应用两种麦管系统对小鼠囊胚的玻璃化冷冻

目的比较两种麦管系统对小鼠囊胚的玻璃化冷冻比较,以期建立一种有效的囊胚冷冻方法。方法分别应用开放麦管系统和传统麦管系统对小鼠扩张囊胚进行玻璃化冷冻,比较冷冻复苏以后囊胚的存活率和孵出率。结果应用开放麦管系统冷冻的小鼠囊胚复苏后的存活率(82.3%)显著高于应用传统麦管系统者(68.6%, P<0.01)。前者冷冻的小鼠囊胚复苏后的囊胚孵出率(70.3%),也明显高于应用传统麦管系统者(57.1%, P<0.05)。结论应用开放性麦管系统进行小鼠囊胚的玻璃化冷冻是一种行之有效的冷冻方法。     

不同浓度冷冻保护剂乙二醇在人扩张囊胚玻璃化冷冻中的应用

目的研究不同浓度冷冻保护剂乙二醇(ethlene glycol,EG)在人扩张囊胚玻璃化冷冻中的应用。方法不同浓度EG 15%,30%,40%,联合15%二甲基亚砜(dimethylsulphoxide,DMSO),0.5 mol/L蔗糖(sucrose),采用两步法,利用改制半麦管为冷冻载体,玻璃化冷冻人扩张囊胚。比较解冻后囊胚存活率,扩张率及孵出率;并比较微吸管吹吸、辅助孵化针刺破胞膜辅助脱水及未辅助脱水对冷冻扩张囊胚的影响。结果由1原核(pronucleus, PN)发育而来的扩张囊胚玻璃化冷冻解冻后囊胚存活率15%EG组明显高于30%及40%EG组(P<0.05)。由2PN 发育成的扩张囊胚玻璃化冷冻解冻后囊胚孵出率15%EG组明显高于30%及40%EG组(P<0.05)。在冷冻过程中给予人工辅助脱水组解冻后囊胚孵出率明显高于未辅助脱水组(P<0.05)。微吸管吹吸组与辅助孵化针刺破胞膜辅助脱水组囊胚孵出率差异无显著性(P>0.05)。结论15%EG为人扩张囊胚玻璃化冷冻中有效和合适浓度。玻璃化冷冻中给予人工辅助脱水,能提高解冻后囊胚的发育潜能。     

RapidWarm Blast玻璃化解冻液对囊胚复苏的效果观察

目的 观察在囊胚复苏周期中,RapidWarm Blast玻璃化解冻液对囊胚的复苏效果。方法 回顾性分析2018年12月至2019年12月在安徽医科大学第一附属医院首次行囊胚复苏移植的655例患者临床资料,根据囊胚解冻液不同分A组357例及B组298例。A组采用传统Vitrification Media解冻液进行囊胚复苏,B组采用新型RapidWarm Blast解冻液复苏。比较两组囊胚复苏后整体存活率,解冻2 h后囊胚重扩张率、孵化率,囊胚种植率及临床妊娠率;同时比较两种解冻液对囊胚不同发育阶段(第5天囊胚、第6天囊胚)的重扩张率、孵化率及临床妊娠率的影响。结果 两组囊胚复苏后的存活率、重扩张率、孵化率、临床妊娠率比较,差异均无统计学意义(P>0.05);B组囊胚种植率(55.45%)高于A组(48.76%),差异有统计学意义(P<0.05)。两组中发育第5天的囊胚复苏2 h后重扩张率及孵化率均高于发育第6天的囊胚,差异均有统计学意义(P<0.05);两组间发育第5天的囊胚复苏2 h后重扩张率及孵化率比较,差异无统计学意义(P>0.05),B组发育第6天的囊胚复苏2 h后扩张率及孵化率均高于A组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 新型RapidWarm Blast解冻液用于囊胚玻璃化复苏,可获得与传统的Vitrification Media相似的临床结局,但新型解冻液对发育第6天囊胚的复苏效果更好,胚胎种植率更高。     

不同成熟时期山羊卵母细胞冷冻保存研究

目的比较山羊卵母细胞在不同成熟时期解冻后体外成熟、体外受精及胚胎发育能力。方法收集山羊生殖泡（GV）期未成熟卵和成熟卵,分5组行开放式拉细麦管（OPS）法玻璃化冷冻,Ⅰ组：直接冷冻GV期卵;Ⅱ组：GV期卵在体外培养（IVC）8h后冷冻;Ⅲ组：GV期卵在IVC16h后冷冻;Ⅳ组：GV期卵体外培养成熟（IVM）后冷冻;Ⅴ组：直接冷冻体内成熟卵。解冻后比较各组卵受精率、卵裂率及8细胞胚胎形成率。结果Ⅰ组（GV期卵）冷冻解冻后存活率达56.8%,显著高于Ⅱ组（33.3%）、Ⅲ组（31.6%）、Ⅳ组（28.9%）及Ⅴ组（30.4%）,差异有高度统计学意义（均P〈0.01）。各组体外受精率、卵裂率及8细胞胚胎形成率比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论采用OPS法玻璃化冷冻山羊GV期卵较冷冻其他成熟时期卵效果好。     

颗粒细胞在玻璃化冷冻中对卵母细胞的影响

目的 采用开放式拉细麦管(open pulled straws，OPS)法玻璃化冷冻技术，探讨卵丘颗粒细胞对未成熟卵母细胞冻融后存活率及其发育能力的影响。方法 小鼠生殖泡期卵丘-卵母细胞复合物(COC)或完全去颗粒细胞后的裸卵(DO)用OPS法玻璃化冻存，复苏后行体外成熟培养(IVM)；COC直接行IVM作为对照组。结果 COC及裸卵冻融后存活率(分别为69．49％、77．90％)、成熟率(分别为56．10％、56．74％)无显著性差异，但成熟率均显著低于对照组(82．28％)。结论 在未成熟卵的玻璃化冷冻中颗粒细胞对卵母细胞冻存无保护作用。     

小型猪急性心肌梗死后心力衰竭模型的构建

目的研究开放拉长塑料细管法（OPS）对HBV转基因小鼠（P21^HBxPHBx）和白内障小鼠（cataract mice,cM）胚胎冷冻效果。方法采用乙二醇作为冷冻保护剂,以昆明小鼠为对照,用OPS法对CM及P21^HBxPHBx两种小鼠3．5d的胚胎进行玻璃化冷冻,并比较KM、CM及P21^HBxPHBx获得胚胎数,解冻后胚胎的复苏率及发育率。结果KM、CM及P21^HBxPHBx小鼠平均获得胚胎数分别为31．12、19．32、9．14枚;解冻后的复苏率分别为95．6％、79-3％、80．3％;发育率分别为94．7％、73．8％、56．6％。表明HBV转基因小鼠的获得胚胎数明显低于昆明小鼠,解冻后三种小鼠的胚胎复苏率之间无显著差别,而解冻后发育率,P21^HBxPHBx小鼠要明显低于KM小鼠。结论转基因小鼠超排数及解冻后发育率低于昆明小鼠,而白内障模型小鼠和昆明小鼠比较不显著。     

OPS玻璃化冷冻小鼠MII期卵效果观察

目的　以小鼠为研究模型 ,探讨MII期卵母细胞冷冻后纺锤体和染色体改变的有效观察方法。研究OPS玻璃化冻存成熟卵的可行性。　方法　运用激光扫描共聚焦显微镜 (LSCM)的光学切片和三维图像重建技术 ,系统研究了OPS玻璃化冷冻对小鼠MII期卵纺锤体和染色体的影响。　结果　冷冻组卵复苏后存活率达 5 8% ,纺锤体和染色体形态正常率分别为 46%和 5 2 % ,与对照组 ( 76%和 70 % )相比 ,差异具显著性 (P <0 0 5 )。暴露组卵纺锤体和染色体结构正常率较对照组略有下降 ,但无统计学差异。　结论　LSCM能够清晰有效地观察冷冻对卵母细胞纺锤体和染色体影响。应用OPS玻璃化方法能够有效冻存卵母细胞     

HBV转基因小鼠胚胎玻璃化冷冻保存研究

目的研究OPS法对不同基因型的HBV转基因小鼠胚胎玻璃化冷冻的效果，为建立转基因小鼠胚胎库奠定基础。方法采用乙二醇作为冷冻保护剂，以野生型P21^ / 小鼠为对照，用OPS法对P21^HBsAg／HBsAg及P21^HBx/HBx两种HBV转基因小鼠3．5d的胚胎进行玻璃化冷冻，并比较不同基因型小鼠的超数排卵数，胚胎的复苏率及发育率。结果P21^ / 、P21^HBsAg／HBsAg及P21^HBx/HBx小鼠平均超排数分别为27．89、15．56、9．14枚；复苏率分别为88．7％、81．1％、80．3％；发育率分别为82．6％、79．4％、56．6％。结果表明HBV转基因小鼠的超排数明显低于野生型小鼠的超排数，解冻后三种小鼠的胚胎复苏率之间无显著差别，而解冻后发育率，P21^HBx／HBx小鼠要明显低于其它两种小鼠。结论超排数、胚胎复苏率及解冻后发育率受小鼠的基因型影响。     

不同冷冻载体对小鼠卵巢组织玻璃化冻存的影响

目的研究不同冷冻载体对小鼠卵巢组织玻璃化冻存的影响.方法将9～12周龄小鼠的卵巢组织取出,在冷冻液中平衡后,分别以闭合麦管、开放麦管与冷冻环为冷冻载体快速深低温冻存,解冻后行自体双肾被膜下移植,观察动情周期、移植21 d后取存活移植物固定,观察单位高倍视野下卵泡数、测定小鼠血清雌激素水平,对比冻存效果.结果移植后各组均有移植物存活,移植物内可见各级处于不同发育阶段的卵泡.闭合麦管、开放麦管与冷冻环组的移植物存活率分别为78.5%、78.5%、84.6%;单位高倍镜下的卵泡数分别为4.0±0.8、4.5±0.7、4.6±0.9;小鼠血清雌激素水平分别为（10.4±0.8）pg/mL、（11.0±1.6）pg/mL、（12.5±1.1）pg/mL.其中,冷冻环组在移植物存活率及小鼠血清雌激素水平与闭合麦管组相比存在显著性差异.结论采用冷冻环做载体能明显提高冻融移植后卵巢组织的存活率与雌激素分泌功能,明显提高对小鼠卵巢组织的保存效果.     

降钙素对小鼠胚泡发育及植入的影响

目的:探讨降钙素对小鼠胚泡发育及植入的影响。方法:将孕4d小鼠胚泡随机接种到添加不同浓度降钙素的培养液内培养,观察记录胚泡的孵化、粘附及扩展等生长情况。于孕4d给小鼠子宫角注射降钙素抗体,孕8d检查胚胎植入数并进行组织学观察。结果:培养液内加入10nmol/L降钙素后,胚泡的孵化、粘附及扩展率均明显提高(P<0.01),注射降钙素抗体的小鼠,其胚胎植入数明显减少(P<0.001),镜下可见胚胎组织蜕化坏死,蜕膜细胞空泡变性。结论:降钙素可促进小鼠胚泡的孵化、粘附及扩展和促进胚泡植入。