温敏型液态氟碳纳米粒声致相变及体外超声显像

目的制备一种脂质包裹液态氟碳(PFP)的新型温敏型纳米粒(HSNP),观察其于加热和低强度聚焦超声(LIFU)辐照下的相变情况,体外检测其超声显影效果。方法采用薄膜分散法制备包裹PFP的HSNP。检测其物理性质;光镜下观察HSNP加热下的相变情况;制备内含HSNP高分子聚丙烯酰胺凝胶模型,同时建立含磷酸盐缓冲液(PBS)和脂质悬液的凝胶模型作为对照,观察LIFU辐照后凝胶模型的超声显影效果。结果成功制备包裹PFP的HSNP,其外观呈乳白色混悬液,镜下微球大小均一,形态规则,平均粒径(507.9±101.7)nm,平均电位(-5.87±4.41)mV。HSNP于45℃时开始转变为微气泡,随温度升高气泡随之增多增大。LIFU辐照前,基波和谐波下含PBS和脂质悬液凝胶模型呈无回声,含HSNP凝胶模型基波和谐波呈无回声为主伴散在点状高回声,LIFU辐照后,含PBS和脂质悬液凝胶模型基波下呈散在点状高回声,谐波下未见明显改变,含HSNP凝胶模型基波下呈密集点状强回声,谐波下呈细密点线状高回声;辐照后含HSNP凝胶模型平均超声灰度值(161.13±2.74)明显高于含PBS(24.09±2.38)和脂质悬液(25.03±2.50)凝胶模型(P均0.05)。结论本研究制备包裹PFP的HSNP为新型超声造影剂,可声致相变,体外可实现增强超声显影。     

叶酸受体靶向高分子相变超声造影剂的制备及体外寻靶实验研究

目的制备一种叶酸受体靶向的相变超声造影剂,观察其体外细胞靶向效果及超声显影情况。方法采用单乳化法制备包裹液态氟碳的高分子纳米微球,通过碳二亚胺法连接叶酸配体制备叶酸受体靶向的相变超声造影剂,以人卵巢癌SKOV3细胞验证其体外细胞靶向性能,以高强度聚焦超声(HIFU)体外辐照实验观察其超声显影情况。结果所制备叶酸受体靶向高分子相变超声造影剂平均粒径为(229.13±13.46)nm,体外细胞寻靶实验显示靶向造影剂与SKOV3细胞大量结合,而普通造影剂组与游离叶酸干预组未见明显特异性结合。造影剂溶液经一定功率HIFU辐照后,超声显影效果较辐照前明显增强。结论成功制备了叶酸受体靶向包裹液态氟碳的高分子造影剂,对高表达叶酸受体的SKOV3细胞具有良好靶向性,并具备HIFU辐照后增强超声显影的特性,有望成为卵巢癌靶向显影与治疗的理想分子探针。     

包裹液态氟碳的高分子超声造影剂的制备及体外显影实验

目的制备一种新型超声造影剂——液态氟碳高分子微球,观察其体外物理特性及超声、CT显影效果。方法采用乳化-蒸发法制备包裹液态氟碳的高分子微球;以光镜、扫描电镜观察微球形态、分布,以激光粒度和电位分析仪检测微球粒径、电位;DiI着色后,于荧光显微镜下观察微球结构和荧光强度;行体外超声和CT,观察其显影效果。结果所制备的液态氟碳高分子微球外观为乳白色混悬液,形态规则,呈球包球形;平均粒径为（413±32）nm,平均电位为（-2.42±5.71）mV;荧光染色后微球的乳酸/羟基乙酸共聚物（PLGA）外壳呈环形红色荧光,而内部包绕的液态氟碳不发光、呈黑色;体外超声与CT显影效果好。结论成功制备的液态氟碳高分子微球粒径小,稳定性好,体外可同时增强超声和CT,有望成为一种新型的多功能超声造影剂。     

靶向EGFRvⅢ包裹液态氟碳的高分子纳米球的制备及其体外靶向能力的评价

目的制备靶向表皮细胞生长因子受体突变体Ⅲ(EGFRvⅢ)并包裹液态氟碳高分子纳米球,评价其性质和体外靶向结合能力。方法采用Western Blot和流式细胞术验证抗EGFRvⅢ单克隆抗体(4G1)的特异性;双乳化溶剂挥发法制备包裹液态氟碳的高分子纳米球(P-NPs),光镜和扫描电镜观察其形态及分布;激光粒径仪检测其粒径及电位;碳二亚胺法耦联4G1制备P-NPs-4G1,流式细胞术观察二者连接情况;超声观察其体外经低强度聚焦超声(LIFU)致相变后的表现;流式细胞术和共聚焦显微镜检测P-NPs-4G1体外靶向结合能力。结果 P-NPs-4G1粒径为(563.8±60.3)nm,Zeta电位为(-32.4±3.37)mV;4G1与P-NPs的连接率为(97.37±1.57)%;P-NPs-4G1在体外经LIFU辐照后可增强其显像效果;体外靶向实验证实P-NPs-4G1可与F98__(npEGFRvⅢ)(EGFR-/EGFRvⅢ+)细胞特异性结合,且不与F98EGFR(EGFR+/EGFRvⅢ-)细胞结合。结论本研究成功制备P-NPs-4G1,经体外LIFU辐照后可显著增强超声显像效果,同时可与F98npEGFRvⅢ细胞特异性结合。     

载超顺磁性氧化铁高分子液态氟碳纳米粒的制备及体外显像

目的制备一种能同时用于超声造影及MR成像的多模态造影剂,观察其体外成像效果。方法采用双乳化法合成载超顺磁性氧化铁（SPIO）纳米颗粒及全氟己烷（PFH）的高分子微球（s-PFH／PLGA）,检测其一般特性及光声信号。对不同浓度的s—PFH／PLGA水囊模型进行超声显影,以JC200聚焦超声肿瘤治疗系统辐照后观察回声强度变化;对不同铁含量的s—PFH／PLGA进行MR成像。结果透射电镜下s—PFH／PLGA呈球形,SPIO颗粒均匀分布在外壳上,平均粒径（738．9±158．4）nm,平均电位（-15．9士6．9）mV,并检测到明显光声信号。体外超声显像中s—PFH／PLGA呈点状高回声,HIFU辐照后回声强度增强。s-PFH／PLGA在T2wI中呈负增强显像;随着铁含量增高,MRI信号呈降低趋势。结论成功制备的载SPIO及PFH多模态造影剂具有体外超声、MR显影功能。     

液态氟碳纳米粒液-气相变治疗肝癌的体外实验

目的探讨低强度聚焦超声(LIFU)辐照包裹液态氟碳(PFP)脂质纳米粒(L-NP)致液-气相变(ADV)对肝癌HepG2细胞凋亡和存活的影响。方法制备包裹PFP的L-NP。在加热条件下光镜观察包裹PFP的L-NP相变情况,超声观察LIFU辐照后包裹PFP的L-NP相变情况,荧光显微镜观察人肝癌细胞吞噬L-NP情况,LIFU辐照靶向组、非靶向组、对照组肝癌细胞后应用流式细胞术检测肝癌细胞凋亡情况,CCK-8检测肝癌细胞存活情况。并进行统计学分析。结果包裹PFP的L-NP在44.5℃时开始出现ADV,随温度升高相变纳米粒由少到多,由小到大,体积达到一定程度时瞬间爆破。包裹PFP的L-NP经LIFU辐照后声像图回声较辐照前增强。靶向L-NP能特异性聚集到肝癌细胞周围并被肝癌细胞吞噬。LIFU辐照后,靶向组肝癌细胞凋亡率[(95.86±1.96)%]高于非靶向组[(17.40±2.20)%]和对照组[(7.70±1.19)%],存活率[(49.21±3.04)%]低于非靶向组[(84.24±2.70)%],差异均有统计学意义(P均0.05)。结论 LIFU辐照可致靶向到肝癌细胞的包裹PFP的L-NP发生ADV,从而促使其死亡,抑制肝癌细胞增殖。     

光声/超声实时双模态显影纳米粒制备及示踪实验

目的研制一种包裹纳米炭和液态氟碳的纳米粒(CNPs),并验证其光声/超声实时双模态示踪能力。方法采用双乳化法制备CNPs。于光镜及透射电镜下观察并通过激光粒径仪检测CNPs的基本性质;以激光仪辐照CNPs,观察其液气相变情况;于激光共聚焦显微镜下观察荧光标记的CNPs被巨噬细胞吞噬的情况;激光辐照后观察CNPs体外增强光声/超声实时双模态显影情况;进行在体实验观察CNPs增强光声/超声实时双模态显影示踪VX2荷瘤兔腘窝转移淋巴结的效果。结果成功制备CNPs,其平均粒径为(483.32±45.09)nm,Zeta电位为(-26.30±5.02)mV;且经激光辐照后,可发生液气相变;与巨噬细胞共孵育后,CNPs大量被巨噬细胞吞噬;CNPs在体外、体内均具有良好的光声显影与超声造影效果,且CNPs浓度越高,平均光声信号值及平均灰度值越大。结论 CNPs可在激光辐照后发生液气相变,具备光声成像与超声造影的实时双模态显影能力,并可在活体实验中示踪兔恶性肿瘤转移淋巴结。     

链霉亲和素化载紫杉醇相变型PLGA纳米粒的制备及体外超声显影

目的制备链霉亲和素化载紫杉醇相变型PLGA纳米粒(PTX-PLGA-SA/PFPs),并观察其体外低强度聚焦超声(LIFU)致相变后超声增强显影特性。方法采用单乳化法(O/W)制备载紫杉醇相变型PLGA纳米粒,高效液相色谱法检测紫杉醇包封率;碳二亚胺法连接链霉亲和素(SA),共聚焦激光显微镜观察二者连接情况,流式细胞术检测二者链接率;体外LIFU致相变观察超声增强显影情况。结果制备的纳米粒粒径为(322.2±85.6)nm,表面电位(-5.66±3.46)mV。紫杉醇的包封率及载药量分别为(71.56±6.51)%、(6.57±0.61)%,与链霉亲和素的连接率为(97.16±1.20)%。LIFU功率7.5 W作用3min时可明显增强该纳米粒在体外的B-mode及造影模式下的超声显影。结论成功制备了PTX-PLGA-SA/PFPs纳米粒,其紫杉醇包封率高、链霉亲和素连接率高,体外声致相变后可显著增强超声显影。     

载Bi2S3液态氟碳纳米粒的制备及体外多功能显影

目的制备新型载Bi2S3液态氟碳纳米粒,观察其特性及其体外多功能显影效果。方法采用旋转蒸发法制备载Bi2S3液态氟碳纳米粒(Bi2S3-PFH),检测其理化性质。对不同浓度Bi2S3-PFH纳米粒进行超声显像,并观察经低强度聚焦超声(LIFU)仪器辐照后的图像变化。对不同浓度Bi2S3-PFH纳米粒进行CT显像。结果 Bi2S3-PFH为棕色混悬液;显微镜下呈球形,平均粒径为(487.2±14.5)nm,Zeta电位为-(18.8±1.6)mV;随着纳米粒浓度的增加,体外超声信号强度增强,且经LIFU辐照后回声强度进一步增强。体外CT值呈明显的浓度依赖性增高。结论成功制备的新型载Bi2S3液态氟碳纳米粒可用于体外超声、CT显影。     

靶向VEGFR2光声/超声双模态造影剂的制备及体外寻靶实验研究

目的制备一种特异性靶向新生血管内皮细胞的光声/超声双模态造影剂,探讨其体外寻靶能力及双模态显影效果。方法采用多步乳化法制备载有印度墨水和液态氟碳的高分子造影剂,用碳二亚胺法将造影剂与抗血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)单克隆抗体相偶联,制备出靶向VEGFR2高分子造影剂(Vi-PFH-PLGA)。检测该造影剂的一般特性、体外寻靶能力及双模态显影效果,并与非靶向高分子造影剂进行比较。结果所制备的靶向高分子造影剂的平均粒径为(565.5±15.6)nm,间接免疫荧光法观察到抗体成功的连接到造影剂表面,流式细胞仪测得抗体微球连接率为99.72%,体外寻靶能力实验显示较多的靶向造影剂呈花环状牢固的聚集在人脐静脉内皮细胞HUVEC表面,而非靶向组和抗体干预组未见造影剂与HUVEC的特异性结合。体外光声/超声显影实验显示,经脉冲激光辐照后,靶向造影剂组可检测到明显的光声信号和超声信号,与非靶向造影剂相比差异无统计学意义(P均0.05)。结论成功制备出靶向VEGFR2的光声/超声双模态造影剂,该造影剂在体外与HUVEC细胞具有较强的靶向结合能力且具备较好的光声/超声双模态显影效果。     

自制靶向卵巢癌的纳米超声造影剂特性及裸鼠体内造影增强实验

目的探讨自制靶向卵巢癌的纳米超声造影剂特性和体内造影增强效果。方法应用冷冻干燥-超声法制备普通纳米脂质膜微泡,通过生物素-亲和素桥连法将生物素化的促黄体生成素释放激素（LHRH）与普通纳米脂质膜微泡连接,制备靶向卵巢癌的纳米微泡（LHRH-N-Mb）;观察其镜下形态,计算浓度以及室温下保存时间;以Zeta检测仪检测粒径范围、表面电位;光镜下观察LHRH-N-Mb与LHRH受体过表达的人卵巢癌OVCAR-3细胞靶向结合情况;观察LHRH-N-Mb增强裸鼠卵巢癌移植瘤显像情况。结果LHRH-N-Mb成功制备,光镜下外观圆整,分布均匀,浓度为（2．24±0．42）×10^9／ml,粒径范围为369～618nm,平均（511．76±64．25）nm,表面电位为-14．6mV。室温下保存14天后,LHRH-N-Mb上述理化特性与刚制备时的差异无统计学意义（P〉O．05）。光镜下OVCAR-3细胞周围可见LHRH-N-Mb围绕或黏附,呈花环样结构,这种靶向结合能被生物素化的LHRH抗体预先阻断。LHRH-N-Mb能增强裸鼠卵巢癌移植瘤血管及实质显像效果。结论通过冷冻干燥超声法和生物素-亲和素桥连法制备的LHRH-N-Mb造影剂具有粒径小、稳定性高,体外能靶向高效结合人卵巢癌OVCAR-3细胞,在裸鼠体内有明显增强显像效果。     

低强度聚焦超声靶向爆破微泡

目的 探讨自制低强度聚焦超声（LIFU）体外靶向爆破微泡范围、空间分布,及在兔肝脏组织中应用LIFU辐照载紫杉醇脂质微泡（PLM）的定位控释情况。方法 ①采用4种不同声强（0.3、0.6、0.9、1.2 W/cm2）LIFU（频率1 MHz,焦距160 mm,占空比50%）分别辐照含脂质微泡的水囊,同时从不同切面观察并记录水囊内微泡爆破范围及空间分布形态;②选取新西兰大白兔10只,随机平均分为聚焦超声组（A组）和非聚焦超声组（B组）;对实验兔静脉注射PLM后,对A、B组分别采用LIFU和非聚焦超声定位辐照肝脏2 min;辐照后1 h处死实验兔,取焦域中心及距离中心1 cm、2 cm、3 cm处的肝脏组织,采用反相高效液相色谱法测定各肝脏组织内的紫杉醇含量。结果 ①LIFU体外定位爆破微泡范围局限、形状规则,爆破范围随声强增高而增大;②A组辐照中心处紫杉醇浓度最大,距离中心处越远,紫杉醇浓度越低（F=201.81,P〈0.05）;B组中各位置紫杉醇浓度的差异无统计学意义（F=1.36,P〉0.05）;辐照中心处,A组紫杉醇浓度高于B组（t=5.28,P〈0.05）。结论 LIFU能够实现体内外靶向爆破微泡,其聚焦部位和微泡爆破范围可调。     

含RGD修饰的丹参酮ⅡA多级靶虎纳米粒的质量评价

目的探讨丹参酮ⅡA多级靶向纳米粒的制备及其质量评价。方法采用乳化溶剂蒸发法制备丹参酮ⅡA多级纳米粒;测定丹参酮ⅡA多级靶向纳米粒的粒径分布及纳米微粒表面结构;并检测丹参酮ⅡA多级靶向纳米粒的载药量、包封率及体外药物释放规律。结果课题组制备的丹参酮ⅡA多级靶向纳米粒,大小均匀,载药纳米粒的平均粒径为190nm,Zeta电位为4．3mV,包封率（94．12±5．20）％,载药量（2．05±0．12）％。与游离的丹参酮ⅡA单体相比,丹参酮ⅡA多级靶向纳米粒释放速度明显减慢,在120h累积释放量为72．59％。结论采用乳化溶剂蒸发法成功制备了含RGD修饰的丹参酮ⅡA多级靶向纳米粒。与丹参酮ⅡA单体相比,制备成纳米制剂后,多级靶向载药纳米粒能随着时间的延长将药物逐步释放出来,具有良好的缓释特征。     

金属植入物对离体猪肝射频消融的热影响

目的探讨金属植入物对射频消融的热影响。方法选取7个离体猪肝,分别建立银夹及125I粒子金属植入物模型。在距离金属植入物1.0cm处进行射频消融,以射频针为对称轴,将金属植入物一侧作为实验组,对侧作为对照组;术中采用测温针多点测温,比较两组间的时间-距离-温度关系,并对两组消融范围进行大体标本测量和光镜组织学分析。结果消融时间分别为8、12、15min时,实验组与对照组的多点平均温度分别为(48.24±18.07)℃和(48.58±17.69)℃、(51.47±19.57)℃和(52.24±19.73)℃、(54.64±19.75)℃和(54.94±19.24)℃,差异均无统计学意义(P均>0.05);12min与15min时,实验组消融范围分别为横径(1.55±0.12)cm、纵径(3.48±0.11)cm及横径(1.89±0.20)cm、纵径(3.72±0.16)cm,对照组分别为横径(1.56±0.12)cm、纵径(3.48±0.11)cm及横径(1.89±0.21)cm、纵径(3.72±0.16)cm,差异均无统计学意义(P均>0.05);两组消融灶光镜下表现相似。结论射频消融离体猪肝时,金属植入物不会造成明显热影响。     

对比观察SonoVue与包裹全氟戊烷的介孔二氧化硅纳米微球在蛋清体模中的高强度聚焦超声增效作用

目的在蛋清体模中比较SonoVue和介孔二氧化硅纳米微球包裹的氟碳化合物增强高强度聚焦超声(HIFU)治疗效果差异,筛选适合HIFU治疗的增效剂。方法将SonoVue和包裹液态全氟戊烷的介孔二氧化硅纳米微球(MSNC-PFP)各0.3ml分别均匀混合到100ml的蛋清体模中,制成SonoVue组和MSNC-PFP组2个实验组,空白组不含增效剂。在B超引导下采用声功率160W的HIFU定点辐照10s,记录辐照区域即刻灰度变化,对比分析辐照后灰度变化区域、损伤体积、损伤形态以及能效因子(EEF)。结果辐照区回声增强范围与损伤大小一致,回声增强范围SMSNC-PFP组SSonoVue组≥S空白组;损伤体积VMSNC-PFP组VSonoVue组≥V空白组;EEFMSNC-PFP组EEFSonoVue组≤EEF空白组。MSNC-PFP组损伤形态皆为圆锥体,偏向换能器方向的损伤边缘类似棉花状,边缘局部有空隙;而SonoVue组和空白组的损伤形状皆为水滴状,边界清晰且无空隙。结论 MSNC-PFP能较SonoVue更有效地提高HIFU治疗效率。