小鼠小肠迷走神经初级传入神经元酸敏感电流的特征

目的 分析小鼠小肠迷走神经初级传入神经元上酸敏感电流的特征及药理学特性,初步探讨介导酸敏感电流的离子通道.方法 运用活性荧光染料(DiI)逆行标记小鼠小肠迷走神经初级传入神经元,全细胞膜片钳技术记录和分析不同pH值的细胞外液刺激诱发的酸敏感电流及与pH值的关系.在pH值5.0的细胞外液中(对照)分别添加酸敏感离子通道(ASIC)拮抗剂(30 μmol/L benzamil和100 μmol/L amiloride)和瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)拮抗剂(10 μmol/L capsazepine和10 μmol/L ruthenium red),观察诱发酸敏感电流的变化.结果 在DiI标记的52个神经元中的33个神经元上可记录到三种类型的内向电流(快、慢和持续型).酸敏感电流的电流幅度均随pH值的降低而增大.30 μmol/L benzamil和100 μmol/L amiloride使快电流的瞬时成分和慢电流的电流幅度显著减小(P＜0.05和P＜0.01);10 μmol/L capsazepine和10 μmol/L ruthenium red能使持续型电流的电流幅度明显减小(均P＜0.05).结论 小肠迷走神经初级传入神经元至少表达三种对酸反应的离子通道,分别是ASIC的两种不同亚型和TRPV1.     

慢性缺氧对大鼠岩神经节神经元ASIC1a和ASIC1b表达的影响

目的探讨慢性缺氧对大鼠岩神经节神经元酸敏感离子通道（acid-sensingion channels,ASICs）的两种亚型ASIC1a和ASIC1b表达的变化。方法建立大鼠慢性缺氧模型（6 h/d,12 d）,用常规免疫组化法（PV法）观察正常大鼠及慢性缺氧大鼠岩神经节神经元ASIC1a和ASIC1b的表达。结果正常大鼠岩神经节存在ASIC1a和ASIC1b阳性表达神经元;慢性缺氧组大鼠岩神经节ASIC1a和ASIC1b阳性神经元明显多于正常组（P〈0.05）。结论慢性缺氧能上调大鼠岩神经节神经元ASIC1a和ASIC1b的表达。     

CGRP/ASIC3参与大鼠食道扩张内脏痛模型中背根神经节神经元高敏感机制的研究

目的：探讨降钙素基因相关肽（CGRP）和酸敏感离子通道3 (ASIC3)参与大鼠食道扩张（ED）内脏痛模型中脊髓背根神经节（DRG）神经元高敏感发生的机制。方法：将50只健康雄性SD大鼠随机分为实验组（n=30）和对照组（n=20）。腹腔麻醉50只SD大鼠，暴露大鼠食管下段，利用PE-240管对实验组大鼠的胸段食管进行1 h重复ED刺激，对照组则不予处理。分离并培养50只大鼠胸段脊髓DRG神经元，根据实验组培养液中有无加入CGRP拮抗剂（CGRP8-37）将其进一步分为ED组（n=15）和ED+CGRP8-37组（n=15）。采用全细胞膜片钳技术记录DRG神经元动作电位及ASIC3电流变化；免疫荧光法检测DRG神经元中CGRP、ASIC3的表达定位；逆转录实时聚合酶链反应（qRT-PCR）法检测CGRP与ASIC3 mRNA表达；Western blot法检测CGRP与ASIC3蛋白表达。结果：ED组DRG神经元动作电位数较对照组显著增加（P<0.01）；免疫荧光结果示CGRP与ASIC3在DRG神经元中存在共表达；与对照组比较，ED组CGRP与ASIC3的mRNA、蛋白水平显著...     

ASICs阻断剂对脑I/R大鼠神经行为学和梗死体积的影响

目的：探讨酸敏感离子通道（ASICs）阻断剂阿米洛利（amiloride）对脑缺血/再灌注（ischemia/reperfusion,I/R）大鼠神经行为学和梗死体积的影响。方法：参照ZeaLonga线栓法建立SD大鼠局灶性脑I/R模型。将32只大鼠随机分为4组,即假手术组、I/R模型对照组、amilorideⅠ组和amilorideⅡ组,每组8只,再灌注24h时间点行神经功能缺损评分,之后进行脑梗死灶体积测定和组织细胞HE染色。结果：I/R模型对照组神经功能缺损评分和脑梗死灶体积均明显大于amilorideⅠ组和amilorideⅡ组（P〈0.05）,amilorideⅠ组明显大于amilo-rideⅡ组（P〈0.05）。结论：ASICs阻断剂amiloride对大鼠脑I/R损伤具有保护作用,其作用机制可能主要为amiloride阻断ASICs,抑制Ca2＋超载,减轻脑I/R损伤。amiloride药理作用具有剂量效应关系。     

蛋白激酶A对小鼠皮层神经元酸敏感离子通道的调节

目的 :探讨蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)对小鼠皮层神经元酸敏感离子通道(acid sensing ion channels,ASICs)功能的影响及机制。方法:取原代培养小鼠皮层神经元,通过应用钙影像、全细胞膜片钳、免疫荧光和Western Blot等技术,分别观察PKA激动剂和抑制剂对ASICs功能的影响及机制。结果:(1)在给予PKA激动剂或抑制剂前神经元ASICs电流幅值约为(224.2±17.59)pA(n=15),预孵育PKA激动剂forskolin(10μmol/L)使电流幅值减小为(108±14.67)pA(n=9),与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01),而预孵育PKA抑制剂PKAI(5μmol/L)则使电流幅值增加为(306.3±22.9)pA(n=12),与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01);(2)在给予PKA激动剂或抑制剂前,酸诱导的胞内钙△F/F值为(0.708±0.07)(n=20),PKA激动剂forskolin(10μmol/L)使其减少为(0.140±0.013)(n=17),与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01),PKA抑制剂PKAI(5μmol/L)使其增加为(0.978±0.108)(n=19),与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01);(3)在加入forskolin或PKAI 24 h后,神经元ASIC1总荧光密度无明显改变(P>0.05),但神经元ASIC1膜荧光密度从对照组的(78.58±7.42)(n=32)减少到forskolin孵育后的(31.41±3.38)(n=57),与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01),而PKAI孵育后神经元ASIC1膜荧光密度增加到(118.29±11.50)(n=34),与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 :PKA通过影响ASICs膜分布负性调节小鼠皮层神经元ASICs电流及由酸诱导的胞内钙增加。     

右美托咪定对大鼠脊髓神经元酸敏感性离子通道和α2A受体的影响

目的 探讨右美托咪定对大鼠脊髓神经元酸敏感性离子通道及α2A受体的影响.方法 选取7～8周龄雄性SD大鼠24只,选取直径为15～35μm的脊髓神经元,将其随机分为酸溶液(pH4.5)组、右美托咪定(0.1μmol/L)组及右美托咪定+酸性溶液组,在电压钳模式下记录脊髓神经元电流,以分析右美托咪定对大鼠脊髓神经元酸敏感离...     

酸感受离子通道亚基3的研究进展

酸感受离子通道（ASIC）是对H⁺敏感的Na⁺选择性阳离子通道，在细胞外H+浓度增高时激活开放，形成H⁺门控电流。目前，已发现该通道有6个亚基，酸感受离子通道亚基3（ASIC3）是其中之一。研究表明，ASIC3在痛觉、伤害性刺激的感受、心肌缺血所致的心绞痛等病理过程中有重要作用，很可能成为药物研制的新靶标。     

高通量筛选酸敏感离子通道1a抑制剂研究

目的 建立体外稳定过表达酸敏感离子通道1a（ASIC1a）的Fisher大鼠甲状腺上皮细胞（FRT细胞）,采用Ca2+敏感荧光染料Fura-2/AM和细胞毒性检测〔乳酸脱氢酶（LDH）释放法〕测定ASIC1a活性,探讨高通量筛选ASIC1a抑制剂的可行性。方法 2014年1月-2016年2月,利用分子生物学方法,构建ASIC1a过表达载体pcDNA3.1/myc-His-mASIC1a,通过细胞转染技术建立了稳定过表达ASIC1a的Fisher大鼠FRT细胞。将细胞分成两组,对照组（FRT细胞）和实验组（稳定过表达ASIC1a的FRT细胞）,并分别未负载和负载Ca2+敏感荧光染料Fura-2/AM,采用酶标检测仪测定双波长（340 nm和380 nm）的值,计算F340/F380。对照组和实验组细胞经不同pH值酸液（pH值7.5、7.0、6.5、6.0、5.5）刺激后,采用酶标检测仪测定450 nm波长处LDH释放量。结果 对照组与实验组未负载Fura-2/AM细胞F340/F380比较,差异无统计学意义（P＞0.05）;实验组负载Fura-2/AM细胞F340/F380较对照组升高（P＜0.05）;对照组和实验组负载Fura-2/AM细胞F340/F380较未负载Fura-2/AM细胞升高（P＜0.05）。pH值6.5、6.0、5.5时,实验组细胞LDH释放量大于对照组（P＜0.05）;对照组和实验组细胞不同pH值时LDH释放量比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 本研究成功建立稳定过表达ASIC1a的FRT细胞,Ca2+敏感荧光染料Fura-2/AM和细胞毒性检测（LDH释放法）两种方法测定ASIC1a活性,使高通量筛选ASIC1a抑制剂成为可能,为发现高选择性和高活性的天然小分子ASIC1a抑制剂奠定了基础。     

TRPV1和ASIC3基因敲除小鼠的寿命观察

目的：观察酸敏感离子通道亚基3（ASIC3,又名ACCN3）基因敲除ASIC3-/-小鼠、香草酸瞬时受体亚型I（TRPV1）基因敲除TRPV1-/-小鼠的生存曲线,为进一步繁殖使用该品系小鼠提供参考。方法选用105只基因敲除小鼠,其中ASIC3-/-鼠44只,TRPV1-/-鼠61只。观察正常喂养两种小鼠500d以内的生存情况,并绘制生存曲线,进行生存分析。结果ASIC3-/-小鼠与TRPV1-/-小鼠随着时间的延长,生存概率降低,经比较TRPV1-/-小鼠的生存概率优于ASIC3-/-小鼠的生存概率,两种小鼠的生存时间存在统计学差异,（P＝0.004,P＜0.01）,两种小鼠中不同性别之间的生存曲线无显著学差异。结论TRPV1-/-小鼠的生存概率优于ASIC3-/-小鼠的生存概率。而两种鼠不同性别之间的生存概率则基本相当。     

与感觉相关的ASIC3 、TRPV1基因敲除小鼠繁殖性能的观察与痛阈的比较

目的 观察酸敏感离子通道亚基3（ASIC3,又名ACCN3）基因敲除ASIC3-/-小鼠、香草酸瞬时受体亚型Ⅰ（TRPV1）基因敲除TRPV1-/-小鼠的繁殖性能,并对其基础痛阈值进行测定和比较.方法 选用成熟的未交配过的ASIC3-/-和TRPV1-/-纯合子小鼠分别进行繁殖交配,统计两种小鼠的妊娠率、窝产仔数、离乳率、头胎产仔数等,并对两种小鼠的基础痛阈值进行测定比较,对照组为同源野生C57BL/6小鼠.结果 ASIC3-/-小鼠的妊娠率、窝产仔数、离乳率较TRPV1-/-小鼠偏低,而TRPV1-/-小鼠妊娠率、窝产仔数、离乳率相对稳定;ASIC3-/-组的基础机械痛阈值与C57BL/6对照组相比显著升高（P ＜0.001）,而热痛阈值没有明显改变;TRPV1-/-组的基础热痛阈值与C57 BL/6对照组显著升高（P＜0.001）.结论 ASIC3-/-小鼠的繁殖能力较TRPV1-/-小鼠弱;ASIC3-/-小鼠的机械痛敏感性下降,TRPV1-/-小鼠的热痛敏感性下降.     

苄阿米洛利和钌红对颈动脉窦压力感受器放电的阻断作用

目的研究苄阿米洛利、阿米洛利和钌红对颈动脉窦压力感受器放电的作用,探讨压力感受器上机械敏感通道的性质。方法制备家兔离体颈动脉窦-窦神经标本,采用颈动脉窦窦内外双重灌流,钳制窦内压并记录窦神经放电,观察上述药物对压力感受器放电的作用。结果苄阿米洛利以浓度依赖性方式阻断窦神经放电,IC50值为18.5μmol/L,该阻断作用在冲洗后能大部分消除;阿米洛利(2 mmol/L)可阻断95%的窦神经放电,其作用可逆;钌红(100μmol/L)以不可逆的方式抑制89%的窦神经放电活动。结论分属A类和C类纤维的压力感受器活动均可被阿米洛利类药物和钌红阻断,提示2类压力感受纤维末梢上有相似的机械敏感通道,但是有关的机械-电转导分子还有待进一步研究。     

三型酸敏感离子通道在大鼠OAB模型膀胱组织中表达的意义

目的 探讨大鼠膀胱组织中三型酸敏感离子通道（ASIC3）的表达与大鼠膀胱过度活动症（OAB）的关系。方法 成年雌性大鼠膀胱造瘘后,随机分为对照组（0.9%氯化钠盐水腹腔注射）、OAB组（环磷酰胺腹腔注射）、干预组（OAB组基础上加入ASIC3抑制剂阿米洛利）,每组20只。24 h后对各组大鼠进行尿流动力学检测;取3组大鼠的膀胱组织,进行病理学检查;并通过免疫组织化学染色、RT-PCR和Western blot方法检测其ASIC3的表达。结果 尿流动力学检测结果显示:对照组大鼠储尿期及排尿期未见明显不稳定收缩;与对照组相比,OAB组及干预组在储尿期可见不稳定收缩,即排尿间隔缩短（ P<0.01）,排尿次数增加（ P<0.01）。干预组与OAB组相比,排尿间隔延长（ P<0.05）,排尿次数减少（ P<0.05）。病理学检测提示:OAB组、干预组中大鼠膀胱黏膜破坏;免疫组化染色提示:大鼠膀胱组织有ASIC3表达,主要分布于膀胱黏膜;RT-PCR及Western blot提示:OAB组中膀胱黏膜上 ASIC3基因及蛋白表达较对照组升高（ P<0.01）,加入ASIC3抑制剂后,干预组 ASIC3基因及蛋白表达低于OAB组（ P<0.05）,但仍高于正常组（ P<0.01）。结论 大鼠膀胱组织有 ASIC3基因及蛋白表达, OAB大鼠膀胱组织 ASIC3基因及蛋白表达增高, ASIC抑制剂可抑制其表达,干预后,大鼠OAB症状减轻,说明膀胱组织ASIC3表达升高与膀胱逼尿肌反射亢进相关。     

组蛋白去乙酰基酶抑制剂NL101对大鼠神经元的作用

目的：观察组蛋白去乙酰基酶新抑制剂NL101对同型半胱氨酸（HCA）诱导大鼠神经元毒性损伤的保护作用,以及对正常神经元的损伤作用。方法：使用HCA（5 mmol/L）诱导大鼠皮层混合细胞及原代神经元的损伤,观察不同浓度NL101对损伤的影响,检测神经元及胶质细胞的活性、数量、形态以及坏死的变化,并观察NL101对正常神经元的作用;以同类药SAHA（suberoylanilide hydroxamic acid）作为对照。结果：0.001~10 μmol/L的NL101对HCA诱导的皮层混合细胞数量减少没有明显影响;但 1、10 μmol/L 的NL101可明显减少细胞坏死（P<0.05）;1 μmol/L的 NL101可增加神经元数量。1、10 μmol/L 的NL101可明显降低原代神经元活性（均P<0.05）;但0.01~10 μmol/L的 NL101可显著减轻HCA诱导的神经元活性降低（均P<0.05）;1、10 μmol/L的NL101可减少HCA引起的神经元坏死（均P<0.05）。NL101的作用与SAHA大致相当。结论：NL101对HCA诱导的神经元损伤有保护作用,高浓度NL101对神经元有明显的毒性作用,与经典的SAHA作用相似。     

酸敏感离子通道在DRG的表达与调控

目的:酸敏感离子通道(acid sensing ion channels,ASICs)为H -门控的阳离子通道,是一类新的配体门控性离子通道,属于钠通道超家族的新成员.ASICs具有许多重要的生物学功能,在痛觉和触觉调制中具有重要作用.近来,ASICs各个亚基已被克隆,并且所有亚基在背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)神经元均有表达.本文主要介绍ASICs在DRG的表达与调控.     

褪黑激素对新生大鼠海马神经元延迟整流钾电流的影响

目的 用膜片钳技术观察褪黑激素对电压门控性延迟整流钾电流(Ik)的影响,探讨褪黑激素在中枢神经系统的作用机制及其生物学意义.方法 选择7～12 d原代培养的新生Wistar大鼠海马锥体神经元,用膜片钳电压钳全细胞记录模式观察Ik的基本电生理特点,并观察不同浓度褪黑激素,包括1、10、100 nmol/L、1、10、100 μmol/L和1 mmol/L对Ik的幅度及动力学特性的影响.结果 利用海马锥体神经元的钾电流对4-AP、TEA的敏感性及电生理特性的不同可分离出激活、失活缓慢,具有强烈外向整流特性的延迟整流钾电流.褪黑激素对海马锥体神经元Ik的影响是快速、可逆、呈电压依赖性的,但对其激活曲线没有影响.褪黑激素对Ik的作用具有浓度依赖性.1～100nmoI/L的褪黑激素可逐渐递增地增加Ik幅度;1～100 μmol/L褪黑激素对Ik的增加程度随浓度增加而增大,而1 mmol/L褪黑激素的增加程度却减小.结论 褪黑激素可逆地增强体外培养新生大鼠海马神经元的Ik电流,这或许参与了神经元损伤和记忆损害的某些环节.     

Inhibitive effect of loureirin B plus capsaicin on tetrodotoxin-resistant sodium channel

OBJECTIVE

To investigate whether the effect of loureirin B plus capsaicin on tetrodotoxin-resistant (TTX-R) sodium channel.

苦参碱和氧化苦参碱抗血管过敏性损伤的作用

目的研究苦参碱和氧化苦参碱对抗原攻击所致血管收缩的影响。方法腹腔注射牛血清白蛋白建立预致敏的豚鼠模型,21d后制备离体豚鼠主动脉环,用0.04mg.mL-1牛血清白蛋白诱发血管过敏反应,记录血管张力的改变。观察苯海拉明、苦参碱和氧化苦参碱对抗原攻击所致血管收缩的影响,并观察capsazepine等对不同剂量苦参碱和氧化苦参碱作用的影响,分析其对血管过敏性损伤保护作用的机制。结果抗原攻击能诱导豚鼠预致敏的离体胸主动脉环收缩,苯海拉明(H1受体阻断剂)能显著抑制抗原攻击所致的血管收缩;氧化苦参碱(3.3×10-4～3.3×10-3mol·L-1)能显著降低抗原攻击所致血管的收缩效应,瞬时受体电位香草酸亚型(Transient Receptor Potentiol Vanilloid 1,TRPV1)受体阻断剂capsazepine(10μmol·L-1)能消除氧化苦参碱对血管收缩的抑制效应;苦参碱(1×10-3、3.3×10-3mol·L-1)能显著降低抗原攻击所致血管的收缩效应,此作用不受capsazepine(10μmol·L-1)的影响。结论氧化苦参碱能显著抑制血管过敏反应时血管的收缩,其作用与激活TRPV1受体有关;较高浓度苦参碱也能显著抑制血管过敏反应时血管的收缩,其作用与TRPV1受体无关。     

乌头碱对胎鼠中脑多巴胺能神经元细胞的神经毒性作用

目的: 观察乌头碱对中脑多巴胺能神经元细胞的毒理作用,以了解和预防乌头碱及其衍生物产生的神经毒性作用。方法: 从孕14 d的小鼠中取出胎鼠中脑,并分离出多巴胺能神经元细胞,于5％CO2,37 ℃和100％湿度条件培养,培养第10天加入不同浓度的乌头碱(0.1,0.5,1,5,10,50 和100 μmol/L)作用48 h,于第12天免疫组化染色。选取神经元细胞数、神经元树突的长度和数量作为观察指标,并进行分析。结果: 乌头碱作用48 h后,不同浓度的乌头碱(0.5～100 μmol/L)对神经细胞生长均有明显的抑制作用,并表现出浓度依赖性神经毒性作用,高浓度乌头碱(10～100 μmol/L)的抑制强度高于低浓度组(0.5～5 μmol/L)。结论: 体外实验证实了乌头碱对中脑多巴胺能神经元有神经毒性作用。     

依托咪酯对丘脑腹侧连接核神经元活性的影响

目的:探索依托咪酯对丘脑腹侧连接核神经元活性的影响及机制.方法:在4～5周龄的C57BL/6J小鼠急性脑片上,利用全细胞膜片钳方法检测依托咪酯对丘脑腹侧连接核神经元活性的影响.在电流钳模式下记录丘脑腹侧连接核神经元的电生理特性,然后观察0.5、2.0、8.0μmol/L依托咪酯(分别设为0.5、2.0、8.0μmol/...