石蒜碱对裂殖酵母生长的抑制作用

 目的 研究石蒜碱对裂殖酵母生长周期的影响,分析石蒜碱的抗肿瘤机制,推测用裂殖酵母作为模型筛选抗肿瘤药物的可行性。方法 在不同浓度石蒜碱条件下培养裂殖酵母,测量生长曲线;流式细胞术检测细胞周期分布;光学显微镜观察形态,DAPI及Calcofluor染色观察细胞核、细胞间隔变化;real-time PCR检测细胞周期相关基因的表达。结果 在试验条件下,石蒜碱显著抑制裂殖酵母生长,并呈现时间浓度依赖性,作用20.5 h后IC50值为212 μmol/L;酵母细胞变长、细胞核及细胞间隔增多,G2/M期细胞比例增加,部分细胞周期相关基因在mRNA水平有所变化。结论 石蒜碱对裂殖酵母生长具有明显抑制作用,可引起细胞表型变化,影响部分细胞周期相关基因的表达。     

人反义端粒酶RNA转染SGC-7901细胞后细胞周期调控基因表达的改变

目的：观察反义人端粒酶RNA(Human telomerase RNA components,hTR)转染的SGC－7901胃癌细胞（7901－ahTR)细胞周期调控基因表达的变化。方法 采用RT－PCR、Western印迹和免疫组化方法检测SGC－7901和7901－ahTR细胞p21、p27、p16、c-myc等基因mRNA和蛋白的表达。结果 反义hTR转染的7901细胞p21和p27表达增加,PCNA和c-myc表达下调,而cyclinD1和p16mRNA表达无明显变化。结论 抑制端粒酶活性能调节多种细胞周期调控基因的表达,从而抑制肿瘤细胞的增殖和诱导分化。     

p27kip1的亚细胞定位对卵巢癌细胞周期的作用研究

目的 :研究卵巢癌中抑癌基因p27kip1蛋白在不同细胞周期中的亚细胞定位及表达形式,分析其对卵巢癌细胞周期调控的作用机制。方法:以人卵巢癌细胞株SKOV3为研究对象,用血清饥饿法同步细胞周期,采用免疫荧光法测定不同细胞周期中p27kip1、p-Ser10p27kip1蛋白的表达定位情况,并用Western Blot法检测p27kip1、p-Ser10p27kip1在不同细胞生长周期的表达。结果:在G0/G1期卵巢癌细胞中,p27kip1定位表达于细胞核,发挥抑制细胞周期的活性的作用。在S期细胞中,p27kip1以p-Ser10p27kip1的形式存在于胞质中。p27kip1的表达水平随着血清释放的时间延长而逐渐减少。p-Ser10p27kip1表达水平随着血清释放的时间延长而逐渐增加。结论:p27kip1定位于卵巢癌细胞核,抑制细胞周期活化,并以磷酸化的形态转移出核,丧失抑癌活性。     

半枝莲阻滞人结肠癌细胞周期的机制

目的研究半枝莲氯仿极性部位提取物（ECSB）阻滞人结肠癌细胞周期的机制。方法用ECSB干预结肠癌细胞株HCT-8、SW620,检测其细胞周期相关基因的表达。结果 ECSB干预SW620细胞后,其p16表达上升,PCNA表达下降;ECSB干预HCT-8细胞后,Cyclin D1、CDK2、CDK4表达下降。结论ECSB通过调控细胞周期相关基因的表达,抑制人结肠癌细胞的增殖。     

细胞型局灶节段性肾小球硬化症的病理变化及其细胞周期调控蛋白的表达

目的:探讨细胞型局灶节段性肾小球硬化症(focal segmental glomerulosclerosis,FSGS)的病理学特征及其细胞周期调控蛋白的表达.方法:收集细胞型FSGS病例17例,肾活检标本进行系统的光镜、免疫荧光及电镜观察,通过免疫组化及免疫电镜方法,检测细胞周期蛋白(cyclin D1,cyclin E,cyclin A及cyclin B1),细胞周期蛋白依赖激酶抑制剂(cyclin dependent kinase inhibitor-CKI,包括p2l,p27及p57)的表达.结果:细胞型FSGS以上皮细胞增生肥大伴有毛细血管襻的节段硬化或塌陷为突出特征;免疫荧光可见部分病例节段性IgM阳性或阴性;超微结构观察显示增生的细胞兼具足细胞及壁层上皮细胞的特征.细胞型FSGS的增生细胞,cyclin E、cyclin A、cyclin B1及p21表达阳性,而cyclin D1、p27及p57转为阴性.结论:细胞型FSGS的增生细胞可能为损伤的足细胞重现幼稚足细胞的表型特征,重新进入细胞周期进行增殖而形成细胞增生病变;细胞周期蛋白(cyclin E,cyclin A,cyclinB1)表达增加及CKI(p27,p57)表达降低与细胞增生病变的细胞周期调控有关.     

网脊衣酸上调p21CIP1蛋白诱导前列腺癌细胞周期阻滞的作用分析

目的 探讨天然化合物网脊衣酸(RB)对前列腺癌LNCaP细胞的周期阻滞作用及分子机制。方法 细胞经RB处理后,流式细胞术检测细胞周期的变化;溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记法检测细胞增殖情况;Western blotting检测p53、p21 CIP1(p21)及细胞周期相关蛋白的表达;实时定量PCR检测p21的 mRNA水平的变化;荧光素酶报告基因检测RB对p21启动子活性的影响;转染p53突变体质粒检测p53对p21表达的影响;基因敲除p21检测其对细胞周期的作用。结果 RB可使LNCaP细胞阻滞于G0/G1期,抑制周期相关的Cyclin D、Cyclin E、Cdk 4和p-Rb表达。同时,RB可时间依赖性地诱导LNCaP细胞中野生型p53表达、促进其入核,同时上调p21的mRNA和蛋白水平。阻断p53的活性后,可抑制RB介导的p21表达及其启动子活性。而敲除p21基因,可降低RB所介导的G0/G1期阻滞,同时G2/M期细胞数量增加。结论 RB通过激活p53,在转录水平上调靶基因p21的表达,导致前列腺癌LNCaP细胞阻滞于G0/G1期,从而抑制细胞的增殖。     

不同类型的DNA聚合酶β基因对CHO细胞的影响

目的:比较野生型和突变型(58 bp缺失)DNA聚合酶β(polβ)基因对真核细胞生长特性的影响. 方法:将表达人野生型和缺失型DNA polβ的中国仓鼠卵巢细胞株(CHO),用RT-PCR方法鉴定野生型和缺失型DNA polβ mRNA水平的表达,MTT法测生长曲线、流式细胞术测细胞周期. 结果:转染野生型和突变型DNA polβ的CHO细胞株中,都有外源基因mRNA水平的表达;转染突变型(58 bp缺失)polβ基因的细胞增殖速度和S期比例增高均高于未转染组细胞,差异有统计学意义(P<0.05). 而转染野生型polβ基因对细胞增殖速度和细胞周期无明显影响(P>0.05). 结论:高表达外源性野生型和突变型DNA polβ,对CHO细胞生长具有不同的影响.     

辛伐他汀依赖p53通路对K562细胞G1期调节的分子机制

目的探讨辛伐他汀体外处理后的K562细胞p53通路和K562细胞G1期的分子水平的变化,以说明辛伐他汀是否依赖p53通路参与K562细胞细胞周期G0／G1期停滞的调控和抑制K562细胞增殖。方法体外培养和用辛伐他汀处理K562细胞,用流式细胞术检测辛伐他汀作用后细胞周期和凋亡率的变化,用RT-PCR检测K562细胞p53通路和细胞周期G1期相关基因表达的变化。结果辛伐他汀能使K562细胞停滞在G1／G0期,明显诱导K562细胞凋亡,大多数p53通路基因和细胞周期相关基因的变化出现差异表达。结论辛伐他汀可能通过作用于参与细胞增殖和凋亡的p53通路,抑制K562细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

乳腺癌紫杉醇耐药细胞中lncRNA和mRNA表达谱筛选

目的:分析紫杉醇诱导的乳腺癌MCF-7耐药细胞（MCF-7/PR）中长链非编码RNA（lncRNA）和信使RNA（mRNA）表达谱的变化,研究筛选出调控乳腺癌紫杉醇耐药的关键lncRNAs,为逆转紫杉醇耐药的分子靶点提供理论依据。方法:利用ArraystarlncRNA芯片技术检测MCF-7/PR细胞中lncRNAs和mRNAs的表达谱;使用Agilent GeneSpring GX v12.1软件筛选差异表达的lncRNAs和mRNAs,对差异mRNAs进行GO和KEGG通路分析,得到mRNA参与的生物学途径;并同时进行lncRNAs与相应mRNAs联合分析推断lncRNAs功能。结果:通过MCF-7/PR细胞和MCF-7亲本细胞相比,共有1 504个lncRNAs和2 264个mRNAs存在差异性表达（差异倍数>2.0）;通过GO聚类分析表明:上调的mRNAs和下调的mRNAs分别参与多种不同的生物过程;差异性lncRNAs可能通过影响相应mRNAs发挥其生物学功能。结论:乳腺癌紫杉醇耐药细胞中lncRNAs和mRNAs的表达存在差异,差异表达的基因可以为寻找新的化疗敏感靶点或生物标志物提供线索。     

益气活血方药对老年大鼠肝脏衰老相关基因表达的影响

目的:观察益气、活血方药对老年大鼠肝脏衰老相关基因表达的影响.方法:以自然衰老大鼠为衰老模型,采用RT-PCR、Western blotting法研究益气、活血方药对老年大鼠肝脏p16、p21、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、cyclin D1和cyclin E mRNA转录和蛋白表达的影响.结果:老年大鼠肝脏p16、p21、cyclin D1 mRNA转录和蛋白的表达增加;PCNA、cyclin E mRNA转录和蛋白的表达降低.与老年大鼠比较,益气、活血方药可下调老年大鼠肝脏cyclin D1 mRNA转录和蛋白表达,上调促进增殖基因cyclin E mRNA转录和蛋白表达,但对p16、p21和PCNA的调节作用不明显.结论:益气、活血方药主要通过调控cyclin D1和cyclin E mRNA转录和蛋白表达而促进细胞增殖.