过表达白血病相关蛋白16基因对前列腺癌ALVA41和DU145细胞增殖的影响

目的探讨过表达白血病相关蛋白16（LRP16）基因对人前列腺癌ALVA41和DU145细胞增殖的影响及其发生机制。方法2004—04～2005—10于解放军总医院用下列方法检测：（1）构建LRP16真核表达载体（peDNA3．1-LRP16）并与对照空载体（pcDNA3．1）分别转染ALYA41和DU145细胞，将G418筛选获得的表达外源LRP16基因以及空载体的4组细胞（A16、A3．1、D16、D3．1）继续传代培养。（2）用四氮唑蓝染色（MTT）法测定并比较各组细胞的生长曲线。（3）提取两种细胞的总RNA，通过RT—PCR方法测定雌激素受体α（ERα）、雌激素受体β（ERβ）和雄激素受体（AR）在两种细胞中的表达。结果（1）LRP16过表达促进DU145细胞的生长，D16组在24、48、72、96和120h的细胞生长倍数分别是对照组（D3．1）的1．03倍（P〉0．05）、1．10倍（P〈0．05）、1．13倍（P〈0.01）、1．63倍（P〈0．01）和1．55倍（P〈0．01）。（2）LRP16过表达对ALVA41细胞的生长无影响，A16组在24、48、72、96和120h的细胞生长倍数分别是对照组（A3．1）的0．998、1．040、0．944、1．018和1．036倍（P值均〉0．05）。（3）ERα和ERβ在ALVA41、DU145两种细胞中均有表达。AR在ALVA41细胞中有表达，而在DU145细胞中无表达。结论过表达LRP16基因促进前列腺癌DU145细胞生长，但是其机制可能不是直接通过AR发挥作用。     

雌激素通过其受体α上调LRP16 mRNA表达并促进MCF-7细胞增殖

目的 探讨雌激素对人乳腺癌MCF-7细胞LRP16 mRNA表达的调控作用以及过表达LRP16对MCF一7细胞生长特性的影响。方法 (1)用Northem印迹方法检测17β-雌二醇(17β-E2)对LRP16m RNA表达水平的作用；(2)构建LRP16启动子(-2．6kb)调控的荧光素酶报告子(pG13-S0)，并与各种核受体包括雌激素受体α和β(ERα和ERβ)、糖皮质激素受体α(GRα)、雄激素受体(AR)和过氧化物酶体增殖物激活的受体γ和α(PPARγ和PPARα)表达载体共转染COS-7细胞，测定荧光素酶活性；(3)将LRP16表达载体转染MCF-7细胞，测定过表达LRP16对细胞的生长特性和细胞周期的影响，并用Western印迹方法测定周期素E、p53和p21^WAF1/CIP1蛋白的变化。结果 (1)17β-E2使MCF-7细胞的LRP16 mRNA表达水平增加5～8倍，增加幅度未显示出β-E2培养时间和剂量的依赖性；(2)pGL3-S0与ERα或AR共转染细胞的相对荧光素酶活性较单独转染pGL3-S0细胞(对照组)分别升高11和7．8倍；(3)LRP16过表达促进MCF-7细胞的生长且伴有周期素E显著升高，S期细胞的数量较对照组增加约10％。结论 (1)雌激素通过激活ERα增加MCF-7细胞LRP16 mRNA的表达；(2)过表达LRP16可能通过上调周期素E促进MCF-7细胞生长。     

甲状腺乳头状癌组织中雌激素受体亚型与表皮生长因子受体-2表达的关系

目的研究人甲状腺乳头状癌(PTC)组织中雌激素受体(ER)亚型(ERα、ERβ1、ERβ2)与表皮生长因子受体-2(HER-2)表达的关系。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测20例PTC组织中ERα、ERβ1、ERβ2的mRNA的表达水平,应用免疫组织化学的方法检测PTC组织中HER-2表达水平。结果 HER-2阳性表达的PTC患者ERαmRNA明显高于HER-2阴性者,ERβ2 mRNA明显低于HER-2阴性者。结论 PTC患者中ER亚型的表达可能受HER-2调节,HER-2过表达,可上调ERα、下调ERβ1和ERβ2,促进肿瘤发生发展。     

雌激素对老年雌鼠阴道NOS及雌激素受体的影响

目的 研究雌激素对老年雌性大鼠阴道组织一氧化氮合酶(NOS)活性及雌激素受体(ER)亚型的影响,探讨雌激素作用于女性性功能的可能机制.方法 SD雌性大鼠分三组:青年组(3月龄)、老年组(20月龄)、苯甲酸雌二醇治疗组,比色法检测阴道组织NOS的活性,免疫组化法检测ER α和β的表达.结果 老年大鼠阴道NOS活性下降,而阴道上皮细胞ERα、平滑肌细胞ERα和ERβ表达增加,雌激素治疗能逆转这些变化.大鼠血清雌二醇浓度与阴道组织NOS活性呈正相关,两者均与阴道上皮细胞ERα、平滑肌细胞ERα和ERβ呈负相关,而与大鼠阴道上皮细胞ERβ、基质纤维细胞ERα和ERβ无相关性.结论 雌激素可以通过调节阴道NOS维持女性性功能,这一过程与阴道上皮细胞ERα、平滑肌细胞ERα和ERβ密切相关.     

RNA干扰下调雌激素受体α亚基的人成骨样细胞模型的构建

目的 构建雌激素受体α亚基(ERα)下调的人成骨样细胞模型.方法 采用计算机辅助设计并合成ERα特异性小干扰RNA(siRNA)前体基因后,定向克隆入pSilencer 4.1-CMV质粒中,构建重组的ERα siRNA表达载体并测序鉴定.由脂质体介导重组质粒稳定转染人成骨样细胞株MG63,潮霉素筛选阳性抗性克隆细胞.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测ERα基因在人成骨样细胞株MG63内的表达,抗生物素蛋白-生物素-过氧化物酶复合体法(ABC)分析ERα蛋白在人成骨样细胞株MG63内的表达与定位.MTT法测ERα基因被特异性下调后对MG63细胞生长的影响.流式细胞术分析ERα siRNA对人成骨样细胞株MG63细胞生长周期的影响.采用改良Gomori氏钙钻法分析ERα siRNA对人成骨样细胞株MG63表达碱性磷酸酶的影响.结果 构建表达ERαsiRNA的重组真核表达载体,并成功地下调了人成骨样细胞株MG63的ERα亚基基因,其中MG63细胞的G1期为68.6%,G2期为17.6%,S期为13.8%;ERα siRNA MG63细胞的G1期为68,6%,G2期为16.8%,S期为14.6%.而ERα siRNA下调人成骨样细胞株MG63的ERα亚基对细胞的生长特性无明显影响.结论 成功地构建了ERα下调的人成骨样细胞模型,该模型为进一步研究雌激素及其受体对骨代谢影响的分子机制提供了基础材料.     

LanCL1过表达对氧糖剥夺诱导PC12细胞凋亡及Sirt3-PGC-1α通路的影响

目的分析硫化双丙氨酸环化酶样蛋白(LanCL)1在氧糖剥夺(OGD)PC12细胞中的表达,并研究LanCL1过表达对OGD诱导PC12细胞凋亡的影响及其对沉默调节蛋白(Sirt)3-过氧化物酶体增殖活化受体γ共激活因子(PGC)-1α通路的影响。方法体外培养PC12细胞,并将其分为4组,对照组为正常培养的PC12细胞;OGD组为OGD条件下培养的PC12细胞;pcDNA3.1组为OGD条件下培养转染pcDNA3.1空载体的PC12细胞;pcLanCL1组为OGD条件下培养转染pcDNA3.1-LanCL1的PC12细胞。分别采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞中LanCL1 mRNA表达量,采用Western印迹检测细胞中LanCL1、Sirt3、PGC-1α蛋白表达水平,分别采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和流式细胞仪检测细胞生存率和凋亡率。结果与对照组相比,OGD组细胞中LanCL1 mRNA和蛋白表达水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05);OGD组和pcDNA3.1组细胞存活率显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与OGD组和pcDNA3.1组相比,pcLanCL1组细胞存活率显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,OGD组和pcDNA3.1组细胞中Sirt3、PGC-1α蛋白水平显著降低(P<0.05);与OGD组和pcDNA3.1组相比,pcLanCL1组细胞中Sirt3、PGC-1α蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论过表达LanCL1能够促进OGD PC12细胞存活,抑制其凋亡,可能通过激活Sirt3-PGC-1α信号通路保护OGD诱导的PC12细胞损伤。     

雌激素受体α和β及孕激素受体在胃癌中的表达及意义

运用Picture^TM-PV6000免疫组化技术检测48例胃癌及癌旁组织中雌激素受体α（ERα）和β（ERβ）、孕激素受体（PR）的表达。结果发现ERα和PR阳性染色只在细胞核内，在癌组织中表达阳性率分别为33．3％和29．2％。而癌旁组织均无表达，P〈0．001，ERβ主要表达在细胞核内。在癌组织和癌旁组织表达阳性率分别为70．8％和72．9％，P〈0．05。PR表达与ERα有高度相关性（P〈0．01）。而与ERβ无相关性。ERα和ERβ、PR三者共同表达阳性率18．75％，明显高于ERα、PR共表达（2．08％）或ERβ、PR共表达（6．25％），P〈0．01。Borrmann分型Ⅲ＋Ⅳ型（浸润型癌）者ERα阳性率（42．4％）显著高于BorrmannⅠ＋Ⅱ型（局限型癌）者（13．3％）。P〈0．05；有淋巴和远处转移者阳性率显著高于无转移者（P〈0．05）IERα和孕激素受体在印戒细胞癌、黏液腺癌、低分化腺癌等分化低的胃癌中表达较高，在中、高分化胃癌中表达较低。但无显著差异，与年龄、性别、肿瘤大小、部位和浸润深度无明显相关性。认为ERα、ERβ及PR在胃癌中均有表达，ERβ占优势IERα在胃癌中表达高于癌旁组织。并与胃癌Borrmann分型、淋巴和远处转移相关。ERα、ERβ及PR阳性胃癌是性激素依赖性肿瘤，可行内分泌治疗，并应针对ERα和ERβ的不同表达选择药物。     

LRP16通过下调PPARγ表达抑制细胞葡萄糖摄取

目的 探讨人白血病相关蛋白16(LRP16)基因对细胞葡萄糖摄取的影响及分子机制.方法 将LRP16基因表达载体pcDNA3.1-16转染3T3-L1脂肪细胞、C2C12成肌细胞和HepG2肝癌细胞,建立LRP16基因高表达细胞系;利用2-脱氧-[~3H]-D-葡萄糖检测LRP16对葡萄糖摄取的影响;免疫印迹法检测LRP16对PPARγ葡萄糖转运蛋白4(GLUT-4)和GLUT-2表达的影响.结果 成功建立LRP16基因高表达细胞系,3组细胞中LRP16表达均为对照细胞的2倍;对照3T3-L1脂肪细胞、C2C12成肌细胞和HepG2肝癌细胞胰岛素刺激的葡萄糖摄取率明显高于LRP16高表达细胞(P＜0.01);对照333-L1脂肪细胞、C2C12成肌细胞和HepG2肝癌细胞的PPARγ及GLUT-4或GLUT-2蛋白表达明显高于LRP16高表达细胞(P＜0.05).结论 LRP16通过下调PPARγ表达抑制细胞葡萄糖摄取.     

甲状腺肿瘤组织中雌激素受体β1和β2的表达及其意义

采用RT-PCR检测10例甲状腺乳头状腺癌(PTC)和10例癌旁正常甲状腺组织雌激素受体(ER)β1、ERβ2以及ERα的表达,同时用免疫组织化学方法检测107例甲状腺癌、56例甲状腺腺瘤和10例正常甲状腺组织中ERβ1和ERβ2表达,并结合甲状腺癌ERα表达及其它主要临床病理参数进行分析.结果显示,ERα mRNA在PTC组织的表达明显高于癌旁正常组织,ERβ2 mRNA在PTC组织的表达明显低于癌旁正常组织(P＜0.05);正常甲状腺组织、甲状腺腺瘤和甲状腺癌中3种ER的表达差异均有统计学意义( P＜0.05);ERβ1和ERβ2在甲状腺癌中的表达与其组织类型有关;甲状腺组织中ERβ1和ERβ2的表达与ERα呈低、中度负相关(ERβ1:r=-0.206,P=0.042;ERβ2:r=-0.545,P＜0.01);ERβ2的表达还与淋巴结转移以及TNM分期有关.提示ERβ2的表达缺失可能导致甲状腺滤泡上皮细胞的增生和癌变以及肿瘤的演进,并且有一定的预后评估价值.     

雄激素对老龄大鼠血管平滑肌组织雄、雌激素受体基因表达的影响

目的　探讨不同剂量的庚酸睾酮 (TE)对老龄雄性大鼠血管平滑肌组织中雄激素受体 (AR)及雌激素受体 β(ER β)基因表达的影响。方法　 2 1月龄的老龄雄性Sprague Dawley纯系大鼠 4 0只随机分为A组 (老龄对照组 )、B组 (老龄低剂量组 ,肌注每次TE 2 .5mg/kg ,1次 /周× 16周 )、C组 (老龄中剂量组 ,肌注每次TE 5 .0mg/kg ,1次 /周× 16周 )、D组 (老龄高剂量组 ,肌注每次TE 10 .0mg/kg ,1次 /周× 16周 )。Western印迹法检测血管平滑肌组织中AR及ER β基因表达情况。结果　给予低、中、高 3种剂量的TE作用后血管平滑肌组织AR蛋白条带吸光度分别为 (99.5 0± 2 1.74 ) ,(12 5 .38± 2 8.6 8) ,(10 1.98± 15 .4 2 ) (对照组为 10 0 ) ;ER β蛋白条带吸光度分别为(92 .34± 18.6 8) ,(47.72± 18.12 ) ,(82 .13± 2 3.5 0 ) (对照组为 10 0 )。结论　中剂量的TE可促进AR基因的表达量 ,而中、高剂量的TE则抑制ER β基因的表达量。     

State of knowledge of helminth fauna of freshwater fishes of Poland

A total 89 fish and lamprey species has been recorded from Polish freshwater habitats. Twenty-seven of them (30.3%) have not been surveyed for parasitic helminthes. Some of the latter fishes are either rare or not easily accessible. Other live only in specific habitats in scattered localities. An important obstacle for studying parasite faunas of some fishes may be their status on an endangered species. Among the non-surveyed fishes, are those which have been relatively recently introduced to Poland or migrated there on their own. The present paper attempts to review all hitherto not studied helminthologically fish species, their habitats, localities and current protection status.     

高血压降压治疗目标的再认识

根据传统的高血压水平的定义,1993年WHO高血压治疗指南提出血压控制目标为<140/90mm Hg(1mm Hg=0.133kPa),但是并非所有患者都必须将血压降至同一水平,而应根据患者情况进行个体化治疗。Framingham进行的一项长达10～12年的心血管事件研究发现,第5年后,正常上限血压[收缩压(SBP     

Lack of correlation of degree of villous atrophy with severity of clinical presentation of coeliac disease

BACKGROUND AND AIM: Both the clinical presentation and the degree of mucosal damage in coeliac disease vary greatly. In view of conflicting information as to whether the mode of presentation correlates with the degree of villous atrophy, we reviewed a large cohort of patients with coeliac disease. PATIENTS AND METHODS: We correlated mode of presentation (classical, diarrhoea predominant or atypical/silent) with histology of duodenal biopsies and examined their trends over time. RESULTS: The cohort consisted of 499 adults, mean age 44.1 years, 68% females. The majority had silent coeliac disease (56%) and total villous atrophy (65%). There was no correlation of mode of presentation with the degree of villous atrophy (p=0.25). Sixty-eight percent of females and 58% of males had a severe villous atrophy (p=0.052). There was a significant trend over time for a greater proportion of patients presenting as atypical/silent coeliac disease and having partial villous atrophy, though the majority still had total villous atrophy. CONCLUSIONS: Among our patients the degree of villous atrophy in duodenal biopsies did not correlate with the mode of presentation, indicating that factors other than the degree of villous atrophy must account for diarrhoea in coeliac disease.