IL-1β对体外培养的兔软骨终板细胞生物学行为的影响

目的:探讨IL-1β对体外培养的兔软骨终板细胞生物学行为的影响。方法:分离培养兔软骨终板细胞,通过甲苯胺兰染色等方法鉴定后,分别加入不同浓度的IL-1β,用MTT测定不同时间点软骨终板细胞增殖活性的变化;免疫组化法检测Bcl-2、Bax、Fas、caspase-3表达的变化;RT-PCR检测蛋白聚糖、Ⅱ型胶原mRNA的表达变化。结果:50ng/ml、100ng/ml浓度IL-1β可抑制细胞增殖;10ng/ml、50ng/ml浓度IL-1β可促进Bax、Fas、caspase-3的表达,但仅浓度为50ng/ml时才可降低Bcl-2的表达;10ng/ml、50ng/ml浓度IL-1β可降低Aggrecan、Collagen IIa mRNA的表达。结论:IL-1β可抑制软骨终板细胞的增殖及基质合成,促进软骨终板细胞凋亡,从而促进椎间盘的退变。     

椎间失稳致兔腰椎软骨终板退变的形态学研究

目的:研究兔腰椎软骨终板退变中的形态学变化.方法:将24只新西兰白兔随机均分为实验组和对照组,实验组通过切除兔腰椎棘上、棘间韧带,咬除部分关节突关节,分离椎旁肌造成腰椎软骨终板退变模型,分别于术后12、24、36周对腰椎摄X线片,行HE及甲苯胺蓝染色观察软骨终板形态学的变化;并行软骨终板蛋白多糖及胶原检测.结果:X线片示软骨终板随时间的延长而逐渐钙化,且实验组较对照组钙化明显;随软骨终板退变进程,HE染色示实验组软骨终板较对照组明显变薄,潮标明显前移,血管芽周嗣钙化;甲苯胺蓝染色示实验组软骨终板染色逐渐变淡,细胞层数明显变少;蛋白多糖含量及胶原释放量逐渐降低,不同时间段实验组明显较对照组低(P<0.01).结论:椎间失稳可导致软骨终板形态学及细胞外基质变化,造成软骨终板退变,为进一步研究其退变机理提供理论依据.     

兔软骨终板退变过程超微结构的观察

目的：研究兔软骨终板退变过程中的超微结构变化。方法：将18只新西兰白兔随机均分为实验组和对照组，实验组通过切除兔腰椎棘上、棘间韧带，咬除部分关节突关节，分离椎旁肌造成腰椎软骨终板退变模型，分别于术后12、24、36周对腰椎摄X线片，并行扫描电镜观察软骨终板超微结构的变化。结果：X线片示软骨终板随时间的延长而逐渐钙化，且实验组较对照组钙化明显；扫描电镜示实验组软骨终板随时间延长胶原纤维逐渐变细、排列紊乱、出现裂隙，蛋白多糖丢失加剧，且上述变化较对照组显著。结论：椎间失稳可造成软骨终板退变，导致软骨终板基质的破坏。     

动力失衡模型兔颈椎间盘病理改变及终板软骨细胞的迁移凋亡规律

背景:颈肌在维持椎体力学平衡以及颈椎病致病的每一阶段、每一环节都发挥着重要的作用,而且是临床多种颈部症状的主导病因,颈椎力学失平衡及颈椎间盘的退变可看作是以颈肌为主的软组织病变的结果。目的:观察颈前肌短缩痉挛所致颈椎动力失衡模型兔颈椎间盘终板软骨细胞的病理变化,以及异常应力下椎间盘各结构细胞的凋亡规律。方法:健康成年新西兰白兔28只,随机分成模型组(n=14)、假手术组(n=14)。模型组于甲状软骨外下方约1 cm处将双侧胸锁乳突肌用医用硅胶硬管垫起致其短缩,建立颈椎动力失衡模型;假手术组仅暴露双侧胸锁乳突肌分离其中部后,直接逐层缝合。于造模后2个月同一时间取材。颈椎间盘及终板软骨组织切片苏木精-伊红染色,光镜下观察颈椎间盘终板软骨细胞的迁移变化情况,运用TUNEL法检测颈间盘终板软骨、纤维环中细胞的凋亡情况。实验方案经北京中医药大学第三附属医院动物实验伦理委员会批准。结果与结论:(1)模型组颈椎间盘发生明显的病理学变化,而假手术组未见明显改变;模型组颈椎间盘终板关节软骨区与纤维环区界限明显,未发现明显细胞迁移现象,但椎间盘终板生长软骨区细胞已明显向关节软骨区迁移;模型组椎间盘关节软骨...     

TNF-α对兔软骨终板细胞增殖、凋亡及基质形成的影响

目的：探讨TNF-α对体外培养的兔软骨终板细胞增殖、凋亡及基质形成的影响。方法:分离培养并鉴定兔软骨终板细胞后，分别加入不同浓度的TNF-α，用 MTT测定不同时点软骨终板细胞增殖活性的变化；免疫组化法检测Bcl-2、Bax、Fas、caspase-3 表达的变化；RT-PCR 检测培养过程中蛋白聚糖、Ⅱ型胶原 mRNA 的表达变化。结果:50 μg/L、100 μg/L浓度TNF-α可抑制细胞增殖；50 μg/L浓度TNF-α可降低 Bcl-2的表达，10 μg/L、50 μg/L浓度TNF-α均可促进Bax、Fas、caspase-3 的表达；10 μg/L、50 μg/L浓度TNF-α可降低collagen IIa mRNA 的表达，TNF-α 为50 μg/L浓度时才可降低aggrecan mRNA 的表达。结论:TNF-α可抑制软骨终板细胞的增殖及基质合成，促进软骨终板细胞促凋亡因子的生成。     

bFGF对人关节软骨细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对体外单层培养的人负重关节软骨细胞的增殖和凋亡的影响。方法：对8例来自人负重关节软骨细胞系进行体外单层传代培养，从第2代起试验组培养液中加入bFGF，观察细胞的倍增时间(DT)、流式细胞分析细胞增殖周期和凋亡指数，并与无bFGF组相比较。结果：与未加bFGF相比较，加用10μg／ml bFGF后，DT缩短，S期细胞数升高，细胞凋亡无变化。结论：bFGF能促进培养的人关节软骨细胞生长，不引起细胞凋亡。     

软骨终板干细胞外泌体活化巨噬细胞自噬抑制软骨终板炎的研究

目的 探讨软骨终板干细胞外泌体通过调控巨噬细胞进而抑制软骨终板炎的机制。方法 采用免疫组化检测炎症因子和巨噬细胞在不同分级分期退变的软骨终板组织中的表达和浸润,NTA(nanoparticle tracking analysis)和透射电镜鉴定外泌体,外泌体质谱检测和KEGG富集分析预测相关信号通路,Western blotting和免疫荧光检测巨噬细胞中自噬因子LC3A/B和炎症因子IL-1β、IL-6及TNF-α的蛋白水平。结果 在临床标本中,软骨终板的退变程度与巨噬细胞浸润数量IL-1β水平均正相关;40μg/ml软骨终板干细胞外泌体可有效活化巨噬细胞自噬,使P62表达降低,LC3B表达增加;自噬激动剂Rapamycin(20μmol/ml)则降低了TBHP诱导巨噬细胞炎症因子IL-6、IL-1β的水平。结论 软骨终板干细胞外泌体通过活化巨噬细胞自噬,降低其炎症因子表达,延缓了软骨终板炎的进程。     

力学刺激在椎体软骨终板退变中的作用及机制

终板的重要功能是传递应力和供给营养。终板退变可能会诱发或促进椎间盘退变,引起一系列严重影响人们健康和生活质量的脊柱疾患。终板软骨细胞可以感受力学刺激。力学刺激是影响终板退变的重要因素,不适宜的力学刺激会加速终板退变。本文回顾力学刺激对终板软骨细胞凋亡、合成抑制、钙化及细胞外基质降解诸方面的影响,并总结力学刺激导致椎体终板退变的相关机制。力学刺激诱发的终板退变是由各种信号转导因子构成的复杂信号通路网络精细调节,包括NF-κB、Wnt、Hedgehog、MAPK、RhoA/Rock-1、AKT/mTOR、TGF-β、miRNA相关信号通路。同时,本文对这些通路相互联系进行梳理总结。多个信号通路可以共同作用调节终板软骨细胞代谢,并导致终板退变。本文希望通过相关机制系统回顾,给终板退变早期诊断及针对性治疗带来有益的启示。     

软骨终板干细胞外泌体活化巨噬细胞自噬抑制软骨终板炎的研究北大核心CSCD

目的探讨软骨终板干细胞外泌体通过调控巨噬细胞进而抑制软骨终板炎的机制。方法采用免疫组化检测炎症因子和巨噬细胞在不同分级分期退变的软骨终板组织中的表达和浸润,NTA(nanoparticle tracking analysis)和透射电镜鉴定外泌体,外泌体质谱检测和KEGG富集分析预测相关信号通路,Western blotting和免疫荧光检测巨噬细胞中自噬因子LC3A/B和炎症因子IL-1β、IL-6及TNF-α的蛋白水平。结果在临床标本中,软骨终板的退变程度与巨噬细胞浸润数量IL-1β水平均正相关;40μg/ml软骨终板干细胞外泌体可有效活化巨噬细胞自噬,使P62表达降低,LC3B表达增加;自噬激动剂Rapamycin(20μmol/ml)则降低了TBHP诱导巨噬细胞炎症因子IL-6、IL-1β的水平。结论软骨终板干细胞外泌体通过活化巨噬细胞自噬,降低其炎症因子表达,延缓了软骨终板炎的进程。     

IL-1β诱导小鼠椎间盘软骨终板细胞炎性退变的细胞模型研究

目的通过IL-1β体外诱导小鼠椎间盘软骨终板细胞建立退变细胞模型,并研究其作用机制。方法 10 ng/ml IL-1β诱导小鼠椎间盘软骨终板细胞24 h后,用cck-8法检测不同时间点IL-1β对软骨终板细胞增殖作用的影响,透射电镜观察细胞退变情况,细胞免疫荧光和Western blot检测细胞退变相关蛋白表达。结果诱导组细胞较正常组细胞增殖减慢,细胞肥大化比例增加,出现线粒体肿胀、核扭曲、染色质边集,染色质及胞质松散等细胞坏死及凋亡表现,且colⅡ、Aggrecan表达下降,colⅩ、MMP-1、MMP-3、MMP-13、TIMP-1表达增加。结论 IL-1β可诱导软骨终板细胞发生退变。     

凋亡调节蛋白Fas和Caspase-3在乳腺癌中的表达及意义

目的观察人乳腺癌组织中凋亡调节蛋白Fas和Caspase-3的表达,探讨Fas和Caspase-3与乳腺癌发生、发展的关系。方法收集手术切除的人乳腺癌组织和癌旁相对正常乳腺组织(距癌组织5 cm以上),用免疫组织化学方法对23例乳腺癌标本进行检测。结果在相对正常乳腺组织和乳腺癌组织中Fas蛋白的阳性表达率分别为86.9%和47.3%;乳腺癌组织中Fas的阳性表达率明显低于相对正常乳腺组织。在相对正常乳腺组织和乳腺癌组织中Caspase-3的阳性表达率分别为82.6%和43.5%;乳腺癌组织中Caspase-3的阳性表达率明显低于相对正常乳腺组织。乳腺癌组织中caspase-3与Fas的表达率均与淋巴结转移无关。相关性分析表明,乳腺癌癌中的表达caspase-3与Fas表达呈正相关。结论乳腺癌组织中Fas和Caspase-3表达下调,使肿瘤抗凋亡机制过度激活,可能在乳腺癌的发生和发展过程中起重要作用。     

活血通脉汤对大鼠脑缺血再灌注损伤诱导的凋亡蛋白Fas、Caspase-3表达的影响

目的探讨活血通脉汤对大鼠脑缺血再灌注损伤过程中所诱导的凋亡蛋白Fas、Caspase-3表达的影响。方法制作脑缺血再灌注模型，80只大鼠随机平均分为4组，假手术组、模型组、阿司匹林组、活血通脉汤组，每组20只。应用免疫组织化学方法分别检测每组大鼠脑缺血再灌注12、24h脑组织Fas、Caspase-3表达的情况。结果模型组大鼠脑缺血再灌注12、24h脑组织Fas、Caspase-3表达水平明显高于假手术组（P〈0．01）；活血通脉汤组大鼠各时间点脑组织Fas、Caspase-3表达水平明显低于模型组（P〈0．05，P〈0．01），且与阿司匹林组无显著差异性（P〉0．05）。结论活血通脉汤能降低大鼠脑组织Fas、Caspase-3表达水平，减轻缺血脑组织神经元坏死的程度，对大鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用，机制与降低Fas、Caspase-3表达水平有关。     

Involvement of Fas/Fas ligand system-mediated apoptosis in the development of concanavalin A-induced hepatitis

Concanavalin A (Con A)-induced hepatitis is an experimental hepatitis model in which hepatic injury is caused by the action of cytokines produced by T cells. Using IFN-γ-deficient mice, we previously demonstrated that IFN-γ plays a central role in Con A-induced hepatitis. Here, we show that development of the disease is completely suppressed in gld/gld mice, in which Fas ligand is defective. In contrast, suppression of the disease in lpr/lpr mice was incomplete, since a small amount of the fas mRNA was produced in these mice. The data indicate that activation of the Fas/Fas ligand system is a necessary step in the development of Con A-induced hepatitis. Furthermore, we found that not only fas but also caspase-1 expression was reduced in IFN-γ-deficient mice. Since caspase-1 is an integral component of Fas signal transduction, these observations suggest that IFN-γ-induced activation of both fas and caspase-1 expression causes enhancement of hepatocyte apoptosis resulting in the development of hepatitis.     

癫痫大鼠海马神经元Fas、FasL和Caspase-3的表达

目的观察Fas、FasL和Caspase-3在癫痫大鼠海马神经元中的表达,探讨Fas、FasL和Caspase-3表达与癫痫的关系,为癫痫的生物治疗提供实验依据。方法通过腹腔注射戊四氮建立癫痫大鼠模型,用免疫组织化学方法和图像分析技术检测Fas、FasL和Caspase-3在癫痫大鼠海马神经元中的表达。结果 Fas、FasL和Caspase-3在癫痫大鼠海马神经元中的表达水平和阳性细胞数量与正常对照组相比均明显增多(<0.05)。结论 Fas、FasL和Caspase-3在癫痫大鼠海马过表达。     

Fas与体外胸腺细胞自发凋亡的关系

目的 探讨体外培养的胸腺细胞表达Fas、Fas-L与自发凋亡的关系。方法 应用流式细胞术,检测体外培养不同时间的胸腺细胞的凋亡率及Fas、Fas-L表达的阳性率。结果 体外培养的胸腺细胞自发凋亡率和Fas表达阳性率,均呈时间依赖性增加,Fas-L在体外培养24h时明显增加,体外培养的胸腺细胞Fas的表达与自发凋亡明显相关。结论 Fas是介导体外培养的胸腺细胞自发凋亡的重要分子。     

缺氧缺血性脑病新生大鼠心肌Caspase-3、Cyt C蛋白表达与心肌细胞凋亡的关系

目的:探讨缺氧缺血性脑病(HIE)新生大鼠心肌Caspase-3、Cyt C蛋白的表达及其与心肌细胞凋亡的关系。方法:7日龄新生大鼠制备HIE经典模型。分为HIE组和假手术对照(NC)组,两组分别于HIE后1小时、4小时、12小时、24小时、48小时、72小时、7天取心脏组织,应用免疫组织化学法检测心肌组织Caspase-3、Cyt C蛋白的表达;应用TUNEL法检测心肌细胞凋亡。结果:HIE组24小时Caspase-3出现阳性细胞表达增多,48小时达高峰,24小时~7天Caspase-3的表达均明显高于NC组(P<0.05)。HIE组24小时Cyt C出现较多的阳性细胞表达,72小时达高峰,至7天时仍高于NC组(P<0.05)。HIE组12小时心肌阳性凋亡细胞开始增多,72小时达高峰,12~72小时各时间点阳性凋亡细胞明显高于NC组(P<0.05)。Cas-pase-3、Cyt C蛋白表达与凋亡细胞数二者之间均呈直线正相关。结论:HIE新生大鼠心肌细胞Caspase-3、Cyt C蛋白表达增加,提示Caspase-3、Cyt C蛋白表达对心肌细胞凋亡起促进作用。     

桥本甲状腺炎中细胞凋亡与增殖关系的实验研究

目的探讨桥本甲状腺炎(HT)中Fas、FasL与增殖细胞核抗原(PCNA)的关系.方法以非毒性甲状腺肿(NTG)的标本为对照,采用TUNEL及免疫组织化学双标记法,分别检测16例HT患者甲状腺标本中细胞凋亡水平及PCNA、Fas、FasL的表达及分布.结果凋亡率(AR)在NTG组为(0.9±0.64)%,HT组为(33.92±14.69)%;增殖率(PR)分别为(4.23±2.36)%和(8.45±3.61)%.AR、PR在HT组均显著高于NTG组(P＜0.01).HT中部分甲状腺滤泡细胞PCNA与Fas、FasL共表达;浸润淋巴细胞PCNA高表达,Fas/FasL弱或无表达.结论HT中甲状腺滤泡细胞凋亡与增殖活动均活跃,凋亡水平增高更为显著;浸润淋巴细胞增殖活跃,凋亡少见.其凋亡和增殖的失平衡可能是HT病理改变的主要机制之一.     

针刺对AD模型大鼠海马凋亡相关蛋白Caspase-3的影响

目的:观察针刺对AD模型大鼠海马凋亡相关蛋白Caspase-3的影响。方法:SD大鼠20只,连续6w腹腔注射D-半乳糖(120mg·kg-1)和亚硝酸钠(45mg·kg-1)建立AD模型后随机分成模型组、针刺组(n=10),同时设立非模型组(n=10)。造模后第21d,针刺组大鼠予以针刺百会和肾俞穴治疗,而模型组大鼠不予以治疗。针刺治疗结束后大鼠立即处死,采用免疫组化法检测非模型组、模型组、针刺组大鼠海马Caspase-3表达。结果:免疫组化结果显示模型组大鼠海马Caspase-3表达明显增加,与对照组比较有显著差异(P0.01);而针刺组Caspase-3的表达明显减少,与模型组比较(P0.01)。结论:针刺可抑制大鼠海马Caspase-3表达。