大肠癌细胞染色体倍性、凋亡率及其在细胞周期各相中的分布情况。结果　大肠癌标本ｐ５３基因突变率为５０ ％ ;其中突变组肿瘤细胞凋亡率（２２ ．１１ ％ ） 明显低于未突变组细胞凋亡率（４０ ．５７ ％ ） ,（ Ｐ＜ ０ ．０５） ;突变组异倍体细胞百分率（ 占７６ ．９ ％ ） 明显高于未突变组（ 占４６ ．２ ％ ） ,（ Ｐ＜ ０ ．０５） ;异倍体肿瘤细胞凋亡率为３４ ．０ ％ ,二倍体肿瘤细胞凋亡率为４０ ．７ ％ ,二者差异无显著性（ Ｐ＞ ０ ．０５） 。结论　ｐ５３ 基因突变使肿瘤细胞凋亡率下降,进而促进肿瘤发生、发展。ｐ５３ 基因突变多见于异倍体细胞,细胞凋亡率与细胞倍性无关。     

Presence of serum p53 antibodies is associated with decreased in vitro chemosensitivity in patients with esophageal cancer

Resistance to chemotherapy remains a serious problem inhibiting the successful treatment of advanced esophageal cancer. A number of studies have revealed that p53 genetic alteration and protein overexpression can predict chemosensitivity. Furthermore, p53 protein overexpression in cancer tissues has been found to induce serum p53 antibodies (p53-Abs). This study was conducted to examine whether analysis of serum p53 Abs could predict the chemosensitivity of esophageal cancer. Serum analysis of p53 antibodies was performed by enzyme-linked immunosorbent assay in 19 patients with esophageal squamous cell carcinoma preoperatively, then surgically resected specimens were stained immunohistochemically for p53 protein expression. Tumor tissues were also analyzed for chemosensitivity by the histoculture drug response assay (HDRA) using cis-dichlorodiammineplatinum(II) (CDDP), 5-fluorouracil (5-FU), and adriamycin (ADM). Serum p53-Abs were present in 47% (9/19) of the patients and immunohistochemical analysis revealed overexpression of p53 protein in 42% (8/19) of the tumors. The presence of serum p53 antibodies was significantly correlated with p53 immunoreactivity (P = 0.005). The inhibition index of patients positive for p53-Abs was significantly lower than that of patients negative for p53-Abs (P < 0.001). This tendency was also observed in the inhibition index to 5-FU. The presence of serum p53-Abs was associated with decreased in vitro chemosensitivity to CDDP and 5-FU. Thus, the detection of serum p53-Abs is suggested to be useful for predicting chemosensitivity in patients with esophageal cancer. Received: August 2, 2000 / Accepted: March 6, 2001     

Preclinical study of adenoviral p53 gene therapy for esophageal cancer

An alteration of the p53 gene function is a major factor in the development of esophageal cancer. Recently, p53 gene therapy has been applied for clinical studies in lung cancer and head and neck cancer. However, no preclinical studies have yet demonstrated an anticancer effect of adenoviral-mediated wild-type p53 gene therapy on esophageal cancer. We herein evaluated the effect of p53 adenoviral gene therapy on human esophageal squamous cell carcinoma to test the ability of clinical application. A normal esophageal epithelial cell line (EN53F) and two human esophageal cancer cell lines (ECGI-10 and T.Tn) with a p53 alteration were used. The transduction efficiency, p53 protein expression, p21 protein expression, the induction of apoptosis, and growth suppression were assessed by using the recombinant adenoviral vector Ad5CMV-p53. The transduction efficiency was 60%–80% at 100 plaque-forming units (PFU)/cell and 80%–100% at 300 PFU/cell. A significant growth suppression following an Ad5CMV-p53 infection was observed in both cancer cell lines. A Western blot analysis confirmed the presence of both exogenous p53 protein expression and p21 protein induction. Apoptotic cell death was observed with TUNEL staining. T.Tn xenografts in nude mice transduced with Ad5CMV-p53 demonstrated significant growth suppression. These data suggest that Ad5CMV-p53 may thus be a potentially effective therapeutic agent for locally advanced esophageal cancer. Received: July 19, 2000 / Accepted: January 9, 2001     

p53重组腺病毒联合增殖细胞核抗原反义寡核苷酸治疗膀胱癌的研究

目的：探讨重组腺病毒p53(Ad-p53)与增殖细胞核抗原反义寡核苷酸（PCNA-ASO）联合应用对膀胱癌的抑瘤效应。方法：用腺病毒将p53{感染强度（MOI）100}导入细胞，PCNA-ASO(1.6μmol/L)在脂质体（Lipofectin）介导下转染细胞，通过噻唑蓝比色法（MTT）、流式细胞术、克隆形成、建立移植瘤模型，探讨其体内外抗瘤活性。结果：Ad-p53与PCNA-ASO联合应用明显抑膀胱癌胞EJ(89.3%)和BIU-87(78.6%)生长，细胞克隆形成能力分别下降74.8％和67.5％，S期比率（EJ细胞11.4％，BIU-87细胞14.6％）明显降低，细胞生长受阻于G1期(EJ细胞62.2％，BIU-87细胞56.8％)；联合应用7d后，肿瘤体积较初始分别下降47.6％和36.4％。结论：Ad-p53联合PCNA-ASO可抑制膀胱癌细胞体内外生长，产生协同效应。     

结直肠癌患者血清p53抗体与肿瘤p53蛋白表达关系的研究

目的　探讨结直肠癌患者血清p5 3抗体与肿瘤组织p5 3蛋白表达的关系 ,评价其能否间接反映p5 3基因的突变。方法　对 13 2例手术治疗的结直肠腺癌患者和 3 6例非肿瘤患者进行血清p5 3抗体定性检测。结直肠癌标本行p5 3蛋白免疫组化染色。结果　结直肠癌组中 5 3例 (4 0 .2 % )血清p5 3抗体阳性 ,而对照组仅 1例 (2 .9% )阳性 (P <0 .0 1)。在 75例p5 3蛋白染色阳性者中 5 1例 (68.0 % )血清p5 3抗体阳性 ;而 5 7例p5 3蛋白染色阴性的患者中 ,仅 2例 (3 .5 % )血清p5 3抗体阳性。结直肠癌血清p5 3抗体阳性率与肿瘤组织p5 3蛋白免疫组化染色阳性反应有明显关系 (P<0 .0 1)。结论　血清p5 3抗体能反映结直肠癌p5 3蛋白的阳性表达 ;检测血清p5 3抗体是间接判定P5 3基因突变的一种可靠而简便的方法。     

散发性结直肠癌APC、K-ras、p53、MMR基因突变检测

目的探讨结直肠癌中APC、K-ras、p53、MMR基因突变模式。方法应用酚/氯仿法提取48例结直肠癌组织及其相应正常黏膜组织的DNA,用聚合酶链反应（PCR）、单链构象多态性分析（SSCP）和DNA测序等方法检测APC基因第l5外显子突变密集区（mutation cluster region,MCR）区段、K-ras、p53和MMR基因的突变。结果hMLH1未发生突变,APC、K-ras、p53基因和hMSH2的突变率分别为37.5%（18/48）、43.8%（21/48）、35.4%（17/48）和4.2%（2/48）。APC、K-ras、p53或hMSH2基因突变率高达91.7%（44/48）。APC、K-ras,p53基因均发生突变的发生率为4.2%（2/48）。结论结直肠癌的发生、发展并不完全遵循由正常结直肠黏膜上皮细胞向腺瘤和侵袭性癌转化的过程,可能存在其他结直肠癌发病机制。     

米非司酮对子宫腺肌病灶组织细胞作用的实验研究

目的　观察米非司酮对子宫腺肌病灶组织细胞的作用。　方法　采用噻唑兰法观察米非司酮对 11例子宫腺肌病患者腺肌病灶组织原代培养细胞体外生长状态的影响 ,实验分为 1.2 5、2 .5、5 0mg/L 3个药物浓度组 ,培养 5 2h ,测定OD值 ,并与空白对照组对比。　结果　 1.2 5、2 .5、5 0mg/L组及对照组的OD值分别为 (0 .2 19± 0 .0 4 4 )、(0 .185± 0 .0 38)、(0 .15 2± 0 .0 33)、(0 .2 6 2± 0 .0 6 8) ,5 0与 1.2 5mg/L组有显著差异 (P <0 .0 1) ,5 0、2 .5mg/L组与对照组有显著差异 (P <0 .0 1)。细胞生长抑制率 2 .5mg/L组 (IR =2 9.4 %)是 1.2 5mg/L组 (IR =16 .4 %)的 1.79倍 ,5 0mg/L组 (IR =4 2 .0 %)是 2 .5mg/L组的 1.4 3倍。　 结论　米非司酮能够抑制子宫腺肌病腺肌组织细胞的生长 ,其抑制能力与药物浓度呈正相关。