鼠白细胞介素—2受体α,β链基因反义RNA真核表达质粒的 …

目的 构建鼠ＩＬ－２Ｒα与β链基因的反义ＲＮＡ真核表达质粒,为反义ＲＮＡ基因治疗细胞免疫相关疾病作准备。方法 用限制性内切酶从克隆体上切下鼠ＩＬ－２Ｒα与β链ｃＤＮＡ及鼠ＩＬ－２启动子,克隆入真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３的多克隆位点上,用酶切或ＰＣＲ法鉴定正反连接。结果 得到４个反向连接的重组质粒：ｐｃＡｎｔｉ－ｍＩＬ－２Ｒα,ｐｃＡｎｔｉ－ｍＩＬ－２Ｒβ,ｐ;ｃＡｎｔｉ－ｍＩＬ－２Ｒαβ及ｐｃｉＡｎ     

尿激酶受体反义RNA表达质粒的构建

目的 构建能在哺乳动物细胞中表达尿激酶受体（ｕＰＡＲ）反义ＲＮＡ的表达质粒ｐＵＲＡＳ。方法 采用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增并克隆尿激酶受体（ｕＰＡＲ）ｃＤＮＡ５’端－４６￣４５４ｂｐ一段为５００ｂｐ的顺序，利用ＤＮＡ重组技术将该片段反向插入表达载体ｐｃＤＮＡ３的ＣＭＶ启动子下游。结果 限制性内切酶分析和ＤＮＡ顺序分析证实ＲＴ－ＰＣＲ获得ｕＰＡＲ ｃＤＮＡ片段与文献报道相吻合；重组质粒ｐＵＲＡＳ转染肺癌细     

尿激酶受体反义RNA表达质粒的构建

构建能在哺乳动物细胞中表达尿激酶受体（ｕＰＡＲ）反义ＲＮＡ的表达质粒ｐＵＲＡＳ。方法采用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增并克隆尿激酶受体（ｕＰＡＲ）ｃＤＮＡ５’端－４６～４５４ｂｐ一段长５００ｂｐ的顺序，利用ＤＮＡ重组技术将该片段反向插入表达载体ｐｃＤＮＡ３的ＣＭＶ启动子下游。结果限制性内切酶分析和ＤＮＡ顺序分析证实ＲＴ－ＰＣＲ获得的ｕＰＡＲｃＤＮＡ片段与文献报道相吻合；重组质粒ｐＵＲＡＳ转染肺癌细胞株９５Ｄ，ＮｏｒｔｈｅｒｎＢｌｏｔ证实转染细胞克隆有ｕＰＡＲ反义ＲＮＡ的表达。结论重组质粒ｐＵＲＡＳ能在肺癌细胞株９５Ｄ中表达尿激酶受体反义ＲＮＡ，尿激酶受体（ｕＰＡＲ）反义ＲＮＡ表达质粒的构建获得成功。     

可溶性白细胞介素-2受体的研究进展

白细胞介素-2（简称白介素-2、IL-2）在机体免疫应答中起重要作用，其可溶性受体（sIL－2R）通过与细胞受体竞争性结合对IL-2起调节作用。血清中sIL－2R的浓度能灵敏地反映出机体的免疫状态，尤其是细胞免疫功能。因此，临床检测血清sIL-2R可作为血液系统恶性疾病、淋巴瘤、实体瘤、自身免疫病、感染及器官移植等的辅助诊断、判断疗效和预后的敏感指标。     

人白细胞介素－2基因真核表达载体构建

人白细胞介素－２基因真核表达载体构建郑强，范清宇，殷剑宁，惠宏襄（第四军医大学唐都医院骨科西安７１００３８第四军医大学生物化学教研室）关键词白细胞介素－２，基因治疗，逆转录病毒载体中图号０７８４白细胞介素－２（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ，ＩＬ－２）是Ｔ细...     

白细胞介素-2及其受体与食管癌的关系研究进展

白细胞介素-2（IL-2）是1976年Morgan和同事在诱生培育外周血单核细胞时首先发现的，当时被命名为T细胞生长因子（T cell growth factor，TCGF），从发现至今国内外学者对其结构、生物学特性、作用机制、纯化鉴定、基因分析及临床应用等做了大量研究，1979年统一命名为IL-2，由于IL-2所具有的广泛的生物学活性和潜在的临床应用前景，受到广泛关注。白细胞介素2受体（IL-2R）是1985年由Rubin首先发现的一种蛋白，它有两种存在形式，一种位于细胞膜mIL-2R（membrane IL-2R），另一种出现于血液和培养上清液中即可溶性sIL-2R（soluble IL-2R），sIL-2R的增高与许多疾病相关联，并且检测容易而引起临床工作者的重视。现就IL-2及其受体在食管癌中的作用作一综述。     

NIDDM淋巴细胞白细胞介素-2受体及转铁蛋白受体的表达

为了探讨NIDDM患者外周血中单个核细胞白细胞介素 - 2受体 (IL - 2R、CD2 5)及转铁蛋白受体 (TfR、CD71)的表达情况 ,了解NIDDM免疫功能状态 ,采用卵白素·生物素·过氧化物酶复合物 (ABC)法检测了 73例不同病程NIDDM患者外周血的CD2 5、CD71水平。结果表明 :NIDDM患者有无并发症CD2 5、CD71均显著低于正常对照组 (P <0 .0 1) ,有并发症组显著低于无并发症组 (P <0 .0 1)。提示NIDDM存在细胞免疫功能的降低 ,且随着病情的进一步加重其降低更明显 ,此方法可作为NIDDM病情进展及转归的辅助监测指标     

人分泌型白细胞介素2受体α链基因的克隆及其在真核细胞…

删除人白细胞介素－２受体α链ｃＤＮＡ中编码胞质内１３个氨基酸及跨膜区１９个氨基酸残基的ＤＮＡ片段后，接上人工合成的终止寡核苷酸片段，改建后的ｃＤＮＡ与真核表达载体ｐＲｃ／ＣＭＶ重组成质粒ｐＣＭＶ／ｒｓＩＬ２Ｒ。用电打孔及磷酸钙法将此质粒转染ＣＨＯ细胞，经Ｇ４１８筛出表达Ｎｅｏ基因的克隆２０株，通过ｍＲＮＡ狭缝杂交及ＥＬＩＳＡ检测，有５株能稳定表达分泌型α链ｍＲＮＡ及蛋白，其中４株细胞培养上清中的Ｉ     

外源性哮喘患者白细胞介素2和可溶性白细胞介素2受体的测定

采用酶联双抗体夹心法,对36例哮喘患者和54例正常献血者(对照组)进行了外周血单个核细胞诱生白细介素2(IL-2)水平的检测。结果;哮喘组外周血单个核细胞诱生的IL-2活性[吸光度(A)值]为0.2015±0.0225,血浆可溶白细胞介素2(sIL-2)水平为167.5±52.4kU/L,均高于对照组[前者A值为0.1881±0.0300,后者为(114.2±48.6)kU/L(P<0.05,P<0.01)]。提示:外源性哮喘患者发病中存在着T淋巴细胞的活化,导致IL-2诱生水平和血浆sIL-2R水平的增高,二者在哮喘发病机制中起着一定的作用。     

IL-1β反义RNA真核表达载体的构建

目的 通过构建IL-1β反义RNA真核表达载体,为进一步研究IL-1β奠定了基础.方法 采用RT-PCR法分别获取IL-1β的两段基因序列,利用基因工程方法构建IL-1β反义RNA真核表达载体,并对其进行反复PCR鉴定、单酶切鉴定和DNA序列分析.结果 经最终DNA序列分析证实,成功构建了人IL-1β反义RNA真核表达载体.结论 本研究为IL-1β尤其是肿瘤微环境中IL-1β作用的研究提供了证据.     

舌下神经核神经元内白细胞介素2受体、孕激素受体和谷氨酸受体共存

为了探讨一个神经元同时受到免疫，神经内分泌物质调节的可能性，在大鼠舌下神经核的两张相邻切片上一张切片用PAP法与SABC法相结合，显示白细胞介素2受体（IL-2R0和孕激素受体（PR），另一张用SABC法显示代谢型谷氨酸5亚型受体（mGluR5)。结果表明，在舌下神经核的IL-2R/PR双标切片上，可见3类阳性反应细胞，IL-2R免疫反应单标细胞，PR免疫反应单标细胞，IL-2R/PR免疫反应双标细胞，后者约占舌下神经核阳性反应细胞的45%，在另一张相邻的显示mGluR5的切片上，有较多的免疫反应阳性细胞，将两张相邻切片的照片进行对合检查证明，在大鼠舌下神经核存在IL-2R/PR/mGluR5三类物质受体共存的神经元，它们约占IL-2R/PR双标细胞总数的25%，提示免疫，神经，内分泌物质可能通过共存于同一神经元上的相应受体共同调节神经元的功能。     

白血病患者血清可溶性白细胞介素-2受体的检测

目的：检测白血病患者血清可溶性白细胞介素－２受体（ＳＩＬ－２Ｒ）水平、缓解期ＣＤ４、ＣＤ８及慢笥粒细胞白血病（ＣＭＬ）患者ｐｈ＾１染色体阳性率以按摩ＳＩＬ－２Ｒ水平变化的临床意义及其与ＣＤ４、ＣＤ８及ｐｈ＾１阳性率的关系。方法：双抗体夹心酶联免疫吸附法测ＳＩＬ－２Ｒ,ＡＰＡＡＰ法测ＣＤ４－ＣＤ８阳性率;Ｒ显带法测ＣＭＬ的ｈｐ＾１阳性率。结果：白血病组ＳＩＬ－２Ｒ水平高于对照组（Ｐ均〈０．０１）,且     

可溶性白细胞介素-2受体与支气管哮喘

支气管哮喘是常见病和多发病，多种细胞因子参与了支气管哮喘的发病过程。发作期支气管哮喘患者血清可溶性白细胞介素—2受体(SIL—2R)水平明显增高。本文就这方面的进展作一综述。     

夏秋花粉免疫治疗哮喘患者SIL-2R和总IgE的变化

目的 探讨变应原免疫治疗变应性哮喘SIL-2R及总IgE水平的变化。方法 用夏秋花粉浸液按脱敏常规方法对36例夏秋花粉变应性哮喘患者进行免疫治疗1年。治疗前后测定SIL-2R和总IgE水乎。结果 免疫治疗后临床有效率达86．11％，治疗前非免疫疗法组和免疫疗法组血清SIL-2R和总IgE明显高于对照组(P＜0．01，P＜0．001)。治疗后免疫疗法组2项指标明显下降(P＜0．01，P＜0．001)。5例无效者和非免疫疗法组下降不明显(P＞0．05)。结论 免疫疗法能使夏秋花粉变应性哮喘息者血清SIL-2R和总IgE水乎明显降低。     

慢性乙型肝炎中可溶性白细胞介素2受体与其它血清学指标的关系

目的 :探讨血清可溶性白细胞介素 2受体 (sIL 2R)在慢性乙型病毒性肝炎 (慢乙肝 )中的发病机制及sIL 2R与肝纤维化指标、肝功能的相关关系。方法 :对 312例肝活检病人按组织病理学炎症和纤维化程度进行分级分期 ,同时检测了病人血清sIL 2R、肝功能及肝纤维化相关指标。结果 :血清sIL 2R均值较对照组明显增高 (P <0 .0 1) ,增幅随着肝脏病理炎症和纤维化程度的加重而逐渐加大 ,各组间比较差异有显著性 (P <0 .0 5或P <0 .0 1)。sIL 2R与血清白蛋白 (A)呈显著负相关 ,与血清脯氨酸肽酶 (PLD)、Ⅳ型胶原 (CⅣ )、层粘连蛋白 (LN)、透明质酸 (HA)、Ⅲ型前胶原氨基端肽 (PⅢNP)、肝功指标中的TB、DB、G、ALT、AST、AKP、γ GT呈显著正相关 (P <0 .0 5或P <0 .0 1)。结论 :慢乙肝病人血清sIL 2R水平与A呈显著负相关 ,与PLD、CⅣ、LN、HA、PⅢNP呈显著正相关 ;sIL 2R的血清水平能反映肝脏组织学病变的程度 ,可作为判断肝组织炎症和纤维化程度的参考指标。     

急性扁桃体炎患者IL-2、6和SIL-2R水平的研究

目的 探讨急性扁桃体炎患者血清中的白细胞介素－2、可溶性白细胞介素－2受体和白细胞介素－6水平。方法 采用放射免疫法（RIA）和双抗体夹心酶联免疫吸附测定法（ELISA），测定了25例急性扁桃体炎患者、20例健康人血清中白细胞介素－2、可溶性白细胞介素－2受体和白细胞介素－6的水平。结果 急性扁桃体炎患者血清中白细胞介素－2、可溶性白细胞介素－2受体和白细胞介素－6的水平均高于健康人（P＜0．05）。结论 三种细胞因子参与了急性扁桃体炎的病理过程。     

狼疮性肾炎患者血清中可溶性白细胞介素－2受体的研究

本实验采用ＥＬＩＳＡ方法，测定了狼疮性肾炎患者血清中可溶性白细胞介素－２受体（ｓＩＬ－２Ｒ）浓度的变化。结果表明：狼疮性肾炎患者血清中ｓＩＬ－２Ｒ水平明显高于正常对照组（Ｐ＜０．０１）。该结果提示狼疮性肾炎患者的细胞免疫功能低下与ｓＩＬ－２Ｒ有密切关系。ｓＩＬ－２Ｒ可能是通过阻断白细胞介素－２（ＩＬ－２）介导的细胞免疫反应而导致狼疮性肾炎的发病。本实验方法简便易行，便于临床推广使用，并可作为临床观察病情变化及判定疗效的一种新的、有用的指标。     

老年患者白细胞介素Ⅱ及其受体变化的初步研究

作者检测了４０例健康献血者，２０例健康老人及８６例老年患者外周血白细胞介素Ⅱ活性及血、尿中可溶性白细胞介素Ⅱ受体的水平。结果显示老年人血白细胞介素Ⅱ活性明显低于青中年人，其可溶性白细胞介素Ⅱ受体则明显高于青中年组，此在老年组肿瘤及糖尿病患者尤为突出。尿可溶性白细胞介素Ⅱ受体在老年患者亦升高，但与外周血白细胞介素Ⅱ升高不呈比例。     

mTLR2基因在CHO细胞中的表达

目的在CHO细胞中表达小鼠TLR2(mTLR2)。方法将目的基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1中,并将其转染到CHO细胞,用G418筛选阳性克隆。采用PCR方法,检测外源基因的整合。采用Westernblot、免疫组织化学对转染细胞的mTLR2表达进行鉴定。结果成功构建了pcDNA-mTLR2重组质粒。将其转染到CHO细胞,经G418筛选获得阳性细胞克隆。阳性细胞克隆经PCR检测表明TLR2基因得到稳定整合。Westernblot分析显示在分子量约95000处可见清晰的阳性反应条带。免疫组织化学检测显示转染细胞表达mTLR2。结论获得了表达mTLR2的细胞株,为进一步进行相关研究奠定了基础。