维甲酸诱导HL-60细胞凋亡的研究

目的：观察维甲酸（ＲＡ）在体外诱导ＨＬ６０细胞（人早幼粒细胞白血病细胞株）凋亡的作用,探讨维甲酸治疗早幼粒细胞白血病的作用机制。方法：用ＤＮＡ电泳、ＤＮＡ片段定量测定技术、流式细胞术分析及光镜和电镜观察凋亡细胞。结果：在体外培养中加维甲酸５０ｍｇ／Ｌ孵育４ｈ,ＤＮＡ片段率达５５７％±１２１％,而对照为１２５％±４９％（Ｐ＜０００１,ｎ＝９）;流式细胞术检测发现,在５０ｍｇ／Ｌ维甲酸作用下,细胞凋亡达５０％,对照为９％。电镜观察维甲酸组ＨＬ６０细胞出现典型的凋亡细胞形态改变。维甲酸诱导ＨＬ６０细胞凋亡具有剂量及时间依赖性,维甲酸作用６ｈ,出现凋亡高峰;随维甲酸浓度升高,诱导凋亡作用明显增强。在环孢素Ａ（ＣｓＡ）存在时,低浓度的维甲酸也有明显诱导ＨＬ６０细胞凋亡作用。结论：维甲酸在体外能诱导ＨＬ６０细胞凋亡,ＣｓＡ能增强维甲酸诱导ＨＬ６０细胞凋亡活性。研究提示诱导白血病细胞凋亡是维甲酸治疗急性早幼粒细胞白血病的重要机制之一。     

乙醇诱导肝癌细胞凋亡的形态学观察

目的：探讨在乙醇诱导下发生凋亡时,原发性肝细胞癌（简称肝癌）细胞的形态学变化。方法：用含60mL.L^-1乙醇的培养液持续作用6h诱导人肝癌细胞系HCC－9204凋亡,进行凋亡活细胞的台盼蓝,吖啶橙／溴化乙啶（AO／EB）染色,凋亡细胞固定后的May-Grunwald-Giemsa (MGG),HE染色和透和透射电镜观察,并进行TUNEL法凋亡检测。结果：60mL.L^-1乙醇可使HCC－9204细胞产生明显的细胞固缩,变圆,胞核和胞质浓染,胞核呈颗粒状,环形或新月体状,胞质可见“出泡”现象等凋亡形态学变化,大部分细胞为台盼蓝拒染,并呈TUNEL阳性着色,部分TUNEL阳性细胞也可见明显的凋亡形态学变化。结论：乙醇可使肝癌细胞产生明显的凋亡形态学变化。TUNEL法可原位同时显示凋亡细胞的形态和分布。     

8-硝基白杨素诱导HL-60细胞生长抑制和凋亡

目的:研究8-硝基白杨素(8-nitrochyrsin,NOChR)对HL-60细胞生长和凋亡的影响。方法:MTT法检测HL-60细胞增殖活性;台盼蓝染色细胞计数法测定细胞存活率,绘制细胞生长曲线;PI染色流式细胞术分析细胞周期和凋亡率。结果:NOChR呈浓度依赖性对HL-60细胞增殖具有抑制作用;NOChR显著抑制HL-60细胞生长;PI染色流式细胞术结果表明以浓度依赖方式诱导HL-60细胞凋亡,且使细胞周期阻滞于G1期。结论:NOChR具有诱导HL-60细胞凋亡的作用,其机制可能与细胞周期G1期阻滞相关。     

131I-GM-CSF诱导HL-60细胞凋亡机制的体外研究

目的:观察131I-GM-CSF诱导HL-60细胞凋亡及其机制,探讨其在急性髓系白血病放射导向治疗中的作用.方法:采用MTT法、TUNEL、透射电子显微镜研究131I-GM-CSF辐射后HL-60细胞的存活率、凋亡率和形态的改变;用流式细胞术和免疫细胞化学方法检测线粒膜电位的改变以及凋亡相关基因的表达.结果:放射性浓度≥18.5×108Bq/L时HL-60细胞存活率显著下降.131I-GM-CSF能致HL-60细胞凋亡、超微结构破坏、线粒体膜电位降低.在诱导细胞凋亡过程中,p53表达上调,bcl-2、bcl-xl表达下调.结论:GM-CSF作为载体携带131I能诱导HL-60细胞凋亡,具有抗白血病的作用.其诱导凋亡的机制与上调p53,下调bcl-2、bcl-xl,开放线粒体膜的通透性转换孔,降低线粒体膜电位有关.     

水杨酸钠对人早幼粒细胞白血病HL-60细胞的影响

目的：研究水杨酸钠对HL－60细胞的影响。方法，用MTT法检测水杨酸钠对HL－60细胞存活率的影响，光镜、电镜观察细胞形态学变化；流式细胞术分析DNA含量；Annexin-V结合分析检测靶细胞磷脂酰丝氨酸外化。结果：水杨酸钠明显抑制HL－60细胞生长，并呈时间，剂量信号性；5mmol.L^-1(IC50)的水杨酸钠作用后，HL－60细胞出现典型的凋亡形态特征，并检测到亚二倍体峰；同时，靶细胞磷脂酰丝氨酸外化率显著高于阴性对照组（0．24vs0.03)。结论：水杨酸钠能抑制HL－60细胞生长并促进其凋亡。     

DADS诱导人白血病细胞HL-60凋亡的流式细胞术检测

目的 运用流式细胞术检测二烯丙基二硫(diallyl disulfide, DADS)诱导人白血病HL-60细胞凋亡的作用. 方法 实验分对照组和DADS处理组,进行体外细胞培养,进行细胞形态学观察,应用流式细胞术检测凋亡率、早期凋亡细胞以及caspase-3活性. 结果 DADS诱导前后,HL-60细胞形态学发生明显改变,PI单染法检测结果 :随着不同浓度DADS作用HL-60细胞24 h,HL-60细胞出现明显亚二倍峰,细胞周期也发生了相应的改变;Annexin V/PI 双染法检测结果 :10 mg/L DADS作用HL-60细胞4、8、12和24 h后,早期凋亡细胞显著增加,具有明显的时间依赖性(P<0.05);间接免疫荧光流式细胞术结果 显示在DADS诱导HL-60细胞凋亡过程中有caspase-3的活化,且与作用时间呈依赖关系. 结论 流式细胞术检测结果 表明,DADS能有效诱导HL-60细胞凋亡.     

益康唑诱导HL-60白血病细胞内质网应激反应性细胞凋亡

目的研究唑类抗真菌药物益康唑（Ec）的抗白血病作用及其机制。方法将12μmol／L Ec、0．1μmol／L倍半萜烯酯（Tg）和0．2μg／ml依霉素（Tu）作用于体外培养的人急性髓细胞性白血病细胞HL-60，利用细胞核荧光染色进行形态学观察．Western blot法检测分子伴侣蛋白（GRP78）和胱天蛋白酶（Caspase）的表达。结果HL-60细胞经Ec，Tg和Tu处理后．细胞呈典型的凋亡形态，凋亡率分别为94％、63％和85％。分子伴侣蛋白GRP78的表达明显增加．位于内质网的Caspase12被活化。结论Ec可诱导人白血病HL-60细胞内质网应激反应性细胞凋亡，凋亡的发生与蛋白质合成抑制．Caspase12的活化有关。     

辛伐他汀诱导大鼠血管平滑肌细胞凋亡及对凋亡相关基因表达的影响

目的 :观察辛伐他汀诱导大鼠血管平滑肌细胞 (VSMC)凋亡及可能参与其中的凋亡相关基因。方法 :贴块法体外培养 VSMC,以透射电子显微镜技术、流式细仪 PI/Annexin 双重染色等鉴定细胞凋亡 ;Western印迹杂交法检测 Bax、Bcl- 2蛋白表达及 caspase- 3的激活情况。结果 :加入 30μmol/L辛伐他汀 2 4 h后电镜显示细胞呈典型的凋亡形态 ,PI/Annexin 染色流式细胞仪检测凋亡细胞占 (35 .5± 5 .8) %显著多于对照组 (15 .1± 5 .0 ) %(P<0 .0 5 ) ;辛伐他汀不改变 Bcl- 2蛋白的表达 ,而使 Bax蛋白表达增高并激活 caspase- 3。结论 :辛伐他汀能诱导VSMC产生凋亡 ,并与 Bax表达增高及 caspase- 3的激活有关     

器官衰竭中白细胞凋亡的研究

目的 探讨细胞凋亡百分率与多系统器官衰竭(MOF)的预后关系.方法采用对照双盲法流式细胞仪检测MOF患者外周血淋巴细胞与单核粒细胞的凋亡早期、凋亡性死亡百分率.结果①MOF患者淋巴细胞、单核粒细胞凋亡早期和凋亡性死亡率高于对照组(P＜0.05);②MOF患者单核粒细胞凋亡性死亡百分率与器官衰竭数目成正相关;③单核粒细胞凋亡总百分率、器官衰竭数与MOF患者死亡成正相关.结论 MOF患者外周血单核粒细胞凋亡异常增加,并且与衰竭器官数目和死亡正相关.     

The up-regulated differentially expressed genes in HL-60 cell line treated with nocodazole

Objective：Microtubule damaging agents such as nocodazole have been used in the clinical cancer chemotherapy. However, the molecular mechanisms of apoptosis induction activity of these agents are still unclear. We previously demonstrated that nocodazole induced apoptosis in human leukemic HL-60 cells. In order to investigate the genes involved in this process, cDNA RDA was performed to identify upregulated genes in the apoptosis process induced by nocodazole. Methods ：Sixteen up-regulated genes were identified and confirmed to be differentially expressed, including ribosomal proteins, cytochrome b, Wilm＇s tumor related protein QM gene, alpha-tubulin isoform 1, heterogeneous nuclear ribonucleoprotein C enzymes, follicular lymphoma variant translocation 1, Ribophorin I , etc. Results：It was the first time for several genes reported to be related to apoptosis, including one functionally unkown gene, BING4. We also analyzed the expression of these genes in apoptosis induced by etoposide, and results showed 9 genes were also up-regulated, indicating they could be important genes involved in apoptosis. Conclusion：The study provides important clues to understand mechanism of apoptosis induced by nocodazole, and establishes foundation for further study.     

蛋白酶体抑制剂硼替佐米诱导髓系白血病细胞株HL60凋亡的机制研究

目的 探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米诱导髓系白血病细胞HL60凋亡的机制。方法 四甲基偶氮唑盐（MTT）法、Hoechst33342染色形态学观察及流式细胞仪证实细胞凋亡,Western印迹检测B细胞淋巴瘤／白血病-2（Bcl-2）、Caspase-9、Caspase-3、多聚ADP-核糖聚合酶（PARP）蛋白表达。结果 硼替佐米对HL60细胞的增殖抑制作用呈浓度和时间依赖关系,30nmol/L的硼替佐米作用24h能明显抑制HL60细胞增殖,抑制率为76％,形态学观察可见明显的胞核凝聚、固缩及碎裂;流式细胞仪检测可见明显的凋亡峰凋亡率为62．6％;Western印迹检测显示Bcl-2表达下降,Caspase-9、Caspase-3、PARP蛋白均裂解激活。结论 硼替佐米能诱导髓系白血病细胞HL60凋亡,其机制与Bcl-2蛋白的抑制及Caspase凋亡信号途径的激活有关。     

大蒜素对人白血病HL-60细胞生长和凋亡的影响

目的: 探讨大蒜素对人白血病HL-60细胞生长抑制和诱导凋亡作用。方法: MTT比色分析法检测大蒜素对HL-60细胞生长的抑制作用,光镜观察细胞凋亡形态学变化,流式细胞术分析大蒜素对HL-60细胞凋亡的影响。结果: 20mg/L、40mg/L、60mg/L大蒜素均能抑制HL-60细胞生长,其抑制作用呈剂量-效应关系,40mg/L大蒜素能诱导HL-60细胞出现典型凋亡形态学变化。大蒜素诱导HL-60细胞有凋亡现象和阻滞细胞周期于G₂/M期。结论: 大蒜素对人白血病HL-60细胞生长有抑制作用,其抑制作用与诱导HL-60细胞凋亡和阻抑细胞周期有关。     

抗肿瘤海洋放线菌LYG-1的筛选及分类鉴定

从连云港海域海泥中分离得到一株具有抗肿瘤活性海洋放线菌LYG-1,通过对其形态特征、培养特征、生理生化特性的研究以及16S rRNA基因序列分析,将海洋放线菌LYG-1归属为链霉菌属玫瑰孢链霉菌(Streptomyces roseos-porus)的新的海洋变种。利用MTT法对海洋放线菌LYG-1发酵产物的抗肿瘤活性进行了初步研究,结果表明放线菌LYG-1的发酵原液对HepG2、MCF-7、HCT116以及MDA-MB-231 4种肿瘤细胞具有良好的体外抗肿瘤活性。     

自分泌血管内皮细胞生长因子对HL-60细胞生物学活性的影响

目的研究自分泌血管内皮细胞生长因子(VEGF)对髓系白血病细胞株HL-60的增殖及凋亡影响。方法采用脂质体转染VEGF165 cDNA入HL-60细胞,通过RT-PCR及ELISA方法鉴定转染克隆HL-60/VEGF165细胞中VEGF mRNA及蛋白的表达,MTT、集落形成实验比较HL-60/VEGF165及带有pcDNA3.1-- neo空载体的HL-60/neo细胞增殖活性,流式细胞仪观察转染细胞凋亡。结果HL-60/ VEGF165细胞的VEGF mRNA表达量增加,细胞培养上清中VEGF蛋白浓度为(399.07±12.45)ng/L,高于HL-60/neo 细胞的(184.45±10.53)ng/L(P<0.01);HL-60/VEGF165细胞与其对照组HL-60/neo 细胞相比较,生长速度明显加快,集落形成能力明显增加,集落数分别为(157.00±17.00)/500细胞和(110.00±12.90)/500细胞(P<0.05),而细胞凋亡率减少,分别为(3.18±0.33)%和(6.61±0.50)%。结论自分泌VGEF在白血病细胞的增殖与凋亡中起重要作用。     

昆明山海棠总生物碱诱发HL-60细胞凋亡的观察

目的 观察昆明山海棠（TH）总生物碱诱导白血病细胞凋亡的发生情况。方法 应用台盼蓝染色法,荧光双重染色法,DNA电泳结合流式细胞仪对HL-6O细胞的凋亡进行观测。结果 HL-60细胞在TH总生物碱作用下出现典型的细胞凋亡特征,包括细胞形态改变、DNA梯状带及亚G1峰,且动态变化过程较为一致。结论 TH总生物碱具有较强的诱导白血病HL-60细胞凋亡的能力,总生物碱是TH诱导凋亡的有效成份之一。     

二烯丙基二硫诱导HL-60细胞系凋亡及其与Caspase-3的关系

目的研究二烯丙基二硫（DADS）诱导白血病细胞凋亡及其机制。方法实验分对照组、DADS处理组、Ae—DEVD—CHO预处理组，进行体外细胞培养，采用形态学观察、MTT法、流式细胞术、DNA凝胶电泳等方法，进行细胞形态学观察、细胞增殖抑制作用研究，检测细胞凋亡率、Caspase-3活性以及DNALadder检测。结果DADS诱导前后，HL-60细胞形态学发生明显改变，DADS以剂量依赖的方式抑制细胞的生长，在DADS诱导HL-60细胞凋亡过程中有Caspase-3的活化，且与剂量和作用时间呈依赖关系，Caspase-3抑制剂Ac—DEVD—CHO能抑制DADS诱导HL-60细胞凋亡。结论DADS能有效地诱导HL-60细胞凋亡，其过程与Caspase-3活化相关。     

FOXO3a转录因子对自血病HL60细胞增殖和凋亡的影响研究

目的:研究转录因子FOXO3a对急性粒细胞白血病HL60细胞株增殖、凋亡的影响及可能的分子机制.方法:将FOXO3a表达质粒pcDNA3.1-FOXO3a及空载对照质粒pcDNA3.1分别经阳离子脂质体介导转染HL60细胞,用G418筛选出FOXO3a稳定表达细胞株.台盼蓝拒染法和MTT法检测HL60细胞增殖,流式细胞...     

流式细胞术分析不同剂量X射线对HL-60细胞周期的影响及其诱导的细胞凋亡

比较不同剂量X射线对HL-60细胞的影响,建立X射线诱导HL-60细胞凋亡的生物研究模型,探索细胞周期检测点对放射剂量的耐受性.采用对数生长期的HL-60细胞经2,5,10,15,20Gy的X射线照射后培养4h,用流式细胞仪分析HL-60细胞周期的改变.结果发现,不同剂量X射线照射均可诱导HL-60细胞凋亡,凋亡率有随照射剂量增大而增高的趋势.经2,5Gy剂量照射的HL-60细胞主要表现为S期细胞的比例减少,G2/M期细胞的比例增多,经15,20Gy剂量照射的HL-60细胞主要表现为S期细胞和G2/M期细胞的比例均减少.结果显示,以X射线照射HL-60细胞可建立理想的射线诱导的细胞凋亡模型,小剂量照射和大剂量照射可能引起不同时相的细胞发生凋亡,提示细胞对放射剂量的反应性与细胞周期检测点之间存在一定的关系.