应用逆转录聚合酶链反应检测肠道病毒感染

为建立一种能检测出临床上绝大多数肠道病毒（ＥＶ）感染的快速、敏感、特异的逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法，通过对ＥＶ基因组的序列分析，在其５′端非编码区设计一对引物，用该引物建立的ＲＴ－ＰＣＲ方法对３１种ＥＶ标准毒株和３４例无菌性脑膜炎及１１例无菌性脑炎患儿的脑脊液（ＣＳＦ）分别进行扩增，其产物做琼脂糖凝胶电泳及斑点杂交检测。研究表明，３１种ＥＶ标准毒株斑点杂交的敏感度达１０－２～１０－３５０％组织培养感染量（ＴＣＩＤ５０）。３４例无菌性脑膜炎中２１例阳性（６１．８％），１１例无菌性脑炎中８例阳性（７２．７％）；阳性患儿恢复期ＣＳＦ，２例无菌性脑膜炎和１例无菌性脑炎仍为阳性。提示用ＲＴ－ＰＣＲ方法检测ＥＶ感染是值得推广的。     

柯萨奇B组病毒感染与小儿哮喘发作关系的探讨

目的　探讨柯萨奇 Ｂ 组病毒（ Ｃ Ｖ Ｂ） 感染与哮喘发作的关系。方法　观察急性发作期哮喘患儿１０２ 例、上呼吸道感染１８２ 例、非感染性疾病患儿７１ 例、健康儿童３０ 例。采用 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 法测定静脉血 Ｃ Ｖ Ｂ 抗原（ Ｃ Ｖ Ｂ－ Ａｇ）和 Ｉｇ Ｍ 抗体（ Ｃ Ｖ Ｂ－ Ｉｇ Ｍ） 、免疫组化法测定 Ｔ 细胞亚群和［３ Ｈ］ － Ｔｄ Ｒ 标记法测定 Ｎ Ｋ 细胞活性。结果　①哮喘患儿 Ｃ Ｖ Ｂ 感染率为５７８ ％ （５９／１０２） ;②哮喘患儿 Ｃ Ｄ８ 显著升高; Ｃ Ｄ３ 、 Ｃ Ｄ４／ Ｃ Ｄ８ 及 Ｎ Ｋ 细胞活性均明显下降（ Ｐ ＜００１） ;而 Ｃ Ｖ Ｂ 阳性哮喘患儿 Ｎ Ｋ 细胞活性又低于非 Ｃ Ｖ Ｂ 阳性哮喘儿（ Ｐ ＜ ００５） , Ｃ Ｄ８ 明显高于非 Ｃ Ｖ Ｂ 阳性哮喘儿（ Ｐ ＜ ００１） 。结论　 Ｃ Ｖ Ｂ 感染与哮喘发作有密切关系。     

PCR管单法快速检测单纯疱疹病毒性脑炎的临床价值

为了确立ＰＣＲ单管法快速检测单纯疱疹病毒（ＨＳＶ－１）的临床价值，本文对１８例经临床、ＥＥＧ，ＭＲＩ或ＣＴ诊断的单疱病毒脑炎（ＨＳＥ）患者２４份ＳＣＦ标本，先经解偶联裂解吸附预处理，抽提模板ＤＮＡ，然后进行ＰＣＲ一次性扩增研究。首次扩增１８份ＣＳＦ标本，其中１７份ＰＣＲ阳性，１份阳性，但６天后复查转为阳性。５例ＰＣＲ阳性患儿经正规抗病毒治疗后均转为阴性。对照组３０例其他中枢神经系统疾病均为阴性。结     

套式聚合酶链反应加限制酶分析检测母婴巨细胞病毒感染

为评价套式聚合酶链反应（套式ＰＣＲ）加限制酶分析在孕妇巨细胞病毒感染及其母婴宫内传播检测中的应用，采用套式ＰＣＲ加限制酶分析，病毒分离、电镜观察和特异性抗体测定，对各孕期孕妇外周血，脐血及死胎组织进行人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）检测。结果：３６７名孕妇ＨＣＭＶ阳性检出率为５．５％，其中，套式ＰＣＲ检出率（４．９％）高于病毒分离（３．０％，Ｐ＜０．０５）。６份ＨＣＭＶＤＮＡ阳性母血中，３份配对脐血ＨＣＭＶＤＮＡ也阳性，母－脐传播率为３／６。３对被证实为母－婴宫内传播ＨＣＭＶ的标本中，２对套式ＰＣＲ，病毒分离及特异性ＩｇＭ、ＩｇＡ均阳性，１对套式ＰＣＲ、病毒分离、特异性ＩｇＡ阳性，ＩｇＭ阴性。提示：套式ＰＣＲ能提高诊断ＨＣＭＶ的特异性与敏感性，对孕妇及胎儿／新生儿ＨＣＭＶ感染的研究有重要意义。     

非化脓性中枢感染中肠道病毒感染的临床研究

目的 分析１９９７年度非化脓性中枢感染中肠道病毒（ＥＶ）感染的临床特点。方法 采用ＲＴ－ＰＣＲ的方法检测１９９７年１２８例非化脓性中枢感染者的ＣＳＦ中ＥＶ ＲＮＡ。结果与我院非化脓性中枢感染季节分布情况比较。结果 本组年龄与ＥＶ感染关系不大，起病早期ＣＳＦ阳性检出高，非化脓性中枢感染与ＥＶ感染关系不大，起病早期ＣＳＦ阳性检出高，非化脓性中枢感染与ＥＶ在ＣＳＦ中检出一致。结论 ＥＶ是小儿时期非化脓性     

新生儿室管膜下囊肿的病因研究

为了探讨新生儿室管膜下囊肿（ＳＥＣ）与先天性感染的关系，采用ＥＬＩＳＡ酶标法检测母婴双方囊肿组与对照组各７０例血巨细胞病毒（ＣＭＶ）、风疹病毒、弓形虫的抗体，并应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术直接检测病原ＤＮＡ（风疹病毒除外），同时作尿ＣＭＶ的ＰＣＲ检测。结果：囊肿组新生儿血ＣＭＶ－ＩｇＭ抗体和ＣＭＶ－ＰＣＲ阳性率显著高于对照组（分别为１７．１％、５．７％和１２．９％、２．９％）；且尿ＣＭＶ－ＰＣＲ的阳性率达４０．０％（２８／７０），高于对照组的１７．１％（１２／７０）；分别进行两组自身对照，尿ＣＭＶ－ＰＣＲ的阳性率显著高于血ＣＭＶ－ＰＣＲ阳性率（Ｐ＜０．０５）。囊肿组母亲的尿ＣＭＶ－ＰＣＲ阳性率亦显著高于对照组（３０％、１０％、Ｐ＜０．０１）。提示新生儿ＳＥＣ是宫内感染损害中枢神经系统的表现之一，与先天性ＣＭＶ感染有关，尿ＣＭＶ－ＰＣＲ检查可作为宫内ＣＭＶ感染的首选实验室诊断方法。     

粒细胞集落刺激因子和免疫球蛋白在母婴分布的探讨

目的：为了找到脐血中粒细胞集落刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）产生的部位，为脐血的基础研究和临床应用提供科学依据。方法：应用Ｇ－ＣＳＦＥＬＩＳＡ试剂盒采用酶联免疫方法，分别测定了４８例妊娠３７～３８周健康孕妇静脉血清和５０例正常足月新生儿脐静脉血清和４９例脐动脉血清Ｇ－ＣＳＦ阳性率和含量。结果：阳性率分别为８３３％、７４％和８１６％，并测定了３７例阳性脐静脉血中Ｇ－ＣＳＦ的含量，结果Ｓ／Ｎ最高１９９４，最低２１，ｘ±ｓ为５９±３９５。经统计学处理，脐静脉血和孕妇静脉血阳性率有显著性差异（Ｐ＜００１），脐静脉血和脐动脉血阳性率也有显著性差异（Ｐ＜００１）。并用单向环状免疫扩散（ＲＩＤ）法测得５１例正常足月儿脐静脉血中免疫球蛋白ＩｇＧ含量明显高于正常值（Ｐ＜００５）。结论：测得结果显示，脐血中Ｇ－ＣＳＦ主要来源于脐静脉的胎盘中。推测胎盘的某些细胞具有产生Ｇ－ＣＳＦ的功能。脐血中含有高水平的ＩｇＧ。     

逆转录—多聚酶链反应检测柯萨奇B组病毒

研究目的用分子生物学方法对柯萨奇Ｂ组病毒（ＣＢＶ）进行检测并探讨与临床症病的关系。研究方法对我院２９８例疑似ＣＢＶ感染的患儿，采用特异性引物进行逆转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测ＣＢＶ。结果检出ＣＢＶ阳性１２７人，阳性率４２．６％。感染与年龄有关，夏秋季多见。８０例健康儿童中，阳性５人，占６．２５％。２０例ＲＴ－ＰＣＲ检测阳性标本用ＥＬＩＳＡ法检测，１７例阳性。结论ＲＴ－ＰＣＲ可快速、敏感、准确地检出标本中的ＣＢＶ。此病毒可侵犯多种器官，引起各种临床症病，有较强的传染性。     

逆转录聚合酶链反应快速检测呼吸道合胞病毒

为探索一种快速、可靠的呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）的检测方法，对逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术检测ＲＳＶ进行研究。结果：ＲＴ－ＰＣＲ方法可检出病毒量为１０ＴＣＩＤ５０／ｍｌ（ＴＣＩＤ５０为半数组织培养感染量）；用于扩增Ｆ蛋白基因的引物经计算机基因库检测与其他病毒无同源性，实验同步扩增其他常见呼吸道感染病毒均无阳性扩增带；实验过程６小时内完成。在ＲＳＶ好发季节对５３例拟诊为病毒性急性下呼吸道感染婴儿咽拭子进行检测，ＲＳＶ阳性２８例（５２．８％）。提示ＲＴ－ＰＣＲ方法检测ＲＳＶ具有快速、敏感性高、特异性好等特点，适合于临床应用。     

儿童急性白血病继发丙型病毒性肝炎

目的 探讨儿童急性白血病继发输血后丙型病毒性肝炎的发生、发展及转归。方法 用ＲＴ－ＰＣＲ法检测血清ＨＣＶ－ＲＮＡ,并用ＥＬＩＳＡ方法测ＨＣＶ核心区多肽抗体（ＨＣＶ－ＣＰ）。结果 １０７例儿童白血病中ＨＣＶ感染率达７０％（７５／１０７）;ＨＣＶ－ＣＰ检测阳性率明显低于ＨＣＶ－ＲＮＡ（４０％ｖｓ７４％）;ＨＣＶ感染者化疗期间曾有转氨酶（ＡＬＴ）明显升高,但停止化疗后５０例中仅１例ＡＬＴ持续偏高,余均恢