正常妊娠中细胞增殖细胞凋亡情况的研究

目的　研究细胞增殖和细胞凋亡在正常妊娠不同孕期胎盘绒毛、蜕膜生长发育中的作用。方法　对 40例正常早孕吸宫流产病例和 40例正常晚孕分娩病例的胎盘绒毛和蜕膜进行分析 :免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白 -过氧化物酶法 (S -P法 )检测细胞增殖 ;用DNA缺口原位末端标记技术 (TUNEL法 )检测细胞凋亡。结果　正常早孕绒毛细胞滋养细胞、合体滋养细胞、蜕膜中的增殖指数 (PI)分别为 (70 74± 1 34 ) %、0、(89 32± 1 75 ) % ,凋亡指数 (AI)分别为 (10 2 7± 0 35 ) %、(15 2 8± 2 43) %、(5 2 3± 1 35 ) %。正常晚孕胎盘细胞滋养细胞、合体滋养细胞和蜕膜中增殖指数 (PI)分别为 (2 10± 1 2 8) %、0、(2 0 4± 1 31) % ;凋亡指数 (AI)分别是 (1 0 6± 0 94) %、(41 79±1 48) %、(6 0 81± 1 41) %。即 :正常早、晚孕绒毛和蜕膜组织中都有一定量的细胞增殖和细胞凋亡发生 ,但早孕时以细胞增殖为主 (P <0 0 1) ,晚孕时以细胞凋亡为主 (P <0 0 1)。结论　细胞增殖和细胞凋亡都是细胞生长代谢的形式 ,随着妊娠进展 ,胎盘细胞增殖下降、细胞凋亡增加。提示 :细胞增殖和凋亡对胎盘绒毛的正常发育和老化起重要作用     

妊娠肝内胆汁淤积症胎盘细胞凋亡与Fas、FasL的研究

目的　探讨妊娠肝内胆汁淤积症 (intrahepatic cholestasis of pregnancy,ICP)胎盘组织Fas及 Fas L (Fasligand)表达在细胞凋亡中的作用。　方法　采用 d U TP缺口末端标记法 (TU NEL )和免疫组化技术对 31例 ICP患者胎盘组织中的细胞凋亡、Fas、Fas L的基因表达进行检测 ,并以正常妊娠胎盘组织 31例作为对照组。　结果　 ICP组胎盘组织中细胞滋养细胞、合体滋养细胞、蜕膜细胞及绒毛间质细胞的凋亡指数 (AI)分别为 4 9.0 9± 9.13(t=13.4 1)、4 6 .6 4± 9.77(t=12 .16 )、35 .0 9±9.4 9(t=8.4 3)、38.74± 9.70 (t=11.2 8) ,明显高于对照组 (P<0 .0 0 5 )。 ICP组细胞滋养细胞和合体滋养细胞 Fas表达明显增强 (P<0 .0 0 5 ) ,Fas L在细胞滋养细胞、合体滋养细胞、蜕膜细胞及绒毛间质细胞中的表达明显低于对照组 (P<0 .0 0 5 )。　结论　 ICP患者胎盘组织中 Fas表达增强 ,Fas L表达减弱 ,可导致母胎间免疫耐受的破坏 ,胎盘细胞凋亡增加 ,可能与 ICP患者胎盘功能减退有关。     

米非司酮药物流产后绒毛蜕膜细胞凋亡的相关研究

目的:探讨米非司酮对早孕绒毛蜕膜细胞凋亡、增殖的作用机制。方法:以20例药物流产患者为研究组,以20例非意愿妊娠要求行人工流产负压吸引刮宫术的患者为对照组,分别收集绒毛和蜕膜标本,应用原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡,并采用免疫组织化学方法检测bcl-2、bax、fas、fasL、增殖细胞核抗原(PCNA)5种蛋白在绒毛和蜕膜中的分布与表达强度,同时应用原位杂交法测定fas与fasLmRNA的分布与表达强度。结果:凋亡细胞在正常早孕绒毛合体滋养细胞中少量存在,蜕膜中偶见;绒毛、蜕膜中bcl-2、bax、fas、fasL、PCNA均有表达。采用米非司酮药物流产的绒毛合体滋养细胞及蜕膜间质及腺上皮细胞的凋亡显著增多,同时伴有促凋亡bax、fas、fasL蛋白及fasLmRNA含量的增加,而PCNA蛋白含量与C组比没有变化。结论:米非司酮不仅能促进早孕绒毛合体滋养细胞、蜕膜间质及腺上皮细胞的凋亡,而且主要通过Fas与FasL转录及翻译途径介导,bax表达增加也其也有一定的相关性,此可能为其抗早孕机制之一。     

复发性自然流产患者子宫蜕膜及绒毛组织白血病抑制因子基因表达的研究

目的 :探讨白血病抑制因子 (LIF)基因在子宫蜕膜及绒毛组织中的表达与反复自然流产 (RSA)的关系。方法 :采用逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)技术 ,对 2 0例RSA患者和 30例正常妊娠妇女子宫蜕膜和绒毛组织进行LIFmRNA检测。结果 :RSA组蜕膜组织中LIFmRNA的表达水平为 0 5 12± 0 32 6 ( x±s,下同 ) ,正常妊娠组为 1 345± 0 885 ,RSA患者蜕膜组织中LIFmRNA表达显著性降低 (P <0 0 5 ) ;RSA组绒毛组织中LIFmRNA的表达水平为 0 6 0 1± 0 10 5 ,正常妊娠组为 1 75 9± 0 318,前者较后者明显降低 (P <0 0 1)。结论 :LIF对妊娠的维持可能起一定的作用。LIF基因表达减弱可能是导致复发性自然流产的原因之一     

复发性流产患者胎盘滋养细胞凋亡及Fas、FasL表达的研究

目的 :通过比较正常早孕妇女和复发性流产 (RSA)患者胎盘绒毛滋养细胞凋亡及Fas、FasL表达 ,进一步从细胞及分子水平探讨复发性流产的发病机理。方法 :应用免疫组织化学SP方法 ,测定 30例RSA患者和 2 5例正常早孕妇女胎盘绒毛滋养细胞Fas和FasL基因蛋白的表达 ,并通过MIAS 2 0 0 0医用彩色病理图像免疫组化测量系统对其表达进行半定量分析 ,其结果用平均灰度表示 ;同时应用DNA缺口原位末端标记技术 (TUNEL法 )测定两组胎盘绒毛滋养细胞凋亡情况。结果 :RSA组患者胎盘绒毛FasL的表达低于正常组 ,差异有显著性 (P <0 0 5 ) ;而Fas表达两组比较差异无显著性 (P >0 0 5 ) ,胎盘绒毛细胞滋养细胞及合体滋养细胞的凋亡指数 ,RSA组明显高于正常组 ,差异有非常显著性 (P<0 0 1)。结论 :细胞凋亡的增加可能是RSA发生的一个重要病理过程 ,且RSA患者胎盘绒毛滋养细胞表面FasL表达减少 ,导致母胎间免疫耐受的破坏 ,引起异常的免疫反应可能是RSA发病的重要机制。     

妊娠肝内胆汁淤积症患者胎盘细胞凋亡及调控基因的研究

目的　通过观察妊娠肝内胆汁淤积症 (ICP)患者胎盘细胞凋亡调控基因p5 3、bax和bcl 2在胎盘中的表达 ,探讨细胞凋亡基因在胎盘细胞凋亡中的作用。方法　采用原位末端标记法(TUNEL)和免疫组织化学方法对 3 1例ICP患者 (ICP组 )的胎盘组织中p5 3、bax和bcl 2基因表达及调亡指数进行检测 ,并以 3 1例正常妊娠妇女的胎盘组织作对照 (对照组 )。结果　 (1)ICP组胎盘组织中细胞滋养细胞、合体滋养细胞、蜕膜细胞及间质细胞中细胞凋亡指数分别为 (49 1± 9 1) %、(46 6±9 8) %、(3 5 1± 9 5 ) %、(3 8 7± 9 7) % ,明显高于对照组的 (2 2 5± 6 2 ) %、(2 1 6± 5 2 ) %、(17 9±6 2 ) %、(17 0± 4 7) %。两组比较 ,差异有极显著性 (P <0 0 1)。 (2 )而调控基因p5 3的表达 ,ICP组明显高于对照组 ,两组比较 ,差异有极显著性 (P <0 0 1) ;bax的表达在两组滋养细胞中比较 ,差异无显著性 (P >0 0 5 )。但在合体滋养细胞、蜕膜细胞及间质细胞中 ,ICP组明显高于对照组 ,两组比较 ,差异有极显著性 (P <0 0 1) ;bcl 2的表达在ICP组胎盘组织细胞滋养细胞、合体滋养细胞、蜕膜细胞及间质细胞中 ,均明显低于对照组 (P <0 0 1)。 (3 )p5 3、bax和bcl 2在ICP组合体滋养细胞中的表达分别是 (75 9± 8 2 ) %、(65     

组蛋白去乙酰化酶1蛋白在早期自然流产绒毛和蜕膜组织中的表达

目的:探讨组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)蛋白在早期自然流产发生中的病理生理作用及临床意义。方法:应用免疫组织化学和Western blot法检测早期自然流产和早期正常妊娠者绒毛及蜕膜组织中HDAC1蛋白的表达。结果:免疫组化示:HDAC1主要定位于绒毛细胞滋养细胞、合体滋养细胞和子宫蜕膜细胞、腺上皮细胞的胞核;早期自然流产绒毛组织中HDAC1的表达强度低于早期正常妊娠组,而蜕膜组织中,早期自然流产组织HDAC1的表达强度高于正常妊娠组,差异均有统计学意义(P均<0.05)。Westernblot示:早期自然流产绒毛组织中HDAC1蛋白的相对表达量为1.38±0.63,明显低于正常妊娠组(1.92±0.82),差异有统计学意义(P<0.05);而早期自然流产蜕膜组织中HDAC1蛋白的相对表达量为1.02±0.53,明显高于正常妊娠组(0.71±0.36),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:HDAC1在早期自然流产绒毛和蜕膜组织中的异常表达可能在早期自然流产的发生、发展中起重要作用。     

正常与药物流产绒毛蜕膜组织细胞凋亡及相关基因的表达

目的：探讨米非司酮对早孕绒毛蜕膜细胞调亡、增殖及相关基因表达的影响。方法：对正常早孕绒毛与蜕膜、药物流产完全与不完全的绒毛、药物流产不完全蜕膜标本各10份（共50份标本）,应用原位末端标记法进行细胞凋亡的组织学检测,免疫组织化学方法测定bcl-2、bax、fas、增殖细胞核捩的（PCNA）5种蛋白在组织中的分布与含量,同时应用原位杂交法测定fas与fasL mRNA的分布与含量。结果：正常早孕绒毛中存在少量凋 细胞,主要分布于合体滋养细胞,蜕膜中凋亡细胞偶见;绒毛蜕膜中均可检测到上述5种蛋白。米非司酮药物流产的绒毛合体滋养细胞凋亡显著增,蜕膜凋亡细胞也增多,同时伴有促凋亡baz、fas、fasL蛋白及fas、fasL、mRNA含量的增加,而PCNA蛋白含量无减少。结论：米非司酮能促进早孕绒毛合体滋养细胞,蜕膜间质及腺上皮细胞的凋亡,且主要通过fas与fasL转录及翻译途径介导,bax表达增加也有一定相关性,此可能为其抗早孕机理之一。     

米非司酮对人甲孕绒毛细胞增殖和凋亡的影响

探讨米非司酮对人早孕绒毛滋养细胞增殖和凋亡的影响。方法 对１５例正常早吸宫流产和１５例米非司酮流病例的绒毛组织，应用免疫组织化学，ＡＢＣ法检测增殖细胞核抗原在细胞中的染色情况，ＤＮＡ缺口原位末端标记法检测细胞凋亡。结果正常早孕绒毛细胞滋养细胞增殖指数为５３．７４％±１．３４％，且见细胞浆阳性染色，合体滋细胞未见ＰＣＮＡ阳性染色；     

早孕妇女血清及蜕膜组织液对自然杀伤细胞活性及淋巴细胞增殖的影响

目的　探讨早孕妇女血清及蜕膜组织液对自然杀伤 (NK)细胞及淋巴细胞功能的影响。方法　采用同位素掺入法 ,检测 3 2例正常早孕妇女血清 (早孕血清组 )及蜕膜组织液 (蜕膜组织液组 )对正常妇女外周血中NK细胞活性 (% )及淋巴细胞增殖功能的影响 ,并采用 2 5例正常未孕妇女的血清作对照 (对照组 )。结果　早孕血清组、蜕膜组织液组及对照组的NK细胞活性分别为 (3 5 .8±3 .0 ) %、(19.1± 2 .9) %及 (46.1± 3 .2 ) % ,淋巴细胞增殖功能 [每分钟同位素放射次数 (CPM) ]分别为(3 689± 4 5 6)CPM、(2 0 5 9± 2 88)CPM及 (4883± 64 3 )CPM ,3者间差异均有极显著性 (P <0 .0 1) ,且蜕膜组织液组均显著低于早孕血清组 (P <0 .0 0 5 )。结论　正常早孕妇女血清及蜕膜组织液具有免疫抑制作用 ,而蜕膜组织液可能是调节早期妊娠子宫局部免疫功能的重要因素之一。     

转化生长因子β1及其受体与体外受精-胚胎移植后流产关系的研究

目的　了解转化生长因子β1(TGF- β1)及其受体(TβR)在绒毛及蜕膜组织中的表达,初步探讨TGF- β1与体外受精胚胎移植(IVF- ET)后流产及自然流产的关系。方法　应用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白过氧化物酶(SP)连接法,检测10例IVF -ET后流产患者(IVF- ET组)和20例早期自然流产患者(自然流产组)的绒毛及蜕膜组织中的TGF -β1及TβR(Ⅰ、Ⅱ型)表达情况,其表达水平以阳性染色部位的吸光度(A)值表示,并与20例人工流产者(对照组)进行比较。结果　TGF- β1及TβR在早孕绒毛滋养细胞、蜕膜组织腺体及间质细胞中均有阳性染色, 3组表达部位相同。TGF β1在IVF ET组蜕膜及绒毛组织中表达水平(A值,中位数,下同)分别为0 167、0 .199,自然流产组为0 .198、0 .201,对照组为0 .277、0 .274;TβR Ⅰ在IVF- ET组蜕膜及绒毛组织中表达水平为0 144、0 150,自然流产组为0 .202、0. 201,对照组为0 .238、0 .281;TβR Ⅱ在IVF ET组蜕膜及绒毛组织中的表达水平为0 .199、0 .145,自然流产组为0. 153、0 .156,对照组为0 .300、0 .301。上述指标,IVF -ET、自然流产组分别与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0. 01)。结论　TGF -β1及TβR在IVF- ET后流产及自然流产患者绒毛及蜕膜组织中的表达下降,在IVF- ET后流产发病中起重要作用,     

米非司酮药流时整合蛋白β3和细胞间粘附分子-1在蜕膜与绒毛内的表达

为了解米非司酮与米索前列醇对早孕流产的蜕膜、绒毛中整合蛋白 (Integrin)β3和细胞间粘附分子 1 (Intercellular adhesion molecule,ICAM 1 )的影响 ,应用流式细胞定性定量分析技术测定了 1 0例采用米非司酮与米索前列醇终止早孕妇女的蜕膜与绒毛组织中整合蛋白β3和 ICAM 1水平 ,并以 1 0例负压吸引人工流产者为对照。结果显示 :蜕膜与绒毛组织整合蛋白 β3和 ICAM 1均较对照组明显降低。实验组蜕膜组织整合蛋白 β3与 ICAM 1分别为 1 9.1± 5.0 1 %和 2 0 .6 1± 6 .51 % ,对照组分别为 2 9.3 1± 5.2 6和 2 6 .6 9± 6 .1 1 ;实验组绒毛组织整合蛋白β3与 ICAM 1分别为 2 1 .3 2± 4 .3 8%和 2 0 .2 9± 6 .4 9% ,而对照组则为 3 1 .3 1± 7.85和 2 8.6 9± 7.98。结果提示整合蛋白β3及 ICAM 1可能与维持早孕有关 ,米非司酮影响蜕膜、绒毛组织中整合蛋白 β3及 ICAM 1的表达 ,可能参与药物抗早孕机制。     

Potential role of decidual apoptosis in the pathogenesis of miscarriages

To investigate the existence and the distribution of decidual apoptosis in normal pregnancies and miscarriages (spontaneous and recurrent), a comparative immunofluorescent tissue labelling of normal control (n?=?12) and miscarried pregnancies (n?=?24) was designed. Evaluation of the existence and distribution of decidual apoptosis in normal pregnancies and miscarriages, characterization of the apoptotic cell types and the involvement of caspase-dependent pathways was analyzed with TUNEL, anti-active caspase-3, anti-pancytokeratin and anti-CD45 antibodies. Normal decidua showed few apoptotic cells, whereas decidua from recurrent miscarriages had a significantly higher number of apoptotic cells preferentially localized to the sub-epithelial and periarteriolar regions, where the onset of decidualization occurs. Apoptosis occurred via a caspase-dependent pathway. Neither immune nor epithelial cells were positively stained for any apoptotic markers. The increased number of apoptotic cells, which are strictly restricted to the periarteriolar stroma particularly in recurrent miscarriages leads us to suggest that decidual apoptosis could result a series of cellular dysfunctions that may threaten the course of pregnancy.     

Expression and localization of tumor necrosis factor receptor 1 protein in the chorionic villi in early normal and spontaneous abortion

BACKGROUND: Increasing tumor necrosis factor alpha (TNFalpha) expression is found to be positively associated with spontaneous abortion. TNFalpha acts through the binding of two types of transmembrane receptors called TNFR1 and TNFR2. Here we compare membrane TNFR1 (mTNFR1) protein expression on chorionic villi in women with spontaneous abortion (SA) and viable pregnancy. METHODS: In a prospective study, 31 women with SA and 30 with a viable pregnancy were studied. Chorionic villous membrane TNFR1 was detected by confocal laser scanning microscopy and immunohistochemistry. RESULTS: The mTNFR1 protein is expressed in villous stromal, vessel endothelial, syncytiotrophoblast, and cytotrophoblast cells in early pregnancy. The intensity of mTNFR1 fluorescence (mean+/-S.D.) in villous stromal cells was higher in the abortion groups than in the control group (35.99+/-6.35 versus 32.64+/-5.01; p<0.05). In the abortion groups, villous cytotrophoblast cells were intensely positive for mTNFR1, whereas mTNFR1 staining of vessel endothelial and syncytiotrophoblast cells was significantly lower (p<0.001). CONCLUSION: Abundant mTNFR1 expression in the cytotrophoblast cells in women with SA may mediate TNFalpha to induce programmed cell death in the mTNFR1-expressing cytotrophoblasts to limit their growth. The over-expressing mTNFR1 in villous stromal cells, mediating TNFalpha effects, may cause pathological changes or tissue damage in chorionic villi locally in nonviable pregnancies.     

细胞因子信号抑制因子3(SOCS3)在先兆流产绒毛和蜕膜组织中的表达

目的:初步探讨早孕母胎界面细胞因子信号抑制因子3(SOCS3)的作用。方法:26例妊娠35-49d先兆流产患者,采用RT-PCR法及Western blotting法、免疫组化法检测绒毛、蜕膜组织SOCS3的表达,并以30例正常早孕者作对照。结果:①绒毛、蜕膜组织均表达SOCS3,但先兆流产组SOCS3表达明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。②绒毛中的SOCS3表达于滋养细胞和绒毛间质,蜕膜中的SOCS3主要位于蜕膜腺体及间质细胞,二组SOCS3表达定位一致。结论:母胎界面SOCS3可能在早期妊娠的维持中起重要作用,其表达水平降低可能与先兆流产的发生、发展有关。     

Interleukin-2 receptor positive cells in human decidua during the first trimester of pregnancy and their association with macrophages

Summary Maternal immune rejection of the fetus could sometimes be the cause of unexplained recurrent spontaneous abortion. Components of the T cell-mediated immunity were investigated in the first trimester of pregnancy in women having spontaneous abortion and compared to those with normal pregnancy having a termination on social grounds. Interleukin 2 (IL-2) had no proliferative effect on the trophoblasts of chorionic villi and there were also no IL-2 receptors in these cells. However IL-2 receptor positive cells were found in the decidua in 7 out of 24 women with normal pregnancy and in 12 out of 18 with spontaneous abortion. A high density of macrophages showed an association with IL-2 receptors in both groups. There were no differences with respect to T-cytotoxis cells and T-helper cells in cases of normal pregnancy (with and without IL-2 receptor positive cells), whereas in women having spontaneous abortion we found lower densities of T-helper and T-cytotoxic cells in those without IL-2 receptors than in those with IL-2 receptors.     

Potential role of decidual apoptosis in the pathogenesis of miscarriages

To investigate the existence and the distribution of decidual apoptosis in normal pregnancies and miscarriages (spontaneous and recurrent), a comparative immunofluorescent tissue labelling of normal control (n?=?12) and miscarried pregnancies (n?=?24) was designed. Evaluation of the existence and distribution of decidual apoptosis in normal pregnancies and miscarriages, characterization of the apoptotic cell types and the involvement of caspase-dependent pathways was analyzed with TUNEL, anti-active caspase-3, anti-pancytokeratin and anti-CD45 antibodies. Normal decidua showed few apoptotic cells, whereas decidua from recurrent miscarriages had a significantly higher number of apoptotic cells preferentially localized to the sub-epithelial and periarteriolar regions, where the onset of decidualization occurs. Apoptosis occurred via a caspase-dependent pathway. Neither immune nor epithelial cells were positively stained for any apoptotic markers. The increased number of apoptotic cells, which are strictly restricted to the periarteriolar stroma particularly in recurrent miscarriages leads us to suggest that decidual apoptosis could result a series of cellular dysfunctions that may threaten the course of pregnancy.     

蛋白酶体亚基LMP 2在稽留流产的蜕膜和绒毛组织中的表达

目的探讨蛋白酶体亚基LMP-2在稽留流产中的作用。方法 用免疫组化方法研究LMP-2在201例稽留流产中的48例绒毛和45例脱膜与114例正常早孕人工流产中的56例绒毛和58例蜕膜中的表达。结果LMP-2在稽留流产的绒毛和蜕膜中的表达均低于正常早孕人工流产的绒毛和蜕膜,二者间的表达强度差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 LMP-2在稽留流产中绒毛与蜕膜的表达减弱提示泛素-蛋白酶体通路介导的细胞蛋白降解参与调控滋养层细胞的生长过程。     

不明原因重复性自然流产妇女配偶精子DNA完整性

目的:探讨精子DNA完整性与重复性自然流产(RSA)的关系。方法:85例不明原因RSA妇女配偶(RSA组)和50例已生育的成年健康男性(对照组)的精液,应用精子染色质扩散实验(SCD)检测精子DNA完整性。将RSA组根据1年后怀孕结果分为3个亚组:怀孕组(30例)、流产组(26例)、未孕组(29例)。结果:RSA妇女配偶DNA损伤精子的百分率(14.6±6.9)%与对照组的(12.9±3.8)%相比无统计学差异(P0.05)。DNA损伤精子百分率大于20%视为精子DNA完整性异常,则有17.6%的RSA患者配偶的精子DNA完整性异常,6%的正常生育男性精子DNA完整性异常,但差异无统计学意义(P0.05)。怀孕组、流产组、未孕组配偶的DNA损伤精子百分率分别为(12.4±5.3)%,(14.6±6.5)%和(16.8±8.1)%,未孕组与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05),怀孕组、流产组与对照组比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论:精子DNA完整性异常与RSA继发不育有关,有必要筛查RSA患者配偶的精子DNA完整性。