肠出血性大肠杆菌O157:H7感染的研究进展

ＷＨＯ不久前指出在过去的 2 0年里 ,世界上出现了大约 30种新的传染病 ,1982年美国首次报告的Ｏ15 7:Ｈ7大肠埃希氏菌 (ＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉＯ15 7:Ｈ7)引起的出血性肠炎即是其中之一。肠出血性大肠埃希氏菌 (Ｅｎｔｅｒｏｈｅｍｏｒｒ ｈａｇｉｃＥ .Ｃｏｌｉ,ＥＨＥＣ)是大肠埃希氏菌众多血清型中非常重要的一组 ,其中目前公认的能引起人血性腹泻的血清型有Ｏ15 7:Ｈ7、Ｏ2 6 :Ｈ11、Ｏ111:Ｈ8等 ,而Ｏ15 7:Ｈ7则是其主要的血清型[1] 。近年来 ,ＥＨＥＣ感染已成为世界性卫生问题。由Ｏ15 7:Ｈ7引起的食物中毒的暴发流行在发…     

肠出血性大肠杆菌O157：H7感染性腹泻

肠出血性大肠杆菌 (ｅｎｔｅｒｏｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃＥ .Ｃｏｌｉ,ＥＨＥＣ)因其引起出血性肠炎 (ｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃｃｏｌｉｔｉｓ,ＨＣ)而得名 ,Ｏ1 5 7∶Ｈ7是最主要的血清型之一 ,其它血清型还包括Ｏ2 6∶Ｈ1 1、Ｏ1 1 1∶Ｈ8等十余种。Ｏ1 5 7∶Ｈ7是目前与ＨＣ及溶血性尿毒综合征 (ｈｅｍｏｌｙｔｉｃｕｒｅｍｉｃｓｙｎｄｒｏｍｅ,ＨＵＳ)有关的主要病原菌。该菌主要通过食物传播[1] 。 1 982年首次在美国爆发ＨＣ中分离出病原菌以来 ,在发达国家已发生多次流行 ,主要分布在北欧、日本、加拿大、美国等地 ,年发生人数为 8/1…     

EMA-PCR技术检测肠出血性大肠杆菌O157∶H7

目的 将叠氮溴化乙锭 （ethidium monoazide bromide,EMA）与PCR技术相结合,建立一种有效、快速检测活肠出血性大肠杆菌O157∶H7的方法。方法 以rfbE为PCR检测靶基因,O157∶H7培养物经EMA处理后制备模板进行PCR检测,并对EMA使用浓度、作用时间等进行优化。结果 不抑制O157∶H7活菌PCR扩增的最大EMA浓度为10 μg/mL;抑制2×107 CFU/mL死菌PCR反应的最小EMA浓度为0.5 μg/mL;该法对O157∶H7检测的灵敏度为2×104 CFU/mL,结果显示能检出混合体系中含有的1%的活菌。结论 EMA-PCR技术能有效检测活的O157∶H7,在突发公共卫生事件的快速检测中具有良好的应用前景。     

肠出血性大肠杆菌O157：H7对抗生素敏感性的研究

目的 了解和掌握O157：H7大肠杆菌对抗生素的敏感性,以便选择防治O157：H7大肠杆菌感染的药物,方法 按照NCCLS药敏试验法,选用MH平板,参照改良K－B法药敏试验判断标准进行结果判定。结果 对选择的29种药物,其中21种为敏感,4种为耐药。结论 肠出血性大肠杆菌O157：H7对大多数抗生素敏感。     

细菌性痢疾和O157:H7出血性大肠杆菌混合感染一例

患者女性 ,19岁 ,于 2 0 0 1年 4月 30日从学校返回家乡农村。 5月 2日开始腹泻 ,6日出现腹痛 ,当日返校后腹痛加重 ,每日腹泻 3～ 6次 ,同时伴有发热 ,恶心和呕吐。 5月 8日在学校医务室输液治疗后未见好转 ,体温升高到 39 5℃ ,腹痛加剧。 9日校医将患者转入当地县人民医院治疗 ,同时作为疑似Ｏ15 7:Ｈ7病例报告了当地县卫生防疫站 ,因为患者出现血便 ,当地卫生防疫站马上到病房采取了患者的粪便 ,送到河南省疾病控制中心实验室化验。经一系列微生物病原菌分离、鉴定和分子生物学试验确认 ,这是一例Ｏ15 7:Ｈ7出血性大肠杆菌和细菌性痢疾…     

出血性大肠杆菌O157：H7 vero细胞毒素抗体的保护性研究

目的:在体外研究vero细胞毒素抗体的保护作用。方法:用从出血性大肠杆菌O157:H7中纯化的一种新的vero细胞毒素来免疫家兔,获得多克隆抗体。用不同剂量抗体,在不同时间段与此vero细胞毒素进行vero细胞毒性试验。结果:高剂量的抗体预先处理过的vero细胞,可以受到抗体保护,毒素的细胞毒作用被抑制。预先用毒素作用vero细胞后,一小时内给予大剂量抗体可以部分抑制毒素的细胞毒作用。结论:本试验提示用抗毒素紧急预防和治疗Vero细胞毒素引起的疾病是可行的。     

重组酶介导的肠出血性大肠杆菌O157:H7等温扩增方法的建立

目的：建立新的快速检测常见食源性致病微生物肠出血性大肠杆菌(enterohemorrhagic E.coli,EHEC)O157：H7的方法。方法：根据EHECO157：H7保守区序列,结合重组酶介导的恒温扩增(recombinase-aided amplification,RAA)和荧光定量或胶体金侧向流免疫层析试纸条(lateral flow dipstick,LFD),建立两种EHEC O157：H7检测方法(RAA荧光法和RAA-LFD法)并进行优化,评估这两种方法的灵敏性及特异性。结果：两种检测方法均可在39 ℃恒温条件下16 min内完成检测,两种方法的检测限均可达1×104 拷贝数,具有较高的灵敏性。两种方法与其他常见的肠道致病菌(金黄色葡萄球菌、沙门氏杆菌、弯曲菌、 耶尔森菌、志贺杆菌)质粒模板无交叉反应,具有良好的特异性。结论：本研究建立的两种检测EHEC O157：H7的方法,检测时间短并具有较好的特异性、灵敏性和重复性,可用于EHEC O157：H7的快速检测。     

肠出血型大肠埃希菌免疫PCR检测方法的建立

目的建立检测肠出血型大肠埃希菌O157：H7的免疫PCR技术,确定该方法的灵敏度和特异性。方法链亲和素桥联生物素化的二抗和双链DNA指示分子,构建桥联系统,进而建立免疫PCR技术,通过PCR扩增指示分子检测O157：H7。结果免疫-PCR技术最少可检测到10 CFU/ml的纯培养菌,灵敏度较ELISA提高103倍,非O157：H7菌株检测结果均为阴性。结论免疫-PCR技术具有较高的灵敏度和特异性,操作简便、快速,可作为肠出血型大肠埃希菌O157：H7的检测方法。     

寡核苷酸阵列芯片快速鉴定大肠杆菌O157:H7初步研究

目的设计、制作一种微型化寡核苷酸阵列芯片，评价快速鉴定肠出血性大肠杆菌O157：H7的效果。方法多重PCR扩增大肠杆菌O157：H7七个特异性基因位点（rfbE、flicH7、intimin、Shiga-like toxins Ⅰ and Ⅱ、hemolysin A和uidA）．通过PCR反应掺入SpectrumOrang^TM-dUTP获取荧光标记的靶序列，与制备的芯片寡核苷酸探针杂交。结果寡核苷酸阵列芯片检测结果与试验预期相符，获取的杂交图分辨效果明显优于多重PCR琼脂糖凝胶电泳。结论基于玻片的寡核苷酸阵列芯片制作简便，鉴定病原菌检测细菌毒力因子快速、灵敏、特异，有良好的应用前景。     

大肠埃希菌O157:H7 Tir基因的生物信息学分析

目的扩增和测序肠出血型大肠埃希菌O157:H7 tir基因,利用生物信息学预测分析其结构和功能特征,以探讨Tir作为疫苗候选抗原的可能性。方法利用PCR技术扩增tir基因并测序,应用生物信息学网站在线分析工具和vector NT Isuite软件分析Tir蛋白结构和生物学功能,预测B细胞抗原表位。结果该基因全长1674bp,编码558个氨基酸,蛋白质总体亲水性高,有稳定的理化性质。含有3个结构和功能域,两段穿膜结构,多个磷酸化位点,预测20个B细胞线性表位。结论Tir毒力因子是很有前景的疫苗候选抗原,为肠出血型大肠埃希菌O157:H7的疫苗研究提供了理论依据。     

实时荧光PCR同时检测金黄色葡萄球菌和大肠杆菌O157：H7

目的建立改良分子信标一双重实时荧光PCR同时检测金黄色葡萄球菌和大肠杆菌0157：H7,应用于细菌性食物中毒的快速诊断。方法根据GeneBank公布的金黄色葡萄球菌nuc基因序列和大肠杆菌O157：H7rfbE基因序列,设计引物和改良分子信标探针,建立改良分子信标一双重实时PCR检测体系。结果双重荧光PCR反应体系检测151株金黄色葡萄球菌和27株大肠杆菌O157：H7,均出现特异的荧光信号,两种细菌检测互不干扰。对8762份大便、食品等标本进行检测,315份标本金黄色葡萄球菌实时荧光PCR阳性,其中286份金黄色葡萄球菌培养阳性;31份标本大肠杆菌O157：H7实时荧光PCR阳性,其中26份大肠杆菌O157：H7培养阳性。从样品处理到检测结果仅需要时间2h～1d。结论改良分子信标-多重实时荧光PCR检测体系快速、灵敏度高,特异性强,可用于金黄色葡萄球菌和大肠杆菌O157：H7食物中毒的快速诊断和肠道传染病的初筛,为食源性疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段。     

肠出血性大肠埃希菌O157:H7菌影生物学活性的初步研究

目的制备肠出血性大肠埃希菌O157∶H7细菌菌影,在细胞及动物水平对其生物学活性进行初步评价。方法将包含噬菌体phiX174裂解基因E的重组质粒pLSE转化肠出血性大肠埃希菌O157∶H7 EDL933及大肠埃希菌DH5α,42℃诱导制备菌影。利用间接免疫荧光实验观察菌影主要抗原结构,并利用电镜观察菌影对Hep-2细胞的黏附。将菌影免疫小鼠后,采用间接ELISA法检测小鼠特异性抗体,并通过小鼠攻毒实验考察菌影的保护效果。结果成功构建了重组质粒pLSE,制备出O157∶H7及DH5α菌影。O157∶H7菌影保留了病原菌的主要外膜抗原,能紧密黏附细胞Hep-2但并不侵入细胞。O157∶H7菌影免疫雄性BALB/c小鼠诱导特异性IgG抗体的产生。攻击试验结果显示小鼠对致死剂量O157∶H7 EDL933强毒株的保护率达到80%。结论 O157∶H7菌影的成功制备及生物学活性的初步析为研制O157∶H7菌影疫苗奠定了基础。     

改良分子信标实时PCR快速检测大肠杆菌O157：H7

目的建立改良分子信标实时PCR快速检测大肠杆菌O157：H7的快速方法。方法根据GenBank公布O157：H7的rfbE保守序列，设计一对引物和改良分子信标探针，用FAM荧光剂标记探针的5’端，建立改良分子信标实时PCR检测O157：H7的反应体系，应用于食物中毒快速诊断和食品微生物检测。结果共检测11种细菌。只有大肠杆菌O157：H7有荧光信号，其余10种全无荧光信号，且与其他细菌无交叉反应，DNA灵敏度为64fg，菌液灵敏度为59cfu／ml或2cfu／PCR反应体系。应用改良分子信标实时PCR反应体系检测10株O157：H7均出现特异的荧光信号，无干扰。对89份食品样品进行检测，5份O157：H7实时PCR阳性，其余样品为阴性，检测仅需2h。5份阳性样本，经传统方法培养，有3份检出大肠杆菌O157：H7。结论改良分子信标实时PCR检测体系快速、灵敏度高，特异性强，可用于大肠杆菌O157：H7食物中毒的快速诊断和食品微生物检测，为食源性疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段。     

江苏省113株大肠杆菌O157:H7的扩增片段长度多态性分析

目的:分析江苏省不同地区和年代分离的Escherichia coli O157:H7(E. coli O157:H7)之间的同源性?方法:用扩增片段长度多态性(amplified fragment length polymorphism,AFLP)分析法对113株 E. coli O157:H7菌株进行分子分型,采用软件BioNumerics Version 4.0对分型数据进行处理和分析?结果:113株E. coli O157:H7共分37个型别,不同来源的菌株存在相同的基因型别,不同的地区和物种之间存在着相互传播?结论:AFLP可以用于对不同来源的E. coli O157:H7进行分子分型?     

肠出血性大肠杆菌O157:H7志贺毒素ⅡA1亚单位单克隆抗体的制备和生物学特性鉴定

目的 制备出高效价的抗志贺毒素ⅡA1亚单位(STX2A1)的单克隆抗体.方法 以重组GST-SIX2A1融合蛋白作为免疫抗原,免疫BALB/c小鼠,运用细胞杂交瘤技术制备,以天然STX2毒素为筛选抗原,采用间接ELISA法筛选产生针对STX2A1的单克隆抗体细胞株;以体内诱生法产生腹水,并采用Protein A-Sepharose柱对其纯化,快速定性试纸鉴定McAb的Ig亚类,采用间接ELISA相加实验鉴定抗原识别表位.结果 获得3株产生针对STX2A1的单克隆抗体细胞株STX2-1A3、STX2-1E10、STX2-3A7,Ig亚类分别为IgG1λ型、IgG1κ型和IgG3κ,亲和力常数分别为5.76×109、1.21×109和3.97×108.结论 成功制备3株稳定分泌抗STX2A1的杂交瘤细胞株,产生的单克隆抗体特异性好,亲和力高,能与天然STX2A亚单位反应.     

河南省肠出血性大肠杆菌(EHEC O157:H7)感染之流行与基因特征研究

目的 :了解河南省肠出血性大肠杆菌 (enterohemorrhagicescherichiacoli,EHEC)的流行状况与流行菌株的志贺毒素基因型。方法 :采集河南省 14个监测点上腹泻病人、家畜家禽粪便和肉食品等标本分离E HEC菌株。应用分子生物学技术检测EHEC菌株的rfbO157、rfbO111、hlyA、eaeA、stx2 和stx1等毒力基因和志贺毒素基因亚型 ,应用细胞培养技术检测菌株Vero细胞毒性。结果 :从腹泻病人、家畜家禽、肉食品、苍蝇、蜣螂中均分离出EHECO15 7:H7菌株 ,波尔山羊的带菌率最高达到 2 9.8%。 13 8株携带志贺毒素基因的菌株中 ,EHECO15 7:H7计 95株 ,占产毒菌株的 68.8% ;EHEC非O15 7菌株 43株 ,占 3 1.2 %。菌株可分为 5种毒素基因型 ,EHECO15 7:H 7仅含stx2 基因 ,以stx2 vha亚型为主 ,不含有stx1基因。EHEC非O15 7血清型毒素基因型较复杂。携带stx1和 /或stx2 的菌株均具有Vero细胞毒性。结论 :河南省腹泻病人和家畜家禽中存在EHEC感染。EHECO15 7:H7血清型是优势菌型 ,羊是主要宿主动物。目前河南省EHECO15 7:H7菌株毒素基因型为stx2 并以stx2 vha亚型为主。     

DETECTION OF E6, E7 AND CELL-TYPE SPECIFIC ENHANCER OF HUMAN PAPILLOMAVIRUS TYPE 16 IN BREAST CARCINOMA

Objective To detect HPV16 E6, E7 genes and cell-type specific enhancer （CTSE） of long control region （LCR） in breast carcinoma （BC）. Methods HPV16 E6 ,E7 genes and CTSE were detected in 40 BCs and 20 normal breast tissue （NBT） using polymerase chain reaction （PCR）. Results The positive rates of HPV16 E6 , E7genes and CTSE were 60% （ 24/40 ） , 55% （ 22/40 ） and 67. 5% （ 27/40 ） respectively in BCs, whereas only 5% （1/20）, 5% （1/20） and 15% （3/20） in NBTs （ P 〈 O. 05）. There exited significant correlation between E6 gene and CTSE in BCs （ P 〈0. 05） , as well as E7 gene and CTSE. The infection of HPV16 E6, E7 and CTSE had no statistic relationship with pathological features. Conclusion There were HPV16 E6 , E7 genes and CTSE together in BCs and CTSE may play an important role in pathogenesis of BC.