缺氧性肺动脉高压大鼠肺动脉一氧化氮合酶的实验研究

目的;研究大鼠肺动脉中一氧化氮合酶（ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ,ＮＯＳ）的量及分布变化与慢性缺氧性肺动脉高压（ｈｙｐｏｘｉｃ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ,ＨＰＨ）发生的关系。方法;采用ｅＮＯＳ多克隆抗体,对慢性ＨＰＨ大鼠的肺组织进行免疫组织化学分析,观察缺氧组及对照组在鼠各级肺动脉中ｅＮＯＳ含量及定位;同时应用分光光度计测定缺氧组及对照组大鼠血浆中ＮＯ的间接浓度。     

低氧对大鼠不同节段肺动脉一氧化氮合酶mRNA表达的影响

目的探讨正常状态下肺动脉结构型一氧化氮合酶（ｃＮＯＳ）基因表达的定位及慢性低氧对不同节段肺动脉ｃＮＯＳ基因表达的影响。方法应用原位杂交技术,采用ｃＮＯＳｃＲＮＡ探针,观察低氧１周组、低氧２周组及对照组大鼠肺动脉ｃＮＯＳｍＲＮＡ的表达与分布。结果对照组大鼠与细支气管伴行的肺动脉内皮细胞ｃＮＯＳｍＲＮＡ的表达明显高于与呼吸细支气管及终末细支气管伴行的肺动脉（ｑ＝８１３,５４９;Ｐ均＜００１）。低氧１周及２周组大鼠与终末细支气管及细支气管伴行之肺动脉内皮细胞ｃＮＯＳｍＲＮＡ表达较对照组大鼠均明显降低。对照组大鼠各级肺动脉平滑肌细胞ｃＮＯＳｍＲＮＡ表达差异无显著意义（Ｆ＝２２６,Ｐ＞００５）;低氧１周及２周组大鼠与呼吸细支气管及终末细支气管伴行之肺动脉平滑肌细胞ｃＮＯＳｍＲＮＡ表达较对照组大鼠均明显降低。结论正常大鼠近端肺动脉内皮细胞ｃＮＯＳｍＲＮＡ表达强度最高;慢性缺氧主要抑制近端肺动脉内皮细胞及远端肺动脉平滑肌细胞ｃＮＯＳｍＲＮＡ的表达。     

缺氧性肺动脉高压大鼠肺组织NOS基因表达的变化

为探讨一氧化氮（ＮＯ）在缺氧性肺动脉高压（ＨＰＨ）发病中的作用，观察了不同时间（８小时～２８天）缺氧后大鼠肺动脉平均压（（ｍＰＡＰ）、肺组织ＮＯ合成酶（ＮＯＳ）基因ｍＲＮＡ表达及ｃＧＭＰ含量（血浆、肺组织）的变化及其相互关系。结果显示：缺氧８小时～２８天，ｍＰＡＰ逐渐升高，而ｃＧＭＰ含量随缺氧时间延长而呈下降趋势，ｍＰＡＰ与ｃＧＭＰ含量变化呈明显负相关；Ｎｏｒｔｈｅｒｎ和斑点印迹杂交表明ＮＯＳ基因ｍＲＮＡ转录水平随缺氧时间的延长而呈下降趋势，而内参照β－ａｃｔｉｎ基因ｍＲＮＡ表达无明显变化。提示缺氧抑制了ＮＯＳ基因表达，ＮＯ释放减少，可能是介导ＨＰＨ发生、发展的重要机理。     

慢性缺氧高二氧化碳大鼠支气管中结构型一氧化氮合酶的分布

目的：研究结构型一氧化氮合酶（ｃＮＯＳ）在慢性缺氧高二氧化碳的大鼠支气管中的表达及分布。方法：用原位杂志技术，对慢性缺氧高二氧化碳的大鼠支气管中ｃＮＯＳ的表达进行定位研究。结果：慢性缺氧高二氧化碳大鼠的各级支气管平滑肌细胞呈ｃＮＯＳ阳性染反反应，上皮细胞呈ｃＮＯＳ弱阳性染色反应。结论：慢性缺氧高二氧化碳时，ｃＮＯＳ在支气管上皮细胞中的表达被抑制。     

长程吸入一氧化氮对大鼠缺氧性肺动脉高压的影响

目的探讨长程吸入一氧化氮（ＮＯ）对慢性缺氧性肺动脉高压的阻抑效应及其机制。方法将３２只雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠分为（１）正常对照组;（２）缺氧组;每天缺氧１２小时,共３周;（３）吸入ＮＯ组：缺氧同时每天吸入２０ｐｐｍＮＯ１２小时,共３周。观察肺动脉压力、右心室肥厚、血浆内皮素－１（ＥＴ－１）和环磷酸鸟苷（ｃＧＭＰ）变化以及肺组织病理学改变。结果（１）缺氧组大鼠肺动脉压力明显升高（４．３±０．９ｋＰａ）,右心室肥厚显著（Ｐ均＜０．００１）,吸入ＮＯ组肺动脉压力降低（３．０±０．４ｋＰａ）,右心室肥厚减轻;（２）缺氧组腺泡内肌型肺动脉增多,无肌肺动脉明显减少,与对照组相比,差异显著（Ｐ＜０．０１）,吸入ＮＯ组明显改善三型血管比例失调。（３）缺氧组血浆ＥＴ－１含量明显升高,（１９７±１５ｐｇ／ｍｌ）,ｃＧＭＰ水平显著降低。吸入ＮＯ组ＥＴ－１含量降低（１６３±１４ｐｇ／ｍｌ）;ｃＧＭＰ含量升高。结论长程吸入２０ｐｐｍＮＯ能阻抑慢性缺氧性肺动脉压力升高,且无明显毒副作用。     

间歇性气囊挤压大鼠腿部对挤压部位和远端骨骼肌一氧化氮？…

目的：为了进一步了解间歇性气囊挤压法（Ｉｎｔｅｒｎｉｔｔｅｎｔ ｐｎｅｕｍａｔｉｃ ｃｏｍｐｒｅｓｓｉｏｎ,ＩＰＣ）挤压大鼠腿部与一氧化氮（ＮＯ）的关系。方法：检测中大鼠骨髓肌中３种一氧化氮合酶（ＮＯＳ）同工酶,神经型ＮＯＳ（ｎＮＯＳ）;诱导型ＮＯＳ（ｉＮＯＳ）和内皮细胞型ＮＯＳ（ｅＮＯＳ）ｍＲＮＡ在ＩＰＣ作用后的表达变化。２５只ＳＤ大鼠被随机分为３个模拟组和４个ＩＰＣ实验组。每只鼠取右侧胫前肌（     

大鼠阴茎组织中NOS表达及增龄的影响

目的：探讨大鼠阴茎组织中一氧化氮合成酶（Ｎｉｔｒｉｃ Ｏｘｉｄｅ Ｓｙｎｔｈａｓｅ,ＮＯＳ）分布及增龄对其的影响。方法：采用ＮＡＤＰＨｄ组化对不同月龄大鼠（２,８,１６,２４月）阴茎组织进行染色。结果：ＮＯＳ主要分布于阴茎组织中平滑肌细胞,内皮细胞、神经纤维含量较少;随龄增加,阴茎组织中ＮＯＳ逐渐减少,各月龄组间差别显著。结论：大鼠阴茎组织中ＮＯＳ主要分布于平滑肌细胞,增龄使ＮＯＳ明显减少,表明ＮＯＳ减少可能与勃起障碍的年龄依赖性相关。     

一氧化氮对慢性缺氧大鼠肺动脉内皮素基因表达的影响

目的探讨一氧化氮对慢性缺氧大鼠肺动脉内皮细胞及平滑肌细胞内皮素－１（ＥＴ－１）ｍＲＮＡ表达的影响，全面了解缺氧性肺动脉高压的发病机制。方法对经Ｌ－精氨酸（Ｌ－Ａｒｇ）及Ｎω－硝基－Ｌ－精氨酸甲酯（Ｌ－ＮＡＭＥ）处理的慢性缺氧大鼠（４０只）肺组织，以ＥＴ－１ｃＲＮＡ探针进行原位杂交。结果缺氧１周及缺氧２周大鼠大部分肺动脉（７５％±３％及７１％±６％）其１％～５０％的内皮细胞显示ＥＴ－１ｍＲＮＡ杂交阳性信号。Ｌ－Ａｒｇ使大鼠肺动脉内皮细胞ＥＴ－１ｍＲＮＡ表达明显抑制，而Ｌ－ＮＡＭＥ使其表达明显增强。缺氧１周及缺氧２周大鼠大部分肺动脉（８５％±６％及９８％±２％）的平滑肌细胞无ＥＴ－１ｍＲＮＡ表达，但Ｌ－ＮＡＭＥ使其表达增强。结论一氧化氮对慢性缺氧大鼠肺动脉内皮细胞及平滑肌细胞ＥＴ－１－ｍＲＮＡ表达均有抑制作用。     

内源性一氧化碳与一氧化氮在高血压发病中的相互作用

目的：研究一氧化氮合酶（ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ, ＮＯＳ）／一氧化氮（ｎｉｃｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ, ＮＯ） 系统和血红素加氧酶（ｈｅｍｅ ｏｘｙｇｅｎａｓｅ,ＨＯ）／一氧化碳（ｃａｒｂｏｎ ｍｏｎｏｘｉｄｅ,ＣＯ）系统在高血压发生机制中的作用及其相互关系。方法：采用ＮＯＳ抑制剂诱导大鼠高血压模型,观察大鼠动脉血压,主动脉组织ＮＯＳ、ＨＯ 活性和ＣＯ 产生释放的变化。结果：大鼠在注射ＮＯＳ抑制剂———左旋硝基精氨酸（ＮＧｎｉｔｒｉｃＬａｒｇｉｎｉｎｅ, ＬＮＮＡ）后第４ 周血压明显增高,同时ＨＯ活性和ＨｂＣＯ形成分别增加２８ ．４％ 和３１ ．１ ％ （ 均为Ｐ＜ ０ ．０１）,血浆和主动脉平滑肌ｃＧＭＰ含量明显增加。同时注射ＨＯ 底物ＨＬＬ和ＬＮＮＡ时,４ 周内血压无明显改变,而ＨＯ活性、ＨｂＣＯ的形成、血浆和主动脉平滑肌ｃＧＭＰ含量比单纯ＬＮＮＡ组增加更明显。结果表明在ＮＯＳ抑制剂诱导的大鼠高血压形成过程中,内源性ＨＯ／ＣＯ 系统可呈代偿性上调状态;应用ＨＯ 底物可诱导ＨＯ活性和ＣＯ 的生成增加,对ＮＯＳ抑制剂所诱导的高血压有防止作用。结论：内源性ＣＯ和ＮＯ都参与血管张力的调节,两者在高血压发生发展     

缺氧性肺动脉高压大鼠肺内氧自由基代谢的研究

测定缺氧性肺动脉高压大鼠血浆及肺组织脂质过氧化物（ＬＰＯ）水平、肺组织超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）和过氧化氢酶（ｃａｔａｌａｓｅ）的含量，结果发现：缺氧大鼠血浆及肺组织ＬＰＯ水平上升、肺组织ＳＯＤ和ｃａｔａｌａｓｅ含量下降，抗氧化剂维生素Ｅ能抑制这种变化．显示缺氧大鼠肺脏存在着氧化－抗氧化的平衡失调，抗氧化剂可使之趋向平衡，氧自由基及其脂质过氧化反应在缺氧性肺动脉高压的发生中起一定作用。     

Alleviation of hypoxic pulmonary vascular structural remodeling by L-arginine

目的探讨L-精氨酸(L-Arg)对低氧性肺血管结构重建的干预作用及其可能机制.方法将18只Wistar大鼠配伍后随机分为对照组、低氧组和低氧+L-Arg组(共6个配伍组).以右心导管法测定肺动脉压力,并对大鼠肺组织标本进行显微结构观测和超微结构观察,同时以分光光度法测定血浆一氧化氮(NO)含量,并对肺组织以内皮素-1(ET-1) cRNA探针进行原位杂交,研究肺动脉内皮细胞ET-1 mRNA的表达.结果低氧组大鼠肺动脉平均压明显高于对照组(20.33±2.18?mm?Hg vs 15.38±1.05?mm?Hg, P<0.05).低氧后大鼠肺血管显微及超微结构发生明显改变,肺血管结构重建形成.同时低氧组大鼠血浆NO间接含量明显低于对照组 (P<0.05 ).低氧后肺动脉内皮细胞ET-1 mRNA表达明显增强.然而,低氧+L-Arg组大鼠PAMP较低氧组明显降低(16.73±1.35?mm?Hg vs 20.33±2.18?mm?Hg, P<0.05).L-Arg缓解了低氧性肺血管结构重建的形成.同时低氧+L-Arg组大鼠血浆NO间接含量明显高于低氧组(P<0.05).L-Arg使低氧大鼠肺动脉内皮细胞ET-1 mRNA表达明显受抑制.结论 L-Arg对低氧性肺血管结构重建以及低氧性肺动脉高压的形成有重要的调节作用,其机制可能与通过促进低氧大鼠体内NO生成,从而抑制肺动脉内皮细胞ET-1 mRNA表达有一定的关系.     

L-精氨酸调节大鼠低氧性肺血管结构重建与肺动脉平滑肌细胞凋亡

目的:探讨L-精氨酸(L-arginine,L-Arg)对低氧性肺血管结构重建大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡的影响及其机制.方法:将17只Wistar大鼠随机分为对照组(n=7)、低氧组(n=5)和低氧+L-Arg组(n=5).对大鼠肺血管进行显微形态学观测.通过末端转移酶介导的dUTP切口末端标记法(TUNEL)检测肺动脉平滑肌细胞凋亡,并以免疫组织化学方法研究肺动脉平滑肌细胞Fas表达.结果:低氧2周后出现大鼠肺血管结构重建.同时,肺中、小型动脉凋亡平滑肌细胞百分数均明显低于对照组(P均＜0.05),平滑肌细胞Fas表达明显降低.然而,L-Arg缓解了低氧性肺血管结构重建的形成.低氧+L-Arg组大鼠肺中、小型动脉凋亡平滑肌细胞百分数均明显高于低氧组(P均＜0.05).L-Arg使低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞Fas表达明显增强.结论:L-Arg通过使肺动脉平滑肌细胞Fas表达上调,促进肺动脉平滑肌细胞的凋亡,从而对低氧性肺血管结构重建有重要的调节作用.     

A study of endothelium-dependent proliferation of pulmonary smooth muscle cells in vitro

Summary The direct effect of hypoxia and the effect of hypoxic endothelial cells conditioned medium on cultured pulmonary arterial smooth muscle cells in vitro were studied with phase contrast microscopy,³H-thymidine labelled technique and flow cytometric measurements. The results showed that direct hypoxia inhibited proliferation of pulmonary arterial smooth muscle cells, retained pulmonary arterial smooth muscle cells in the Go/G₁ phase and decreased³H-thymidine incorporation into pulmonary arterial smooth muscle cells and that hypoxic endothelial cells conditioned medium stimulated proliferation of pulmonary arterial smooth muscle cells, promoted pulmonary arterial smooth muscle cells from G₀/G₁ phase to S phase and increased³H-thymidine incorporation into pulmonary arterial smooth muscle cells. It was reasonable to believe that hypoxia might enable pulmonary arterial endothelial cells to secrete some growth factors which could stimulate proliferation of pulmonary arterial smooth muscle cells, thereby playing an important role in structural remodeling of the pulmonary arteries and in the development of hypoxic pulmonary hypertension.     

L-精氨酸干预低氧性肺血管结构重构机制的研究

探讨Ｌ－精氨酸干预低氧性肺血管结构重构的机制。方法将１８只Ｗｉｓｔａｒ大鼠采用区组随机法分为对照组、低氧组和低氧＋Ｌ－Ａｒｇ组。以右心导管法测定肺动脉压力,并对大示本进行显微结构观测和超微结构观察,同时分光光度法间接测定血浆一氧化氮（ＮＯ）含量,并对肺组织以内皮素－１（ＥＴ－１）ｃＲＮＡ探针进行原位杂交,研究肺动脉内皮细胞ＥＴ－１ｍＲＮＡ的表达。结果低氧组大鼠肺动脉平均压（ｍＰＡＰ）为２．７１ＫＰ     

ET－1和NO对肺动脉平滑肌细胞DNA合成的作用及缺氧对其调制的研究

观察内皮素－１（ＥＴ－１）和一氧化氮（ＮＯ）在缺氧性肺血管结构重组中的作用，发现ＥＴ－１可促进肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）ＤＮＡ合成，其促进作用呈剂量依赖性；ＮＯ供应剂ＳＮＰ则起抑制作用，ＮＯ的抑制增殖作用主要由ｃＧＭＰ介导。在此基础上观察到缺氧可促进ＰＡＳＭＣ对ＥＴ－１的增殖反应，同时可抑制ＰＡＳＭＣ胞浆内可溶性鸟苷酸环化酶活性而降低ＰＡＳＭＣ对ＮＯ等舒血管药物的反应性。提示ＥＴ－１和ＮＯ及缺氧在缺氧性肺血管结构重组中具有重要的作用。     

一氧化碳对缺氧性肺血管结构重建大鼠肺动脉血小板源性生长因子表达的影响

目的　探讨一氧化碳对缺氧性肺血管结构重建大鼠肺动脉中血小板源性生长因子 (PDGF)表达的影响。方法　将大鼠随机分为 3组 :常氧组 (n =12 )、低氧组 (n =12 )和低氧 +血红素加氧酶组 (低氧 +HO组 ) (n =12 )。以光学显微镜观测 3组大鼠肺中型动脉及小型动脉的相对中膜厚度 (RMT)。应用PDGF的单克隆抗体经免疫组织化学技术对 3组大鼠肺动脉PDGF进行定位及半定量分析。结果　低氧组大鼠中型肺动脉及小型肺动脉RMT均高于常氧组和低氧 +HO组 (P <0 .0 1)。 3组大鼠各级肺动脉内皮细胞中均有PDGF的表达 ,低氧组高于常氧组和低氧 +HO组 (P <0 .0 1)。中型肺动脉内皮细胞中PDGF的表达与相应中型肺动脉RMT之间呈正相关(r为 0 .82 3 5,P <0 .0 1) ;小型肺动脉内皮细胞中PDGF的表达与相应的小型肺动脉RMT之间呈正相关 (r为0 8642 ,P <0 .0 1)。结论　一氧化碳对缺氧性肺血管结构重建大鼠肺动脉中PDGF表达有抑制作用     

新型气体信号分子硫化氢对低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡的影响

目的:探讨新型气体信号分子硫化氢(H2S)对低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡的调节作用.方法:24只Wistar大鼠,随机分为对照组(8只)、低氧组(8只)和低氧 NaHS组(8只).以化学分光光度法测定血浆H2S含量;采用原位缺口末端标记方法(TUNEL)检测大鼠肺动脉平滑肌细胞的凋亡,并行图像分析计算单位面积细胞凋亡率;采用免疫组织化学方法检测肺动脉平滑肌细胞凋亡蛋白Bcl-2、Fas和caspase-3表达,并进行定位和半定量分析.结果:低氧组与对照组比较,低氧组大鼠血浆中H2S含量下降36%,应用TUNEL检测肺动脉平滑肌细胞单位面积凋亡率减少52.9%,肺动脉平滑肌细胞Bcl-2蛋白表达增高123.9%,Fas蛋白表达减弱45%,caspase-3表达与对照组差异无显著性;低氧组与低氧 NaHS组比较,低氧 NaHS组大鼠血浆中H2S含量升高65%,应用TUNEL检测到肺动脉平滑肌细胞单位面积凋亡率较低氧组增高62.5%,肺动脉平滑肌细胞Bcl-2蛋白表达减弱36.4%,Fas和caspase-3蛋白表达分别增高84.8%、34.5%;结论:低氧时肺动脉平滑肌细胞凋亡减少,H2S可能通过抑制肺动脉平滑肌细胞Bcl-2蛋白表达、增加Fas和caspase-3蛋白表达,促进低氧时肺动脉平滑肌细胞凋亡.     

腺病毒介导的p53消减基因对慢性低氧性肺动脉高压大鼠的影响

目的 探讨p53消减基因对低氧性肺动脉高压（pulmonary artery hypertension,PAH）大鼠肺动脉压力及平滑肌细胞凋亡的影响。 方法 SD大鼠60只随机分为常氧对照组、常氧实验Adeno-null组、常氧实验Adeno-p53组、低氧对照组、低氧实验Adeno-null组和低氧实验Adeno-p53组各10只。低氧组大鼠置于含有10% O2浓度的低氧舱中。培养2周后气管滴入3×108 MOI腺病毒,继续培养2周。利用右心导管测压法测定各组大鼠平均颈总动脉压、平均肺动脉压;称重右心室、室间隔+左心室的重量,计算右心室肥厚指数,TUNEL染色法检测左肺肺动脉平滑肌细胞的凋亡指数,评价p53消减基因转染对大鼠肺动脉压力及平滑肌细胞凋亡的影响。 结果 常压下持续通入10.0% O2培养4周的大鼠与正常情况下培养的大鼠相比,平均肺动脉压力显著升高,右心室明显肥厚（P＜0.01或P＜0.05）。低氧培养条件下,与低氧实验Adeno-null组相比,低氧实验Adeno-P53组肺动脉压和右心室肥厚指数降低(P＜0.05)。低氧实验Adeno-P53组的肺动脉平滑肌细胞的凋亡指数显著高于低氧实验Adeno-null组常氧实验Adeno-p53组大鼠肺动脉平滑肌细胞的凋亡指数高于常氧实验Adeno-null组(P＜0.05)。 结论 p53消减基因能在一定程度上缓解低氧性PAH的发展,其机制可能与p53消减基因诱导肺动脉平滑肌细胞的增加有关。     

慢性低氧性肺动脉高压大鼠体内血管活性物质表达的变化及意义

目的: 观察慢性低氧性肺动脉高压(HPH)大鼠血浆中心房钠尿肽(ANP)和降钙素基因相关肽(CGRP)的表达变化.方法: 用低压、低氧的方法复制大鼠慢性HPH模型,放射免疫法检测血浆中血管活性物质ANP和CGRP表达的变化.结果: 慢性HPH大鼠血浆中血管活性物质ANP和CGRP的表达均发生了变化,呈现先降低后增高的表现, 即低氧3 wk＞正常＞低氧2 wk.结论: 在慢性HPH形成过程中,随着肺小动脉壁的增厚,血浆中血管活性物质ANP和CGRP的表达先降低后增高.其变化可能与慢性HPH过程中肺动脉压升高和肺小动脉壁的结构重建有一定关系.