凉血化瘀方治疗湿性老年黄斑变性临床研究

目的初步评价凉血化瘀方治疗湿性老年黄斑变性的疗效。方法随机纳入湿性老年性黄斑变性患者54例54只眼。初诊时查对数视力表、眼底彩照、荧光素眼底血管造影及眼底光学相干断层扫描，并予以凉血化瘀方进行治疗。观察治疗后视力、荧光素眼底血管造影和眼底光学相干断层扫描的变化。结果视力治疗前后结果：治疗1个月后，54例患者中，视力改善显著者4眼（7．41％），稳定者47眼（87．04％），下降者3眼（5．56％）。6个月复诊患者38例，视力改善者7眼（18．42％），稳定者26眼（68．42％），下降者5眼（13．16％）。光学相干断层扫描前后结果：初诊时患者黄斑区视网膜厚度基线为287．46μm，6个月时基线为240．62μm（P〈0．01）。初诊时黄斑区总容积基线值为7．43mm^3，6个月时为6．88mm^3（P〈0．01）。结论凉血化瘀方治疗湿性老年性黄斑变性具有较好的临床疗效。     

凉血化瘀方对肝衰竭大鼠细胞凋亡相关基因表达的调控作用

目的:应用功能分类基因芯片分析凉血化瘀方对急性肝衰竭大鼠细胞凋亡相关基因表达的影响,探讨其抗肝衰作用的分子机制。方法:腹腔注射GalN(500mg·kg^-1)+LPS(4.8μg·kg^-1),造成大鼠急性肝功能衰竭,应用美国SuperArray公司大鼠细胞凋亡Oligo基因芯片检测模型组和治疗组基因的差异表达。结果:模型组与正常组比较表达下调的基因有37条,表达上调的基因有10条;治疗组与模型组比较表达下调的基因有16条,其中诱导细胞凋亡基因有13条,表达上调的基因有12条,其中抗细胞凋亡基因7条。结论:凉血化瘀方能够调节细胞凋亡相关基因从而抑制肝细胞凋亡,主要是通过下调凋亡诱导相关基因的表达,同时也少量上调凋亡抑制基因的表达。     

灵杞黄斑颗粒含药血清预处理对人视网膜色素上皮细胞衰老的保护作用

目的探讨中药灵杞黄斑颗粒(LQHB)含药血清预处理对氧化应激诱导的人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞衰老的保护作用。方法运用血清药理学方法制备不同剂量LQHB含药血清,以过氧化氢(H2O2)(150μmol/L)诱导建立体外人RPE细胞衰老模型,分为正常对照(NC)组、模型(M)组、模型+空白血清(MB)组、模型+低剂量药物血清(ML)组和模型+高剂量药物血清(MH)组,分别采用MTS法、流式细胞法检测各组RPE细胞的活力和周期,衰老相关-β-半乳糖苷酶试剂盒检测各组RPE细胞的衰老情况。相关统计分析采用SAS 9.13统计学软件。结果模型组RPE细胞活力较正常对照组明显降低,而LQHB含药血清组细胞活力虽低于正常对照组,但高于模型组。LQHB含药血清组停滞在G1期的RPE细胞较模型组少。模型组衰老相关-β-半乳糖苷酶活性染色阳性的细胞高达70%,而正常对照组仅占5%,LQHB含药血清组衰老细胞百分比介于两者之间,但不同剂量间无统计学意义的差异。结论 LQHB含药血清对氧化应激诱导的人RPE细胞衰老损伤具有一定的保护作用。     

凉血化瘀方对急性肝损伤大鼠线粒体和内质网应激凋亡途径的影响

目的观察凉血化瘀方对大鼠急性肝损伤的保护作用,并探讨其机制。方法SD健康雄性大鼠50只,随机分为正常对照组,D一氨基半乳糖（GalN）＋脂多糖（LPS）模型组,凉血化瘀方高、中、低剂量治疗组。末次给药后1h除正常组外其余4组按0．1midl0g腹腔注射D—GalN（50mg／mL）加LPS（0．48~tg／mL）,造成大鼠急性肝损伤模型。用HE染色,观察肝组织病理变化;电镜观察肝细胞形态及结构;TUNEL法检测肝细胞凋亡;Westernblot检测细胞凋亡蛋白Caspase-9、Caspase-3、Bcl-2、Chop的表达情况。结果各剂量凉血化瘀方均改善肝组织病理损伤;凉血化瘀方各剂量组细胞凋亡蛋白Caspase-9、Caspase-3、Chop的表达下调（P均〈0．05或0．01）,而抗凋亡蛋白Bcl-2表达上调,肝细胞形态改善明显。结论凉血化瘀方能抑制肝细胞凋亡。机制主要与调控线粒体和内质网应激途径诱导的细胞凋亡相关。     

凉血化瘀方拮抗内质网应激引起的L02肝细胞凋亡作用及机制研究

内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS) 启动的细胞凋亡是近年才发现的一种新的凋亡途径,本研究从ERS途径探讨凉血化瘀方对肿瘤坏死因子α(TNF-α)和D-氨基半乳糖 (D-GalN)所致肝细胞凋亡的保护作用。研究发现,TNF-α和D-GalN可明显抑制L02肝细胞增殖,诱导细胞凋亡,使细胞质内游离钙离子含量明显上升,并使ERS凋亡相关信号分子磷酸化PERK,磷酸化elF2α,cleaved Caspase-12,GRP78,CHOP的蛋白表达显著增加。不同浓度的凉血化瘀方作用后,与TNF-α/GalN损伤组相比,可显著减轻L02肝细胞的增殖抑制、减少细胞的凋亡,抑制细胞质内游离钙离子含量的增高,并使磷酸化PERK,磷酸化elF2α,cleaved Caspase-12,GRP78,CHOP的蛋白表达量呈逐渐下降的趋势。这些发现说明:凉血化瘀方对TNF-α和D-GalN所诱导的肝细胞凋亡具有抑制作用,其机制可能与维持内质网腔钙稳态平衡和下调ERS凋亡相关信号分子磷酸化PERK,磷酸化elF2α,cleaved Caspase-12,GRP78,CHOP的表达有关。     

凉血化瘀方治疗湿性老年性黄斑变性患者90例临床观察

目的观察凉血化瘀方治疗湿性老年性黄斑变性(AMD)患者的临床疗效和安全性。方法收集临床确诊为湿性AMD患者共90例109眼,患者口服凉血化瘀方治疗后连续观察6个月,分别于治疗后1、2、3、6个月观察平均视力情况及眼底平均出血、渗出、累积损害面积,并观察药物不良反应。结果治疗3个月后,视力提高25眼(22.94%),稳定74眼(67.89%),降低10眼(9.17%);治疗6个月后视力提高32眼(29.36%),稳定60眼(55.05%),降低17眼(15.6%)。治疗3、6个月后患者眼底出血面积、渗出面积和累积损害面积与治疗前比较差异无统计学意义(P0.05)。17例患者发生轻微不良反应。结论凉血化瘀方治疗湿性AMD患者在6个月观察期内具有一定提高视力的作用,能使眼底出血、渗出和累积损害情况稳定,不良事件发生率低,是治疗湿性AMD患者较安全有效的方法。     

从线粒体途径探讨凉血化瘀方对肿瘤坏死因子α致肝细胞凋亡的保护作用

目的:从线粒体途径探讨凉血化瘀方对肿瘤坏死因子α(TNF-α)和D-氨基半乳糖(D-GaIN)所致肝细胞凋亡的保护作用.方法:体外培养人正常肝L02细胞,用TNF-α(100 μg·L-1)和D-GaIN(44 mg·L-1)诱导肝细胞损伤模型,荧光显微镜观察细胞凋亡的形态学变化;采用细胞增殖实验(MTT)法检测细胞活力;Annexin V-FITC/PI双染色法结合高内涵细胞成像系统检测肝细胞凋亡;罗丹明123(Rh123)染色结合高内涵分析系统检测线粒体跨膜电位;Western-blot检测线粒体途径凋亡标志蛋白凋亡蛋白酶激活因子(Apaf-1)、细胞凋亡诱导因子(AIF)、胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶(cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-9)表达水平的变化.结果:与正常对照组相比,TNF-α和D-GalN可明显抑制L02肝细胞增殖,诱导细胞凋亡,使细胞线粒体跨膜电位明显下降,并使促凋亡蛋白Apaf-1,AIF,cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-9的表达显著增加.不同浓度的凉血化瘀方作用后,与TNF-α/GalN损伤组相比,可显著减轻L02肝细胞的增殖抑制、减少细胞凋亡,抑制细胞线粒体跨膜电位的下降,并促使凋亡蛋白Apaf-1,AIF,cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-9的表达量呈逐渐下降的趋势.结论:凉血化瘀方对TNF-α和D-GaIN所诱导的肝细胞凋亡具有抑制作用,其机制可能与稳定线粒体的膜电位和下调促凋亡基因Apaf-1,AIF,cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-9的表达有关.     

水蛭提取液对凝血酶诱导的视网膜色素上皮细胞增殖的影响

目的 观察渗滤法水蛭提取液对体外培养视网膜色素上皮细胞（retinal pigment epithelium,RPE）增殖的影响.方法 利用体外培养的视网膜色素上皮细胞,观察水蛭提取液对凝血酶诱导的视网膜色素上皮细胞增殖的影响.结果 128mg/ml水蛭提取液对体外培养的视网膜色素上皮细胞具有抑制增殖的作用.结论 水蛭提取液对体外培养的视网膜色素上皮细胞具有抑制增殖的作用.     

内毒素肝损伤中FADD mRNA表达及凉血化瘀方的影响

目的研究凋亡调节基因相关死亡区蛋白(FADD)mRNA在内毒素肝损伤中的表达与肝细胞凋亡的关系,以及凉血化瘀方对其的影响.方法腹腔注射内毒素脂多糖于D-氨基半乳糖致敏小鼠造成暴发性肝衰竭模型,用逆转录-聚合酶链反应半定量分析FADD mRNA表达情况,同时观察药物的影响作用.结果造模3h模型组和治疗组肝组织中FADD mRNA表达分别为110%、100%,至6h模型组的表达增加(124%),治疗组表达下调(81%).结论凉血化瘀方抑制肝细胞凋亡的作用,可能与其下调FADD mRNA表达有关.     

凉血化瘀方治疗小儿过敏性紫癜临床观察

为观察凉血化瘀方治疗小儿过敏性紫癜的临床疗效 ,设治疗组 30例 ,用凉血化瘀方治疗 ;对照组 2 6例 ,采用西医常规治疗方法 ,疗程均为 8周。结果 :治疗组和对照组疗效差异有显著性意义 (P <0 0 5 )。提示凉血化瘀方对小儿过敏性紫癜有较好的疗效     

人视网膜色素上皮细胞的体外分离培养冻存复苏

目的为研究色素上皮相关疾病的发病机制及探讨中医中药治疗此类疾病的作用机制提供细胞模型。方法用胰蛋白酶消化法获得人视网膜色素上皮细胞,免疫细胞化学法对其进行鉴定。采用超低温冷冻的方法对细胞进行冻存,复苏后观察细胞活性。结果人视网膜色素上皮细胞在体外生长良好,胞浆内充满了棕黑色色素颗粒,随着传代的增加,色素颗粒逐渐减少至消失。冻存后复苏的人视网膜色素上皮细胞生长良好,增生活跃。结论成功建立了人视网膜色素上皮细胞的体外培养模式。冻存的细胞复苏后细胞活性不受影响。     

凉血化瘀方佐治糖尿病视网膜病变血热瘀阻证临床疗效及相关机制探讨

[目的]探讨分析凉血化瘀方佐治糖尿病视网膜病变（DR）血热瘀阻证临床疗效及相关机制。[方法]选择2019年3月—2020年3月西安市第一医院收治的DR患者89例,随机分为观察组45例、对照组44例。对照组在常规治疗基础上给予羟苯磺酸钙胶囊口服,观察组在对照组基础上给予凉血化瘀汤治疗,两组均连续治疗3个月。比较两组患者治疗临床疗效、治疗前后视网膜血流动力学指标变化、眼部相关指标变化及氧化应激、血清炎症因子水平变化。[结果]观察组患者治疗总有效率显著高于对照组（P<0.05）。治疗后两组患者视网膜中央动脉舒张末期流速（EDV）、收缩期峰值流速（PSV）及平均血流速度（Vm）较治疗前升高（P<0.05）,治疗后两组患者视网膜中央静脉回流速度（CRV）、血流阻力指数（RI）及搏动指数（PI）较治疗前降低（P<0.05）,且治疗后观察组患者EDV、PSV及Vm高于对照组（P<0.05）,CRV、RI及PI低于对照组（P<0.05）。治疗后两组患者视野灰度值、黄斑厚度、出血斑面积以及血管瘤体积均较治疗前降低（P<0.05）,且治疗后观察组患者视野灰度值、黄斑厚度...     

水蛭提取液对视网膜色素上皮细胞内游离钙离子的影响

目的观察水蛭提取液对视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelium,RPE)内游离钙离子(Intracellular liber calcium ion,[Ca2 ]i)浓度的影响。方法利用体外培养的视网膜色素上皮细胞,采用双波长荧光分光光度计测量法测定视网膜色素上皮细胞内[Ca2 ]i浓度。结果空白组(A)133.4517±13.17789、凝血酶组(A1)192.2037±4.54292、水蛭组(A2)96.9935±8.80148、水蛭和凝血酶同时加组(A3)142.0867±26.47195、先加水蛭后加凝血酶组(A4)162.7284±29.13950、先加凝血酶后加水蛭组(A5)130.4810±20.48673。结论水蛭提取液能使RPE细胞内游离Ca2 浓度下降,为进一步深入研究水蛭提取液抑制RPE细胞增殖的作用机制,防治增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreo-retinopathy,PVR)提供了实验室依据。     

羟基喜树碱对猪视网膜色素上皮细胞增殖抑制作用的实验研究

目的探讨10-羟基喜树碱（hydroxycamptothecin,HCPT）对培养的猪视网膜色素上皮（retinalpigment epithelium,RPE）细胞的抑制作用,并研究其发挥作用的适宜浓度。方法建立体外猪RPE细胞培养体系,应用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法测定对照组及不同浓度（0.75、1.5、3.0、6.0 mg/L）HCPT分别作用第24 h、72 h、120 h时的光密度,计算其对RPE细胞的增殖抑制率;采用流式细胞术检测不同浓度不同时间作用后,各分裂周期RPE细胞的数量;通过倒置相差显微镜和电子显微镜技术观察RPE细胞形态及超微结构的变化,并用台盼蓝排除检测法计算活细胞百分比。结果 0.75 mg/L实验组在HCPT作用后第1天与对照组比较差异无统计学意义;其余各时间段各组与相应对照组比较差异均有统计学意义（P〈0.01）;抑制作用与药物浓度、作用时间均呈正相关（药物浓度及作用时间与RPE细胞增殖抑制率呈明显的线性关系）。终浓度为1.5 mg/L的HCPT作用72 h后,RPE细胞的增殖抑制率达47.95%,而细胞活性〉85%,细胞形态及超微结构改变轻微,RPE细胞的S期细胞增加了7.52%,G2/M期细胞减少。结论 HCPT对RPE细胞的抑制作用呈剂量-时间依赖性;终浓度为1.5 mg/L的HCPT对RPE细胞的增殖具有明显的抑制作用,且细胞毒性小。     

化瘀消癥杀胚复方含药血清对体外培养输卵管妊娠滋养细胞凋亡的影响

目的:探讨化瘀消癥杀胚复方含药血清对体外培养的输卵管妊娠滋养细胞凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax的影响。方法:取化瘀消癥杀胚复方含药血清及甲氨喋呤、生理盐水组血清对体外培养的输卵管妊娠滋养细胞进行培养,通过蛋白质印迹法(Western Blot)检测与含药血清作用72h后,滋养细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达。结果:滋养细胞与含药血清共同作用72h后,可降低Bcl-2蛋白表达量,与对照组比较,差异具有显著统计学意义(P0.01)。而Bax蛋白表达量未见有明显变化,两组含药血清与对照组比较,差异均无统计学意义。结论:化瘀消癥杀胚复方可能通过下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,降低Bcl-2/Bax比值,从而促进凋亡的途径起到治疗输卵管妊娠的作用。     

Protective effects of Puerariae radix extract and its single compounds on methylglyoxal-induced apoptosis in human retinal pigment epithelial cells

Ethnopharmacological relevance

In Korea, Puerariae radix is a medicinal plant traditionally used to treat various diseases including diabetes mellitus. To provide pharmacological basis for Puerariae radix in the treatment of diabetes, we investigated the protective effects of the ethanolic extract and its single compounds on apoptosis associated with glycation in human retinal pigment epithelial (RPE) cells.

Materials and methods

In the present work, a quantified ethanolic extract or single compounds of Puerariae radix were selected to determine its anti-apoptotic effect in human RPE cells cultured with methylglyoxal (MG), which is a stimulator of glycation. To assess the protective effect of the extract or single compounds, the cytotoxicity assessment was performed using an MTT assay in the human RPE cells. Selected active compounds or extracts were tested by FACS analysis with annexin V staining for apoptosis.

Results

Daidzein (1), daidzin (2), puerarin (3), 3'-hydroxy-daidzein 8-C-apiosyl (1→6) glucoside (4), and daidzein 8-C-apiosyl (1→6) glucoside (5), and pueroside B (6) were isolated from an ethanolic extract of Puerariae radix. MG-induced apoptosis was completely inhibited by Puerariae radix, ethanolic extract, and single compounds. Of the six major compounds, daidzin (2) and 3'-hydroxy-daidzein 8-C-apiosyl (1→6) glucoside (4) significantly inhibited MG-induced apoptosis.

Conclusion

Our results provide the first evidence that, due to its anti-glycation effect, Puerariae radix extract could inhibit MG-induced apoptosis in the cultured human RPE cells. These data suggest that Puerariae radix extract, especially its single compounds daidzin and 3'-hydroxy-daidzein 8-C-apiosyl (1→6) glucoside, has potential utility as a preventive agent for glycation-related diabetic retinopathy.