环孢素对心脏移植大鼠急性排斥反应及血清IDO活性的影响

目的 探讨不同剂量的强效免疫抑制剂环孢素(CsA)对同种异基因心脏移植大鼠急性排斥反应程度和血清吲哚胺2,3双加氧酶(IDO)活性的影响.方法 分别以SD和Wistar大鼠为供、受体,建立同种异基因大鼠颈部异位心脏移植模型.18只受体大鼠随机分为对照组、低剂量CsA组(CsA 2 mg·kg-1·d-1)和高剂量CsA组(CsA 15 mg·kg-1·d-1),每组6只.术后第7天,所有受体大鼠经腹主动脉采集血样后处死,取移植心脏制备组织学检查标本.ELISA法检测血清白介素2(IL-2)和γ干扰素(IFN-γ)水平;高压液相色谱法检测血清犬尿氨酸和色氨酸浓度,计算两者比值并以此估算IDO活性.移植心脏标本常规HE染色,采用Stanford标准进行急性排斥反应程度分级.结果 三组血清IL-2和IFN-γ水平以及IDO活性比较显示,对照组＞低剂量CsA组＞高剂量CsA组,差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).三组移植心脏急性排斥反应程度分级结果显示,对照组＞低剂量CsA组＞高剂量CsA组,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 CsA可明显减轻同种异基因大鼠移植心脏急性排斥反应程度并降低血清IDO活性,两者变化趋势一致且与CsA的使用剂量有关.提示血清IDO活性监测有可能成为一种无创性移植器官急性排斥反应及其程度的预测和评估方法.     

FTY720对大鼠心脏移植急性排斥反应的影响

目的观察FTY720对大鼠心脏移植急性排斥反应(AR)的影响并探讨其相关机制。方法利用Cuff技术建立颈部异位心脏移植模型,受体大鼠随机分为对照组和FTY720组,每组12只。FTY720组自术前3 d至术后11 d管饲FTY720(3 mg·kg~(-1)),对照组管饲等量生理盐水。2组均于术后第5天随机选6只动物抽取外周血后留取标本,其余6只观察存活期。苏木素-伊红染色光镜下观察排斥反应级别;流式细胞仪检测外周血CD4~+T淋巴细胞和CD8~+T淋巴细胞。结果FTY720组心脏移植物平均存活时间长于对照组,排斥反应级别低于对照组,CD4~+T淋巴细胞和CD8~+T淋巴细胞阳性率低于对照组,差别均有统计学意义(P<0.05)。结论FTY720能明显减轻大鼠心脏移植AR。     

大鼠心脏移植急性排斥反应期基因表达变化的研究

目的　研究同种异基因大鼠心脏移植急性排斥反应期相关基因表达的改变。方法　采用近交系Lewis和SD大鼠 ,分别建立Lewis(供体 )→SD(受体 )大鼠心脏移植模型为实验组 (n =2 4 ) ;Lewis→Lewis大鼠心脏移植模型为同期对照组 (n =2 4 )。术后 1、3、5d各时点分别处死 ,取移植心脏进行普通病理检查 ;应用基因芯片技术对术后5d移植心脏进行mRNA检测。结果　实验组移植心脏术后 3d开始发生急性排斥反应 ,术后 5d全部发生严重的急性排斥反应 ;而对照组未发生急性排斥反应。共发现差异表达基因总数为 2 1 0条 (下调 96条 ,上调 1 1 4条 ) ;其中已知基因有 33条 (下调 1 3条 ,上调 2 0条 ) ;未知基因 1 77条 (下调 83条 ,上调 94条 )。结论　心脏移植急性排斥反应涉及多基因表达改变 ,分析差异表达的基因 ,有助于进一步了解心脏移植急性排斥反应的发生机制。     

抗ICOS单抗与小剂量环孢素A联用对大鼠心脏移植慢性排斥反应的影响

目的：探讨抗可诱导共刺激分子（inducible costimilator,ICOS）单克隆抗体与小剂量环孢素A（cyclosporine,CsA）联用对同种异基因大鼠心脏移植后移植物生存质量和慢性排斥反应的影响。方法：建立大鼠腹腔异位心脏移植模型,术后随机分为同基因移植对照组和同种异基因移植试验组,其中试验组根据术后处理不同又分为安慰剂组、常规剂量CsA组、抗-ICOS-单抗组、小剂量CsA组和抗-ICOS-单抗联合小剂量CsA组,观察各组大鼠移植心脏的存活时间及移植心组织病理学变化,对移植心长期存活（〉100d）的受体,应用流式细胞仪检测其外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞。结果：单独使用不同剂量CsA者移植心脏的存活时间较安慰剂组明显延长（P〈0.05）;抗-ICOS-单抗联用小剂量CsA组移植心脏的存活时间较单用小剂量CsA组明显延长（P〈0.05）;与安慰剂组相比,单用抗-ICOS-单抗组移植心脏存活时间差异无统计学意义（P〉0.05）。移植心长期存活受体中,与常规剂量CsA组比较,联合治疗组移植心慢性排斥损伤明显减轻,而外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞比例有显著升高（P〈0.05）。结论：抗ICOS单抗加小剂量CsA联合免疫治疗,可有效延长大鼠移植心存活时间和减轻慢性排斥反应,CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的高水平表达与诱导移植耐受、抑制慢性排斥反应有重要关联。     

血清血管内皮细胞生长因子和大鼠心脏移植急性排斥反应的关系

目的观察血管内皮细胞生长因子在大鼠心脏移植急性排斥期中的血清表达及与排斥反应的关系。方法实验分为对照组和CSA组(n=14)。采用颈部心脏移植术式建立模型,手术后分别经胃管给予生理盐水及CSA干预。常规监测排斥反应发生情况。每组7只用于观察移植物存活时间,7只用于动态抽取血液标本,样本采用双抗体夹心法检测血清VEGF表达水平。结果CSA组移植心存活时间(21.1±2.9)d长于对照组(12.4±2.3)d(P<0.01)。对照组血清VEGF表达强度强于CSA组(P<0.05)。结论VEGF的表达和移植心的炎性浸润以及急性排斥有密切关系。     

来氟米特联合环孢素A对大鼠心脏移植慢性排斥反应的抑制作用研究

目的探讨来氟米特对大鼠心脏移植慢性排斥反应抑制作用的机制,并评价来氟米特联合环孢素A对慢性排斥反应的作用效果。方法行大鼠腹部异位心脏移植后给予环孢素A2．5mg／（kg&#183;d）灌胃,连续7天,以抑制急性排斥反应。第12天选跳动良好者随机入4组：对照组无治疗,来氟米特5mg／（k&#183;d）组,环孢素A5mg／（kg&#183;d）组;来氟米特5mg／（kg&#183;d）和环孢素A联合组。每组分别在42天、72天作组织病理学检查,RT-PCR检测血管内皮生长因子表达。结果与对照组相比,来氟米特组、环孢素A组及联合组对移植物炎性反应有明显抑制。联合组减少了VEGF表达,延缓了移植物新生血管病变进展。结论来氟米特与环孢素A联合用药组效果更佳,且能明显地抑制大鼠心脏移植血管病变的发展。     

HO-1在大鼠异位心脏移植急性排斥期的表达研究

目的:观察血红素加氧酶1(HO-1)mRNA在大鼠异位心脏移植急性排斥期中的表达及意义。方法:建立大鼠腹部心脏异位移植模型,分对照组及环孢菌素(CSA)组,每组32只。分别灌胃给予生理盐水及CsA干预,每组8只用于观察移植心存活时间,术后1,3,5,7d各6只动态切取标本,常规组织切片监测排斥反应,TUNEL法检测心肌细胞凋亡,RT-PCR检测移植心肌组织HO-1 mRNA的表达。结果:CSA组移植心存活时间(15.4±5.1)d长于对照组(7.6±1.5)d,P<0.01;CSA组各采样时段的心肌凋亡指数明显低于对照组,而HO-1表达强度均强于对照组。结论:移植心脏中HO-1表达水平的高低与心脏移植免疫排斥反应的轻重存在一定的相关性,CSA干预增强HO-1表达,减轻免疫排斥反应及降低凋亡指数。提示HO-1在心脏移植术后应激及急性免疫排斥反应抑制中起着重要的作用。     

常山酮对大鼠心脏移植急性排斥反应的抑制作用

目的:研究常山酮(HF)对大鼠异基因心脏移植急性排斥反应的影响及相关机制。方法:SPF级近交系Wistar雌性大鼠30只,SD雌性大鼠60只,随机分为3组行颈部心脏移植手术:同系对照组15对(供、受体均为SD大鼠,术前第1天及术后均用生理盐水灌胃),排斥组15对(供体为Wistar大鼠,受体为SD大鼠,术前第1天及术后均用生理盐水灌胃)及HF治疗组15对(供、受体同排斥组,术前第1天及术后均用HF溶液灌胃)。移植后第3,5,7天每组各处死5只受体大鼠,留取移植心行组织病理学及分子生物学检测。结果:与排斥组相比,HF治疗组移植心存活时间延长,免疫排斥反应减轻,血清中白细胞介素-17(IL-17)呈低水平,供心心肌组织中相关细胞因子白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)呈低表达,具有统计学差异。结论:常山酮可以有效抑制大鼠心脏移植模型体内由于急性排斥反应引起的多种促炎性细胞因子的异常升高,具有抗急性移植排斥反应的潜能,其机制可能与抑制了Th17分泌IL-17减少相关。     

豚鼠-大鼠异种心脏移植急性血管排斥反应期组织因子mRNA的表达

目的 通过检测组织因子mRNA在异种心脏移植急性血管排斥反应期的动态表达与排异反应强度之间的关系，初步了解组织因子在该反应期的意义。方法 建立豚鼠-大鼠异种异位心脏移植动物模型，使用CVF抑制超急性排异反应，FK506抑制细胞免疫排斥反应，分别在移植术后4、8、12、16、24h切取移植心脏，通过病理切片观察排异反应和凝血强度，同时通过RT—PCR方法检测组织因子mRNA表达强度，未移植豚鼠心脏作对照。结果 在移植后，移植心脏的排异反应和凝血逐渐加重，豚鼠组织因子mRNA表达强度逐渐减弱，大鼠组织因子mRNA表达强度逐渐增强。结论 组织因子在异种心脏移植急性血管排斥反应期中起重要作用，其中供体的组织因子可能与凝血的激发有关，受体的组织因子可能与凝血的发展有关。     

应用彩色多谱勒超声心动图监测心脏移植术后排斥反应

目的 评价超声心动图在监测心脏移植术后急性排斥反应中的作用。方法 采用Accuson型彩色多谱勒超声心动图诊断仪,应用M型超声观察室壁厚度及活动度、有无心包积液;应用B型超声观察各房室腔大小;用脉冲多谱勒频谱测E峰峰值流速、A峰峰值流速及E/A值,连续观察120 d后行心内膜心肌活检（EMB）。结果 超声心动图连续监测4个半月未发现排斥反应征象,心脏结构、功能正常。结论 动态应用超声心动图监测心脏移植后早期急性排斥反应的发生具有安全、迅速、无创、无并发症的优点,同EMB相比有明显优越性。     

红细胞变形性与心脏移植急性排斥反应的关系

目的研究红细胞变形性的改变与心脏移植急性排斥反应的关系。方法随机选取6只SD大鼠作为正常对照组,采集正常红细胞变形指数。手术创伤组(A组,SD大鼠24只);同系移植组(B组,供受体均为SD大鼠,共48只);同种移植组(C组,供体为Wistar大鼠,受体为SD大鼠,各24只)。B组、C组应用ONO大鼠腹腔异位心脏移植模型。观察术后1、3、5和7d的移植心病理改变,同时采用激光衍射法测定红细胞变形指数。结果A组与B组之间差异无显著性(P>0.05),两组各观察点红细胞变形指数与正常组比较差异均无显著性(P>0.05)。C组红细胞变形指数术后第1天起持续下降,并在第5天达到变化的高峰,与正常组相比差异有显著性(P<0.05);与A组、B组比较差异均有显著性(P<0.001)。红细胞变形指数与心脏病理的相关分析显示两者具有显著的相关性(P<0.001,r=0.78)。结论红细胞变形性的下降与移植心脏急性排斥反应显著相关,可能是参与及促进急性排斥反应发生发展的重要因素之一。     

氨基胍对大鼠心脏移植急性排斥期细胞凋亡与诱导型一氧化氮合酶的影响祆

目的:探讨诱导型一氧化氮合酶(iNOS)抑制剂氨基胍(AG)对大鼠心脏移植后急性排斥反应期细胞凋亡的影响。方法:分3组建立大鼠腹腔异位心脏移植模型:同系移植组、同种移植组、同种移植后AG治疗(应用AG(600mg/(kg·d))皮下注射)组。各组分别在术后第3d,5d,7d采集移植心肌的心室组织,观察移植心脏排斥反应情况,细胞凋亡情况及心肌组织中iNOS活性的变化。结果:①同种移植组和同种移植后AG治疗组排斥反应差异有统计学意义(χ2分别为11.98,12.70,P<0.05);②心脏移植后各级排斥反应中均可见细胞凋亡的存在,且随着心脏移植排斥反应的加重,心肌细胞凋亡的量也在增加;③同种移植后AG治疗组与同种移植组相比各时间段iNOS活性均明显升高,而与同系移植组相比,差异无统计学意义。结论:AG可以通过抑制心脏移植术后急性排斥期的iNOS活性,从而抑制细胞凋亡,保护移植心脏的功能。     

心脏移植术后急性排异反应的监测

目的 总结原位心脏移植术后急性排异反应的监测。方法 2000－01／2002－04施行11例原位心脏移植手术，结合临床表现、心电图、超声心动图、化验检查及心内膜活栓等检查，对心脏移植术后急性排异反应的监测进行分析。结果 采用临床症状＋心电图＋超声心电图＋心肌血清学检测综合判断有6次急性排异反应，行心内膜活检证实Ⅰb级2次，Ⅲa级3次；术后常规行心内膜活检21次，仅发现急性排异反应Ⅰa或Ⅰb级5次。结论 急性排异反应是关系到心脏移植术后患者康复及愈后的重要因素，因此要及时、有效地进行监测；心内膜心肌活检是诊断急性排异反应敏感可靠的方法，但为有创性检查，有一定的并发症风险，其他多项无创性检查可作辅助指标，因此急性排异反应监测应把无创性检查与心内膜心肌活检有机地结合起来。     

结缔组织生长因子在大鼠移植心脏急性排斥反应期的表达

目的:检测结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)在大鼠移植心脏急性排斥期(acute rejection,AR)的表达,并探讨其与移植心脏心肌纤维化的关系.方法:取Wister大鼠16只作为供体,取SD大鼠16只作为受体,进行腹部异位心脏移植,采用10 mg/(kg·d) 环孢霉素A,40 mg/(kg·d)骁悉和3 mg/(kg·d)甲泼尼龙三联免疫抑制疗法,2周后取其中10例移植心脏标本作为实验组,10例健康Wister大鼠心脏标本作为对照组(normal heart,NH).采用HE及van Gieson染色观察心肌病理形态、心脏血管狭窄程度;并进行纤维化的半定量评分.采用免疫组化半定量方法检测CTGF在心脏组织中的表达,并分析其与心肌纤维化的相关性.结果:移植心脏血管壁及心肌间质组织内有大量粒细胞浸润,呈典型的急性排斥反应期改变;移植心脏血管内膜及大量纤维组织增生,与正常对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);CTGF在移植心脏组织中有明显表达,且主要表达于血管壁及心肌损伤部位,而正常心脏无表达,CTGF灰度值为 (AR vs NH: 103.52±6.42 vs. 182.61±8.72,P<0.05).CTGF灰度值与移植心脏纤维化显著负相关(r=-0.734,P<0.01).结论:CTGF在急性移植心脏组织中有明显表达且可能与移植心脏心肌纤维化相关.     

柳氮磺胺嘧啶对大鼠移植心脏心肌白细胞介素-1β和细胞间黏附分子-1表达的影响

目的: 探讨柳氮磺胺嘧啶 (SSA)对移植心脏的保护作用。方法:建立大鼠异位心脏移植模型,分为 3组:Wistar到Wistar大鼠为对照组, SD到Wistar大鼠为同种移植组, 同种移植SSA治疗组。于移植术后第 3d、5d、7d检测移植心肌组织IL- 1β、ICAM -1,并观察排斥反应发生情况。结果:对照组心肌组织术后第 3d, 5d, 7dIL 1β分别为(124. 89±3. 29)ng/g, (126. 96±2. 73)ng/g, (124. 25±2. 87 )ng/g;ICAM 1分别为 ( 144. 40±22. 11 ),(145. 51±1. 73), (147. 61±2. 05);表达均微弱。同种移植组各时间点IL 1β分别为(154. 48±2. 42)ng/g, (336. 42±3. 24), (336. 72±2. 75)ng/g;ICAM 1分别为(177. 38±2. 16), (196. 16±2. 39), (196. 43±2. 22),与对照组相比均增高(P<0. 05 );SSA治疗组IL 1β分别为 (135. 13±2. 28)ng/g, (145. 50±2. 08 )ng/g, ( 153. 28±1. 73 )ng/g;ICAM 1分别为(153. 95±1. 66), (154. 97±1. 98), (145. 04±2. 36);表达均较同种移植组降低 (P<0. 01 )。对照组心肌组织结构基本正常,同种移植组表现出不同程度的淋巴细胞浸润、心肌间质水肿和组织坏死; SSA治疗组心肌损伤程度降低。结论:大鼠心脏移植急性排斥反应中IL- 1β、ICAM -1的升高,对移植心脏起到保护作用。     

ClC-3在大鼠异位心脏移植急性排斥期表达的研究

目的:观察氯离子通道ClC-3在大鼠异位心脏移植急性排斥期的表达及其意义。方法:建立大鼠腹部心脏异位移植模型,分对照组及环孢菌素(CsA)组,每组32只。分别灌胃给予生理盐水及CsA干预,每组8只用于观察移植心存活时间,术后1,3,5,7d各6只动态切取标本,常规组织切片监测排斥反应,TUNEL法检测心肌细胞凋亡,免疫组织化法检测Bcl-2和Bax表达的计算机图像定量分析,RT-PCR检测移植心肌组织Clc-3mRNA的表达。结果:CsA组移植心存活时间(15.4±5.1)d,长于对照组(7.6±1.5)d(P<0.01);对照组心肌细胞凋亡指数及Bax的表达强度明显高于CsA组,而Clc-3mRNA的表达显著低于CsA组。结论:移植心脏中Clc-3mRNA表达水平的高低与心脏免疫排斥反应的轻重、心肌细胞凋亡指数及Bax表达的高低密切相关,提示ClC-3在移植心脏免疫排斥反应心肌细胞凋亡中可能起着重要的调解作用。