湖北蕲春产凹叶厚朴质量研究(Ⅰ)

目的:研究湖北蕲春产凹叶厚朴的质量.方法:采用高效液相色谱法测定湖北蕲春产凹叶厚朴中厚朴酚与和厚朴酚含量,并与其它不同产地、品种厚朴样品进行比较.结果:蕲春凹叶厚朴的厚朴酚与和厚朴酚含量较低,但符合药典规定.结论:本研究为湖北蕲春产凹叶厚朴药材的品质鉴定提供了依据.     

凹叶厚朴挥发油成分的研究

厚朴来源于木兰科植物厚朴Ｍａｇｎｏｌｉａ　ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓＲｅｈｄ．ｅｔＷｉｌｓ．或凹叶厚朴Ｍ．ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓＲｅｈｄ．ｅｔＷｉｌｓ·ｖａｒ·ｂｉｌｏｂａＲｅｈｄ·ｅｔＷｉｌｓ．的干燥干皮、根应及枝皮。福建是厚朴的主产地之一,药材主要来源为四叶厚朴。厚朴的主要有效成分为厚朴酚等酚类成分和少量挥发油［１］。据报道从日本的和厚朴Ｍａｇｎｏｌｉａｏｂｖａｔａ的树皮中分离出１１个挥发油组分［２］。本文对福建产凹叶厚朴的挥发油成分作了分析,考察了不同树龄及不同部位的样品的挥发油含量,对可能影…     

一株凹叶厚朴内生真菌的分离及其产厚朴酚类物质的初步研究

目的研究凹叶厚朴内生真菌种群的多样性,为更加合理有效的利用药用植物资源提供依据。方法通过微生物方法从秦岭凹叶厚朴中分离纯化内生真菌,采用显微形态观察法对内生真菌进行初步鉴定,以高效液相色谱法分析发酵代谢产物。结果分离得到内生真菌,其中一株经初步鉴定为葡萄孢属,能够产生厚朴酚类化合物。结论凹叶厚朴内生真菌能够提供厚朴资源保护新途径。     

贵州黔北凹叶厚朴HPLC指纹图谱研究

目的建立黔北凹叶厚朴的HPLC指纹图谱分析方法,为控制和评价黔北凹叶厚朴的质量提供依据。方法采用Diamonsil C18(4.6mm×200mm)柱;流动相:乙腈-水,梯度洗脱,检测波长为294nm;以厚朴酚为参照物,对黔北10批不同产地厚朴进行指纹图谱分析。结果建立黔北厚朴的HPLC指纹图谱共有模式,标定了8个共有峰,10批厚朴的相似度在0.921～0.983。结论该方法简便、准确、重复性好。可专属性地研究厚朴的指纹图谱,为有效地控制黔北凹叶厚朴的内在质量提供科学依据。     

HPLC色谱法测定贵州黔北凹叶厚朴中和厚朴酚的含量

目的 建立高效液相色谱法测定贵州黔北凹叶厚朴中和厚朴酚的含量.方法 色谱条件:色谱柱为Diamonsil C<,18>以甲醇-水(78:22)为流动相;流速为1.0mL/min;柱温25℃;检测波长为294nm.结果 和厚朴酚线性范围为0.278 4 μg～0.649 6 μg,r=0.999 5;本品的平均回收率为1...     

凹叶厚朴愈伤组织诱导及其有效成分量变化研究

目的 研究凹叶厚朴愈伤组织的诱导,并对其产生的有效成分厚朴酚与和厚朴酚总量进行检测,以期获得生产药用成分的新途径,补充药材资源的不足。方法 以不同母株种子幼苗的不同营养器官为外植体,采用不同种类及不同质量浓度的植物调节剂诱导愈伤组织,并在继代培养基中加入前体化合物L-苯丙氨酸及D, L, β-苯丙氨酸对愈伤组织进行诱导培养;HPLC法检测不同培养途径获得的愈伤组织中厚朴酚与和厚朴酚量的总和。结果 筛选出最佳愈伤组织诱导培养基为：B₅＋6-BA 2.0 mg/L＋2, 4-D 1.5 mg/L;不同母株种子幼苗诱导的愈伤组织总酚量存在显著差异,质量分数变化范围为0.004%～0.228%;不同营养器官作为外植体诱导的愈伤组织总酚量存在差异,以幼茎为外植体诱导的愈伤组织总酚量最高可达0.25%;继代培养基中添加前体化合物D, L, β-苯丙氨酸,能有效提高愈伤组织总酚量8～10倍。结论 凹叶厚朴愈伤组织中含有少量的厚朴酚及和厚朴酚,不同的母株种子幼苗及不同幼苗器官诱导的愈伤组织总酚量都有差异,D, L, β-苯丙氨酸能有效促进愈伤组织中总酚的合成。     

井冈山产凹叶厚朴挥发油中化学成分分析

目的对井冈山产凹叶厚朴Magnolia officinalis var biloba果实、花、干皮、叶4个部位的挥发油成分进行分析,为厚朴不同部位的入药性质提供参考。方法采用水蒸气蒸馏法提取厚朴4个部位的挥发油,运用气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术对挥发油成分进行分析和鉴定,采用峰面积归一化法确定各成分的质量分数。结果从井冈山产凹叶厚朴的挥发油中共鉴定出75个化学成分,其中果实中鉴定出1-石竹烯、α-蒎烯等42个成分,质量分数占98.7%:花中鉴定出4-羟基-4-甲基-2-戊酮、茨烯等19个成分,质量分数占77.59%:干皮中鉴定出α-按叶油醇、四十四烷等24个成分,质量分数占77.92%;叶中鉴定出1-石竹烯、α-桉叶油醇等32个成分,质量分数占76.48%。1-石竹烯和四十三烷为4个部位共有。结论从凹叶厚朴挥发油成分角度,凹叶厚朴叶可替代厚朴皮入药,果实可以入药,花活性成分量很少,不建议入药。     

基于核磁共振技术比较厚朴与凹叶厚朴醇提物的化学成分

目的:运用核磁共振手段研究并比较厚朴与凹叶厚朴醇提物的化学成分.方法:采用Bruker AVANCE 500Ⅲ型超导脉冲傅里叶变换核磁共振波谱仪,测试两者1H-NMR、13C-qNMR、DOSY谱.1H-NMR的工作频率为500.13 MHz,谱宽为50000.50 Hz.13C-qNMR采集条件:反转门控去耦脉冲序列zgig,扫描次数NS=8192,谱宽SW=230 ppm.DOSY采用标准脉冲程序LEDBPG2S采集,采样温度为298 K,时域点数为4096,采样延迟时间为1.5 s,扫描次数为8,空扫次数为4,梯度持续时间为1.6 ms,线性梯度变化区间为2％～95％.测试溶剂:氘代甲醇.结果:厚朴醇提物的主要成分是厚朴酚,根据氢信号积分值估测含量在90％以上.微量的次要成分为和厚朴酚.凹叶厚朴醇提物的主要成分是和厚朴酚与厚朴酚,前者占比稍多,根据氢信号积分值,估测它们的相对含量约为60％:40％.需要特别指出的是,与厚朴醇提物有所不同,凹叶厚朴醇提物的核磁图谱中还可见微量的酚苷类成分.结论:厚朴、凹叶厚朴主要成分存在显著差异.可以对厚朴、凹叶厚朴进行鉴别和区分.     

施肥、修剪等措施对凹叶厚朴中厚朴酚、和厚朴酚含量累积的影响

目的：提高凹叶厚朴的品质,缩短生产周期,为凹叶厚朴种植提供科学参考依据。方法：本次实验通过采用施肥、修枝、环割、铁丝环扎对凹叶厚朴进行处理,采用HPLC测定两年后厚朴中厚朴酚、和厚朴酚的含量,计算总酚含量增长率。结果：凹叶厚朴中总酚含量累积增长（1,）与肥料中的氮肥、磷肥正相关,与钾肥负相关,回归方程为：Y=1．804＋2．470N＋2．746P-15．616K（r=0．982）。修枝处理的凹叶厚朴中总酚的含量较前期增长了310％,环割处理的凹叶厚朴中总酚的含量较前期增加了125．65％,铁丝环扎处理的凹叶厚朴中总酚的含量较前期增加了343．2％,而同期的空白组中凹叶厚朴中总酚的含量较前期增加了84．62％。实验结果显示不同栽培措施的效果由大到小的顺序是：铁丝环扎〉修枝〉环割。结论：凹叶厚朴中厚朴酚、和厚朴酚含量的积累可以通过改变土壤的肥力、环割、修枝等栽培措施得以提高。     

凹叶厚朴细胞悬浮培养的研究

目的研究凹叶厚朴MagnoliaofficinalisRehd.etils.Subsp.biloba（Rehd.etwils.）Law的细胞悬浮培养。方法以凹叶厚朴茎段诱导的愈伤组织为材料,应用L9（34）正交设计研究植物生长调节剂对凹叶厚朴悬浮细胞生长的影响,通过单因素试验,考察初始接种量、蔗糖浓度、pH值对凹叶厚朴悬浮细胞生长的影响。结果植物生长调节剂6-BA是影响凹叶厚朴悬浮细胞生长的主要因素;最佳初始接种量为8ml;最佳蔗糖浓度为30g/L;最佳pH值为6.5时。结论初步建立了适合凹叶厚朴悬浮细胞培养的体系。     

种源、产地及采收树龄对厚朴药材质量的影响

目的:以厚朴酚类和挥发油类成分为指标,对影响厚朴药材质量的因素进行分析.方法:以厚朴和凹叶厚朴主产区所产的不同树龄厚朴/凹叶厚朴为研究对象,用水蒸汽蒸馏法提取样品中的挥发油,以气相色谱-质谱联用技术对挥发油进行指纹图谱定性和β-桉叶醇含量测定;采用高效液相色谱技术,对厚朴酚类成分进行指纹图谱定性和含量测定.结果:厚朴和凹叶厚朴的液相色谱指纹图谱有7个相同的特征峰,气相色谱-质谱图谱中有20个相同的特征峰.厚朴样品中厚朴总酚的含量均达到药典要求.同产地不同树龄厚朴/凹叶厚朴样品中厚朴总酚的含量差别不大.湖北恩施产厚朴中厚朴总酚的含量较其他产地厚朴样品高,浙江丽水产凹叶厚朴中厚朴总酚的含量较其他产地凹叶厚朴样品低.厚朴中和厚朴酚与厚朴酚的比例基本上大于0.7,凹叶厚朴基本上小于0.7.厚朴中和厚朴酚质量分数(平均值2.89%)明显比凹叶厚朴(平均值0.78%)高.在挥发油方面,树龄小的厚朴和凹叶厚朴样品中β-桉叶醇含量较树龄高者少.结论:产地和生长年限的不同对厚朴质量影响不大,种源是影响厚朴药材质量的主要因素.     

基于CRITIC结合Box-Behnken响应面法的厚朴产地趁鲜加工与炮制一体化工艺研究

目的 应用星点设计-响应面法优化厚朴Magnolia officinalis产地趁鲜加工与炮制一体化工艺。方法 通过CRITIC法计算厚朴饮片外观性状和主要有效成分厚朴酚、和厚朴酚含量3个指标的权重系数,采用Box-Behnken响应面法,以综合评分作为评价指标,考察干燥温度、干燥时间和切丝宽度3个因素对厚朴饮片的影响,优化厚朴产地趁鲜加工与炮制一体化工艺。结果 利用CRITIC法确定厚朴饮片外观性状、和厚朴酚含量、厚朴酚含量的权重系数分别为0.422 1、0.241 0、0.336 9,优选的厚朴饮片炮制工艺为厚朴药材去粗皮后,切7 mm厚的丝装入内膜袋于烘箱内40 ℃发汗16 h后,平铺在烘箱内65 ℃干燥14.5 h。验证结果与预测值之间的RSD为1.76%,说明模型具有良好的预测性。结论 优化的厚朴产地趁鲜加工与炮制一体化工艺简便易行,稳定性好,可为以厚朴为代表的“发汗”类皮类饮片规范化生产和质量标准提高提供参考。     

不同基原厚朴UPLC指纹图谱及化学模式识别研究

目的建立厚朴Magnolia officinalis、凹叶厚朴M. officinalis var. biloba 2种基原厚朴药材的超高效液相色谱(UPLC)指纹图谱,为厚朴药材的质量控制提供参考。方法采用UPLC法,色谱柱为Waters Acquity UPLC~?BEH C₁₈(100 mm×2.1 mm,1.7μm);流动相为乙腈-0.4%磷酸水溶液,梯度洗脱;体积流量为0.4 mL/min;波长294 nm;柱温30℃;进样量为1μL。通过相似度评价、聚类分析(cluster analysis,HCA)、主成分分析(principal component analysis,PCA)、正交偏最小二乘法-判别式分析(orthogonal partial least squares method-discriminant analysis,OPLS-DA)和t检验对2种基原厚朴的指纹图谱进行评价。结果厚朴、凹叶厚朴指纹图谱均具有9个共有峰,通过与对照品比对,指认出其中2个共有峰,分别为厚朴酚、和厚朴酚。13批厚朴指纹图谱与对照指纹图谱的相似度为0.907～0....     

厚朴与凹叶厚朴在湖北地区的生态适宜性研究＊

通过实地调查和文献研究，了解厚朴与凹叶厚朴在湖北地区的种植状况；采集45个野生分布点的海拔、经纬度数据，应用地理信息系统（GIS）提取各样点生境适宜度值，分析厚朴与凹叶厚朴在湖北地区的生长适宜性，为确定湖北区域内厚朴的适宜种植地提供科学依据。本研究结果表明，湖北西南部位于武陵山区的恩施地区及其周边适宜厚朴生长，适宜度值0.4~0.9；湖北东部位于大别山区的黄冈地区适宜凹叶厚朴生长，适宜度值0.8以上；湖北西北部位于武当山区的十堰地区，厚朴与凹叶厚朴均不适宜生长。     

厚朴1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合成酶基因的鉴定及挥发油成分分析

目的在厚朴转录组测序基础上,对厚朴1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合成酶(DXS)基因DXS1(MoDXS1)和厚朴DXS2(MoDXS2)基因进行全面的生物信息学分析。方法利用生物信息学方法对厚朴MoDXS1和MoDXS2基因编码氨基酸序列的理化特性、亲/疏水性、功能域、二级结构、三级结构和系统发育进化等进行分析和预测;采用实时荧光定量PCR分析厚朴MoDXS1和MoDXS2基因的相对表达量。结果 MoDXS1和MoDXS2均为不稳定的亲水蛋白,蛋白结构域分析显示MoDXS1、MoDXS2与其他植物的DXS基因有很高的同源性:二级结构均为混合型结构的蛋白质,α-螺旋是所有基因多肽链中大量的结构元件,利用同源建模法对三级空间结构进行了预测;同源序列对比显示MoDXS家族与烟草、丹参和拟南芥的DXS蛋白具有较高的同源性:系统进化树分析表明MoDXS1与其他被子植物亲缘关系较近,但MoDXS2单独聚为一支;实时荧光定量PCR结果显示DXS1在厚朴与凹叶厚朴间无显著差异,但DXS2在凹叶厚朴中的表达量要明显高于厚朴;GC-MS检测结果表明,3种指标性成分β-石竹烯、β-氧化石竹烯和β-桉叶油醇在凹叶厚朴皮或叶中的量均高于厚朴。结论本研究结果为解析厚朴萜类次生代谢调控机制奠定了理论基础。     

星点设计-响应面法优化厚朴提取工艺

目的: 通过星点设计-响应面法优化厚朴的提取工艺。 方法: 以乙醇体积分数、提取时间、溶媒比为自变量,以浸膏得率、厚朴酚及和厚朴酚含量的总评"归一值"为因变量,通过对自变量各水平进行多元线性回归及二项式拟合,采用响应面法优选提取工艺,并进行预测分析。 结果: 最佳提取工艺为佳10倍量60%乙醇提取3次,每次95 min。 结论: 星点设计-响应面法优选的厚朴提取工艺简便、合理可行,具有较高的精确度,可推广于大生产应用。     

华山参化学成分研究

目的 研究漏斗泡囊草Physochlaina infundibularis根及根茎(华山参)的化学成分.方法 综合运用硅胶、反相硅胶、大孔树脂、微孔树脂、Sephadex LH-20柱色谱法对华山参乙醇提取物不同萃取部位进行系统分离,并通过理化性质和谱学数据鉴定化合物结构.结果 从华山参中分离得到17个化合物,分别鉴定为莨菪碱(1)、东莨菪碱(2)、山莨菪碱(3)、东莨菪素(4)、东莨菪苷(5)、伞形花内酯(6)、6,7-二甲氧基香豆素(7)、3-甲氧基槲皮素(8)、异槲皮苷(9)、山柰酚-7-O-β-D-葡萄糖苷(10)、丁香脂素(11)、原儿茶酸(12)、对羟基苯甲酸甲酯(13)、邻羟基苯甲酸(14)、托品酸(15)、对羟基苯甲酸(16)、棕榈酸(17).结论 化合物7～17为首次从泡囊草属植物中分离得到,化合物5为首次从该植物中分离得到.     

凹叶厚朴快繁技术体系的建立

目的建立凹叶厚朴Magnolia officinalis subsp.biloba快速繁殖体系。方法以选育的优质凹叶厚朴种胚为初始外植体,采用单因素及正交试验筛选不同基本培养基,不同植物调节剂(6-BA、NAA、IBA、IAA),获取最适种胚启动培养基,丛芽增殖培养基和生根培养基。结果适宜种胚萌发的启动培养基为B5+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L,出芽率达87.0%;适合丛芽增殖的培养基为MS+6-BA 2.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L,增殖系数可达6.2;适合生根的培养基为1/2 MS+NAA 0.5mg/L,30 d生根率可达84%。结论建立了凹叶厚朴快速繁殖体系,为凹叶厚朴优质种苗的工厂化育苗奠定了基础。