(一)蝙蝠葛苏林碱对兔淋巴细胞内钙含量的影响

采用钙荧光指示剂Fura—2/Am定量测试法检测了静息淋巴细胞胞浆内游离钙浓度,并以Ca~(2+)载体A23187作为阳性对照.观察了(一)蝙蝠葛苏林碱(8701)对兔淋巴细胞胞浆内Ca~(2+)浓度的影响。结果表明:8701的各种实验浓度均可显著地促进淋巴细胞内Ca~(2+)浓度增加,在浓度为10~(-4)mol·L~(-1)时,增加细胞内Ca~(2+)浓度的作用显著高于Ca~(2+)载体A23187的作用(P<0.01),提示该药有可能作为淋巴细胞的刺激剂或在高浓度时可能造成淋巴细胞的Ca~(2+)中毒作用。     

镉对小鼠体液免疫功能和淋巴细胞钙稳态的影响

在本研究中,以 CdCl_2连续给雌性 LACA 小鼠灌胃染毒14天,在0.3mg/kg/day剂量下(累积剂量相当于1/50LD_(60))即可明显抑制 LACA 小鼠脾淋巴细胞 IgM-PFC(IgM 空斑形成细胞数),其抑制率为42.12%(P<0.001),同时淋巴细胞胞内游离 Ca~(2+)浓度比对照组增加35%(P<0.05)。而且 CaM(钙调素)含量随灌胃剂量的增加(0.3-2.4mg/kg/day)而呈下降趋势(r=-0.9996,P<0.001),但同期测定的脾淋巴细胞 Ca~(2+),Mg~(2+)-ATPase 活性和膜脂流动性未见明显改变(P>0.05)。说明在此剂量范围内镉对 LACA 小鼠脾淋巴细胞 IgM-PFC 的抑制与胞内游离 Ca~(2+)浓度的增加及 CaM 含量的下降有一定相关,而与 Ca~(2+)、Mg~(2+)-ATPase 活性和膜脂流动性的关系不明显。     

钙通道阻滞剂的新进展

自Ringer 发现Ca~(2+)在维持心肌收缩中的重要性以来,已有100多年;然而,Ca~(2+)的信使功能最近才得到重视。这种功能是通过细胞的下列三种表现来表达:(1)静息状态时细胞内游离Ca~(2+)浓度低下(≤10~(-7)M),兴奋时则增加到10~(-7)和10~(-5)M 之间;(2)细胞内存在有特异性Ca~(2+)结合蛋白,作为细胞内的Ca~(2+)受体,其解离常数在10~(-7)和10~(-5)M 之间;(3)在浆膜和细胞器内,有Ca~(2+)特异的流出、流入和隔绝过程,使兴奋时细胞内Ca~(2+)浓度增加,静息时则回复和保持在低水平。细胞内Ca~(2+)通过能量-依赖性     

受精和人工激活诱导的小鼠卵内游离钙离子变化(英文)

目的:研究哺乳类动物卵母细胞激活机制。方法:将休止于第二次成熟分裂中期的小鼠卵母细胞负载Fura 2-AM后用乙醇,钙离子载体,电脉冲或受精等激活;采用Spex AR-CM-MIC阳离子检测系统测定卵激活过程中细胞内游离Ca~(2 )浓度变化;电镜下检测卵激活后皮质颗粒释放。结果:在含Ca~(2 )(1.7mmol·L~(-1))的IVF液中,精子受精诱发卵内Ca~(2 )浓度波动,这种Ca~(2 )波动持续达3—4h直至受精卵发育至原核期消失。当外Ca~(2 )升高至5.0mmol·L~(-1)时Ca~(2 )波动加快;去除外Ca~(2 )后Ca~(2 )波动很快消失;将卵移入含Ca~(2 )IVF后又恢复Ca~(2 )波动。出现Ca~(2 )波动的卵随后均排出第二极体并形成原核。胞内注射Ca~(2 )螯合剂依他酸(200μmol·L~(-1))抑制受精诱导的Ca~(2 )波动则阻止卵激活。胞内注射肝素(MW=3500,100μmol·L~(-1))不能阻止受精Ca~(2 )波动。乙醇,钙离子载体和1次电脉冲刺激诱导卵内Ca~(2 )浓度升高1次并且仅诱导大龄卵(>18h CG)激活。刚排出卵的激活则需要[Ca~(2 )]_i多次升高诱导。人工激活诱导卵出现与受精相似的皮质颗粒释放。卵内注射Ca~(2 )螯合剂抑制[Ca~(2 )]_i升高则阻断卵激活的一系列反应。结论:细胞内游离Ca~(2 )升高是诱导卵激活的重要信号;受精与人工激活诱导的[Ca~(2 )]_i升高及Ca~(     

不同条件下吡喹酮对日本血吸虫雄虫摄入钙的影响

吡喹酮仅在较短时间内增加体外培养的日本血吸虫♂虫对~(45)Ca~(2+)的摄入量。在含30 mMMg~(2+)的HBS中,吡喹酮对♂虫摄入~(45)Ca~(2+)的量无明显影响。在4℃的HBS中,吡喹酮可使♂虫对~(45)Ca~(2+)的摄入量至少在1小时内持续增加。此外,在无Ca~(2+)的HBS中,血吸虫♂虫已摄入的~(45)Ca~(2+)的释放量较在HBS中的显著为多。     

D-聚甘酯对血管内皮细胞损伤的保护作用

目的 用 H_2O_2(200μmol·L~(-1))诱导人脐静脉内皮细胞株ECV304氧化损伤,研究D-聚甘酯(DPS)对血管内皮细胞损伤的保护作用。方法 噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性,采用试剂盒测定细胞内脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量、培养液中乳酸脱氢酶(LDH)和超氧化物歧化酶(SOD)活性。同时采用流式细胞仪检测损伤后细胞内Ca~(2+)含量,并观察DPS对H_2O_2导致的内皮细胞内钙离子浓度的影响和细胞凋亡的作用。结果DPS 0.1,1,10μg·L~(-1)对损伤后ECV304具有促进增殖作用。DPS 0.1,1μg·L~(-1)使细胞培养液中SOD水平升高并降低细胞内MDA含量,4个剂量的DPS均能使细胞培养液中LDH释放减少。流式细胞术检测结果显示DPS能降低H_2O_2导致的细胞内Ca~(2+)含量的升高,并抑制细胞凋亡。结论 DPS具有保护H_2O_2致血管内皮细胞损伤的作用,其机理可能与其抗脂质过氧化作用,降低损伤后细胞内Ca~(2+)含量并抑制细胞凋亡有关。     

牛磺酸对Ca~(2+)与脂质体结合作用的影响

本工作在人工生物膜——脂质体上观察牛磺酸对Ca~(2+)与脂质体结合作用的影响。结果发现,牛磺酸对Ca~(2+)与脂质体结合的影响取决于Ca~(2+)浓度,在低Ca~(2+)浓度(2μmol·L~(-1))时,显著促进Ca~(2+)与脂质体的结合,在高Ca~(2+)浓度(2mmol·L~(-1))时,对其结合则无明显影响。牛磺酸的上述作用在高钾缓冲液中更强,而在高钠、高镁缓冲液中较弱。本工作还观察到膜脂质过氧化后与Ca~(2+)结合力显著增强,牛碘酸能有效地降低其结合。实验结果提示,牛碘酸可能通过影响膜的微环境(磷脂双层分子)调节Ca~(2+)与膜的相互作用,参与细胞Ca~(2+)稳态的调节。     

1-磷酸鞘氨醇促进胰岛素分泌及可能机制研究

目的研究1-磷酸鞘氨醇(sphingosine-1-phosphate,S1P)促进葡萄糖刺激的胰岛素分泌效应及其分子机制,探索糖尿病治疗药物的作用靶点。方法使用胶原酶P消化SD大鼠胰腺,Histopaque 1077梯度离心获得胰岛,Dispase II消化得到胰岛细胞。不同浓度S1P(0~20μmol·L~(-1))干预,观察低糖(2.8 mmol·L~(-1))和高糖(16.7 mmol·L~(-1))条件下胰岛素分泌的变化。膜片钳技术记录β细胞电压依赖性钾通道电流(Kv电流),观察S1P干预后Kv电流的变化。钙成像技术记录β细胞内Ca~(2+)浓度,观察不同浓度S1P(0~20μmol·L~(-1))干预后细胞内的Ca2+浓度变化。结果与低糖组相比,高糖组明显刺激了胰岛素的分泌(P<0.01)。低糖条件下,S1P没有改变胰岛素分泌量(P>0.05)。高糖条件下,S1P浓度依赖性增加了胰岛素分泌量(P<0.01)。与对照组相比,S1P明显抑制了β细胞Kv电流(P<0.01)。高糖条件下,S1P浓度依赖性升高了胰岛细胞内Ca~(2+)浓度(P<0.01)。结论 S1P可能通过抑制β细胞Kv电流、升高细胞内Ca2+浓度,最终促进葡萄糖刺激的胰岛素分泌。     

尼卡地平升高小鼠胸腺细胞胞浆钙浓度(英文)

研究尼卡地平(nicardipine,Nic)对小鼠胸腺细胞胞浆钙浓度([Ca~(2 )]_i)及增殖的影响.方法:用Fura-2掺入细胞的荧光测定法测定[ca~(2 )]_i;用[~3H]thymidine掺入法测定胸腺淋巴细胞的增殖.结果:无论在含Ca~(2 )或无Ca~(2 )介质中,Nic 1—30 μmol·L~(-1),以浓度依赖的方式升高静息胸腺细胞的[Ca~(2 )]_i.丝裂原Con A 5 mg·L~(-1)也从细胞内库释放Ca~(2 ),而Nic抑制Con A引起的[Ca~(2 )]_i升高.在上述升高[Ca~(2 )]_i的浓度中,Nic不刺激静息胸腺淋巴细胞增殖,但显著抑制Con A的增殖反应.结论:Nic升高[Ca~(2 )]_i,干扰了细胞Ca~(2 )稳态,因而抑制淋巴细胞对丝裂原的反应.     

虾青素对过氧化氢所致HepG2细胞线粒体氧化损伤及生存能力下降的保护作用

目的探讨虾青素对H_2O_2导致的HepG2细胞线粒体氧化损伤及生存能力下降的保护作用。方法采用H_2O_2损伤HepG2细胞,测定细胞内Ca~(2+)浓度及线粒体膜电位、胞浆中细胞色素c(Cyt-c)的阳性表达率变化考察了虾青素对活性氧所致线粒体氧化损伤的保护作用;测定细胞存活率、乳酸脱氢酶(LDH)释放率考察了虾青素对活性氧所致细胞生存能力下降的保护作用。结果虾青素(1.0×10~(-7)、1.0×10~(-6)、1.0×10~(-5)mol·L~(-1))能明显抑制H_2O_2导致的细胞内Ca~(2+)浓度升高、线粒体膜电位降低、Cyt-c的释放增加;以及细胞存活率下降、LDH释放率增加。结论虾青素对H_2O_2所致细胞线粒体氧化损伤及细胞生存能力下降具有明显的保护作用,其机制可能与其抗氧化作用有关。     

前胡丙素对培养心肌细胞~（45）Ca~（2＋）摄入及细胞内游离钙的影响

利用培养的乳鼠心肌细胞测定细胞４５Ｃａ２＋的摄入及细胞内游离钙的浓度。结果表明，前胡丙素（Ｐｒａ－Ｃ）１０－１００μｍｏｌ·Ｌ－１依浓度抑制４５Ｃａ２＿的摄入，并抑制由３０μｍｏｌ·Ｌ－１ＫＣｌ所引起的４５Ｃｓ２＋摄入的增加，同时Ｐｒａ－Ｃ１００μｍｏｌ·Ｌ－１对去甲肾上腺素所诱发的４５Ｃａ２＿摄入的增加也有抑制作用。Ｐｒａ－Ｃ１０μｍｏｌ·Ｌ－１和维拉帕米１０μｍｏｌ·Ｌ－１能抑制细胞外高钾（３０，５０ｍｍｏｌ·Ｌ－１）引起的［Ｃａ２＋］ｉ的升高，同时Ｐｒａ－Ｃ３０ｍｏｌ·Ｌ－１和维拉帕米１０μｍｏｌ·Ｌ－１对去甲肾上腺素１０μｍｏｌ·Ｌ－１在无钙及含ＣａＣｌ２１．３ｍｍｏｌ·Ｌ－１的溶液中所引起的［Ｃａ２＋］，的增加也有抑制作用。提示前胡丙素对心肌细胞的作用与其阻滞钙通道有关。     

钙流拮抗药对眼镜蛇心脏毒升高大鼠心肌胞浆Ca~（2＋）作用的影响

Ｆｕｒａ－２荧光测定实验显示，眼镜蛇心脏毒（ＣＴＸ）能明显升高新鲜分离的大鼠心肌细胞的胞浆Ｃａ２＋浓度。维拉帕米在完全阻断高Ｋ＋引起胞浆Ｃａ２＋升高的浓度下（１μｍｏｌ·Ｌ－１）．能明显抑制ＣＴＸ作用，但不能阻断之。１．５μｍｏｌ·Ｌ－１ＣＴＸ使离体大鼠Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ心脏收缩幅度逐渐减少，最后心脏停搏于收缩期。维拉帕米及硝苯吡啶均能明显延长心脏的搏动时间，但不能阻止ＣＴＸ引起的心脏停搏。结果提示，ＣＴＸ引起膜去极化使电位依赖性Ｃａ２＋通道开放不是ＣＴＸ触发Ｃａ２＋内流的唯一机理。     

萘哌地尔衍生物YMⅢ扩张血管效应及其机制研究

目的观察萘哌地尔衍生物YMⅢ对家兔血管活动的影响并探讨其血管活性机制,为该药的开发研究提供基础资料。方法采用家兔胸主动脉条收缩的方法,观察YMⅢ对去甲肾上腺素(NA)、5-羟色胺(5-HT)、和高钾缩血管量效曲线的影响;应用无Ca2+-复Ca2+的实验法,以NA和咖啡因为血管收缩剂,间接观察YMⅢ对细胞内游离钙浓度([Ca2+]i)的影响,并分析其可能作用的钙通道。结果YMⅢ10-8、5×10-8、10-7mol·L-1使NA量效曲线明显平行右移,而最大反应不变,pA2值为8.00;本品10-6、5×10-6mol·L-1对氯化钾(KCl)量效曲线没有明显影响,但当浓度为10-5mol·L-1时,能使高钾量效曲线呈非平行右移,最大反应压低,pD′2值为4.26;本品10-7、10-6、10-5mol·L-1虽使5-HT量效曲线的最大反应有降低趋势,但无统计学意义。在无钙Krebs液中,YMⅢ10-8、5×10-8、10-7mol·L-1呈浓度依赖性抑制NA所致血管条的短暂收缩,对复钙后NA所诱发的持续性收缩也呈浓度依赖性抑制作用,但其剂量达10-5mol·L-1时尚不能抑制咖啡因在无Ca2+液中所致收缩。结论YMⅢ可能是一种α受体阻断剂,其扩血管机制可能是阻断细胞膜上的α受体,从而抑制受体中介的Ca2+内流和Ca2+释放。     

小檗碱对培养的新生大鼠心肌细胞内游离钙含量的影响

采用Ｃａ２＋指示剂Ｆｕｒａ－２作为细胞内钙离子的荧光探针，利用ＡＲ－ＣＭ－ＭＩＣ阳离子测定系统。检测了培养新生大鼠心肌细胞内游离钙的浓度，并观察了小檗碱对去甲肾上腺素，Ｈ２Ｏ２，高Ｃａ２＋及高Ｋ＋引起细胞内钙离子浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）变化的影响。小檗碱对心肌细胞静息［Ｃａ２＋］ｉ无明显影响，能浓度依赖地抑制去甲肾上腺素和Ｈ２Ｏ２引起的［Ｃａ２＋］ｉ的升高。小檗碱５０μｍｏｌ·Ｌ－１能抑制高Ｋ＋引起的［Ｃａ２＋］ｉ的升高，而小剂量（１－１０μｍｏｌ·Ｌ－１）则无作用。对搏动细胞，小檗碱能抑制其［Ｃａ２＋］ｉ瞬间变化的最大值，对最小值则无作用。     

小檗碱对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

目的探讨小檗碱对体外培养SD大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响。方法应用MTT法检测不同浓度小檗碱对骨髓间充质干细胞增殖情况的影响,以对硝基苯磷酸盐法检测碱性磷酸酶活性,等离子体直读光谱仪检测钙沉积,放射免疫法检测骨钙素含量,茜素红法染色观察钙化结节形成。结果小檗碱在1×10-9～1×10-5mol.L-1浓度范围对骨髓间充质干细胞增殖无明显影响。小檗碱浓度为1×10-7和1×10-6mol.L-1培养3～7d能明显提高骨髓间充质干细胞内碱性磷酸酶活性。小檗碱在1×10-7～1×10-5mol.L-1浓度范围培养22d能明显促进骨髓间充质干细胞骨钙素合成和分泌。小檗碱在浓度为1×10-6和1×10-5mol.L-1培养28d时钙盐沉积量和钙化结节形成增加。结论小檗碱可促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞方向分化,增强骨钙化。这可能为其防治骨质疏松的机制之一。     

茶黄素对大鼠心室肌细胞内游离钙浓度的影响

目的研究茶黄素对大鼠心室肌细胞内游离钙浓度([Ca2+]i)的影响并探讨其可能机制。方法用激光共聚焦显微镜探测细胞内游离钙浓度,结果用相对荧光强度((FI-FI0)/FI0,%;FI0:对照;FI:给药)表示。结果①茶黄素(10,20,40μmol.L-1)对正常台氏液中心肌细胞内游离钙浓度没有影响,却可浓度依赖性地降低模拟缺血液中心室肌细胞[Ca2+]i的增加。②预先应用L型钙通道开放剂Bay k8644,可大部分取消茶黄素(20μmol.L-1)在模拟缺血液中的作用。③茶黄素(20μmol.L-1)能明显抑制无钙台氏液中由低浓度ryanodine引起的[Ca2+]i增加。④当细胞外液钙浓度由1 mmol.L-1增加到10 mmol.L-1而诱发心室肌细胞钙超载时,部分心室肌细胞产生可传播的钙波,茶黄素(20μmol.L-1)可降低钙波发生的频率和持续时间,最终阻断钙波并降低[Ca2+]i。结论茶黄素可抑制电压门控性钙通道的外钙内流和减少肌浆网的内钙释放从而降低[Ca2+]i。     

萘甲异喹对大鼠主动脉平滑肌~（45）Ca转运的影响

萘甲异喹（ＮＩ１，１０μｍｏｌ·Ｌ－１）和硝苯吡啶（Ｎｉｆ０．５μｍｏｌ·Ｌ－１）对大鼠主动脉平滑肌４５Ｃａ溢流无影响，ＮＩ（１～３０μｍｏｌ·Ｌ－１）能浓度依赖地抑制高钾和苯肾上腺素引起的大鼠主动脉平滑肌４５Ｃａ内流，抑制率分别为２７％～８１％和１７％～７７％，ＮＩ（１０μｍｏｌ·Ｌ－１）尚可明显抑制由苯肾上腺素引起的４５Ｃａ外溢。这些结果提示ＮＩ能抑制平滑肌细胞膜ＰＤＣ和ＲＯＣ两类钙通道及细胞内钙释放。     

蛋白激酶C与血管平滑肌α_1肾上腺素受体触发Ca~（2＋）内流的关系

在酶新鲜分离的犬肠系膜上动脉平滑肌细胞，蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）的激活剂佛波二丁酯（ＰＤＢ）引起的胞内Ｃａ２＋增高作用可被ＰＫＣ抑制剂１－（５－异喹啉磺酰）－２－甲基哌嗪（Ｈ７）所阻断，而哌唑嗪和普萘洛尔则不能阻断ＰＤＢ的这一作用；１０μｍｏｌ·Ｌ－１苯福林引起的胞内Ｃａ２＋增高作用可被１０和２０μｍｏｌ·Ｌ－１Ｈ７部分阻断；在无Ｃａ２＋液，Ｈ７可部分抑制苯福林引起的内Ｃａ２＋释放和外Ｃａ２＋内流，两者分别被抑制了３３±３％和５８±６％；ＫＣｌ（２０－１００ｍｍｏｌ·Ｌ－１）可浓度依赖性地引起胞内钙升高，这一作用可被１０和２０μｍｏｌ·Ｌ－１Ｈ７不同程度地阻断；ＰＤＢ引起的胞内Ｃａ２＋增高也可分别被１．２５和２．５μｍｏｌ·Ｌ－１维拉帕米部分和全部阻断。上述结果提示ＰＫＣ参与苯福林引起的部分内Ｃａ２＋释放和外Ｃａ２＋内流，但以参与外Ｃａ２＋内流为主；这一作用可能与ＰＫＣ激活，引起电压依赖性Ｃａ２＋通道开放有关。     

牛磺酸镁配合物对乌头碱诱发心律失常大鼠心肌细胞钙通道的影响

目的研究牛磺酸镁配合物(TMCC)对乌头碱诱发心律失常大鼠心肌细胞L型钙电流(I_(Ca,L))的影响。方法酶解法分离大鼠单个心室肌细胞,乌头碱诱导大鼠心律失常模型,胺碘酮作为阳性对照,100、200和400μmol·L~(-1)TMCC作用于心肌细胞。应用全细胞膜片钳技术记录心室肌细胞I_(Ca,L)的变化。结果 400μmol·L~(-1)TMCC显著增加大鼠正常心肌细胞I_(Ca,L),胺碘酮则使之减小。1μmol·L~(-1)乌头碱使I_(Ca,L)电流密度由(4.3±1.6)pA·pF~(-1)增加到(6.4±1.9)pA·pF~(-1)(p<0.01),400μmol·L~(-1)TMCC能显著降低乌头碱诱导的I_(Ca,L)增加。胺碘酮则能使之恢复为(3.7±1.4)pA·pF~(-1)。结论 400μmol·L~(-1)TMCC能增加正常细胞的I_(Ca,L),对钙内流有促进作用,并可减少乌头碱诱导的心律失常大鼠心肌细胞异常增加的电流。     

汉防己甲素抑制三种神经递质引起的新生大鼠脑细胞内游离钙的升高

应用Ｐｕｒａ－２技术测定游离新生大鼠脑［Ｃａ２＋］ｉ浓度的技术、研究了Ｔｅｔ对静息脑［Ｃａ２＋］ｉ和３种递质引起的脑［Ｃａ２］ｉ变化的影响。Ｔｅｔ（１，１０和２０μｍｏｌ·Ｌ－１）对静息脑［Ｃａ２＋］ｉ无明显影响。Ｔｅｔ（１０μｍｏｌ·Ｌ－１）可降低Ｌ－Ｇｌｎ（０．１、１．０和１０μｍｏｌ·Ｌ－１）引起的脑（Ｃａ２＋）ｉ的升高。在Ｈａｎｋ＇ｓ液Ｃａ２＋为１．３ｍｍｏｌ·Ｌ－１时，Ｔｅｔ１０μｍｏｌ·Ｌ－１可降低Ｈｉｓ（５０和１００μｍｏｌ·Ｌ－１）和５－ＨＴ（０．１、１．０、１０和１００μｍｏｌ·Ｌ－１）引起的脑［Ｃａ２＋］ｉ的升高。但不能降低Ｈａｎｋ＇ｓ液无Ｃａ２＋时Ｈｉｓ和５－ＨＴ引起的脑［Ｃａ２＋］ｉ的升高。研究表明Ｔｅｔ可阻滞Ｌ－Ｇｉｎ、Ｈｉｓ和５－ＨＴ受体调控的钙通道。但对Ｈｉｓ和５－ＨＴ引起的细胞内贮存钙的释放并无明显影响。Ｔｅｔ的这种降低脑［Ｃａ２＋］ｉ的作用可能是其治疗脑缺血性疾病的机理之一。Ｐ＜０．０１在Ｔｅｔ１０μｍｏｌ·Ｌ－１作用下，相同浓度的细胞外液钙和Ｈｉｓ（０、５０和１００μｍｏｌ·Ｌ－１），脑［Ｃａ２＋］ｉ分别是２２１±５、２４５±５和３０２±６ｎｍｏｌ·Ｌ－１。增加了１１．８?