硒对Ox—LDL诱导牛内皮细胞Caspase-3酶的作用

目的 探讨硒对氧化型低密度脂蛋白（Ox—LDL）诱导体外培养牛主动脉内皮细胞Caspase-3酶的影响。方法 Ox—LDL与硒处理牛主动脉内皮细胞后，通过流式细胞仪、DNA电泳检测凋亡细胞，测定Caspase-3酶活性。结果 Ox—LDL作用内皮细胞后，细胞凋亡DNA电泳呈梯度务带；加入硒干预后，内皮细胞平均凋亡率及Caspase-3酶活性吸光度比值较Ox—LDL组明显降低（P〈0．05）。结论 硒能减少Ox—LDL诱导体外培养的牛主动脉内皮细胞凋亡，部分通过抑制Caspase-3酶活性而发挥抗凋亡的细胞保护效应。     

切应力对内皮细胞一氧化氮合酶及细胞凋亡的影响

目的探讨切应力作用对体外培养的牛胸主动脉内皮细胞一氧化氮合酶(eNOS)蛋白表达和细胞凋亡的影响。方法体外培养牛胸主动脉内皮细胞，采用平行平板流动腔装置模拟体内血流切应力(5dynes／cm^2和25dynes/cm^2)作用于内皮细胞12h，采用Western blot分析和DNA片段凝胶电泳，观察不同切应力对体外培养的血管内皮细胞eNOS蛋白表达和细胞凋亡的影响。结果静息状态下，体外培养的牛胸主动脉内皮细胞呈多角形“铺路石”状排列，形态大小均匀。不同切应力(5，25dyne／cm^2)作用12h后，血管内皮细胞形态学未见明显改变。但与静止状态细胞的基础水平相比，Western blot分析发现，牛胸主动脉血管内皮细胞eNOS蛋白表达在低切应力时降低；低切应力还可诱导血管内皮细胞发生凋亡，凝胶电泳检测出现明显的DNA梯形带；但在高切应力(25dynes／cm^2)作用下，内皮细胞eNOS表达水平与未处理组接近，而且DNA片段凝胶电泳也未见明显凋亡现象。结论低切应力可降低内皮细胞eNOS蛋白表达和诱导内皮细胞凋亡，提示低切应力可能是导致血管内皮细胞eNOS表达降低和细胞凋亡的重要因素。     

无血清培养对小鼠脑微血管内皮细胞凋亡的影响及其机制

目的　研究无血清培养诱导小鼠脑微血管内皮细胞凋亡及其可能机制。方法　培养用小鼠脑微血管内皮细胞系bEnd .3。用流式细胞术检测凋亡细胞的百分比;用免疫细胞化学法检测Bax及Bcl- 2蛋白表达;用WesternBlot检测caspase 3蛋白表达。结果　bEnd .3细胞经无血清饥饿体外培养12 ,2 4 ,36h后细胞凋亡率明显增加,分别为(13.79±0 .99) % ,(17.80±1.39) % ,(2 0 .5 1±0 .5 5 ) % ,与各自正常血清培养的对照组凋亡率相比,P <0 .0 1。Bax表达明显增强,Bcl -2表达明显减弱,caspase 3明显增强。结论　无血清饥饿培养可诱导bEnd .3细胞发生凋亡,其发生机制与Bax/Bcl 2的变化及caspase 3的激活有关。     

低胆红素血症对机体抗氧化能力和脂质过氧化的影响及VitE的干预效果

目的 :探讨低胆红素血症对机体抗氧化能力和脂质过氧化的不良影响并观察VitE的干预效果。方法 :从体检健康人群中有意选择 4 5例胆红素水平偏高者 (≥ 15 μmol/L)和 4 0例胆红素水平偏低者 (≤ 9μmol/L)作为研究对象 ,抽空腹静脉血检测血清总抗氧化能力 (T -AOC) ,丙二醛 (MDA)及血浆氧化修饰低密度脂蛋白(Ox -LDL) ,并给低胆红素组每人每天口服VitE 10 0mg ,连续 2周 ,复测上述指标。结果 :与高胆红素组比 ,低胆红素组T -AOC明显降低 (P <0 .0 1) ,而MDA和Ox -LDL明显升高 (P <0 .0 5和P <0 .0 1) ,但低胆红素组补充VitE干预后 ,T -AOC显著升高 ,而MDA和Ox -LDL显著降低 (均P <0 .0 1) ,分别达到甚至超过了高胆红素组的相应水平。结论 :低胆红素血症可显著降低机体抗氧化能力 ,促进脂质过氧化 ,但这一不良影响可以通过补充VitE得到有效纠正。     

氟对人胎肝细胞细胞周期、凋亡及p53表达的影响

目的　研究氟对人胎肝细胞 (L 0 2细胞 )细胞周期、凋亡及p5 3表达的影响。方法　体外培养的人胎肝细胞接触 4 0、 80、 16 0 μg/ml氟化钠 2 4h后 ,MTT法检测L 0 2细胞存活率 ,流式细胞术检测细胞凋亡率和周期构成比 ,Westernblot检测P5 3蛋白的表达水平。结果　高剂量氟染毒组细胞存活率显著低于对照组 (P <0 0 1) ;各染氟组S期细胞数与对照组相比均明显增多 (P <0 0 1) ,中、高剂量氟染毒组细胞凋亡率和p5 3蛋白表达量均显著高于对照组 (P <0 0 1)。结论　氟可使L 0 2细胞S期细胞数增多 ,诱导人胎肝细胞凋亡和 p5 3表达 ,并呈剂量 效应关系。     

川芎嗪对家兔软骨细胞Bcl-2蛋白表达及凋亡的影响

目的 :观察川芎嗪对体外培养的家兔关节软骨细胞的Bcl 2蛋白表达及凋亡的影响。方法 :取家兔的关节软骨 ,将软骨细胞分离后进行体外培养。传至第二代后重新制成软骨细胞悬液 ,按 2 .5× 1 0 5浓度接种于载玻片上 ,每片 1 .8ml。分为 2个实验组 ,一组加入川芎嗪注射液 0 .2ml(川芎嗪组 ) ,一组加入等量培养基作为对照组 ,再置入 37℃ ,5 %CO2 培养箱内培养 2 4h后 ,用免疫组化的方法检测各组Bcl 2的表达 ,及用TUNEL法 (脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法 )观察各组软骨细胞的凋亡。结果 :①川芎嗪组对体外培养的家兔关节软骨细胞Bcl 2蛋白明显高于对照组 ,差异有显著性 (P <0 .0 1 ) ;②川芎嗪组的软骨细胞凋亡率明显低于对照组 ,差异有显著性 (P <0 .0 1 )。结论 :川芎嗪对软骨病变有一定的修复功能     

氧化LDL对人脐静脉内皮细胞Connexin37表达的影响

目的研究氧化低密度脂蛋白（Ox—LDL）对体外培养的人脐静脉内皮细胞缝隙连接蛋白Connexin37基因表达的影响。方法常规人脐静脉内皮细胞体外培养并传代。根据Ox—LDL的不同浓度分为对照组（不加Ox—LDL）及50、100、200mg／L干预组,干预24h后通过RT-PCR方法检测并比较各组内皮细胞Connexin37mRNA的表达。根据Ox—LDL干预的不同时间分为对照组（不加Ox—LDL）以及50mg／LOx—LDL干预6、12、24、48、72h组,检测比较各组Connexin37mRNA的表达情况;并检测比较对照组和100mg／L Ox-LDL干预组间Connexin37蛋白的表达水平。结果50、100、200mg／L的Ox—LDL干预24h后均能引起内皮细胞Connexin37mRNA表达的显著减少（P〈0.01）,以50mg／L的Ox—LDL干预效果最明显（P〈0.01）.50mg／L的Ox-LDL干预12h后Connexin37mRNA的表达开始显著下降（P〈0．01）,24h下降最明显（P〈0．01）,48h仍下降（P〈0．05）,至72h时恢复到刺激前水平。100mg／L的Ox—LDL干预24h后内皮细胞Connexin37蛋白表达水平显著降低（P〈0.01）。结论Ox-LDL可以抑制人脐静脉内皮细胞Connexin37mRNA和Connexin37蛋白的表达。     

荜茇明碱对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及凋亡的影响

目的：探讨荜茇明碱（PL）对人乳腺癌MDA‐MB‐231细胞增殖、凋亡的影响及作用机制。方法体外培养人乳腺癌MDA‐MB‐231细胞;采用活细胞计数试剂盒（CCK‐8）法检测不同浓度的PL对MDA‐MB‐231细胞增殖的影响;流式细胞术检测PL对细胞凋亡的影响;蛋白免疫印迹（Westernblot）法检测PL对MDA‐MB‐231细胞Bcl‐2和Bax蛋白表达水平的影响。结果PL抑制MDA‐MB‐231细胞增殖,并呈现出浓度、时间依赖性。PL诱导MDA‐MB‐231细胞凋亡,而乙酰‐L‐半胱氨酸则抑制了PL诱导的细胞凋亡。Westernblot结果提示随着PL浓度的增加,Bax的表达逐渐增加,而Bcl‐2的表达逐渐减少。结论PL对人乳腺癌MDA‐MB‐231细胞有明显的生长抑制和诱导凋亡作用,其机制可能与Bcl‐2蛋白表达的减少和Bax蛋白表达增加有关。     

苦瓜核糖体失活蛋白诱导HL-60细胞发生凋亡及其分子机制的研究

目的　探讨苦瓜核糖体失活蛋白 (Ribosomalinactivatingprotein ,RIP)诱导HL 60细胞凋亡的活性 ,以及对HL 60细胞Bcl 2、Bax、caspase 3表达变化的影响及其分子机制。方法　以一定浓度苦瓜RIP处理HL 60细胞 2 4～ 72h ,用TUNEL法检测细胞凋亡。运用RT PCR和Westernblot免疫印记法检测Bcl 2、Bax、caspase 3mRNA和蛋白表达的变化。结果　苦瓜RIP在一定作用浓度下可使HL 60细胞发生凋亡 ,且随着作用时间的延长凋亡细胞比例逐渐升高。在此过程中 ,HL 60细胞的caspase 3mRNA的表达及其胞内活性亚单位水平显著升高 (P <0 .0 5 ) ,Bcl 2mRNA表达变化虽不显著 ,但其蛋白水平明显降低 (P <0 .0 5 ) ,与此同时 ,BaxmRNA和蛋白表达均有所上调。结论　在苦瓜RIP诱导的HL 60细胞凋亡中 ,caspase 3发挥了极为重要的作用 ,而Bcl 2和Bax可能通过其表达量的变化、转录后调节等方式对细胞凋亡发挥重要的调控功能     

VitE和硒对白血病细胞凋亡及c-myc基因表达的影响

目的研究VitE和硒对人髓系白血病细胞株HL-60细胞凋亡和c-myc基因表达的影响.方法应用体外细胞培养法,DNA凝胶电泳技术、Northern印迹杂交技术.结果 VitE(100μmol/L) 和Se(8μmol/L)作用24h后,HL-60细胞出现细胞凋亡现象.VitE(100μmol/L)可以抑制c-myc基因的表达,作用有显著性(P＜0.05).Se(8μmol/L)无此作用.结论抑制c-myc基因的表达,诱导白血病细胞凋亡是VitE抑制白血病细胞增殖的重要途径之一.硒与VitE同样具有抗氧化作用,可诱导HL-60细胞凋亡.但对c-myc基因的表达却无影响,提示二者的作用机制是不同的.     

HEPATOCYTE GROWTH FACTOR PROTECTS AGAINST APOPTOSIS INDUCED BY ADVANCED GLYCATION END PRODUCTS IN ENDOTHELIAL CELLS

CARDIOVASCULARcomplicationsaretheleadingcauseofmorbidityandmortalityinpatientswithdiabetesmellitus.Disruptionordysfunctionofen dothelialcellshasbeenhypothesizedtoplayapivotalroleintheprogressionand/ordevelopmentofvasculardisease indiabetes.Regulationofcel…     

β-淀粉样肽（25-35）对PC12细胞bax和bcl-2基因表达的影响

目的：观察β-淀粉样肽25-35（β-amyloid peptide 25-35,Aβ25-35）诱导PC12细胞凋亡和对bax及bcl-2基因表达的影响。方法：采用MTT法检测PC12细胞的存活率;DNA电泳法观察细胞凋亡时特异性梯状条带;Hochest33258-PI荧光染色观察细胞核形态学改变;RT-PCR检测bax和bcl-2基因mRNA表达变化,Western blot检测Bax和Bcl-2蛋白表达变化。结果：随着Aβ25-35浓度的增加,PC12细胞存活率逐渐降低;DNA电泳呈凋亡特异性梯状条带;荧光染色可见细胞核碎裂、核固缩等凋亡特征;bax mRNA及Bax蛋白表达增加,bcl-2 mRNA及Bcl-2蛋白表达降低。结论：在Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡过程中,Bax和Bcl-2可能起重要作用。     

缺氧性血管内皮细胞凋亡分子机制的实验研究

目的:研究Caspase-3在缺氧性血管内皮细胞凋亡中的作用.方法:用NaCN合并无糖培养基造成培养的牛主动脉内皮细胞(BAECs)化学性缺氧(CI);应用台盼兰染色、TUNEL、流式细胞仪计数和Hoechst 33342荧光染色的方法观察细胞受损和凋亡情况;应用免疫细胞化学染色的方法观察内皮细胞Caspase-3的表达.结果:Caspase-3的选择性抑制剂可显著减少缺氧性血管内皮细胞凋亡的发生,在Caspase-1和Caspase-6的选择性抑制剂作用下,Caspase-3的表达明显减少.结论:提示Caspase-3参与了缺氧性血管内皮细胞凋亡的发生,在Caspases的蛋白酶级联切割反应中,Caspase-3位于Caspase-1和Caspase-6的下游.     

肝细胞生长因子抗糖基化终产物诱导内皮细胞凋亡及分子机制

目的：探讨肝细胞生长因子抑制糖基化终产物诱导内皮细胞凋亡的作用及其相关分子机制。方法：体外培养人脐静脉内皮细胞，分为实验对照组、糖基化终产物及糖基化终产物＋肝细胞生长因子组，采用MTT法测定各组血管内皮细胞生长抑制率；瑞氏-吉姆萨染色观察细胞形态学变化、流式细胞术测定细胞凋亡率；蛋白免疫印迹法分析各组凋亡基因Ban、Bcl-2蛋白的表达及酶联反应法测定caspase-3活性。结果：糖基化终产物诱导培养的内皮细胞出现明显的凋亡形态学改变，内皮细胞凋亡率与糖基化终产物的浓度和作用时间呈依赖关系，肝细胞生长因子干预后可显著降低不同时间的内皮细胞凋亡率；肝细胞生长因子作用内皮细胞抗凋亡基因Bcl-2表达明显升高，而促凋亡基因Bax表达无明显变化；caspase-3活性显著降低。结论：肝细胞生长因子抑制糖基化终产物诱导内皮细胞凋亡，其作用机制可能是上调抗凋亡基因Bcl-2水平、抑制caspase-3的激活．     

Induction of Apoptosis by Superoxide Anion and the Protective Effects of Selenium and Vitamin E

Objective:The purpose of this study is to investigate the effect of superoxide anion on the apoptosis of cultured fibroblasts and the protective role of seleium and Vitamin E.Methods:Cultured fibroblasts(NIH3T3),with or without selenium or vitamin E in the medium,were treated by superoxide anion produced by xanthine/xanthine oxidase reaction system and changes in cell structure and DNA were observed microscopically and electrophoretically,Results:Apoptosis was observed when superoxide anion at a concentration of 5nmol/L or 10nmol/L had acted on the fibroblasts for 5-10h.Selenium and Vitamin E in the medium inhibited the apoptosis significantly when their concentrations reached 1.15mol/L and 2.3mol/L respectively.Concleusion:selenium and vitamin Ehave protective effect against the apoptosis induced by superoxide anion.The effect of selenium is more remakable than that of vitamin E.     

高密度脂蛋白对氧化型低密度脂蛋白诱导内皮细胞凋亡的影响

目的　探讨高密度脂蛋白 (HDL)对氧化型低密度脂蛋白 (ox L DL)诱导体外培养的人血管内皮细胞凋亡的影响及相关机制。方法　 ox L DL 单独或与 HDL 共同处理体外培养的人脐静脉内皮细胞株 (ECV- 30 4 )后 ,通过流式细胞仪、DNA电泳检测细胞凋亡并测定 Caspase- 3酶活性。结果　 10 0 μg/ml和 2 0 0 μg/m l浓度 ox L DL 作用内皮细胞后 ,其细胞凋亡率分别为 2 8.4 0± 5 .30 %、34.72± 4 .6 4 % ,DNA电泳呈典型的梯状图谱 ,Caspase- 3酶活性达到 16 6 .0 1± 16 .4 4、2 6 3.74± 4 6 .6 2 pmd/(m in· mg protein) ,与空白组比较均有显著性差异 (P<0 .0 1)。HDL(2 0 0 μg/ml)与 ox L DL(10 0 μg/ml、2 0 0 μg/m l)共同作用后 ,凋亡率降至 8.0 6± 2 .35 %及 9.4 0± 2 .5 8% ,未出现梯状图谱 ,Caspase- 3酶活性减低 (分别为 6 7.73± 14 .83、111.2 6± 2 7.13min· m g protein) ,与对应的 ox L DL 组比较均差异显著 (P<0 .0 1)。结论　 HDL 能减少 ox L DL 所致体外培养的内皮细胞凋亡 ,这一作用可能与降低Caspase- 3酶活性有关     

尼氟灭酸对氯化钴诱导血管内皮细胞凋亡的保护作用

目的：探讨尼氟灭酸（NFA）对氯化钴（CoCl2）诱导血管内皮细胞凋亡的保护作用,阐明其可能的机制。方法将血管内皮细胞随机分为对照组、100μmol／L CoCl2损伤组和20、40μmol／L NFA保护组,四甲基偶氮唑蓝比色（ MTT）法检测各组细胞增殖活性,酶联免疫吸附试验（ ELISA ）检测细胞内相关凋亡蛋白Bcl-2、Bax及Caspse-3的表达情况。结果 MTT检测,与对照组比较,100μmol／L CoCl2组在24 h细胞增殖活性明显降低（P＜0．01）;与CoCl2损伤组相比,20、40μmol／L NFA保护组在24 h细胞增殖活性升高（P＜0．05,P＜0．01）,40μmol／L NFA保护组更加明显。 ELISA法检测显示,与对照组比较,100μmol／L CoCl2组在24 h细胞Caspse-3、Bax的表达增多,Bcl-2表达减少（ P＜0．05,P＜0．01）。与损伤组相比,NFA处理缺氧后血管内皮细胞Caspse-3、Bax的表达减少,Bcl-2表达增多（P＜0．05,P＜0．01）。结论 CoCl2能诱导血管内皮细胞缺氧损伤,引起细胞的凋亡;NFA可以保护CoCl 2诱导的血管内皮细胞的缺氧损伤,这可能与上调Bcl-2、下调Bax和Caspse-3抑制其凋亡有关。     

5-烯丙基-7-二氟亚甲基白杨素通过活化过氧化物酶体增殖因子激活受体γ诱导人卵巢癌CoC1细胞凋亡的研究

目的探讨5-烯丙基-7-二氟亚甲基白杨素（ADFMChR）通过活化过氧化物酶体增殖因子激活受体（PPARγ）诱导人卵巢癌细胞凋亡作用的分子机制。方法采用MTT法测定ADFMChR对卵巢癌（CoC1）细胞系细胞增殖抑制作用;碘化丙啶染色流式细胞术（FCM）检测ADFMChR诱导CoC1细胞凋亡程度;DNA琼脂糖凝胶电泳证实ADFMChR诱导CoC1细胞凋亡作用。Western印迹检测ADFMChR对CoC1细胞PPA脚,NF-κB,Bcl-2,Bax蛋白表达的影响。结果MTY法显示ADFMChR呈剂量依赖性抑制CoC1细胞增殖作用,IC50值为7．76μmol／L;FCM分析ADFMChR呈剂量依赖性诱导CoC1细胞凋亡,ADFMChR（10．0,30．0μmol／L）处理CoC1细胞48h,凋亡率分别为33．07％和73．70％,均高于相应浓度白杨素诱导凋亡率（21．70％、40．00％）;ADFMChR（30μmol／L）处理CoC1细胞48h的DNA琼脂糖凝胶电泳呈现典型梯形条带,加用PPARγ／阻断剂（GW9662）后条带消失;Western印迹分析ADFMChR以剂量依赖方式上调CoC1细胞PPA脚和Bax蛋白表达,下调NF-κB和Bcl-2蛋白表达。结论ADFMChR通过活化PPARκ抑制NF-κB和Bcl-2表达,上调Bax,诱导CoC1细胞凋亡。     

Effect of U—74389G on apoptosis and bcl—2 expression following traumatic brain injury in rats

Objective: To investigate the relationship between oxidative stress and apoptosis and bcl-2 expression fol-lowing traumatic brain injury (TBI). Methods: Male Sprague-Dawley ras were subjected to lateral fluid percussionbrain injury (FPBI) of moderate severity. U-74389G (20 mg/kg) were administered intravenously before FPBI. Theneurological functions were measured by beam-walk task (BWT) and beam-balance task (BBT). In addition to mor-phological evidence of apoptosis, TUNEL histochemistry was used to identify DNA fragmentation in situ with both lightand electron microscopic levels. The internucleosomal fragments of DNA in apoptotic cells were examined using agarose