PTCA围手术期硫氮(艹卓)酮对血小板活性和钙动力学的影响

目的 :研究硫氮  酮对内皮损伤后血小板激活的影响及与胞浆Ca2 浓度的关系。方法 :35例拟行PTCA治疗的心绞痛患者随机分成对照 (C)组和硫氮 艹卓 酮治疗 (D)组 ,由冠状静脉窦和外周静脉采血 ,检测围术期血小板GPⅡb/Ⅲa表达和胞浆Ca2 浓度。并在体外研究不同浓度硫氮 艹卓 酮对稳定型心绞痛患者全血GPⅡb/Ⅲa表达的影响。结果 :C组首次球囊扩张后 5min、10min和PTCA后 10min时GPⅡb/Ⅲa表达和 [Ca2 ]i明显升高 ,而D组未见升高。高于治疗浓度的硫氮 艹卓 酮 (2 0 0 μg/L以上 )显著抑制GPⅡb/Ⅲa表达。 结论 :硫氮 艹卓 酮和阿司匹林 /抵克力得联合治疗可防止常规阿司匹林 /抵克力得治疗时发生的血小板激活。硫氮 艹卓 酮抗血小板作用可能是抑制[Ca2 ]i升高的结果 ,但只在高于治疗浓度时有效     

PTCA围手术期硫氮酮对血小板活性和钙动力学的影响

目的研究硫氮(艹卓)酮对内皮损伤后血小板激活的影响及与胞浆Ca2+浓度的关系.方法35例拟行PTCA治疗的心绞痛患者随机分成对照(C)组和硫氮(艹卓)酮治疗(D)组,由冠状静脉窦和外周静脉采血,检测围术期血小板GPⅡb/Ⅲa表达和胞浆Ca2+浓度.并在体外研究不同浓度硫氮(艹卓)酮对稳定型心绞痛患者全血GPⅡb/Ⅲa表达的影响.结果C组首次球囊扩张后5 min、10 min和PTCA后10 min时GPⅡb/Ⅲa表达和[Ca2+]i明显升高,而D组未见升高.高于治疗浓度的硫氮(艹卓)酮(200μg/L以上)显著抑制GPⅡb/Ⅲa表达.结论硫氮(艹卓)酮和阿司匹林/抵克力得联合治疗可防止常规阿司匹林/抵克力得治疗时发生的血小板激活.硫氮(艹卓)酮抗血小板作用可能是抑制[Ca2+]i升高的结果,但只在高于治疗浓度时有效.     

GPⅢa^T1565C点突变对FAK磷酸化的影响

目的建立稳定表达野生型CPⅡ b／Ⅲa和突变型GPⅡb／Ⅲa^T1565C的中国仓鼠卵巢（CHO）细胞系,探讨GPⅡb／Ⅲa^T1565C点突变对黏着斑激酶（FAK）磷酸化的影响。方法采用脂质体介导基因转移法将真核表达载体pcDNA3．1（＋）Ⅱb分别与pcDNA3．i（＋）Ⅲa或pcDNA3．1（＋）Ⅲa^T1565C共转染到CHO细胞中,经C,418筛选出稳定表达野生型GPⅡb／Ⅲa和突变型GPⅡb／Ⅲa^T1565C的CHO细胞系。流式细胞术（Flowcytom—etry,FCM）检测野生型和突变型GPⅡb／ⅢaCHO细胞表面CD41和CD61的表达。免疫沉淀、免疫印迹（Westernblot）和FCM细胞内染色等方法检测野生型和突变型GPⅡb／ⅢaCHO细胞经纤维蛋白原（Fbg）激活后发生的FAK酪氨酸磷酸化和丝氨酸磷酸化。结果野生型和突变型GPⅡb／ⅢaCHO细胞表面CD41和CD61均高效表达,分别为97．19％和99．71％。免疫沉淀、Western blot检测结果显示,野生型和突变型GPⅡb／ⅢaCHO细胞经Fbg激活90min后,分别有16．24％和20．44％的FAK发生酪氨酸磷酸化;FCM细胞内染色检测结果显示,经Fbg激活90min后,野生型和突变型GPⅡb／ⅢaCHO细胞均不发生FAK丝氨酸磷酸化;激活48h后,野生型和突变型GPⅡb／ⅢaCHO细胞分别有34．89％和73．84％发生FAK丝氨酸磷酸化。结论成功构建稳定表达野生型GPⅡb／Ⅲa和突变型GPⅡb／ⅢaaT1565C托的CIIO细胞系。GPIU／ⅢaaT1565C点突变能够增强FAK酪氨酸磷酸化和丝氨酸磷酸化,因此可能增强GPⅡb／Ⅲa介导的细胞外向内信号转导功能。     

急性冠脉综合征患者血小板活化及聚集的相关研究

目的 观察急性冠脉综合征(acute coronary syndromes,ACS)患者血小板聚集性及血小板活化指标P选择素、膜GPⅡb/Ⅲa的变化.探讨活化血小板在ACS急性冠脉综合征发病中的作用.方法 选取健康体检者52名为正常对照组,ACS患者89例,按其病情分为不稳定心绞痛(unstable angina,UA)组43例,急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)组46例.检测两组对象的血小板聚集率及血小板表面表达的P选择素、膜GPⅡb/Ⅲa表达率等活化指标.结果 与正常对照组比较,UA组患者血小板聚集率、血小板P选择素、膜GPⅡb/Ⅲa表达率均明显升高,差异有统计学意义(P均＜0.001);ACS患者中,AMI组与UA组比较,血小板聚集率、血小板P选择素、膜GPⅡb/Ⅲa表达率均明显升高,差异有统计学意义(P均＜0.001).结论 随着ACS患者病情加重,血小板活化水平明显升高,聚集功能明显增强,血小板功能异常改变与急性冠脉综合征病情轻重有密切关系.     

特发性血小板减少性紫癜患者GPⅡb/Ⅲa、CD62P表达探讨

目的检测原发性血小板减少性紫癜(ITP)患者血小板表面GPⅡb/Ⅲa、CD62P的表达情况,以探讨其在ITP患者中的临床应用价值.方法采用美国BD公司的FACSCalibur流式细胞仪,对32例ITP患者、17例非免疫性血小板减少、21例其它自身免疫性疾病及20例健康正常人的血小板表面GPⅡb/Ⅲa、CD62P的表达情况进行了分析测定.结果ITP患者GPⅡb/Ⅲa血小板阳性表达率明显高于其它三组(P＜0.01),但CD62P血小板阳性表达率四组无明显差别(P＞0.05),15例无临床症状ITP患者GPⅡb/Ⅲa表达明显高于17例有临床症状ITP患者的表达(P＜0.01).结论GPⅡb/Ⅲa作为监测血小板活化指标,对ITP的鉴别诊断及监测病情发展、判断预后具有重要意义;ITP患者的GPⅡb/Ⅲa表达明显增高,但CD62P表达并不增高,CD62P并非监测ITP患者循环中活化血小板的理想标志物.     

血栓性脑血管疾病患者治疗前后血小板活化膜表面糖蛋白检测及临床意义

目的 :探讨血栓性脑血管疾病患者治疗前后血小板活化标记物CD62 P,GPⅡb/Ⅲa的表达及其临床应用价值。方法 :采用流式细胞仪 (FCM )检测治疗前后血小板活化标记物CD62 P、GPⅡb/Ⅲa的表达。结果 :血栓性脑血管疾病患者治疗前血小板活化标志物CD62 P、GPⅡb/Ⅲa分别为CD62 P5 2 .19± 12 .3 7% ,GPⅡb/Ⅲa 77.98± 14 .2 2 % ,较正常对照组有显著性升高 (P <0 .0 1) ;治疗后CD62 P3 1.16± 17.43 % ,GPⅡb/Ⅲa 40 .71± 11.64 %较治疗前有显著性下降 (P<0 .0 1) ,但仍高于正常对照组 (P <0 .0 1)。结论 :血小板活化标志物CD62 P、GPⅡb/Ⅲa对血栓性脑血管疾病的诊断具有重要价值 ,为临床症状缓解后患者长期药物预防提供理论依据     

血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲ a基因突变与脑血栓的关系

血小板糖蛋白（GP）是一种存在于血小板质膜表面的糖蛋白,在血小板活化和血栓形成过程中起关键作用。血小板膜上存在多种糖蛋白,其中GPⅡh／Ⅲa属于整合素家族黏附受体,是血小板膜含量最多的糖蛋白。GPⅡb／Ⅲa是纤维蛋白原的受体,参与血小板的聚集。GPⅡh／Ⅲa受体的基因突变影响血小板表面受体表达的数量与质量,从而影响血小板聚集。因此,GPⅡh／Ⅲa基因的突变与脑血栓疾病的发生、发展密切相关。研究其基因突变及其与脑血栓的关系将为脑血栓的早期诊断和防治提供分子遗传学基础。     

人源性抗血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa Fab抗体的研制及其对血小板聚集功能的影响

目的:构建人源性抗血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa(GPIⅡb/Ⅲa)Fab噬菌体抗体库,筛选抗GPⅡb/Ⅲa特异性的噬菌体抗体,并对其功能进行研究.方法:取血小板膜糖蛋白抗体(抗GPⅡIb/Ⅲa)阳性的特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者脾细胞,采用噬菌体抗体库技术构建人源性抗GPⅡb/Ⅲa Fab噬菌体抗体库,以表达GPⅡb/Ⅲa的CHO123细胞筛选抗体库,并以ELISA法检测噬菌体抗体;用Western blot对抗体进行鉴定,并测定其与血小板抗原的结合;观察筛选到Fab抗体对血小板聚集的影响.结果:筛选出2株能够与血小板膜GPⅡb/Ⅲa特异性结合的Fab抗体,其序列与人免疫球蛋白轻、重链可变区序列具有高度同源性,表达纯化的Fab抗体能抑制血小板聚集.结论:成功地从人源性抗血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa Fab抗体库筛选出特异性识别GPⅡb/Ⅲa,具有抑制血小板聚集作用的人源性抗体.     

PTCA对血小板Ⅱb/Ⅲa受体及一氧化氮水平的影响及临床意义

目的了解PTCA(经皮冠状动脉腔内成形术)对GPⅡb/Ⅲa(血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体)、NO(一氧化氮)水平的影响 ,为临床上减少PTCA术后副作用提供帮助。方法静脉采血 ,采用放免和分光光度比色法检测PTCA术前后GPⅡb/Ⅲa及血浆NO水平。结果PTCA手术后GPⅡb/Ⅲa水平明显增高 ,术后12h达到高峰 ,48h接近术前水平。血浆NO变化与GPⅡb/Ⅲa的变化趋势相反。结论PTCA可能通过增加GPⅡb/Ⅲa表达 ,降低NO合成释放等环节 ,可诱发新血栓形成 ,导致急性冠状动脉闭塞。因此 ,为减少PTCA后急性再梗塞的发生 ,临床上除应用常规的抗凝治疗外 ,加用GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂效果会更好     

噬菌体抗体库中筛选血小板膜糖蛋白Ⅱ b/Ⅲa特异的人源性Fab抗体

本研究利用特发性血小板减少性紫癜(idiopathic thrombocytopenic purpura,ITP)患者产生抗血小板自身抗体的特点,从ITP患者脾脏细胞中提取RNA,扩增抗体轻链和重链Fd基因,插入噬粒载体pComb3H,构建人源性抗GP Ⅱ b/ⅢaFab噬菌体抗体库.以表达GP Ⅱ b/Ⅲa的CHO123细胞筛选抗体库,制备人源性GPⅡb/Ⅲa Fab噬菌体抗体.     

复发性流产患者HLA及血小板特异性糖蛋白抗体GPⅡb/Ⅲa表达的初步研究

目的:探讨原因不明复发性流产(RSA)患者HLA抗体和血小板特异性糖蛋白(GPⅡb/Ⅲa)抗体的表达情况。方法:对299名复发性流产的患者血浆中HLA抗体和GPⅡb/Ⅲa抗体进行检测,血小板抗体检测试剂盒(固相凝集法)筛查IgG抗体,Antigen Tray-LATM板检测HLA抗体,GTI公司PAK-PLUS检测试剂盒检测血小板特异性抗体,利用流式细胞仪技术进行GPⅡb/Ⅲa抗体的确证。结果:检测的299例RSA患者中,IgG抗体阳性26例,阳性率8.69%。26例IgG抗体阳性患者中,25例HLA抗体呈阳性。HLA-Ⅰ类抗体阳性占5.02%,HLA-Ⅱ类抗体阳性占1.33%,HLA-Ⅰ+Ⅱ类抗体阳性占2.01%;在26例RSA患者中,GPⅡb/Ⅲa抗体阳性4例(占15.38%),其中GPⅡb/Ⅲa阳性和HLA抗体均阳性3例(占11.54%),GPⅡb/Ⅲa抗体单独阳性1例(占3.85%)。结论:初步探讨了RSA患者HLA抗体和GPⅡb/Ⅲa抗体的分布情况,本研究为复发性流产患者血小板抗体的检测提供了初步的实验基础。     

血小板活性与老年慢性肺心病高凝状态的关系

目的:探讨老年慢性肺心病急性加重期患者血小板膜糖蛋白GPⅡb/Ⅲa、CD62p的变化与纤维蛋白原(FG)、D-二聚体(DD)的关系.方法:用三色全血流式细胞术测定42例老年慢性肺心病急性加重期患者及42例缓解期患者外周血中血小板GPⅡb/Ⅲa、CD62p的表达水平,并检测患者FG、DD水平,与30例老年健康对照者及30例非老年健康对照者比较.结果:老年慢性肺心病急性加重期组GPⅡb/Ⅲa、CD62p、FG、DD均明显高于缓解期组、老年健康对照组及非老年健康对照组(均P<0.001).老年慢性肺心病急性加重期组GPⅡb/Ⅲa、CD62p与FG、DD均呈正相关.结论:老年慢性肺心病急性加重期患者血小板明显活化,其活化程度与高凝状态关系密切.     

慢性ITP患者血小板膜表面GPⅣ、GPⅤ特异性自身抗体的测定

目的：检测慢性ITP患者血小板膜表面GPⅣ、GPⅤ特异性自身抗体。方法：应用改良直接MAIPA(单克隆抗体俘获血小板抗原技术)检测血小板膜糖蛋白(GPⅣ、GPⅤ)特异性自身抗体。结果：慢性ITP患者血小板洗脱液中GPⅣ特异性和GPⅤ特异性自身抗体的阳性率分别为6．3％和4．8％。结论：血小板膜GPⅣ、GPⅤ分子是慢性ITP自身抗体的靶抗原，但多与GPⅡb／Ⅲa或GPⅠb自身抗原共存。     

ITP血小板特异性自身抗体（GPⅡb/Ⅲa和GPIbα）与糖皮质激素和静脉丙种球蛋白临床疗效的关系

目的检测特发性血小板减少性紫癜（ITP）患者体内的抗血小板膜糖蛋白（GPⅡb/Ⅲa和GPIbα）特异性自身抗体,并探讨特异性自身抗体与糖皮质激素和静脉丙种球蛋白（静丙）治疗的临床疗效是否存在针对性,以便得到更经济和个体化的治疗方案,为ITP提出新的分型依据。方法应用改良的单克隆抗体特异性俘获血小板抗原（MAIPA）法检测抗GPⅡb/ⅡIa,GPIbα特异性自身抗体。结果双抗体阳性组与单一抗GPIbα抗体阳性组总疗效比较,差异无显著性（χ^2=0.995,P〉0.05）双抗体阳性组与单一抗GPⅡb/ⅡIa抗体阳性组总疗效比较,差异有显著性（χ^2=17.439,P〈0.01）,后者优于前者;单一抗GPⅡb/ⅡIa抗体阳性组,双抗体阳性组,双抗体阴性组,糖皮质激素治疗与糖皮质激素联合静丙治疗比较,差异无显著性（P〉0.05）。结论血小板特异性自身抗体种类（GPⅡb/Ⅲa和GPIbα）及种类数目与ITP的临床疗效（糖皮质激素、静丙）有一定关系,对临床治疗方案的选择有一定意义。以抗血小板膜糖蛋白（GPⅡb/Ⅲa和GPIbα）特异性自身抗体为ITP进行新的分型依据尚不足,需扩大样本量进一步研究。     

用单克隆抗体对ITP自身抗血小板抗体及其相关抗原的初步研究

本文应用三种抗血小板膜糖蛋白单克隆抗体,按ELISA 间接法、ELISA双抗体夹心法、ELISA竞争法,对ITP患者自身抗血小板抗体及其相关抗原进行了初步研究。实验结果表明,抗血小板抗体的相关抗原呈多态性,包括:GPⅠb、GPⅡb及/或 GPⅢa,以 GPⅡb及/或 GPⅢa占多数,还可能包括血小板膜蛋白以外的其它抗原成分。这提示,ITP可能是一组复杂的、不均一的自身免疫性疾病。     

血小板膜糖蛋白基因多态性与缺血性脑卒中

血小板膜糖蛋白是细胞黏附受体整合素家族的成员,在血小板黏附、聚集和血栓形成的过 程中起着关键作用。研究发现血小板膜糖蛋白基因多态性影响着GP Ia／Ⅱa、GP Ib-IX-V及GPⅡb／Ⅲa等 受体的功能,并可能是缺血性脑卒中的遗传危险因素。本文就血小板膜糖蛋白基因多态性的研究进展 及与缺血性脑卒中的关系作一综述。     

中华眼镜蛇毒F组分抗血小板聚集的作用机制

目的 探讨中华眼镜蛇毒F组分抑制血小板聚集的作用机制.方法 用比浊法测定中华眼镜蛇毒F组分对二磷酸腺苷、花生四烯酸和血小板活化因子诱导血小板聚集作用的影响,流式细胞术观察中华眼镜蛇毒F组分对荧光标记的单克隆抗体CD41(FITC-CD41)和CD61(FITC-CD61)与血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa(GPⅡb/Ⅲa)结合的影响.结果 中华眼镜蛇毒F组分明显抑制二磷酸腺苷、花生四烯酸和血小板活化因子诱导的血小板聚集,其作用呈现一定程度的剂量依赖关系.中华眼镜蛇毒F组分可以明显降低单克隆抗体CD41(抗GPⅡb)与血小板的结合率,而对单克隆抗体CD61(抗GPⅢa)与血小板的结合率没有影响.结论 中华眼镜蛇毒F组分可以抑制多种激动剂诱导的血小板聚集,其机制和中华眼镜蛇毒F组分与血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa复合物的结合有关.     

危重烧伤患者GPⅡb/Ⅲa、CD62p变化与病情及预后的相关性研究

目的探索血小板变化与危重烧伤患者病情及预后的关系。方法对67例危重烧伤患者进行分组,A组（特重烧伤组）选择烧伤总面积〉50%TBSA或（及）Ⅲ度烧伤面积〉20%TBSA的患者;B组（重度烧伤组）为烧伤总面积为30%～49%或（及）Ⅲ度烧伤面积10%～19%的患者,选择伤后3、5、7、14、28天测定两组的PLT、GPⅡb/Ⅲa、CD62p值并进行统计分析。结果 A组患者的PLT、GPⅡb/Ⅲa较B组患者的PLT、GPⅡb/Ⅲa显著降低（P〈0.05）,A组患者的CD62p较B组患者的CD62p显著增高（P〈0.05）。结论血小板的变化是影响危重烧伤患者病情及预后重要因素之一,血小板水平和功能变化越明显,病情越重,预后越凶险。动态观测血小板（PLT、GPⅡb/Ⅲa、CD62p）的变化对病情的判定及预后的估计有很好的预见性。     

子痫前期及子痫患者全血中CD62p和GPⅡb/Ⅲa的变化及意义

目的通过检测子痫前期及子痫患者全血中CD62p和GPⅡb/Ⅲa表达水平,以探讨血小板活化状态。方法采用流式细胞术于剖宫产术前(入院后24h内)和术后48h内,检测子痫前期及子痫、正常孕晚期、正常未孕妇女全血中CD62p和GPⅡb/Ⅲa水平。结果分娩前轻度子痫前期组CD62p与正常未孕组、正常孕晚期组相比较,无显著性差异(P>0.05);分娩前重度子痫前期及子痫组CD62p明显高于正常未孕组、正常孕晚期组、轻度子痫前期组,有显著性差异(P<0.01);分娩后各组之间均无统计学差异(P>0.05);重度子痫前期及子痫组分娩后CD62p较分娩前明显降低,有显著性差异(P<0.01)。分娩前轻度子痫前期组GPⅡb/Ⅲa水平与正常未孕组、正常孕晚期组相比较,无显著性差异(P>0.05);分娩前重度子痫前期及子痫组GPⅡb/Ⅲa水平明显高于正常未孕组、正常孕晚期组、轻度子痫前期组(P<0.01);分娩后各组之间均无显著性差异(P>0.05);重度子痫前期及子痫组分娩后GPⅡb/Ⅲa水平明显降低与分娩前相比较,有显著性差异(P<0.01)。结论联合检测重度子痫前期及子痫患者CD62p和GPⅡb/Ⅲa水平,不但可以指导临床治疗及预防,并对该病的病因学研究提供了新理念。     

TNF-α和 LPS对体外培养血脑屏障内皮细胞胞浆内钙离子浓度的影响

目的：观察脂多糖（Lipopolysaccharid，LPS）和肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor-α，TNF-α)对血脑屏障内皮细胞（Blood-brain barrier endothelial cell，BBBEC）胞浆内钙离子浓度（plasmic inner concentration of calcium，[Ca^2 ]i）的影响。方法：用Fluo-3/AM做为荧光探针对钙离子进行负载，激光扫描共聚焦显微镜观察不同浓度的LPS和TNF-α刺激下BBBEC胞浆内钙离子浓度的变化。结果：在TNF-α刺激下，单个BBBEC[Ca^2 ]i呈浓度依赖性的一过性升高。不同浓度TNF-α引起的BBBEC Ca^2 的荧光强度达高峰的时间基本一致，高峰荧光强度和荧光持续时间随TNF-α浓度的升高而增加。低浓度LPS（1μg/ml和10μg/ml）刺激细胞时，BBBEC[Ca^2 ]i无明显变化，高浓度LPS刺激细胞时，可见[Ca^2 ]i呈短暂性升高，随后下降。结论：TNF-α和LPS在极短的时间内导致BBBEC[Ca^2 ]i的升高，激活BBBEC，这一过程是缺血性脑损伤极早期的重要病理机制之一。