静脉注射大鼠骨髓MSCs缓解新生大鼠高氧肺损伤

目的:研究大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)对高氧新生大鼠肺组织血管内皮生长因子(Vascular endothelial cell growth factor,VEGF)表达的影响.方法:采用贴壁选择法分离、培养、扩增大鼠骨髓来源MSC,并以5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2-deoxyuridine,BrdU)进行标记;3日龄清洁级SD新生大鼠32只,随机分为高氧组(A组)、高氧干预组(B组)、正常干预组(C组)、对照组(D组)4组;A、B二组均置大鼠于95%氧环境下7天后,B组每只动物尾静脉注射5×104的MSCs,A组每只注射磷酸盐缓冲液(PBS)50μl;而C、D二组则置于正常空气环境下,同时分别给予每只大鼠尾静脉注射含5×104MSC及PBS 50μl.注射后72 h(13日龄)处死全部动物,肺组织病理学检测辐射状肺泡计数(radical alveolar counts,RAC),免疫组织化学检测VEGF吸光度(A)值、BrdU表达情况.结果:仅二个注射MSC组(B、C组)可见BrdU阳性表达,高氧组RAC值及均显著低于对照组,而给予MSC均可使其明显上升,近于对照组.结论:给新生大鼠静脉注射MSC对高氧肺损伤的保护作用可能与增加肺组织VEGF表达有关.     

骨髓间充质干细胞对高氧肺损伤大鼠的治疗作用

【目的】: 观察骨髓间充质干细胞(MSC)对新生大鼠高氧肺损伤的治疗作用?【方法】 贴壁法体外培养扩增大鼠骨髓MSC,利用携带GFP基因的慢病毒液对骨髓MSC进行转染;SD新生大鼠随机分为A?B?C?D?E五组,A,B两组高氧暴露7 d后经尾静脉分别注射(1 × 105 /只和1 × 104 /只)骨髓MSC,C组注射磷酸盐缓冲液(PBS),D?E两组为空气组,分别注射骨髓MSC和PBS,观察骨髓MSC在大鼠肺组织的分布情况?大鼠的体质量增长?肺系数?放射性肺泡计数(RAC)及肺组织的病理改变?【结果】 A?B?D组肺组织中均可见GFP+ 细胞;MSCs干预3?7 d,A,B两组GFP+ 细胞占总细胞数的比例高于D组(31.3 ± 2.6% vs. 11.8 ± 1.3%,A组 vs. D组, 22.7 ± 1.3% vs 11.8 ± 1.3%, B组 vs. D组,P < 0.05);A组治疗第3?7?14天GFP+ 细胞占总细胞数的比例高于B组,P < 0.05;A?B两组治疗后体质量增长加快(66 ± 9 g vs. 48 ± 7 g,A组 vs. C组, P < 0.05),肺系数降低(2.26 ± 0.23% vs. 2.9 ± 0.4%,A组 vs. C组, P < 0.05),RAC值明显增加(9.2 ± 0.7 vs. 7.4 ± 0.4,A组 vs. C组, P < 0.05),肺部炎性反应减轻;A组对高氧肺损伤的治疗作用优于B组,P < 0.05?【结论】 两种剂量的骨髓MSC均可以减轻高氧肺损伤,高剂量组对高氧肺损伤的治疗效果更明显。     

A型肉毒毒素对内脏性疼痛镇痛作用的实验研究

目的:近年来A型肉毒毒素(BTX-A)在疼痛治疗中的作用已成为新的热点,文中研究腹腔注射BTX-A在大鼠内脏性疼痛中的镇痛作用,以及对肠壁乙酰胆碱酯酶(AChE)、P物质(SP)表达的影响. 方法:72只成年雄性Wistar大鼠随机分为4组,A组腹腔注射等渗盐水2ml,B、C、D组分别腹腔注射含2、4、6UBTX-A的等渗盐水2ml,注射后1、4、8周时,各组随机抽取6只大鼠进行扭体实验疼痛评分,留取肠道标本行AChE、SP免疫组化检测.结果:1周时,大鼠扭体反应疼痛积分:C、D组大鼠均明显少于A组(P<0.05),B、C、D组肠壁肌层AChE表达及C、D组肠壁SP表达均小于A组(P<0.05).4周时,B、C、D组疼痛积分明显少于A组(P<0.05);B,C,D组肠壁AChE、SP表达均明显小于A组(P<0.05).8周时,C组疼痛积分与A组相比减少;各组肠壁AChE表达仍小于A组(P<0.05). 结论:腹腔注射BTX-A能减少乙酸所致大鼠内脏性疼痛的疼痛积分,并能减少肠壁AChE、SP的表达.     

肉毒素在大鼠内脏痛模型中对血清TNF的影响

目的:探讨A型肉毒素(BTX-A)在大鼠化学性内脏损伤中的止痛作用及对血清肿瘤坏死因子(TNF)的影响。方法:8周的Wistar雄性大鼠72只,随机分为4组:A组为对照组,腹腔注射生理盐水2 mL;B组、C组、D组分别腹腔注射含2 U、4 U、6 UBTX-A的生理盐水2 mL。4周时各组随机取6只应用结直肠气囊扩张方法测定结直肠痛阈。分别于注射BTX-A后1周、4周各组随机取6只,腹腔内注射乙酸,观察大鼠扭体反应45 min,进行行为学评分和比较。应用放射免疫法测定血清TNF的含量。结果:给药后4周各组大鼠结直肠痛阈与A组结果无明显差异。给药后1周,总的疼痛积分C组、D组均少于A组(P<0.05);D组血清TNF较A组明显减少(P<0.05)。4周时,B、C、D组大鼠疼痛积分与A组相比均明显减少(P<0.05);C组、D组血清TNF较A组明显减少(P<0.05)。结论:腹腔注射BTX-A能缓解乙酸所致的大鼠内脏损伤的疼痛行为学反应,减少血清TNF释放,BTX-A可能通过减少血清TNF释放,减轻炎性反应,减少疼痛刺激。     

促红细胞生成素对血管性痴呆大鼠神经干细胞增殖分化的影响

目的 探讨促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)对血管性痴呆(vascular dementia,VD)大鼠神经干细胞(neural stem cell,NSC)增殖、分化及认知功能的影响.方法 SD大鼠45只,按随机数字表法分为对照组、VD组和治疗组;改良2-VO+硝普钠法建立VD大鼠模型;治疗组腹腔注射EPO;采用穿梭箱系统检测大鼠认知功能;免疫组化法检测神经干细胞增殖分化情况.结果 行为学测试:VD组大鼠AAR比率显著低于对照组(P<0.01);治疗组大鼠AAR比率显著高于VD组(P<0.01),但仍显著低于对照组(P<0.01).免疫组化结果:BrdU(5-Bromodeoxyuridine)标记阳性细胞随时间推移从海马颗粒下层(the subgranular zone,SGZ)向颗粒细胞层(granule cell layer,GCL)迁移.造模后1周,VD组BrdU标记阳性细胞数明显高于对照组(P<0.01),低于治疗组(P<0.01);治疗组大鼠BrdU+DCX(doublecortin)双标阳性细胞数明显高于VD组(P<0.01).造模后4周,各组BrdU标记阳性细胞数与造模后1周相比均有明显下降,其中VD组下降最明显.治疗组BrdU+NSE(neuron-specific-enolase)双标阳性细胞数明显多于VD组(P<0.01).各组大鼠各时相点BrdU标记阳性细胞数中神经元所占比例无统计学差异(P>0.05).结论 腹腔注射EPO可促进VD大鼠脑内NSC增殖,显著改善大鼠认知功能,但对NSC分化无明显影响.     

维生素D3联合地塞米松对哮喘大鼠的治疗作用及机制

目的:探讨维生素D3联合地塞米松对哮喘大鼠的治疗作用及其机制.方法:实验分为正常对照组(A组)、哮喘模型组(B组)、地塞米松组(C组)和维生素D3联合地塞米松治疗组(D组),每组Wister大鼠10只.用卵白蛋白(OVA)腹腔注射致敏和雾化吸入激发建立哮喘大鼠模型,采用EUSA方法测定大鼠血清中IgE,IL-4,IL-5含量;收集肺泡灌洗液(BALF)进行细胞计数和分类.结果:①大鼠血清IgE,IL-4,IL-5含量B组分别为(362.84±6.26)×103IU/L,(22.66±1.59)ng/L,和(55.31±2.81)ng/L,A组分别为(36.16±2.61)×103IU/L,(8.37±0.66)ng/L,(13.45±1.70)ng/L,B组和A组相比较,差异具有统计学意义(P<0.05);C组分别为(188.25±5.55)×103IU/L,(6.23±0.90)ng/L,(29.64±1.90)ng/L,D组分别为(114.47±6.00)×103IU/L,(2.06±1.30)ng/L,(7.33±1.33)ng/L,C和D组与B组相比均显著降低(P<0.05);D组与C组相比也显著降低(P<0.05);②大鼠BALF中细胞总数及各种炎症细胞B组较A组增加;C组和D组比B组明显减少(P<0.05),且D组与C组相比亦明显减少,差异具有统计学意义(P<0.05).结论:维生素D3联合地塞米松能够有效地治疗哮喘,其机制可能是通过协同抑哮喘大鼠气道炎性反应和降低哮喘大鼠血清中IgE,IL-4,IL-5水平实现的.     

大鼠骨髓来源MSCs对新生大鼠高氧肺损伤的影响

目的 研究静脉注射大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)对高氧新生大鼠肺损伤的影响.方法 采用贴壁选择法分离、培养、扩增大鼠骨髓来源MSCs,并以5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)进行标记.3 d龄清洁级SD新生大鼠32只,随机分为A、B、C、D四组,每组8只.A、B两组均先将动物置于95%氧环境下,而C、D组则置于空气环境下;7d后,A、C组每只尾静脉注射含5×104MSCs的PBS 50μl,B、D组同时仅给予PBS 50μl,并将大鼠全部置于空气环境下,72 h后处死全部动物,病理学检测肺组织辐射状肺泡计数(RAC),免疫组织化学检测BrdU表达情况,ELASA法检测肺组织匀浆肿瘤坏死因子α(TNFo)、转化生长因子β1(TGFβ1)含量.结果 与空气暴露(C、D)组相比,两高氧(A、B)组RAC值显著降低,TNFα、TGFβ1等显著增加;比较A、B二组,A组在RAC、TNFo、TGFβ1等方面与B组存在显著差异;免疫组化显示A、C两组均可见BrdU阳性细胞表达,且两组间差异有显著性.结论 给新生大鼠静脉注射MSCs后,MSCs可在肺组织定植,其定植水平与动物暴露的环境有关,并对高氧引致的肺损伤具有保护作用,其机制可能与调控肺部微环境等有关.     

神经干细胞和神经生长因子联合移植对大脑中动脉阻塞大鼠的影响

目的 将神经干细胞(NSCs)移植和神经生长因子(NGF)单独及联合应用于大脑中动脉阻塞(MCAo)模型大鼠,观察NGF和NSCs移植对大鼠缺血性脑卒中神经功能恢复的作用及NGF对自体和移植NSCs的影响.方法 体外分离、培养新生大鼠海马NSCs,BrdU标记.实验动物随机分为A组(MCAo组)、B组(MCAo NGF组)、C组(MCAo NSCs组)及D组(MCAo NGF NSCs组),每组16只,移植后进行神经功能损害评分(NSS),用免疫组化行BrdU、槽蛋白检测,分析结果.结果 移植后的2周、4周神经功能评分显示D组显著好于其他3组(P<0.05),B组与C组显著好于A组(P<0.05).B组的槽蛋白及BrdU阳性细胞数最著多于A组(P<0.05),D组的BrdU阳性细胞数显著多于C组(P<0.05).结论 NSCs移植和NGF单独及联合应用对MCAo大鼠的神经功能恢复均有作用,二者联合具有协同作用.NGF对自体NSCs的激活、增殖有促进作用,对移植NSCs的增殖有促进作用.     

人参皂苷Rg1对成年大鼠脑缺血海马区神经干细胞的影响

目的:观察人参皂苷Rg1对成年大鼠脑缺血后海马区神经干细胞增殖分化的影响,探讨其促进神经细胞再生的作用.方法:将60只Wistar大鼠随机分为假手术组、单纯缺血组及人参皂苷Rg1治疗组.用Longa线栓法制作大鼠脑中动脉闭塞模型.通过腹腔注射5-溴脱氧尿苷(BrdU)的方法标记神经干细胞,用免疫单标及双标免疫荧光技术观察人参皂苷Rg1对局灶性脑缺血后海马区BrdU,BrdU/β-Ⅲ型微管蛋白(Tuj-1)和BrdU/波形蛋白(Vimentin)免疫活性的影响,并计数作定量分析.结果:免疫组织化学染色显示脑缺血后海马区存在BrdU阳性细胞.单纯缺血组7 d(28.4±3.0)时,与同组1 d(12.7±1.2),3 d(20.3±2.7)相比较,差异具有统计学意义(P<0.01),且缺血7 d后阳性细胞达高峰,14 d(17.2±1.2)时可见BrdU阳性细胞急剧减少.应用人皂苷Rg1后BrdU阳性细胞数明显增多,人参皂苷Rg1治疗组1 d(15.1±1.5),3 d(27.2±3.3),7 d(37.1±4.2),14 d(23.6±2.7)与同时间点单纯缺血组相比差异均具有统计学意义(P<0.01);人参皂苷Rg1治疗组BrdU/Tuj-1,BrdU/Vimentin阳性细胞数分别为(14.3±0.5),(15.1±0.5)个/视野,较单纯缺血组(7.2±0.3),(8.9±0.4)个/视野明显增多(P<0.01).结论:人参皂苷Rg1能诱导海马区神经干细胞增殖、分化,提示其具有促进神经神经细胞再生的作用.     

rhG-CSF对缺氧脑瘫大鼠内源性神经干细胞增殖、迁移及分化的影响

目的:探讨人重组粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对缺氧脑瘫大鼠内源性神经干细胞(NSCs)增殖、迁移及分化的影响.方法:制备缺氧脑瘫大鼠模型并随机分为治疗组(5 d组和21 d组各8只)、模型组(5 d组和21d各7只),同时设假手术组(5 d组和21 d组各4只).治疗组于造模12 h后腹腔注射rhG-CSF 40μg/(kg·d),模型组和假手术组则给予等量生理盐水,共3 d;腹腔注射5-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)10 mg/kg;分别于BrdU注射5 d(5d组)和21 d(21 d组)后,免疫荧光组织化学法检测BrdU、GFAP、NeuN和PSA-NCAM的表达.结果:手术后5 d和21 d,模型组海马及大脑皮层BrdU阳性细胞增多,BrdU+GFAP、BrdU+NeuN及Brdu+PSA-NCAM双阳性细胞也增多(P<0.05);治疗组多于模型组(P<0.05).治疗组海马齿状回区域急性期(术后5 d)Brdu+NeuN双阳性细胞较稳定期(术后21 d)少(t=2.279,P=0.038),而Brdu+GFAP双阳性细胞较稳定期多(t=7.220,P<0.001).结论:rhG-CSF能促进缺氧脑瘫大鼠内源性NSCs的增殖、迁移和分化.     

间充质干细胞对血管性痴呆大鼠学习记忆能力及海马CA1区突触素表达的影响

目的 观察同种异体骨髓间充质干细胞(MSCs)对血管性痴呆(VaD)模型大鼠空间学习记忆功能及海马CA1区突触素(SYN)表达的影响.方法 体外分离、扩增大鼠骨髓MSCs,并用BrdU标记.双侧颈总动脉结扎法(2-VO)制备VaD模型.将经过Y-迷宫筛选的大鼠随机分为A、B、C 3组.MSCs移植组(A组)于2-VO后4周尾静脉注射MSCs;对照组(B组)注射同等剂量的PBS;假手术组(C组)暴露双侧颈总动脉但不结扎,不进行尾静脉注射.Y-迷宫实验检测大鼠的空间学习记忆功能;免疫荧光染色观察MSCs注射后4周大鼠海马区BrdU标记细胞;免疫组化染色观察海马CA1区SYN表达的变化.结果 MSCs移植后4周A组大鼠海马区可见荧光标记的MSCs;A组大鼠Y-迷宫作业成绩错误次数(EN)为(7.39±0.68)次,较B组[(12.25±0.77)次]明显减少,差异有显著性(t=4.86,P＜0.05),全天总反应时间(TRT)为(348.94±27.92)s,较B组[(542.22±30.27)s]明显缩短,差异有显著性(t=193.28,P＜0.05);A组大鼠SYN光密度值(OD)为(0.284±0.041),较B组(0.093±0.036)显著增加(t=0.191,P＜0.05).结论 静脉移植MSCs使VaD大鼠空间学习记忆能力改善并使海马CA1区SYN表达增加.     

骨髓间充质干细胞治疗大鼠糖尿病肾病初探

目的 探索骨髓间充质干细胞(MSCs)经体外扩增培养后移植入糖尿病肾病大鼠体内能否改善或者治疗糖尿病肾病.方法 SD大鼠60 mg/kg STZ一次性腹腔注射,糖尿病成模后4周,成功制备糖尿病肾病大鼠被随机分为:糖尿病肾病对照组(n=12)和干细胞移植组(n=12),另选6只正常大鼠作为对照组.MSCs经体外培养、鉴定、BrdU标记后,心脏注射到干细胞移植组大鼠体内(2×106 MSCs/200 μL),一周后再次注射等量干细胞.于末次注射后1、2、8周测定大鼠血糖、体质量、24 h尿总蛋白、肌酐清除率、肾脏肥大指数,观察大鼠肾脏病理变化和标记干细胞体内作用情况.结果 MSCs体外扩增培养后表达间充质细胞的表型抗原,能多向分化为成骨、成脂细胞.在体内能趋化到受损肾脏,但在干细胞定植部位未发现增殖细胞.干细胞移植组和糖尿病肾病对照组在各观察时点血糖、尿总蛋白、肌酐清除率、肾脏肥大指数均明显高于正常对照组(P<0.05), 体质量均低于正常对照组(P<0.01).干细胞治疗后1周移植组较糖尿病肾病对照组血糖降低[(26.7±2.8) vs (29.9±1.6) mmol/L,P<0.05].在第2、8周,移植组较糖尿病肾病对照组24 h尿总蛋白降低,但差异无统计学意义.干细胞移植组肌酐清除率低于糖尿病肾病对照组,在治疗后2周两组差异有统计学意义[(8.6±1.9) vs (17.1±1.6) mL/min,P<0.05].在第2周干细胞移植组的肾脏肥大指数较糖尿病肾病对照组减少(5.5±0.1 vs 6.2±0.3, P<0.05),但高于正常对照组(3.2±0.2).结论 发现MSCs经体外培养标记后在体内能趋化到糖尿病肾病大鼠肾脏,可以暂时改善糖尿病肾病.     

应用超顺磁性氧化铁粒子标记组织工程关节软骨种子细胞及在体磁共振示踪的研究

目的探讨应用1．5T MRI活体示踪注入兔膝股骨髁软骨缺损关节腔内的超顺磁性氧化铁粒子（SPIO）标记的骨髓间充质干细胞（MSCs）的可行性。方法从兔骨髓中分离培养MSCs,经体外采用SPIO和BrdU双重标记后,与壳聚糖支架复合,然后注射到兔膝股骨髁自体软骨缺损关节腔中,术后1d及4、8、12周应用MR对膝关节腔内注入的磁标记MSCs进行扫描示踪,并与组织切片普鲁士染色及免疫组化BrdU对照。结果体外标记的MSCs普鲁士染色和电镜检查显示细胞胞质内含致密铁颗粒,标记细胞可正常成软骨分化。复合物注射后MRI GRET2^＊ WI序列检查显示关节腔内磁标记MSCs产生颗粒状低信号改变至少12周,不同时相信号改变在空间上呈不一致性。MRI信号改变区域与组织学检查结果基本一致。结论兔MSCs经SPIO标记后仍然具有成软骨细胞分化能力,利用1．5TMRI活体示踪注入自体软骨缺损膝关节腔内的兔磁标记MSCs分布和迁移是可行的。     

实时定量PCR法检测骨髓间充质干细胞移植到梗死心肌后的存活数量

目的：建立一种干细胞移植到梗死心肌后检测其存活数量的有效方法。方法：选取10只雌性SD大鼠结扎前降支,心肌梗死3周后,随机分成移植组与对照组,同时选取雄性大鼠培养出骨髓间充质干细胞（MSCs）,分别将MSCs（3×10^6个,50μL）及等体积的PBS液移植到梗死心肌中,24h后通过实时定量PCR（Real-time PCR）检测雄性大鼠Y染色体上特有的基因SRY,从而得知移植MSCs的存活数量。结果：MSCs移植24h后,移植组梗死心肌中检测到SRY基因数占移植总数的14.9％±8.3％,存活细胞的绝对数量为447195±248090,而对照组均禾检测到SRY基因的存在。结论：用Real-time PCR的方法能有效地检测到具有SRY基因的干细胞,从而能准确地得知移植干细胞的存活数量,Real-time PCR技术在心梗后干细胞移植的基础研究及临床应用中具有童要的价值。     

Monocyte chemotactic protein 1 increases homing of mesenchymal stem cell to injured myocardium and neovascularization following myocardial infarction

Objective：To investigate the effect of MCP-1 on mesenchymal stem cells（MSCs） homing to injured myocardium in a rat myocardial infarction（MI） model. Methods：Rat myocardial infarction model was established by permanent left anterior descending branch ligation. Mesenchymal stem cells from donor rats were cultured in IMDM and labeled with BrdU. The Rats were divided into two groups. Monocyte chemotactic protein I（MCP-1） expression were measured by in situ hybridization and immunohistochemistry in the sham operated or infarcted hearts at 1, 2, 4, 7, 14 and 28 days post operation in MCP-1 detection group. The rats were injected with MCP-1, anti-MCP-1 antibody or saline 4 days after myocardial infarction in intervention group. Then, a total of 5 × 10^6 cells in 2.5 ml of PBS were injected through the tail vein. The number of the labeled MSCs in the infarcted hearts was counted 3 days post injection. Cardiac function and blood vessel density were assessed 28 days post injection. Results：Self-generating MCP-1 expression was increased at the first day, peaked at the 7^th day and decreased thereafter post MI and remained unchanged in sham operated hearts. The MSCs enrichment in the host hearts were more abundant in the MI groups than that in the non-MI group（P= 0.000）, the MSCs enrichment in the host hearts were more abundant in the MCP-1 injected group than that in the anti-MCP-1 antibody and saline injected groups （P = 0.000）. Cardiac function was improved more in MCP-1 injected group than anti-MCP-1 antibody and saline injected groups（P= 0.000）. Neovascularization in MCP-1 injected group significantly increased compared with that of other groups（P = 0.000）. Conclusion： Myocardial MCP-1 expression was increased only in the early phase post MI. MCP-1 may enhance MSCs homing to the injured heart and improve cardiac function by promoting neovascularization.     

甘草酸二铵联合骨髓间充质干细胞治疗大鼠肺纤维化急性加重的实验研究

目的探讨甘草酸二铵对骨髓间充质干细胞(MSC)移植治疗博来霉素(BLM)所致大鼠肺纤维化急性加重的干预作用。方法体外分离、培养雄性Wistar大鼠的MSC细胞,将24只雌性Wistar大鼠随机分为4组:NC组,气管内注入生理盐水;BLM组,气管内注入BLM;MSC组,气管内注入BLM 7 d后,经尾静脉注入雄性大鼠MSC液0.5 mL(细胞数为2.5×106个);DGMSC组,在MSC组基础上,按150 mg·kg^-1·d^-1剂量连续腹腔注射甘草酸二铵21 d。于第28 d各组均处死6只大鼠,提取肺组织,行病理学检查评估肺泡炎及肺纤维化的程度,免疫荧光法检测Ⅱ型肺泡上皮细胞数量及分布。碱水解法测定肺组织羟脯氨酸(HYP)含量,硫代巴比妥酸法测定肺组织丙二醛(MDA)含量,比色法测定肺组织超氧化物歧化酶(SOD)的活性和总抗氧化能力(T-AOC),酶联免疫吸附试验检测肺组织匀浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达水平。结果甘草酸二铵联合MSC 7 d后移入可以减轻造模大鼠肺泡炎及肺纤维化的程度,其中肺组织匀浆中的HYP及TGF-β1含量较MSC组明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。甘草酸二铵联合MSC 7 d后移入可明显增加造模大鼠的抗氧化能力,与单纯MSC 7 d后移入比较,MDA含量下降,SOD活性及T-AOC能力改善明显,差异有统计学意义(P<0.05);Ⅱ型肺泡上皮细胞较单独MSC移入明显增多,且细胞形态完整。结论甘草酸二铵对MSC治疗肺纤维化急性加重有协同作用。其机制可能与抑制肺纤维化过程中的炎性因子、减弱氧化应激反应以及促进MSC向肺组织移入并向Ⅱ型肺泡上皮细胞转化有关。     

体外非接触性共培养对MSC向软骨细胞诱导分化的实验观察

目的：探讨骨髓基质干细胞（MSCs）与软骨细胞体外非接触性共培养成软骨的可行性。方法：分离、培养、扩传兔MSCs及软骨细胞，MSCs以1×10^5个/ml接种于共培养板内孔，第1代软骨细胞以1×10^4个/ml接种于共培养板外空板。48h后将内孔插如外孔中，补充全培养基覆盖于MSC细胞层上。以相同密度MSC单独培养为空白对照，观察共培养7d和14d流式细胞仪观察MSC的Ⅱ型胶原蛋白变化情况。结果：实验空白组在7d和14d，Ⅱ型胶原蛋白均阴性表达，符合MSC特性。非接触共培养1周后，Ⅱ型胶原蛋白阳性表达，与空白对照比较，P〈0.01，具有统计学意义；非接触共培养2周后，Ⅱ型胶原蛋白也阳性表达，与空白对照比较，P〈0.01，同样具有统计学意义；实验14d组与实验7d组比较，P〈0.01，具有非常显著性差异。结论：软骨微环境在MSCs成软骨分化及体内软骨形成中具有重要作用，软骨细胞能有效地诱导MSCs向软骨细胞分化并促进MSCs体内软骨形成。     

间充质干细胞对异体B淋巴细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨骨髓间充质干细胞(MSC)在体外对异体外周血B淋巴细胞增殖和凋亡的影响.方法 从骨髓中分离、培养MSC.从外周血中分离单个核细胞,L-亮氨酸甲酯去除单核细胞,以2-氨乙基硫脲溴化物(AET)处理绵羊红细胞(SRBC)的花环形成法,去除T淋巴细胞获得纯化的B淋巴细胞.用羊抗人IgM单克隆抗体(Anti-IgM,终浓度10μg/ml)刺激与不同比例的MSC(B:MSC 50:1、10:1、1:1)及不同浓度的MSC培养上清(12.5%、25%、50%)共培养的B淋巴细胞,72 h后四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色分析测B淋巴细胞的增殖.B淋巴细胞与MSC等比例,加或不加Anti-IgM,共培养24、48 h后,流式细胞术检测B淋巴细胞的凋亡.结果 10:1、1:1组B淋巴细胞A值分别为0.418±0.103、0.365±0.114,显著低于对照组的0.679±0.049(P＜0.01),1:1组显著低于50:1组(P＜0.05);50%MSC上清组B淋巴细胞A值(0.504±0.099),同对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05),并且显著低于12.5%组(0.669±1.023,P＜0.05).MSC不诱导B淋巴细胞的凋亡;B淋巴细胞与Msc共培养24、48 h,加或不加Anti-IgM,各组细胞凋亡率为(1.90±0.75)%、(2.33±1.01)%、(2.33±0.75)%、(1.39±0.63)%,组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 MSC及其上清抑制B淋巴细胞增殖,作用机制与MSC细胞数量和MSC分泌的细胞因子有关,但是在体外MSC不诱导B淋巴细胞的凋亡.