MMP-14在口腔癌患者预后及转移的临床病理学研究

目的 观察基质金属蛋白酶14（MMP-14）、波形蛋白\E-钙粘蛋白在口腔癌及癌旁组织中的表达,探讨MMP-14在口腔癌患者预后及转移的作用机制。方法 选取83例有随访资料的口腔癌患者标本和20例癌旁组织标本,应用免疫组织化学法检测MMP-14及EMT标记物Vimentin,E-cadherin的表达水平,结合随访患者临床参数,进行统计学分析。结果 MMP-14表达在口腔癌中较正常组织升高,有特别显著性差异(P＜0.01);在有淋巴结转移、中低分化及T3-T4期患者中高表达,有特别显著性差异（P<0.01）;且与Vimentin上调,E-cadherin下调具有显著相关性（P<0.001）。结论 MMP-14的高表达,提示口腔癌患者生存率低预后较差,易发生淋巴结转移。其机制可能通过对EMT的调控,从而促进口腔癌细胞的侵袭转移。     

顺铂诱导舌鳞癌细胞发生上皮-间充质转化及获得肿瘤干细胞样特性的实验研究

目的: 建立舌鳞癌顺铂耐药株,观察其是否具有肿瘤干细胞样特性以及是否发生上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)。方法: 使用顺铂梯度浓度递增法构建舌鳞癌顺铂耐药细胞株,通过MTS、流式细胞术和球囊培养对比舌癌顺铂耐药株和其亲本细胞株化疗耐药性及肿瘤干细胞特性的变化,通过qRT-PCR和Western 免疫印迹检测肿瘤干性因子SOX2、OCT4、BMI1和ABCG2的表达,以及舌癌顺铂耐药株和其亲本细胞株中EMT的指标E-cadherin和Vimentin的表达水平,通过Transwell侵袭迁移实验研究侵袭和迁移能力的变化。采用SPSS 17.0 软件包对数据进行统计学处理。结果: 成功构建了2株舌鳞癌顺铂耐药株CAL27-res和SCC9-res,2株细胞对顺铂具有更强的耐药性。与亲本的舌癌细胞CAL27和SCC9相比,CAL27-res和SCC9-res细胞呈现间充质表型, E-cadherin显著下调(P<0.001),Vimentin和N-cadherin显著上调(P<0.001),侵袭、迁移能力显著增强(P<0.001)。同时,CAL27-res和SCC9-res细胞球囊形成能力增强,肿瘤干性因子SOX2、OCT4、BMI1和ABCG2上调(P<0.001),CD44⁺/CD24^-细胞的比例增高(P<0.001)。结论: 顺铂诱导的舌鳞癌耐药细胞发生EMT且获得了肿瘤干细胞样特性。     

Twist1调控上皮-间质转化促进舌鳞癌细胞顺铂耐药机制的研究

目的: 探讨Twist1调控上皮-间质转化（EMT）促进舌鳞状细胞癌细胞顺铂耐药的机制。方法: 在CAL27/CDDP中转染Twist1 siRNA,免疫印迹及免疫荧光检测E-cadherin、Vimentin的表达;免疫印迹检测Twist1、Slug的表达;Transwell及划痕实验检测细胞的侵袭、迁移能力;MTT检测细胞对顺铂的半抑制率。采用SPSS17.0 软件包对结果进行单因素方差分析。结果: 转染Twist1 siRNA可逆转CAL27/CDDP的EMT表型, E-cadherin表达增强,Vimentin、Twist1及Slug表达降低,细胞的侵袭、迁移能力明显降低,IC₅₀下降41.75%±5.10%（P<0.01）。结论: Twist1可通过调控上皮-间质转化而促进舌鳞癌细胞的顺铂耐药。     

miR-181a抑制舌鳞癌细胞上皮-间充质转化及化疗耐药机制的研究

目的:探讨miR-181a调控上皮-间充质转化(EMT)促进舌鳞状细胞癌细胞顺铂耐药的机制。方法:分别在CAL27/CDDP、CAL27中转染miR-181a mimics、miR-181a LNA,免疫印迹及免疫荧光检测E-cadherin、Vimentin的表达;免疫印迹检测Twist1、Slug的表达;Transwell及划痕实验检测细胞的侵袭、迁移能力;MTT法检测细胞对顺铂的半抑制率。利用生物信息学方法:预测Twist1可能为miR-181a的靶基因。构建包含Twist1结合序列片段的荧光素酶报告基因质粒,进行双荧光素酶报告基因实验。采用SPSS17.0软件包对结果进行单因素方差分析。结果:转染miR-181a mimics可逆转CAL27/CDDP的EMT表型,E-cadherin表达增强,Vimentin、Twist1及Slug表达降低,细胞的侵袭、迁移能力显著降低,IC₅₀下降47.57%±6.23%（P<0.05）。转染miR-181a LNA可诱导CAL27细胞发生EMT,E-cadherin表达降低,Vimentin、Twist1及Slug表达增强,细胞侵袭、迁移能力显著增强,IC₅₀升高55.61%±7.20%（P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验证实,Twist1是miR-181a的靶基因。结论:miR-181a靶向调控Twist1,从而抑制舌鳞癌细胞上皮-间充质转化与顺铂耐药。     

口腔鳞状细胞癌组织中Periostin的表达及其在上皮间质转化中的作用

目的:观察Periostin在口腔鳞状细胞癌组织中的表达情况,及其在上皮间质转化(EMT)中的作用。方法:用免疫组化法检测59例口腔鳞状细胞癌组织(实验组)和15例正常口腔黏膜组织(对照组)中Periostin、E-cadherin、Vimentin表达情况,分析Periostin与E-cadherin、Vimentin间相关关系。结果:59例口腔鳞状细胞癌组织中Periostin、E-cadherin、Vimentin阳性表达率分别为71.2%、52.5%、39.0%, Periostin表达与肿瘤TNM分期、分化程度、淋巴结转移密切相关(P＜0.05);且Periostin与E-cadherin表达降低和Vimentin表达上调间均存在相关性(P＜0.01)。结论:Periostin可能通过调控上皮间质转化促进口腔鳞状细胞癌侵袭转移。     

人舌鳞状细胞癌顺铂耐药细胞发生上皮-间质转化的研究

目的初步探讨人舌鳞状细胞癌（TSCC）化疗耐药与上皮．间质转化（EMT）的关系。方法以人舌鳞状细胞癌细胞、SCCl5及其顺铂耐药细胞株CAL27／CDDP、SCCl5／CDDP为研究对象。MTY检测两组亲本细胞及耐药细胞的半抑制率（IC50）,显微镜下观察两组亲本细胞及耐药细胞的形态．免疫荧光和Westonblot检测EMT相关分子标记蛋白E-cadherin和Vimentin的表达,Westonblot检测EMT转录因子Twistl和Slug的表达,Transwell及划痕实验检测细胞的侵袭迁移能力,结果采用单因素方差分析。结果CAL27／CDDP较CAL27IC。提高7．5倍（X^2=13．8043。P〈0．01）,SCCl5／CDDP较SCCl5IC50提高8．3倍（X^2=10．464,P〈0．01）。CAL27和SCCl5均为上皮细胞形态,CAL27／CDDP和SCCl5／CDDP呈间质细胞形态．且两组耐药细胞上皮标记蛋白E-cadherin表达下调．间质标记蛋白Vimentin表达上调,EMT转录因子Twistl、Slug表达上调,细胞的侵袭迁移能力明显增强。结论顺铂能成功诱导人舌鳞癌细胞发生EMT。     

肿瘤相关成纤维细胞促进舌鳞癌细胞上皮间质转化

目的：检测舌鳞癌组织中肿瘤相关成纤维细胞是否诱导舌癌细胞的上皮间质转化。方法：通过体外原代培养舌鳞癌组织肿瘤相关成纤维细胞的培养上清作用于舌鳞癌细胞系Tca8113,通过检测细胞形态确认肿瘤细胞是否发生上皮间质转化。利用实时定量PCR及免疫印迹检测舌鳞癌细胞上皮标志及间质标志物表达。利用TGF-β/Smad信号通路阻断剂探究TGF-β在此过程的作用。结果：肿瘤相关成纤维细胞促进Tca8113的上皮间质转化。利用实时定量PCR检测及免疫印迹发现肿瘤相关成纤维细胞可以明显促进Tca8113细胞的Vimentin的表达。SB431542,TGF-β/Smad信号通路特异性阻断剂可明显阻断肿瘤相关成纤维细胞条件培养基对Tca8113上皮间质转化的诱导作用。结论：舌鳞癌组织中的肿瘤成纤维细胞可通过诱导舌鳞癌细胞的上皮间质转化促进舌鳞癌细胞的迁移及侵袭,可能在肿瘤发展过程发挥重要作用。     

过表达TAZ促进口腔舌鳞癌细胞增殖迁移和侵袭的作用机制研究

目的 :探究过表达Tafazzin(TAZ)对口腔舌鳞癌CAL-27、SCC-15细胞增殖迁移侵袭的影响及其作用机制。方法:利用成功过表达TAZ的慢病毒载体转染CAL-27、SCC-15细胞,分为过表达TAZ组(overexpression TAZ, OE TAZ)和对照组(negative control, NC)。用CCK-8实验检测细胞增殖;用划痕实验检测细胞的迁移;用Transwell实验检测细胞侵袭。相关基因的mRNA水平和蛋白水平分别利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测。结果:qRT-PCR和Western blot结果显示,过表达TAZ病毒转染成功;过表达组较对照组增殖升高,迁移侵袭明显增强;增殖相关蛋白p-Erk,p-Akt表达量升高,上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白E-钙黏连蛋白(E-Cadherin)降低,波形蛋白(Vimentin)升高。结论:过表达TAZ可能通过影响p-Erk、p-Akt、E-Cadherin、Vimentin的表达促进口腔舌鳞癌CAL-27、SCC-15细胞的增殖迁移和侵袭。     

舌鳞状细胞癌上皮-间质转化与血管生成拟态的关系及意义

目的初步探讨舌鳞状细胞癌（TSCC）上皮-间质转化（EMT）与血管生成拟态（VM）的关系及意义。 方法对65例TSCC组织及相应癌旁正常组织采用免疫组化检测EMT标记物E-cadherin和Vimentin的表达情况,同时CD34联合PAS双重染色检测VM情况。 结果Vimentin在癌和癌旁正常上皮的阳性表达率分别是41.54%和0%,差异具有统计学意义（Z=-5.815,P= 0.000）,Vimentin表达与肿瘤组织分化、临床分期及有无淋巴结转移密切相关。E-cadherin在TSCC和癌旁正常上皮的阳性表达率分别是阳性率56.92%和100%,差异具有统计学意义（Z=-5.951,P= 0.000）,E-cadherin表达与临床分期及有无淋巴结转移密切相关。VM在TSCC和癌旁正常组织的出现的例数比率是33.14%和0%,差异具有统计学意义（Z=-3.946,P= 0.000）,VM与肿瘤临床分期及有无淋巴结转移密切相关。相关分析显示,E-cadherin与Vimentin具有负相关关系（r=-0.507,P= 0.000）,Vimentin表达与VM具有正相关关系（r= 0.592,P= 0.000）,VM与E-cadherin具有负相关关系（r=-0.518,P= 0.000）。 结论TSCC中存在EMT及VM,存在EMT和VM的TSCC具有更高临床分期和容易发生淋巴结转移,两者具有密切相关性,对TSCC侵袭、转移具有重要作用。     

肿瘤相关中性粒细胞诱导人粘液表皮样癌细胞上皮-间质转变和侵袭转移的功能及机制研究

目的:研究肿瘤相关中性粒细胞对人粘液表皮样癌MC3细胞上皮-间质转变(EMT)和侵袭转移过程调控的功能及机制。方法:分离培养C57小鼠骨髓中性粒细胞,Transwell检测肿瘤相关中性粒细胞对MC3侵袭和迁移的影响;Western印迹和Real-time PCR检测Vimentin等mRNA和蛋白表达;免疫荧光等检测Vimentin表达。结果:肿瘤相关中性粒细胞中TGF-β表达增加;MC3细胞与中性粒细胞共培养后Vimentin和Snail表达增加;裸鼠体内实验表明中性粒细胞浸润程度与Vimentin表达相关。结论:肿瘤相关中性粒细胞通过TGF-β诱导MC3细胞中Snail表达,并促进肿瘤侵袭和转移。     

Tumor budding correlates with poor prognosis and epithelial‐mesenchymal transition in tongue squamous cell carcinoma

J Oral Pathol Med (2011) 40 : 545–551 Background: Tumor budding is a readily detectable histopathological feature and has been recognized as an adverse prognostic factor in several human cancers. However, the prognostic value of tumor budding in tongue squamous cell carcinoma (TSCC) has not been reported. The purpose of this study was to assess the correlation of tumor budding with the clinicopathologic features, and the known molecular biomarkers (E‐cadherin and Vimentin), as well as to evaluate its prognostic significance for TSCC. Methods: Archival clinical samples of 230 patients with TSCC were examined for tumor budding. Immunohistochemistry analyses were performed to examine the expression of E‐cadherin and Vimentin. Statistical analyses were carried out to assess the correlation of tumor budding with clinicopathologic parameters and patient survival. The potential association between tumor budding and alterations of E‐cadherin and Vimentin expression was also assessed. Results: Of the 230 TSCC cases examined, tumor budding was observed in 165 cases (71.7%), with a mean tumor bud count of 7.5 (range from 1 to 48 buds). High‐intensity budding (≥5 tumor buds) was observed in 111 cases (48.3%). Statistical analysis revealed that tumor budding was associated with tumor size (P < 0.05), differentiation (P < 0.05), clinical stage (P < 0.05), lymph node metastasis (P < 0.01), and correlated with reduced overall survival. In addition, significant associations were observed among tumor budding and the deregulation of E‐cadherin (P < 0.001) and Vimentin (P < 0.001). Conclusions: Tumor budding, which associates with epithelial–mesenchymal transition, is a frequent event and appears to be an independent prognostic factor in TSCC.     

肿瘤-睾丸抗原NY-ESO-1在舌鳞状细胞癌中的表达及意义

目的：检测NY-ESO-1蛋白在舌鳞癌（tongue squamous cell carcinoma,TSCC）中的表达情况,分析其与肿瘤临床病理参数的关系,并探讨其作为TSCC免疫治疗靶标的可能性。方法：采用免疫组织化学EnVision法检测53例TSCC标本及10例正常舌黏膜中NY-ESO-1蛋白的表达,SPSS统计软件分析所得数据。结果：53例TSCC标本中13例NY-ESO-l阳性表达（24.5%）,定位于细胞浆,而10例正常舌黏膜无表达。NY-ESO-1蛋白的表达与肿瘤大小及临床病理分级有关（P〈0.05）,但与肿瘤浸润深度及有无淋巴结转移无关。结论：NY-ESO-1蛋白在中高分化TSCC组织中的表达较高,可以进一步研究其作为TSCC免疫治疗靶点的可行性。     

低氧诱导因子-1α在舌鳞状细胞癌中的表达及其与临床预后的关系

目的:探讨低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)在舌鳞状细胞癌(tongue squamous cellcarcinoma,TSCC)中的表达及其对临床预后的影响。方法:收集舌鳞状细胞癌组织标本49例以及相应癌旁组织标本15例。免疫组织化学法检测其中HIF-1α的表达。临床随访所选病例患者情况,将随访结果与HIF-1α表达情况进行统计分析。Kaplan-Meier方法分析无病生存期(DFS)和总生存期(OS)生存曲线,Log-Rank分析临床病理学参数与HIF-1α表达之间的意义。多变量Cox回归分析临床参数和HIF-1α表达之间的相关性。结果:在49例舌鳞状细胞癌标本中有43例表达HIF-1α,表达率为87.76%;而在癌旁组织中的表达率为33.33%,差异有统计学意义(P<0.05)。HIF-1α过表达与T分级(P=0.01)、组织分化(P<0.001)和淋巴结转移(P=0.05)密切相关。同时,HIF-1α过表达、组织分化和淋巴转移均与患者5年生存率(P<0.001,P=0.008,P<0.001)和无病生存率(P=0.01,P=0.020,P<0.001)密切相关。Cox比例风险回归模型表明,HIF-1α的过表达以及淋巴转移是影响舌鳞状细胞癌的预后独立因素。结论:舌鳞状细胞癌中存在HIF-1α的表达,HIF-1α的过表达预示舌鳞癌患者的预后较差。在舌鳞癌的检测与治疗中,它可能作为一个新的靶点发挥作用。     

舌鳞癌组织中CENP—H的表达及临床意义

目的：检测着丝粒蛋白-H（CENP—H）在舌鳞状细胞癌中的表达水平,并结合临床病理资料探讨其l临床意义。方法：采用免疫组织化学SP法检测168例舌鳞状细胞癌组织石蜡切片中CENP—H的表达情况。所有病例均有完整的『临床病理资料,应用SPSS13．0软件包对数据进行统计学处理,分析CENP—H表达水平对舌鳞癌的早期诊断和预后评估的价值。结果：168例舌鳞癌标本中,CENP—H的强阳性率为55．95％（94／168）;不同临床分期（P=0．005）、T分期（P=0．004）的CENP—H表达有显著性差异,随分期增高而表达升高;多因素Cox回归分析显示,CENP—H的表达水平（P=0．043）、临床分期（P〈0．001）分别是舌鳞癌患者的独立预后因素。生存分析显示,高表达CENP—H的患者生存率显著低于低表达CENP—H的患者（P=0．0011：早期舌鳞癌组中CENP—H高表达患者预后较差（P=0.000）。结论：CENP—H可能是与舌鳞癌发生、发展相关的标志物。对舌鳞癌患者的预后评估,特别是对早期患者的预后评估具有重要意义。     

尿路上皮癌胚抗原1（UCA1）在舌鳞癌中的表达及意义

目的：探讨尿路上皮癌胚抗原I（UCAl）mRNA在舌鳞状细胞癌中的表达及其与舌鳞癌病理分级和临床分期的关系。方法：采用SYBRGreenII实时荧光定量反转录聚合酶链反应实验方法．从6种基因中筛选出在40对舌鳞癌组织及配对正常舌组织样本中表达有明显差异的基因UCAl．扩大样本量至93例．检测UCAlmRNA在两者中的表达。应用SPSSl3．0软件包分析UCAlmRNA表达量与舌鳞癌患者临床病理学特征的关系。结果：UCAlmRNA在93例患者的肿瘤组织中平均表达量为0．7213,在正常舌组织中为0．2756,表达量有显著差异fP〈0．001）：UCAlmRNA的表达与患者的性别、年龄、肿瘤大小无关（P〉0．05）,与舌鳞癌的病理分级和临床分期有显著相关性（P〈0．05）。结论：UCAlmRNA高表达与舌鳞状细胞癌密切相关．对舌鳞癌的诊断、判断病理分级和临床分期具有重要意义。     

CD44V6、MMP-9在舌癌中的表达及其意义

目的：观察CD44V6和MMP-9在舌癌（tongue squarnous cell carcinomas,TSCC）组织中的表达及其与临床病理因素和预后的关系。方法：采用免疫组织化学PV9000法检测60例舌癌、21例转移淋巴结及15例癌旁正常组织中CD44V6和MMP-9的表达。结果：CD44V6在舌癌中的阳性表达率略低于癌旁组织,无显著意义;MMP-9在舌癌中的阳性表达率明显高于癌旁正常组织（P〈0.05）,并与舌癌的组织学分级呈正相关（P〈0.05）;在有颈淋巴结转移组中的舌癌组织CD44V6和MMP-9阳性表达率明显高于无颈淋巴结转移组（P〈0.05）;舌癌中CD44V6和MMP-9表达强阳性者有4例复发（5年内）。结论：CD44V6和MMP-9在舌癌组织中的表达与颈淋巴结转移密切相关,可作为评价舌癌颈淋巴结转移和预后的生物学指标。     

Livin、Bcl-2在舌癌中的表达及临床意义

目的:探讨舌癌组织中Livin蛋白的表达及其与Bcl-2蛋白表达的相关性。方法:采用免疫组织化学法(SABC法)检测Livin、Bcl-2在舌癌和正常舌黏膜组织中的表达。应用SPSS 13.0统计软件对数据进行统计学分析。结果:舌癌与正常舌黏膜组织中Livin蛋白阳性表达率分别为68.89%和10%,二者有非常显著的差异(P<0.01);Livin的高表达与舌癌组织学分化程度相关(P<0.05),与颈淋巴结转移密切相关(P<0.05)。舌癌与正常舌黏膜组织中Bcl-2蛋白阳性表达率分别为60.0%和0,二者有非常显著的差异(P<0.01);经Spearman等级相关分析,Livin与Bcl-2之间呈正相关(r=0.353,P=0.027)。结论:Livin蛋白在舌鳞癌组织中高表达,显著高于正常舌黏膜组织:Bcl-2蛋白在舌鳞癌组织中高表达,而在正常舌黏膜组织中无表达:在舌鳞癌组织中Livin与Bcl-2蛋白表达呈正相关。     

BDNF、TrkB和E-cadherin在唾液腺腺样囊性癌中的表达及意义

目的 研究BDNF、TrkB和E-cadherin在唾液腺腺样囊性癌（salivary adenoid cystic carcinoma,SACC）中的表达及其与临床病理特点的关系。方法：采用免疫组织化学染色检测76例唾液腺腺样囊性癌和20例正常唾液腺组织中BDNF、TrkB和E-cadherin的表达情况,并分析其与临床病理特征之间的关系。采用SPSS17.0软件包对实验结果进行χ²检验、Wilcoxon秩和检验、Spearman相关系数检验。结果：与正常唾液腺组织相比,BDNF、TrkB在SACC组织中呈现高表达,阳性表达率分别为89.5%、92.1%;E-cadherin呈现中低表达,阳性表达率为46.1%。BDNF的表达与肿瘤临床分期、肿瘤转移显著相关（P<0.05）。TrkB的表达与肿瘤临床分期、神经侵袭、肿瘤转移显著相关（P<0.05）。 E-cadherin的表达与肿瘤病理分型、临床分期、神经侵袭、转移呈显著负相关（P<0.05）。在SACC中,BDNF表达与 E-cadherin表达无显著相关性（P>0.05）,而TrkB表达与E-cadherin表达呈显著负相关（P<0.05）。结论：BDNF、TrkB和E-cadherin的表达与SACC的临床病理特征密切相关,检测3者的表达对SACC的诊断和临床病理研究具有重要的参考价值。     

尿激酶型纤溶酶原激活剂及其抑制剂在舌鳞癌中的表达及意义

目的:研究尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)及其抑制剂(PAI-1)在舌鳞癌(TSCC)中的表达及其与临床病理参数的关系.方法:应用链霉卵白素-生物素复合体方法检测uPA及PAI-1在74例TSCC组织和15例癌旁正常黏膜中的表达.以SPSS10.0软件包对数据进行统计学处理,Kappa一致性法分析uPA和PAI-1表达...