IL-1β和TNF-α对软骨细胞基质降解的影响及相关机制研究

目的 研究白介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对关节软骨细胞外基质降解的作用及相关分子机制.方法 体外培养大鼠原代关节软骨细胞,单独或联合使用IL-1β和(或)TNF-α刺激软骨细胞,分别设为IL-1β刺激组、TNF-α刺激组、IL-1β和TNF-α联合刺激组;另设无任何刺激的对照组.在细胞培养24、48、72 h时点,采用倒置显微镜观察软骨细胞外基质的变化;采用Real-Time PCR法检测基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、蛋白聚糖降解酶-1(Adamts- 4)和蛋白聚糖降解酶-2(Adamts-5) mRNA的表达.结果 细胞在培养48、72 h时点,显微镜观察显示对照组与TNF-α刺激组的软骨细胞外基质降解情况无明显差异;IL-1β刺激组、IL-1β和TNF-α联合刺激组细胞外基质失染、降解,细胞形态缩小,细胞间隙增宽.与对照组比较,细胞培养24 h时点,IL-1β刺激组MMP-13、Adamts- 4和Adamts-5 mRNA的表达显著上调(P<0.01);而在培养48、72 h时点有所下调.IL-1β和TNF-α联合刺激组与IL-1β刺激组比较,在培养各时点,MMP-13、Adamts- 4和Adamts-5 mRNA表达差异均无统计学意义(P>0.05).结论 IL-1β诱导软骨细胞产生大量的MMP-13、Adamts- 4和Adamts-5而直接降解软骨细胞外基质;TNF-α可能不直接引起软骨细胞外基质的降解.     

益气养血方抗兔膝骨关节炎模型软骨退变的作用及机制研究

目的探讨益气养血方对兔膝骨关节炎(KOA)模型软骨细胞凋亡及血清白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、Ⅱ型胶原蛋白(COL-Ⅱ)、人基质金属蛋白酶-13(MMP13)表达的影响,揭示其抗骨关节炎软骨退变的作用及机制。方法 40只日本大耳白兔随机分为4组,即假手术组、KOA模型组、阳性药(双醋瑞因)组、益气养血方组各10只。石蜡切片HE染色观察软骨退变情况,TUNEL法检测软骨细胞凋亡,免疫组化检测COL-Ⅱ、MMP13的表达。结果益气养血方对KOA模型兔膝关节软骨退变具有一定抑制作用,能下调血清促炎细胞因子TNF-α产生水平(P0.05),抑制软骨细胞凋亡;能下调软骨组织MMP-13蛋白的表达(P0.01),上调软骨组织COL-Ⅱ胶原的表达(P0.05),抑制软骨基质降解。结论益气养血方通过下调TNF-α、MMP-13蛋白表达,同时上调COL-Ⅱ胶原表达,抑制软骨细胞凋亡及细胞外基质降解,可能是益气养血方治疗骨关节炎的作用机制之一。     

穿山龙水溶性总皂苷对RSC-364细胞分泌MMP-2和MMP-9的影响

目的：观察穿山龙水溶性总皂苷对大鼠滑膜成纤维细胞系RSC-364细胞分泌基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和MMP-9的影响。方法：应用肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白介素17（IL-17）刺激RSC-364细胞建立类风湿性关节炎细胞模型,并以不同剂量穿山龙水溶性总皂苷进行干预,ELISA法检测细胞培养液上清MMP-2和MMP-9的水平。结果：穿山龙水溶性总皂苷各剂量组（10、20、30mg/L）在不同时间点（24、48、72h）均可明显降低TNF-α和IL-17刺激的RSC-364细胞分泌MMP-2、MMP-9水平的升高,并呈剂量依赖性（P＜0.05）。结论：穿山龙水溶性总皂苷可能通过抑制RSC-364细胞分泌MMP-2和MMP-9发挥抗类风湿性关节炎的作用。     

透骨消痛胶囊含药血清对退变关节软骨细胞表达TNF-α、IL-1β的影响

目的观察透骨消痛胶囊含药血清对体外培养的大鼠退变软骨细胞表达肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）的影响,探讨透骨消痛胶囊防治骨性关节炎的作用机制。方法 4周龄SD大鼠膝关节软骨建立体外培养的软骨细胞,采用Ⅱ型胶原原位杂交法对第3代软骨细胞进行鉴定。用10 ng.mL-1IL-1β干预第3代软骨细胞复制退变软骨细胞模型。模型复制成功后,随机分为模型组和透骨消痛胶囊含药血清组,分别在培养24、48、72 h后用TaqMan real-time PCR法检测各组mRNA表达。结果透骨消痛胶囊含药血清组TNF-αmRNA、IL-1βmRNA相对表达量随着干预时间的延长逐渐下降,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论透骨消痛胶囊治疗骨性关节炎的部分作用机制是有效抑制退变软骨细胞TNF-α、IL-1β的表达。     

低频脉冲磁场对兔膝关节软骨细胞白介素-1β、肿瘤坏死因子-α表达与分泌的影响

目的：测定在低频脉冲磁场（Low frequency pulsed electromagnetic field,LFPEMF）刺激的情况下,兔膝关节软骨细胞白介素-1β（Interleukin-1β,IL-1β）与肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factor-α,TNF-α）表达与分泌的变化。方法：分离培养由兔骨髓干细胞（Marrow stem cells,MSCs）诱导分化形成的软骨细胞,分别使用不同强度的LFPEMF进行电磁辐射刺激,用免疫印迹法测细胞中IL-1β与TNF-α的表达状况,并用ELISA检测细胞培养液中IL-1β与TNF-α的水平。结果：施加LFPEMF的兔膝关节软骨细胞中IL-1β与TNF-α的表达无明显差异,但其培养液中IL-1β与TNF-α的水平有明显降低,并且随着施加脉冲磁场刺激强度的增加,IL-1β与TNF-α的降低程度增强。结论：LFPEMF可以抑制体外兔膝关节软骨细胞IL-1β与TNF-α的分泌。     

AGEs对兔软骨细胞TNF-α和MMP-13表达的影响及其机制研究

目的:探讨晚期糖基化终末产物(AGEs)对兔软骨细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和基质金属蛋白酶-13(MMP-13)的影响及可能机制。方法:不同浓度的AGEs与兔软骨细胞共孵育48h后采用RT-PCR方法检测TNF-α和MMP-13的mRNA表达量,试剂盒方法检测过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)水平,荧光探针法检测细胞内活性氧(ROS)水平。AGEs与兔软骨细胞共孵育的同时,分别加入AGEs受体的抗体(Anti-RAGE)及核因子-κB(NF-κB)的特异性阻断剂PDTC处理,同法检测TNF-α和MMP-13的mRNA表达量。结果:与AGEs共孵育48h后兔软骨细胞TNF-α及MMP-13表达明显增多,CAT、SOD活性降低,MDA、ROS含量增多,均呈浓度依赖性;分别加入Anti-RAGE及PDTC处理后软骨细胞TNF-α及MMP-13表达明显低于AGEs单独处理组(P<0.01),与正常对照组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:AGEs能诱导软骨细胞TNF-α和MMP-13表达增多,其机制与激活RAGE,诱导ROS生成增多,激活NF-κB信号通路有关。     

白细胞介素-1β、肿瘤坏死因子α及基质金属蛋白酶13在骨性关节炎中的表达及相关性

目的 探讨白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及基质金属蛋白酶-13(MMP-13)在骨性关节炎中的表达及相关性.方法 采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)法及酶联免疫吸附(ELSIA)法检测72例骨性关节炎患者及32例正常对照者关节液中IL-1β、TNF-α及MMP-13的表达,对骨性关节炎患者病情严重程度进行美国纽约特种外科医院(HSS)评分,采用Pearson 相关分析法分析骨性关节炎患者IL-1β、TNF-α与MMP-13的相关性以及它们与HSS评分之间的相关性.结果 骨性关节炎患者关节液中IL-1β、TNF-α、MMP-13基因及蛋白表达水平均高于正常对照者(P<0.01),骨性关节炎患者关节液中IL-1β、TNF-α、MMP-13蛋白水平均与骨性关节炎严重程度呈正相关,IL-1β和TNF-α均与MMP-13蛋白水平呈正相关.结论 IL-1β、TNF-α及MMP-13与骨性关节炎发生、发展有密切关系,并且与病情严重程度相关,关节液中MMP-13的高表达可能是通过IL-1β及TNF-α等炎性细胞因子激活、上调.测定骨性关节炎患者关节液中IL-1β、TNF-α及MMP-13 水平对骨性关节炎的诊断、病情判断和治疗具有重要意义.     

淫羊藿苷对白介素-1β诱导软骨细胞退变的保护作用

目的观察不同浓度淫羊藿苷（icariin, ICA）对IL-1β诱导软骨细胞退变的保护作用。方法原代分离培养新生24h大鼠四肢长骨干骺端透明软骨的软骨细胞,取P1代细胞,以4×103/孔接种96孔培养板,加入终浓度分别为1×10-7、1×10-6和1×10-5mol/L的ICA,MTT法分别测定12、24、36、48、60、72h后软骨细胞增殖情况。以1.2×105/孔接种6孔培养板,分别设置空白对照组（N组）、炎症刺激组（M组,加入10ng/mL IL-1β诱导软骨细胞退变）和淫羊藿苷低、高剂量组（ICA-L组和ICA-H组,炎症刺激组基础上加入ICA,终浓度分别为1×10-7、1×10-6mol/L）,连续干预72h。ELISA法测定培养上清液中Ⅱ型胶原（collagen-Ⅱ, Col-Ⅱ）和糖胺多糖（glycosaminoglycan, GAG）含量,RT-PCR法检测细胞Col-Ⅱ、基质金属蛋白酶13（matrix metaloproteinase13, MMP13）、蛋白聚糖（aggrecan, Acan）和Sox9 mRNA表达情况。结果1×10-5mol/L ICA早期（24h）表现为抑制软骨细胞增殖（P<0.01）,72h后促进软骨细胞增殖（P<0.01）;1×10-7mol/L和1×10-6mol/L ICA干预36~72h后促进软骨细胞增殖（P<0.05）,但其中1×10-7mol/L在60h与空白对照组相比差异无统计学意义（P>0.05）。ICA干预72h后,与M组比较,ICA-L和ICA-H组,GAG浓度均显著升高（P<0.05）,而Col-Ⅱ含量于ICA-L组降低、ICA-H组升高,但差异均无统计学意义（P>0.05）。ICA-L组Acan/Sox9 mRNA表达升高（P<0.01）,ICA-H组Col-ⅡmRNA水平升高而MMP13 mRNA表达降低（P<0.01）。结论淫羊藿苷能影响软骨细胞基质微环境,促进软骨细胞表型基因表达,抑制MMP13 mRNA表达,进而拮抗IL-1β诱导的软骨细胞退变。     

Effect of low frequency pulsed electromagnetic field on the expression and secretion of IL-1β and TNF-α in rabbit's knee chondrocytes

目的:测定在低频脉冲磁场(Low frequency pulsed electromagnetic field,LFPEMF)刺激的情况下,兔膝关节软骨细胞白介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)与肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达与分泌的变化.方法:分离培养由兔骨髓干细胞(Marrow stem cells,MSCs)诱导分化形成的软骨细胞,分别使用不同强度的LFPEMF进行电磁辐射刺激,用免疫印迹法测细胞中IL-1β与TNF-α的表达状况,并用EIISA检测细胞培养液中IL-13与TNF-α的水平.结果:施加LFPEMF的兔膝关节软骨细胞中IL-Iβ与TNF-α的表达无明显差异,但其培养液中IL-1β与TNF-α的水平有明显降低,并且随着施加脉冲磁场刺激强度的增加,IL-1β与TNF-α的降低程度增强.结论:LFPEMF可以抑制体外兔膝关节软骨细胞IL-13与TNF-α的分泌.     

益气活血通络方对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞炎性因子表达的影响

目的 研究益气活血通络方含药血清对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)炎性因子白细胞介素-1β（interleukin-1 beta, IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor alpha, TNF-α）、单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemoattractant protein-1, MCP-1）及金属基质蛋白酶-1（metal matrix proteinase-1, MMP-1）表达的影响,探讨益气活血通络方对脐静脉内皮细胞的保护作用。方法 选择SD大鼠30只,中药灌胃,制备含药血清。体外培养HUVECs,MTT法检测不同时间点、不同浓度葡萄糖对细胞存活率的影响;将HUVECs随机分为5组,即空白对照组,模型组,益气活血通络方低、中、高浓度组,高糖刺激后,分别加入不同浓度益气活血通络方含药血清干预,收集上清及细胞,ELISA法检测IL-6的表达,Western Blot法测定IL-1β、TNF-α、MCP-1及MMP-1蛋白的表达。结果 细胞培养48 h 后,33.3 mmol/L高糖组（模型组）细胞活力显著降低（P＜0.05）;高糖刺激可引起IL-6、IL-1β、TNF-α、MCP-1及MMP-1蛋白的高表达(P＜0.05）,益气活血通络方含药血清显著抑制IL-6、IL-1β、TNF-α、MCP-1及MMP-1蛋白的高表达（P＜0.05)。结论 益气活血通络方可抑制炎性因子的高表达,对高糖损伤的HUVECs有一定的保护作用。     

肿瘤坏死因子-α对软骨细胞蛋白聚糖代谢的影响及小白菊内酯的保护作用

目的 探讨小白菊内酯(PAR)对关节软骨细胞蛋白聚糖合成的调节作用.方法 软骨细胞取自骨关节炎(OA)患者进行膝关节置换术的股骨髁,随机分为4组:对照组、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)组、PAR组和TNF-α+PAR组.用3种方法测定蛋白聚糖的代谢:(1)测定蛋白聚糖的代谢产物糖胺多糖(GAG)含量.(2)用针对蛋白聚糖单克隆抗体(Mab-383和5D4),采用ELISA法检测培养液中蛋白聚糖的代谢片段含量.(3)半定量RT-PCR检测软骨细胞蛋白聚糖、ADAMTS-4、ADAMTS-5、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)和丝裂原活化蛋白激酶.1(MAPK-1)的mRNA 表达.结果 (1)TNF-α+PAR组培养液中GAG的百分含量明显低于TNF-α组(t=5.92,P=0.02),其降低程度与PAR呈剂量依赖性.(2)TNF-α组培养液中5D4片段的含量明显高于TNF-α+PAR组(t=7.93,P=0.016),而各组间培养液中383片段的含量无差别.(3)TNF-α组的蛋白聚糖mRNA表达明显低于其他3组(F=133.7,P=0.000);而其ADAMTS-5及MAPK-1的mRNA表达明显高于其他3组(F=209.7,117.1;P=0.000).结论 (1)TNF-α可促进人OA关节软骨细胞蛋白聚糖的降解而PAR可抑制其降解作用.(2)PAR可下调TNF-α导致的ADAMTS-5及MAPK-1的mRNA表达.     

柿叶黄酮对同型半胱氨酸诱导小胶质细胞细胞因子表达的影响

目的：观察柿叶黄酮对同型半胱氨酸诱导的小胶质细胞表达白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的影响,并与银杏叶提取物EGb761进行比较。方法将体外培养的小鼠小胶质细胞（BV-2细胞）分成空白对照组、同型半胱氨酸组（Hcy）、Hcy＋EGb761组（100mg/L）和Hcy＋低、中、高（12.5、25、50μg/mL）剂量柿叶黄酮组,培养72h。应用RT-qPCR方法评价各组IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA表达,酶联免疫吸附法（ELISA）测定培养上清液中上述细胞因子的蛋白浓度。结果与空白对照组比较,同型半胱氨酸组细胞内IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA表达和细胞培养上清液中蛋白浓度明显增加（P〈0.05）;与同型半胱氨酸组比较,Hcy＋EGb761组和Hcy＋低、中、高剂量柿叶黄酮组各细胞因子mRNA表达及培养上清液中蛋白浓度均降低（P〈0.05）,尤其是高剂量柿叶黄酮组结果与Hcy＋EGb761组作用相似。结论柿叶黄酮能抑制同型半胱氨酸诱导小胶质细胞表达IL-1β、IL-6和TNF-α,在一定浓度条件下其作用不亚于银杏叶提取物。     

急性冠脉综合征患者基质金属蛋白酶-9水平及与炎症因子相关性研究

目的研究急性冠脉综合征患者基质金属蛋白酶-9（MMP-9）水平及其与炎症因子的相关性。方法临床收集病例及血液标本120例,试验分为4组,每组30例,分别为：急性心肌梗死组（ AMI组）,不稳定型心绞痛组（ UA组）,稳定型心绞痛组（ SA组）,对照组。对照组为同期冠脉造影显示无明显局限性狭窄者。采用双抗夹心酶联免疫吸附（ ELISA ）法测定MMP-9、肿瘤坏死因子（ TNF）-α、白细胞介素（ IL）-6、IL-1β水平。结果正常对照组与AMI组、UAP组比较MMP-9、TNF-α、IL-6、IL-1β水平差异均有统计学意义（P＜0．05）。 SAP组与AMI组、UAP组比较MMP-9、TNF-α、IL-6、IL-1β水平差异均有统计学意义（P＜0．05）。 AMI组和UAP组MMP-9与TNF-α、IL-6显著相关（r＝0．37,0．42,P＜0．05;r＝0．45,0．51,P＜0．05）,与IL-1β呈弱相关性（r＝0．236,0．259,P＜0．05）;而SAP组和对照组MMP-9与IL-6、IL-1β无相关性（P＞0．05）。结论急性冠脉综合征患者血清MMP-9增高,并伴有TNF-α、IL-6、IL-1β水平的增高,且血清MMP-9增高的水平与TNF-α、IL-6、IL-1β水平相关;MMP-9及TNF-α、IL-6、IL-1β水平升高提示了粥样斑块的不稳定性,有可能作为急性冠脉综合征的预测指标之一。     

TNF-α、IL-1β诱导人角质形成细胞β防御素-2的表达

目的 观察TNF-α、IL-1β诱导人角质形成细胞(Hacat细胞)表达β防御素-2(hBD-2)的情况,阐明不同诱导因素在不同时间点诱导hBD-2的规律及差异性. 方法 将培养的Hacat细胞分为四组:对照组、TNF-α组、IL-1β组、TMF-αa IL-1β组.对照组不加任何药物干预,其余各组分别于6h,18 h,24 h加入药物后用RT-RCR方法检测h13E-2mRNA的表达.结果 TNF-α和IL-1β干预组Hacat细胞hBD-2 mRNA表达均高于对照组(P<0.05),各组干预18 h的表达量均明显高于干预6 h,24 h时的表达量.TNF-α与IL-1β联合干预Hacat细胞时有协同作用,18 h时hBD-2 mRNA表达量最高. 结论 TND-α、IL-1β二者联合时有协同作用,Hacat细胞产生hBD-2 mRNA的表达量随时间变化而变化.     

USP49抑制IL-1β诱导的软骨退行性改变

目的 了解USP49对IL-1β诱导的软骨细胞凋亡及细胞外基质降解的影响。方法 首先基于数据库了解USP49在骨关节炎患者中的表达水平。原代培养软骨细胞并鉴定,使用不同浓度的IL-1β预处理软骨细胞,检测USP49基因表达与蛋白水平后,选择合适的IL-1β浓度模拟骨关节炎。使用IL-1β处理构建的USP49过表达软骨细胞,检测软骨细胞凋亡,测定USP49、β-catenin及软骨降解相关蛋白MMP-1、MMP-13表达。结果 较正常人样本,USP49在骨性关节炎患者中表达显著降低。原代软骨细胞经不同浓度IL-1β预处理后,USP49表达明显抑制,且随浓度增加,抑制作用增强。USP49过表达可显著减弱IL-1β诱导的细胞凋亡,抑制β-catenin、MMP-1、MMP-13表达。结论 USP49可能通过Wnt/β-catenin通路抑制软骨细胞凋亡及细胞外基质降解,减轻IL-1β诱导的软骨退变。     

EGCG 对Ro52 介导的THP-1 细胞凋亡 及炎症因子的影响

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对SSA/Ro52（Ro52）介导的人单核- 巨噬 细胞株THP-1 凋亡及炎症因子分泌的影响。方法 构建稳定Ro52 过表达质粒（pCMV-Ro52）,pCMVRo52 转染THP-1 细胞48 h,检测Ro52 mRNA 和蛋白表达水平的变化,采用膜联蛋白- 荧光素异硫氰酸酯 和碘化丙锭双染检测THP-1 细胞凋亡率,酶联免疫吸附法检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-1β （IL-1β）、IL-13 水平。pCMV-Ro52 质粒转染48 h 后, 分别使用0、5、10、20 和50 mg/L EGCG 处理细 胞24 h,检测Ro52 表达的变化、THP-1 细胞的凋亡,以及TNF-α、IL-1β、IL-13 水平。结果 pCMVRo52 促进Ro52 表达（P <0.05）,上调THP-1 细胞凋亡率及TNF-α、IL-1β、IL-13 水平（P <0.05）; 在Ro52 过表达的THP-1 细胞中,与0 mg/L EGCG 组相比,10、20 和50 mg/L EGCG 组Ro52 蛋白表达水 平、凋亡率及TNF-α、IL-1β、IL-13 水平降低（P <0.05）。结论 Ro52 过表达可促进人单核- 巨噬细胞 THP-1 凋亡及炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-13 分泌;EGCG 可减弱Ro52 介导的THP-1 细胞凋亡,减 少炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-13 的分泌。     

外泌体通过HMGB1抑制骨关节炎软骨细胞凋亡和炎症

目的 探讨滑膜成纤维细胞(synovial fibroblast, SF)来源的外泌体中高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对骨关节炎(OA)软骨细胞增殖、凋亡以及炎症反应的影响。方法 对获得HMGB1沉默稳转滑膜的成纤维细胞(滑膜成纤维细胞组)和ExoQuick-TC试剂盒处理后细胞(Exo组)提取上清液，用Western blotting检测两组HMGB1、CD63及CD81蛋白的表达。将软骨细胞HC-A分为空白对照组、IL-1β组(100 pg/ml IL-1β预刺激)和IL-1β+Exo组(100 pg/ml IL-1β预刺激+50μg/ml滑膜成纤维细胞来源的外泌体),并使用实时定量PCR方法检测IL-6、TNF-α、MMP-1、MMP-13和COL2A1的mRNA水平。随后将IL-1β处理的软骨细胞分为IL-1β组、IL-1β+Exo组、IL-1β+Exo+NC-siRNA组和IL-1β+Exo+HMGB1-siRNA组。IL-1β+Exo+NC-siRNA组和IL-1β+Exo+HMGB1-siRNA组IL-1β处理的软骨细胞分别加入转染NC-siRNA或HMGB1-siRN...     

骨保护素保护关节软骨细胞作用机制研究

目的探讨骨保护素（OPG）对间歇性循环牵张力（ICMT）加力诱导下退变的关节软骨细胞保护作用的机制。方法获取大鼠膝关节软骨细胞,传代至P2代进行实验,对细胞用FX-5000TM细胞体外力学刺激装置进行力学刺激,建立关节软骨细胞体外退变模型。P2代软骨细胞随机分为对照组、ICMT3d组（在与对照组相同培养条件下对细胞进行8％压强的ICMT,0.5Hz,10h/d,加力3d）、OPG组（在细胞培养液中加入一定浓度的OPG培养细胞）、ICMT3d+OPG组（对用含有OPG的细胞培养液培养的细胞进行加力3d）。培养3d后收集各组细胞,应用倒置相差光学显微镜观察关节软骨细胞的表型变化,甲苯胺蓝染色法观察细胞表面形态,四噻唑蓝法检测不同浓度OPG和不同ICMT作用时间下关节软骨细胞存活率的变化。RT-PCR法检测各组关节软骨细胞中二型胶原、蛋白聚糖、SRY相关高迁移率族盒蛋白9（SOX-9）、基质金属蛋白酶13（MMP-13）mRNA表达水平,Westernblot法检测各组关节软骨细胞中NF-资B信号通路相关蛋白MMP-13、p65、磷酸化p65（p-p65）蛋白表达水平。结果与对照组比较,ICMT3d组细胞发生梭形改变,细胞外基质减少;ICMT3d+20ngOPG组细胞形态变化不明显,细胞外基质的丢失得到改善。ICMT1d组、ICMT2d组、ICMT3d组、5ngOPG组、10ngOPG组和20ngOPG组与对照组关节软骨细胞存活率比较,差异均无统计学意义（均P＞0.05）。与对照组比较,ICMT1d组、ICMT3d组细胞中二型胶原、蛋白聚糖、SOX-9mRNA表达水平均下降,ICMT3d组细胞中MMP-13mRNA表达水平升高,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。与ICMT3d组比较,ICMT3d+10ngOPG组细胞中二型胶原、SOX-9mRNA表达水平均升高,ICMT3d+20ngOPG组细胞中二型胶原、蛋白聚糖、SOX-9mRNA表达水平均升高,ICMT3d+10ngOPG组、ICMT3d+20ngOPG组细胞中MMP-13mRNA表达水平均下降,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。与ICMT3d组比较,ICMT3d+5ngOPG组、ICMT3d+10ngOPG组、ICMT3d+20ngOPG组MMP-13蛋白表达水平均下降（均P＜0.05）。与ICMT3d组比较,ICMT3d+10ngOPG组、ICMT3d+20ngOPG组中p-p65蛋白表达水平均下降（均P＜0.05）。结论OPG通过影响NF-资B信号通路可以抑制大鼠膝关节软骨细胞的退变,从而起到保护关节软骨的作用。     

IL-1β对兔关节软骨细胞MMP-1/-13mRNA表达和NO的影响

目的观察白介素-1β(IL-1β)对体外培养的兔关节软骨细胞基质金属蛋白酶-1/-13(MMP-1/-13)基因表达的调节作用和对一氧化氮(NO)的影响,以了解骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨损伤的机制。方法将体外培养的兔关节软骨细胞随机分为5组,每组有3个样本,第1组为空白对照组,第2,3,4,5组分别加入10ng/mL的IL-1β,作用时间分别为8,16,24,36h。采用实时荧光定量PCR(real-timePCR)的方法,观察兔关节软骨细胞MMP-1/-13基因的表达情况,以空白组为对照,比较不同时间段软骨细胞MMP-1/-13基因表达,并收取培养细胞上清液测定一氧化氮(NO)含量,比较各组变化。结果正常兔关节软骨细胞具有MMP-1/-13基因表达,但是表达量较低,而各实验组MMP-1/-13mRNA都明显增高。尤其是MMP-1mRNA增高明显,在36h内随着时间的延长逐渐增高,且各组间差异具有统计学意义(P<0.05);MMP-13mRNA增高后维持在高水平,但各组间无明显差异。NO的含量也随着时间的延长而逐渐增高。结论IL-β1随着时间延长,正向调节兔关节软骨细胞MMP-1/-13mRNA表达,并能促进NO的释放增加,从而使它们在OA软骨破坏的机制中发挥重要作用,但对MMP-1/-13具体调节机制不尽相同。