丹参酮ⅡA对人胃癌MKN-45细胞整合素β1、基质金属蛋白酶-7表达影响

目的：通过观察丹参酮ⅡA对胃癌MKN-45细胞的增殖抑制及对整合素β1、基质金属蛋白酶-7（MMP-7）表达的影响,探讨其抗肿瘤机制。方法：MTT法检测不同浓度的丹参酮IIA对体外培养的人胃癌MKN-45细胞增殖的影响 RT-PCR法测丹参酮IIA作用后人胃癌MKN-45细胞整合素β1、MMP-7的表达。结果：与阴性对照组相比,丹参酮ⅡA各浓度组（4μg/mL、8μg/mL、16μg/mL、32μg/mL、64μg/mL）对肿瘤细胞增殖的抑制率有显著差异（P〈0.05）,其24h、48h、72h半数抑制浓度分别为42.5μg/mL、19.4μg/mL和7.4μg/mL。PCR半定量分析表明丹参酮ⅡA作用后整合素β1和MMP-7mRNA的表达受到抑制,抑制程度随着药物浓度的增加而增加。结论：丹参酮ⅡA能有效抑制人胃癌MKN-45细胞的生长,并具有明显的时间和剂量依赖性。丹参酮ⅡA可能通过降低人胃癌MKN-45细胞整合素β1和MMP-7mRNA的表达,而抑制肿瘤细胞增殖。     

丹参酮ⅡA诱导瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡及细胞周期阻滞的实验研究

目的观察丹参酮ⅡA对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法体外培养人瘢痕疙瘩成纤维细胞,予含有不同浓度丹参酮ⅡA的培养液(分别为0μg/mL、50μg/mL、100μg/mL和200μg/mL)进行干预。不同时间点以CCK-8检测细胞增殖活力,流式细胞仪检测细胞凋亡、细胞周期的变化。结果不同浓度丹参酮ⅡA干预和不同时间干预,对瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖活性、早期凋亡率、细胞周期G0/G1期比例的影响,均具有统计学意义(P<0.001),其中200μg/mL组干预效果最明显。结论丹参酮ⅡA具有抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖,诱导凋亡并阻滞细胞周期的作用,且干预效果存在浓度依耐性及时间依耐性。     

丹参酮ⅡA对软骨细胞去分化影响的研究

目的研究丹参酮ⅡA在大鼠膝软骨细胞体外培养中对软骨细胞去分化的影响。方法采用Ⅱ型胶原酶消化法获取2周龄SD大鼠膝关节原代软骨细胞,体外培养传代至P4进行实验。对照组用含10%小牛血清高糖DMEM培养(基础培养液)。实验组有3个浓度:100μg/ml组用基础培养液+100μg/ml丹参酮ⅡA培养,200μg/ml组用基础培养液+200μg/ml丹参酮ⅡA培养,400μg/ml组用基础培养液+400μg/ml丹参酮ⅡA培养。培养72 h后,采用CCK-8法检测各组细胞增值情况,光学显微镜观察软骨细胞形态,阿利新蓝染色观察糖胺聚糖(GAG)含量,实时荧光定量PCR检测Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅹ型胶原表达情况。结果 400μg/ml组肉眼可见的细胞密度低于其他各组,且阿利新蓝染色最浅。培养24 h、48 h、72 h,100μg/ml组、200μg/ml组的OD值均大于对照组,而400μg/ml组OD值均小于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。实验组的Ⅰ型、Ⅹ型胶原m RNA含量明显低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。400μg/ml组Ⅱ型胶原m RNA含量低于对照组,100μg/ml组、200μg/ml组Ⅱ型胶原m RNA含量高于对照组,差异有统计学意义(P0.05);但100μg/ml组、200μg/ml组差异无统计学意义(P0.05)。结论不同浓度的丹参酮ⅡA对去分化软骨细胞作用有所区别,100μg/ml、200μg/ml时促进软骨细胞增殖,抑制去分化进程;400μg/ml时抑制软骨生长活性,细胞基质分泌减少。     

不同浓度生长分化因子-5对内侧副韧带成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的 观察生长分化因子-5(GDF-5)对内侧副韧带(MCL)成纤维细胞增殖能力及胶原合成的影响. 方法 体外培养10周龄SD大鼠MCL成纤维细胞,分别加入不同浓度GDF-5,分为4组:0 ng/mL组、10 ng/mL组、50 ng/mL组、100 ng/mL组,用CCK-8法测定细胞增殖能力,羟脯氨酸测试盒测定细胞总胶原含量,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测I与Ⅲ型胶原mRNA的表达. 结果 浓度为10、50、100 ng/mL的GDF-5均能增强MCL成纤维细胞的增殖能力,以100 ng/mL的GDF-5作用最显著,组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05).MCL成纤维细胞中加入GDF-5后,羟脯氨酸量增加,I型胶原mRNA表达增加,组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05),但Ⅲ型胶原mRNA表达组间比较差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 GDF-5可以促进MCL成纤维细胞增殖及胶原合成进而促进韧带损伤愈合.     

瑞香素联合IGF-1对大鼠脂肪间充质干细胞成软骨分化的影响

目的初步研究瑞香素(dephnetin,DAP)联合IGF-1基因转染对大鼠脂肪间充质干细胞(adiposederived mesenchymal stem cells,ADSCs)成软骨分化的影响。方法采用酶消化法分离培养大鼠ADSCs。取第3代ADSCs以IGF-1基因转染作为实验组,未转染的ADSCs作为对照组。两组细胞分别用不同浓度DAP(0、30、60、90μg/mL)处理,培养72 h后采用细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)法检测细胞增殖活性;培养14 d分别采用实时荧光定量PCR和Western blot检测Ⅱ型胶原和蛋白聚糖(Aggrecan)mRNA和蛋白表达,并行甲苯胺蓝染色及Ⅱ型胶原免疫组织化学染色观察。结果 CCK-8法检测示,随DAP作用浓度增加,对照组和实验组细胞吸光度(A)值均逐渐增加(P0.05);相同DAP浓度下,实验组细胞A值显著高于对照组(P0.05)。实时荧光定量PCR和Western blot检测示,随DAP作用浓度增加,对照组细胞Ⅱ型胶原和Aggrecan的mRNA和蛋白相对表达量无明显变化,各浓度组间差异无统计学意义(P0.05);实验组细胞Ⅱ型胶原和Aggrecan的mRNA和蛋白相对表达量逐渐增加,其中60、90μg/mL DAP浓度组显著高于0μg/mL DAP浓度组(P0.05)。相同DAP浓度下,实验组细胞Ⅱ型胶原和Aggrecan的mRNA和蛋白相对表达量显著高于对照组(P0.05)。甲苯胺蓝染色示,随DAP作用浓度增加,对照组内和实验组内细胞着色无明显差异;相同DAP浓度下,实验组比对照组细胞着色略深。Ⅱ型胶原免疫组织化学染色示,随DAP作用浓度增加,对照组细胞的细胞质内着色无明显差异;实验组细胞的细胞质内着色逐渐加深,其中60、90μg/mL DAP浓度组明显深于0μg/mL DAP浓度组。相同DAP浓度下,实验组比对照组细胞着色明显加深。结论 DAP对大鼠ADSCs增殖有一定促进作用;单独使用DAP诱导大鼠ADSCs向软骨细胞分化作用极微弱,但DAP联合IGF-1基因转染有明显协同作用,促进ADSCs成软骨分化。     

白细胞介素13对胆管成纤维细胞TGF-β1/Smads通路表达的影响及地塞米松的干预作用

目的:探讨白细胞介素13(IL-13)对胆管成纤维细胞转化生长因子β1(TGF-β1)/Smads通路活性的影响及地塞米松(Dex)的干预作用。方法:分离、培养兔胆管成纤维细胞并鉴定后分别给予IL-13、IL-13联合不同浓度的Dex(0.01、0.05、0.25 mg/mL)干预48 h,以无处理的胆管成纤维细胞为空白对照,分别用CCK-8细胞计数法测定各组细胞增殖水平;real-time PCR检测各组细胞TGF-β1、Smad3及Smad4基因mRNA表达;Western blot检测各组细胞TGF-β1及Smad4蛋白表达。结果:与空白对照组比较,在IL-13干预48 h后,胆管成纤维细胞增殖明显加速、TGF-β1、Smad3及Smad4 mRNA表达均明显上调,TGF-β1、Smad4蛋白表达明显上调(均P0.05),而Dex对IL-13引起的上述变化有明显的抑制作用,并呈一定的浓度依赖趋势(部分P0.05)。结论:IL-13能增加胆管成纤维细胞TGF-β1/Smads通路的活性,削弱该通路的活化可能是Dex抑制良性胆道狭窄形成的机制之一。     

雷帕霉素对大鼠尿道成纤维细胞增殖和胶原形成的影响

目的研究雷帕霉素(RAPA)对体外培养的大鼠尿道成纤维细胞增殖、Ⅰ、Ⅲ胶原分泌以及TGF-β1表达的影响;方法组织块法原代培养雄性SD大鼠尿道成纤维细胞;MTT法检测不同浓度RAPA溶液在不同时间对鼠尿道成纤维细胞增殖和活力的影响;羟脯氨酸比色法测定RAPA干预后成纤维细胞培养上清液胶原含量的变化;RT-PCR检测雷帕霉素对TGF-β1、Ⅰ、Ⅲ胶原mRNA表达的影响;结果随浓度增加和时间延长体外培养鼠尿道成纤维细胞的吸光度(A值)逐步降低,实验组与对照组间存在显著性差异(P0.05);羟脯氨酸比色法、RT-PCR测定不同浓度(0、10、20、40、80、160ng/mL)RAPA干预前后的成纤维细胞培养上清液胶原含量表达逐渐减少,TGF-β1、Ⅰ、Ⅲ胶原基因表达降低,各组间均存在显著性差异(P0.05);结论雷帕霉素可抑制大鼠尿道成纤维细胞的增殖、减少胶原生成以及降低细胞内TGF-β1、Ⅰ、Ⅲ胶原的基因表达,在预防、治疗尿道狭窄中的作用值得进一步研究。     

丹参酮ⅡA与人肝癌细胞HepG2体内外增殖和凋亡的相关性

目的:探讨丹参酮ⅡA对人肝癌细胞HepG2体内外增殖、凋亡相关研究。方法:采用不同浓度(0、1、2、4、8μg/m L)、不同时间(24、48、72 h)丹参酮ⅡA处理人肝癌HepG2细胞,采用MTT法检测人肝癌细胞HepG2增殖抑制率,采用流式细胞仪技术检测细胞凋亡情况,采用Western lot检测Bax、Bcl-2蛋白表达;建立裸鼠肝癌模型,测量给药1、6、12和21 d肿瘤体积变化。结果:丹参酮ⅡA作用24、48、72 h对HepG2细胞抑制率逐渐升高,差异有统计学意义(P0.05),且呈一定的药物剂量依赖性(P0.05)。采用Annexin V-FITC/PI双染法检测各浓度丹参酮ⅡA对HepG2细胞凋亡的影响,各剂量丹参酮ⅡA的细胞凋亡率明显高于对照组(P0.05),且随着丹参酮ⅡA浓度增加,细胞凋亡率明显升高(P0.05)。各丹参酮ⅡA药物组Bcl-2表达均低于对照组(P0.05),且随着丹参酮ⅡA药物浓度的升高,Bcl-2表达明显降低(P0.05);各丹参酮ⅡA药物组Bax表达均高于对照组(P0.05),且随着丹参酮ⅡA药物浓度的升高,Bax表达明显升高(P0.05)。丹参酮ⅡA低剂量组和丹参酮ⅡA高剂量组给药12、21 d肿瘤体积低于同期对照组,且丹参酮ⅡA高剂量组低于丹参酮ⅡA低剂量组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:丹参酮ⅡA可有效抑制肝癌HepG2细胞增殖,促进细胞凋亡,且其作用与丹参酮ⅡA药物浓度相关,丹参酮ⅡA可能通过调节凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达可能是其促进细胞凋亡及抑制肿瘤体积增长。     

三羟基异黄酮对增生性瘢痕成纤维细胞增殖与胶原合成作用的影响

目的探讨5,7,4′-三羟基异黄酮对体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞增殖及胶原合成作用的影响。方法以不同浓度三羟基异黄酮处理体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞分为25、50、100μmol/L三组,以加DMSO溶剂为对照组,MTT法测定成纤维细胞的增殖,3H-脯氨酸掺入法测定细胞胶原合成情况,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达。结果三羟基异黄酮能有效抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖及胶原合成(P<0.05),且具有剂量-效应关系;100μmol/L浓度组作用后,与对照组相比,差异有显著意义(P<0.01);三羟基异黄酮作用后成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达显著下调(P<0.05)。结论三羟基异黄酮能抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖与活性,可能成为治疗瘢痕及纤维化疾病的有效药物。     

丹参酮ⅡA抑制人胆管癌细胞的生长及诱导其凋亡的实验研究

目的体外实验研究丹参酮ⅡA对人肝内胆管癌细胞株HCCC-9810的生长抑制及诱导凋亡作用。方法分别采用（0～10μg／ml）的丹参酮ⅡA作用人肝内胆管癌细胞72h后，通过MTT比色法观察其细胞毒性，荧光显微镜、投射电镜检测细胞凋亡；流式细胞术（FCM）定量检测5μg／ml丹参酮ⅡA作用不同时间后的细胞凋亡率。结果丹参酮ⅡA以剂量依赖的方式抑制胆管癌细胞的生长。1～10μg／ml丹参酮ⅡA作用72h后，胆管癌细胞出现细胞皱缩、核染色质浓缩、核碎裂以及凋亡小体出现等特征性的形态学改变。5μg／ml浓度作用12、24、36、48、72h后的细胞凋亡率分别为（2．31±0．15）％、（3．02±0．36）％、（3．86±0．44）％，（6．75±0．60）％和（20．62±1．76）％与对照组（1．08±0．14）％比较均具有显著差异。结论在体外丹参酮ⅡA能够诱导人肝内胆管癌细胞株HCCC-9810凋亡，这可能是丹参酮ⅡA抑制其生长的机制。     

TNF-α对兔胆管成纤维细胞P311/TGF-β1/α-SMA通路的影响及川芎嗪的干预作用

目的:探讨TNF-α对兔胆管成纤维细胞P311/TGF-β1/α-SMA通路的影响及川芎嗪的干预作用。方法:分离、培养正常家兔胆管成纤维细胞并鉴定,将胆管成纤维细胞分别给予TNF-α、TNF-α联合不同浓度的TMP(0.08、0.4、2.0 mg/m L)干预48 h,以无处理的胆管成纤维细胞为空白对照,用CCK-8法检测细胞增殖水平;real-time PCR检测细胞P311、TGF-β1、α-SMA m RNA表达;Western blot检测细胞TGF-β1、α-SMA蛋白表达。结果:与空白对照比较,胆管成纤维细胞经TNF-α处理后,增殖明显增强,P311、TGF-β1、α-SMA m RNA以及TGF-β1、α-SMA蛋白表达明显上调(均P0.05);TMP对TNF-α的上述效应有抑制作用,并且呈现浓度依耐趋势,其中0.4、2.0 mg/m L的TMP有明显作用(均P0.05)。结论:TNF-α可能通过调控P311/TGF-β1/α-SMA信号通路促进胆管成纤维细胞增殖,TMP能抑TNF-α对该通路的活化,故可能对良性胆道狭窄有防治作用。     

丹参酮ⅡA对大鼠肾小球系膜细胞增殖及TGF-β1基因表达活性的调控研究

目的观察丹参酮ⅡA对大鼠肾小球系膜细胞增殖及对人转化生长因子β1（TGF-β1）基因启动子活性的影响。方法对传代培养的肾小球系膜细胞分别加入3种浓度的丹参酮ⅡA（1×10-3／L、5×10-3g／L和10×10-3g／L）,采用MTT法观察肾小球系膜细胞增殖情况;将TGF-β1启动子重组质粒phTGF2.14、phTGF1．12转染至肾小球系膜细胞,分别加入上述3个浓度的丹参酮ⅡA,用酶联免疫吸附（ELISA）方法检测报告基因氯霉素乙酰转移酶（CAT）的活性。比较各组系膜细胞增殖及TGF-β1启动子活性。结果不同浓度丹参酮ⅡA对。肾小球系膜细胞增殖具有明显抑制的作用,抑制率分别为8．20％、18．40％和23．06％,呈剂量依赖性（P〈0．01）;丹参酮ⅡA浓度为10×10-3g／L时,TGF-β1启动子活性明显降低（P〈0．01）。结论丹参酮ⅡA对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞具有抑制其增殖的作用,其作用机制可能与其抑制TGF-β1启动子的活性有关.     

管腔外局部应用紫杉醇对豚鼠胆管对端吻合术后吻合口愈合的作用

目的探讨局部应用紫杉醇对豚鼠动物模型胆管对端吻合术后瘢痕愈合、狭窄发生抑制作用的可能性。方法制作豚鼠胆管对端吻合动物模型。将42只豚鼠按术后时间（3d、2周、1个月）随机分为3组,每组按紫杉醇组与对照组各分为2组,每组7只。紫杉醇组于显微吻合操作完成后吻合口管壁外局部涂抹紫杉醇溶液（1000μmol/L,0.05ml）,作用10min左右。术后分别于3d、2周、1个月时取材,与对照组比较,进行组织学、管壁厚度检测。应用透射电镜观察紫杉醇诱导细胞凋亡的超微结构。结果术后胆管壁呈炎症反应,内膜增生显著。术后3天和1个月时,紫杉醇组管壁厚度均小于对照组[3天：（574.41±24.53）μmvs（802.98±24.42）μm,t=-6.604,P=0.000;1个月：（1383.36±36.64）μmvs（1518.56±34.89）μm,t=-2.672,P=0.020）]。透射电镜可见紫杉醇诱导细胞凋亡及细胞器损害超微结构表现。结论管腔外局部单次使用紫杉醇1个月内可起到延缓豚鼠动物模型胆管管壁增厚的作用。     

PTEN编码蛋白对TGF-β1刺激大鼠肾成纤维细胞增殖和ColⅣ与FN分泌的抑制作用

目的：观察张力蛋白同源物基因（PTEN）编码蛋白对转化生长因子-β1（TGF-β1）刺激所致大鼠肾成纤维细胞增殖和Ⅳ型胶原（ColⅣ）、纤连蛋白（FN）分泌的影响。方法：用重组PTEN腺病毒转染体外培养大鼠肾成纤维细胞,倒置荧光显微镜检测绿色荧光蛋白表达,RT-PCR检测PTEN mRNA表达。转染36h后TGF-β1体外刺激,TGF-β1刺激24h后MTT法检测细胞增殖活力,免疫细胞化学法检测PCNA表达,ELISA法检测细胞上清中ColⅣ、FN水平。结果：PTEN腺病毒转染36h后可见明显绿色荧光蛋白表达,PTEN mRNA表达明显增多（P〈0.01）。PTEN腺病毒转染后给予TGF-β1刺激组较单纯TGF-β1刺激组平均光密度值（OD）显著降低（P〈0.01）,PCNA表达显著减少（P〈0.01）,且ColⅣ、FN的分泌水平明显下降（P〈0.05）。结论：PTEN基因编码蛋白能抑制TGF-β1刺激所致大鼠肾成纤维细胞增殖、PCNA表达及ColⅣ、FN分泌,可能具有抑制残肾纤维化、延缓残肾毁损速度的作用。     

原花青素对人结肠癌细胞SW620增殖和凋亡的影响

目的:观察葡萄籽提取物原花青素对人结肠癌细胞株SW620细胞增殖和凋亡的影响。方法:SW620细胞与20、40、60、80μg/mL的原花青素共同孵育24h～8d,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术分析细胞凋亡情况,分光光度法检测Caspase-3酶活性。结果:不同浓度(20～80μg/mL)的原花青素对SW620细胞的生长有明显的抑制作用,呈现出一定的剂量依赖性;含原花青素20、40、80μg/mL的观察组细胞凋亡发生率分别为6.9%、18.6%及22.9%,不含药的对照组细胞凋亡发生率为1.3%。SW620细胞与含药(40μg/mL)或不含药的培养基共同培养48h或72h,对照组细胞几乎无法检出Caspase-3酶活性,而给药组细胞活性显著增加。结论:原花青素在体外可呈浓度依赖性抑制人结肠癌细胞株SW620的增殖并通过Caspase-3通路促进其凋亡。