简单、快速同时检测乙肝表面抗原和甲胎蛋白胶体金免疫层析方法的建立

检测乙肝表面抗原 (HBsAg)和甲胎蛋白 (AFP)是诊断乙型肝炎病毒感染和辅助诊断原发性肝癌的两个重要的实验室指标。我国某些地区的肝癌 90 %是从肝硬化发展而来 ,每年有 3%～ 7%的肝硬化病人发展为肝癌。AFP大于 4 0 0 μg L的患者多数伴有乙型肝炎 ,说明乙肝病毒与AFP升高关系较密切〔1〕。AFP对肝癌的早期辅助诊断价值已被公认。而检测AFP对判断慢性肝炎病人是否继发原发性肝癌有帮助。因此在临床上 ,对于许多被怀疑患乙型肝炎病毒感染或原发性肝癌的病人 ,常常需要同时测定其HBsAg和AFP。在我国 ,肝癌的人群普查均同时测定HBs…     

ELISA法和胶体金试纸条法在乙肝表面抗原 检测中的应用研究

目的 研究ELISA法和胶体金试纸条法（GICA）在乙肝表面抗原检测中的准确度和特异性,分析方法的应用价值。方法 选取本院妇幼保健院检验科在2016年5月~2017年12月收集的共计460例血样标本,分别运用ELISA法及GICA法进行检测,比较检测结果。结果 ELISA法乙肝表面抗原阳性率为47.61%,GICA法阳性率为41.96%,差异有统计学意义（P＜0.05）。ELISA法及GICA法在对乙型病毒性肝炎表面抗原检测结果上具有密切的相关性（P＜0.05）。ELISA法灵敏度和特异度均高于GICA法（P＜0.05）。结论 ELISA法在阳性率、特异度及灵敏度等指标上均较GICA法高,但由于GICA法器材更为小巧、简洁直观,且无需大型设备辅助,较为广泛地应用于普查及急诊前检查中。     

金标免疫层析对弓形虫抗体的检测

采用金标免疫层析法与ELISA法检测 12 0 0份临床标本中的弓形虫抗体并进行比较。结果是ELISA法阳性率 2 42 % ,金标免疫层析法阳性率 2 33% ,两者的符合率 96 6 % ,两者无显著性差异。因此 ,免疫层析法是一种具有简便、快速、准确等特点的方法。     

人心肌肌钙蛋白T胶体金免疫层析法的建立

目的 建立一种简便,快速,准确检测人心肌肌钙蛋白Ｔ（ｃＴｎＴ）的胶体金免疫层析法（ＧＩＣＡ）。方法 制备的胶体金标记抗ｃＴｎＴ单克隆抗体３Ｆ７,生物素标记另一株抗体２Ｈ８,链霉亲和素结合于硝酸纤维素膜上,制成免疫层析试纸条,血清中ｃＴｎＴ与测试条两种抗体结合后,沿硝酸纤维素膜移动,与链霉亲和素交联形成肉眼可见的红色线条。结果 测试条灵敏度可达０．５ｎｇ／ｍｌ。检测３０例急性心肌梗塞（ＡＭＩ）患者血     

胶体金免疫层析法检测血清癌胚抗原

建立一种快速、简易的检测血清中癌胚抗原(CEA)的胶体金免疫层析法(GICA)。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒，标记抗CEA单克隆抗体4A3。将单克隆抗体3B5划线包被于硝酸纤维素膜上，制成免疫层析检测试纸条。血清中CEA与试纸条上胶体金标记物结合后沿着硝酸纤维素膜移动，与膜上的包被抗体结合形成肉眼可见的红色线条。用GICA与ELISA试剂盒对比检测了637份血清标本，其灵敏度为96．69％，特异性为99．38％，两法符合率为98．74％。GICA检测血清中的CEA特异性强、灵敏度高、简便快速，无需特殊仪器设备，有广泛应用价值。     

检测Asia I型口蹄疫病毒的胶体金免疫层析法的建立及应用

目的:建立一种快速、简便的检测AsiaⅠ型口蹄疫病毒(FMDV)的胶体金免疫层析法(GICA)。方法:采用柠檬酸钠还原法制备胶体金颗粒,用其标记纯化的AsiaⅠ型口蹄疫抗体后包被在玻璃纤维素膜上,另外将纯化的AsiaI型口蹄疫抗体和纯化的羊抗豚鼠抗体分别包被在硝酸纤维素膜上,作为检测带与质控带。玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜按顺序组装成胶体金快速诊断试纸条,通过系列实验验证其灵敏度、特异性、重复性及稳定性。结果:研制的AsiaⅠ型口蹄疫快速检测试纸条对AsiaⅠ型口蹄疫病毒的检测灵敏度为0.116mg/L,对阳性样品进行重复性试验3次检测结果完全相同。交叉反应证实该方法与其他血清型口蹄疫抗原和猪水疱病抗原(SVD)无交叉反应。检测田间样品,GICA与反向间接血凝的定型的符合率为96.87%。稳定性实验证实试纸条可保存12个月。结论:建立的GICA是一种快速、灵敏、特异的FMD抗原检测方法,对基层现场具有广泛应用价值。     

霍乱弧菌O1胶体金免疫层析快速检测法的建立

目的建立一种快速、简易的检测霍乱弧菌O1群的胶体金免疫层析法(GICA)。方法利用胶体金免疫层析技术,采用双抗体夹心法检测霍乱弧菌O1群,对该法进行敏感性、特异性和稳定性分析。与细菌培养法对比检测208份临床标本。结果该法能在10分钟内完成检测;该试纸条仅与霍乱弧菌O1群阳性样品发生特异性反应;检测霍乱弧菌O1群的最低检出浓度为1×105cfu/mL;与细菌培养法对比检测208份临床标本,特异性和灵敏度均达100%。结论新建立的霍乱弧菌O1群胶体金免疫层析试验简便、快速,特异性和灵敏度较好,适用于现场样品的快速筛查。     

玉米赤霉烯酮单克隆抗体的制备及胶体金免疫层析法的建立

目的 制备并鉴定玉米赤霉烯酮(ZEN)单克隆抗体(mAb),并初步建立ZEN的胶体金免疫层析检测方法.方法 采用活泼酯法制备人工抗原ZEN-OVA和ZEN-BSA,以ZEN-OVA作为免疫原制备ZEN mAb.ELISA法鉴定抗体效价、亚类、特异性等.ZEN mAb-胶体金复合物包被于胶体金结合垫上,检测原ZEN-BSA和山羊抗小鼠lgG分别结合于硝酸纤维膜上作为检测线(T线)和质控线(C线),建立ZEN的胶体金免疫层析检测法.结果 经紫外分光光度法和SDS-PAGE鉴定,ZEN人工抗原合成成功.经3次克隆化后,筛选出1株能稳定分泌ZEN mAb的杂交瘤细胞株1G4,腹水效价为1∶1.6×105;抗体亚类为IgG2b;对ZEN的IC50为10.2 ng/mL,检测限为0.58 ng/mL.mAb对ZEN具有高度的特异性,除与β-玉米赤霉烯醇的交叉反应率为12.8％外,与其他ZEN代谢物α-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇、玉米赤霉酮及其他相似毒素呕吐毒素、伏马毒素、赭曲霉素A等几乎无交叉反应.制备的胶体金免疫层析试纸条在5 min内即可肉眼观察到结果,对ZEN的最低检测限为100 ng/mL.结论 成功制备出1株ZEN mAb,并初步建立了其胶体金免疫层析检测方法,最低检测限为100 ng/mL.     

乙肝表面抗原压电免疫传感器阵列的研制

采用戊二醛交联法,将乙肝表面抗体固定于石英晶体表面,研制成HBsAg压电免疫传感器阵列.根据频率改变值考察了传感器的固定化过程和传感器对乙肝表面抗原的响应特性.该传感器对乙肝表面抗原进行定量分析,线性范围为1～25 μg/ml,线性相关系数为0.9977.取临床血清进行检测,将结果与临床常用的ELISA法比较,探索了该传感器应用于临床检测的可行性.     

EB病毒衣壳抗原IgA抗体胶体金快速检测法的建立及应用

目的建立了一种快速检测人血清中EB病毒衣壳抗原(VCA)IgA抗体的胶体金免疫层析(GICA)方法。方法预先将EB病毒衣壳抗原(EB-VCA)包被在硝酸纤维素膜上,将鼠抗人IgA抗体免疫金固化在金标垫上。检测时,样本通过层析作用向上流动,样本中的IgA抗体首先被胶体金标记的鼠抗人IgA抗体捕获,其中的EB-VCAIgA抗体再与包被在硝酸纤维素膜上的EB-VCA特异性结合,最后形成包被固相上的EB-VCA与EB-VCAIgA抗体及胶体金标记鼠抗人IgA抗体的三元复合物,通过检测线胶体金沉淀颜色的变化来定性判定样本中是否存在EB-VCAIgA抗体。结果采用自制的GICA试纸条进行了1028份临床标本的盲法检测,并与酶联免疫吸附试验的EB-VCAIgA抗体诊断试剂盒进行比对,结果表明两种试剂检测的总符合率达到94.56%,阳性符合率为93.40%,阴性符合率为95.17%,Kappa值为0.873,两种诊断试剂具备一致的诊断价值。结论用于检测血清中的EB-VCAIgA抗体的GICA试纸条的制备条件已基本建立,其检测结果特异性强、稳定性好、操作方法简便快捷且无需特殊仪器设备。     

铜绿假单胞菌胶体金免疫层析法的研制和应用

为建立一种简单、快速、准确的铜绿假单胞菌检测方法,结合抗重组铜绿假单胞菌外膜蛋白单克隆抗体（mAb）、胶体金标记技术,采用双抗体夹心法,建立了检测铜绿假单胞菌的胶体金免疫层析法,并对该方法的特异性、灵敏度和稳定性进行了评价,对临床痰标本进行了检测。结果显示,该胶体金免疫层析法能在3～15min内完成检测,方法的特异性高、稳定性强,检测灵敏度能达到105CFU/mL。与传统细菌培养方法相比,胶体金免疫层析法的相对灵敏度和特异性分别是80%和90.6%,两种方法的总符合率为86%。结论：利用抗铜绿假单胞菌单克隆抗体建立的胶体金免疫层析法,适合现场快速、特异检测铜绿假单胞菌。     

胶体金法药物滥用检测试剂临床研究要点

目的 结合体外诊断试剂现行法规和药物滥用检测试剂自身的特点,阐述其临床研究要点.方法 对该类试剂管理分类、研究方法、临床试验方案设置、临床试验样本选择、结果 的统计学分析以及临床试验报告撰写等方面进行了详细解析.结果确立了体外诊断试剂和药物滥用检测试剂的研究方法.结论 体外诊断试剂和药物滥用检测试剂的临床研究应从试剂本身的临床预期用途出发,重点针对试剂定性的准确性、特异性进行科学的临床考察.     

纳米胶体金最佳标记条件的一种简易方法研究

免疫胶体金稳定性的关键因素在于标记胶体金时条件的选择。本文将最适pH值和最适蛋白稳定量的测定结合起来,用蛋白质过量法测定胶体金最佳标记条件。     

免疫胶体金法定量检测促甲状腺激素的实验性能测试

目的 免疫胶体金法用于快速检测受试者手指全血的促甲状腺素(TSH),可以定量分析且快速简便.本研究拟对免疫胶体金法定量检测TSH的精密度性能及检测仪器间是否存在差异进行实验研究.方法 设计7个不同浓度的促甲状腺激素(TSH)质控品和人血清样本,每天对各样本重复测定4次,持续5天,计算重复性(批内CV)和中间精密度(CV).选用33份不同浓度的TSH血清标本,分别用检测仪器1和检测仪器2进行判读分析,比较两者结果的相关性.结果 质控品和病人血清TSH浓度为1.20、2.51、3.46、5.02、7.63、10.03、11.08 μIU/mL,对应的批内CV分别为30.00％、17.84％、16.50％、15.00％、13.92％、10.62％、9.62％,中间精密度CV分别为29.23％、20.19％、18.15％、16.60％、15.34％、10.42％、8.76％.二台检测仪器检测TSH值相关性r为0.968,无统计学差异.结论 免疫胶体金法定量检测TSH在低浓度TSH水平的精密度变异较大,但在中高浓度TSH尤其＞10μIU/mL情况下,检测精密性能良好.不同检测仪器间检测结果也无明显差异.     

胶体金免疫层析法检测念珠菌抗原对侵袭性念珠菌肺炎的诊断价值

目的研究胶体金免疫层析法检测念珠菌抗原对侵袭性念珠菌肺炎的诊断价值。方法纳入2015年4月至2019年9月本院诊治的怀疑为侵袭性念珠菌肺炎、侵袭性曲霉菌肺炎、非真菌感染病例253例,使用我们与军事医学研究院共同研发的胶体金免疫层析试剂检测血液中念珠菌抗原。结果本研究共测定临床血液标本253例,其中诊断为侵袭性肺念珠菌感染的有30例,非真菌感染患者213例,侵袭性肺曲霉菌感染10例。胶体金法检测念珠菌的灵敏度为87%,特异性为93%,阳性预测值为63%,阴性预测值为98%。结论胶体金免疫层析法对于侵袭性肺念珠菌肺炎具有较高的灵敏度和特异性,且具有快速、方便等特点,能够用于临床念珠菌肺炎的检测。     

Rapid purification of HBsAg from human plasma

A method is described for the rapid isolation of purified HBsAg from infected donor plasma. This method uses polyethylene glycol precipitation and a single isopycnic ultracentrifugation step in which the gradient is formed in situ. It works equally well using a small swingout rotor or a zonal rotor.