黄芪联合间质干细胞对大鼠缺氧缺血性脑损伤修复作用的实验研究

目的:观察黄芪注射液联合大鼠骨髓间质干细胞移植对大鼠缺氧缺血性脑损伤神经功能恢复的影响。方法:制作大鼠缺氧缺血性脑损伤动物模型。造模后3天治疗组脑局部注射经BrdU标记的rMSCs[(2.5～5)×105cell],或同时腹腔注射黄芪注射液(1.2mL/100g),对照组则仅注射黄芪注射液或脑局部注射PBS液。造模后24天(即移植后21天)行Morris水迷宫行为学试验检测大鼠学习、记忆能力,另取脑组织作HE染色和双标免疫组化。结果:Morris水迷宫试验中,rMSCs移植加黄芪组在各时间点的平均潜伏期均低于rMSCs移植组,除第1、6天外,其余均有显著性差异(P0.05);穿越平台次数高于rMSCs移植组,但无显著性差异(P0.05)。HE染色rMSCs移植加黄芪组较rMSCs移植组脑组织修复更明显。双标免疫组化显示rMSCs移植加黄芪组中GFAP、NSE阳性细胞数目均较rMSCs移植组显著增多(P0.05)。结论:黄芪注射液能够在体内诱导rMSCs向神经细胞分化,同时具有协同rMSCs修复损伤脑组织,改善学习、记忆能力的作用。     

夏天无总生物碱对东莨菪碱及D-半乳糖所致大鼠学习记忆障碍的影响

目的研究夏天无总生物碱对东莨菪碱及D-半乳糖致学习记忆障碍大鼠行为学的影响.方法大鼠连续ig夏天无总生物碱1 5 d后,对东莨菪碱造成记忆获得障碍大鼠进行"y"型电迷宫和Morris水迷宫行为学检测;D-半乳糖sc 6周、夏天无总生物碱给药5周后进行"Y"型电迷宫行为学检测.结果在"Y"型电迷宫行为学检测中,夏天无总生物碱用药组[0.5～4 mg/(kg@d)]大鼠学习记忆成绩较模型组均有显著的提高(P＜0.05);Morris水迷宫行为学检测中,夏天无总生物碱用药组[0.25～1.0 mg/(kg@d)]大鼠对撤去平台的记忆成绩较模型组大鼠有显著的提高(P＜0.05).结论夏天无总生物碱对东莨菪碱及D-半乳糖造成的两种学习记忆获得障碍大鼠的学习记忆能力均有明显的改善作用.     

大鼠脑组织匀浆对其BMSCs向神经元样细胞分化的影响

目的探讨大鼠脑组织匀浆上清对大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）向神经元样细胞分化的影响。方法全骨髓培养法从Wistar大鼠中分离培养BMSCs,流式细胞仪鉴定,预诱导24h后,分为4组。空白对照组（A组）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）20 ng/mL组（B组）、bFGF20 ng/mL＋正常脑匀浆上清100μL/mL组（C组）、bFGF 20 ng/mL＋损伤脑匀浆上清100μL/mL组（D组）,诱导48 h至细胞分化。免疫细胞化学染色分别检测各组诱导分化后神经特异性烯醇化酶（NSE）、微管相关蛋白-2（MAP-2）和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达。结果第4代BMSCs CD29、CD44和CD34的表达率为99.8%、99.7%和2.2%;诱导后的细胞均具有神经细胞形态特征。免疫组化染色结果：NSE在诱导各组（B组、C组、D组）的表达率为44.50%、63.10%和73.30%,MAP-2的表达率为45.70%、65.30%和75.60%,各组均不表达GFAP。结论大鼠脑组织匀浆上清能提高BMSCs向神经细胞方向分化的阳性率,损伤脑匀浆的作用更强。     

地黄多糖对大鼠骨髓间充质干细胞向神经样细胞诱导分化作用的研究

目的:探讨地黄多糖体外对大鼠骨髓间充质干细胞( BMSCs)分化为神经样细胞的诱导作用.方法:以大鼠BMSCs为研究对象,采用流式细胞仪检测BMSCs表面标志,MTT法检测细胞生长曲线,当第3代细胞爬片达到80％以上汇合时,分为对照组、化学方法诱导组(5 mmol·L -1,β-mercap toethanol)、脑源性神经生长因子(10 μg·L-1,BDNF)组和地黄多糖组(200 mg·L-1)进行诱导,6h后应用免疫细胞化学染色法检测各实验组神经元巢蛋白(nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,RT-PCR检测nestin,NSE,βⅢ-微管蛋白(βⅢ-tubulin)和GFAP mRNA的表达情况.结果:经分离鉴定培养5代以内大鼠BMSCs增殖旺盛、具有较好的细胞活力;免疫细胞化学染色和RT-PCR检测结果显示,对照组不表达神经细胞标志物,各诱导组诱导后有特异性神经细胞标志物表达.其中地黄多糖组Nestin,NSE阳性细胞率分别为( 56.74±1.36)％,(73.37±1.27)％,高于化学诱导组(28.21±2.43)％,(2.31±2.72)％和神经生长因子组(31.3±1.61)％,(28.87±1.65)％,(P＜0.05);GFAP阳性细胞率(20.17±1.27)％低于化学诱导组和神经生长因子组,差异具有统计学意义(P＜0.05);化学诱导组Nestin,NSE和GFAP阳性细胞率与生长因子组比较,差异无统计学意义.结论:地黄多糖具有诱导BMSCs向神经样细胞分化的作用,主要向神经元样细胞方向诱导.     

黄芪皂甙Ⅳ联合BMSCs移植对大鼠脑缺血再灌注海马神经细胞凋亡及Livin、Caspase-9蛋白的影响

目的探讨黄芪皂甙Ⅳ联合骨髓间充质干细胞（BMSCs）移植对缺血再灌注大鼠海马Livin、Caspase-9蛋白及神经细胞凋亡表达的影响。方法实验动物随机分为假手术组、模型组、BMSCs组、联合组。采用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血（MCAO）模型,假手术组不予处理。BMSCs组于造模后3 h移植BMSCs。联合组既移植BMSCs,又给予黄芪皂甙Ⅳ治疗。观察缺血72 h后,各组神经功能评分,PKH-26标记的移植BMSCs分布,采用Western blot和免疫组化方法检测大鼠海马Livin、Caspase-9蛋白的表达,TUNEL方法检测细胞凋亡指数。结果 PKH-26标记的BMSCs在海马有表达。各组中联合组神经功能恢复最为明显（P〈0.05）。与模型组比较,联合组和BMSCs组均可上调Livin蛋白表达（P〈0.05）,下调Caspase-9蛋白表达（P〈0.05）,降低神经元细胞凋亡指数（P〈0.05）,以联合组作用更为显著（P〈0.05）。结论黄芪皂甙Ⅳ联合BMSCs移植对脑缺血再灌注神经元细胞凋亡有协同抑制作用,其作用机制可能与黄芪皂甙Ⅳ促进BMSCs上调Livin蛋白表达,下调Caspase-9蛋白表达,抑制细胞凋亡有关。     

腺病毒载体pAdeasγ-1／pAdtrack-CMV-GFP-βNGF转染大鼠BMSCs对大鼠颅脑损伤保护作用研究

目的：探索腺病毒载体pAdeasγ-1／pAdtrack-CMV-GFP-βNGF转染大鼠BMscs对大鼠颅脑损伤的保护作用及作用机制。方法：以缺陷型腺病毒作为载体，生成高效表达的J3NGF重组腺病毒载体系统，β-巯基乙醇对BMSCs细胞进行定向诱导分化并引入大鼠的BMSCs细胞，复制Feeney法大鼠模型，NSS评分观察BMSCs移植对大鼠脑外伤的影响。观察大鼠Morris水迷宫实验并测定NO、总NOS和iNOS。结果：移植β-巯基乙醇定向诱导BMSCs细胞大鼠在NSS评分和Morris水迷宫实验中，充分显示其对颅脑损伤大鼠的脑保护作用，能适量升高N0浓度，降低总NOS和iNOS的表达（P〈0．05）。结论：腺病毒载体pAdeasy-γ／pAdtrack-CMV-GFP-βNGF转染大鼠BMscs对大鼠颅脑损伤保护有明显作用，其作用机制之一可能与抑制氧自由基的生成、轻脂质过氧化反应有关。     

BMSC向神经细胞分化诱导后上清液对MCI大鼠治疗作用的实验研究

目的探讨3代、4代、5代大鼠骨髓间充质干细胞（BMSC）向神经细胞诱导后12h上清液对认知功能障碍大鼠的治疗作用。方法行Morris水迷宫行隐蔽平台获得实验对比各组间注射上清液前后大鼠潜伏期,免疫组织化学法对比各组间注射前后海马周期蛋白依赖性激酶5（CDK5）表达情况。结果Morris水迷宫隐蔽平台获得实验,除3代组与5代组之间差异无统计学意义外,其他任何两组间的差异均有统计学意义,3代与5代上清液较4代效果明显。大鼠脑组织CDK5表达除3代组与5代组间差异无统计学意义外,余各组间差异均有统计学意义,3代与5代上清液组较4代CDK5表达阳性率低。结论3代、4代、5代大鼠BMSC向神经细胞诱导后12h上清液对认知功能障碍大鼠有治疗作用,3代与5代作用较4代明显。     

电针对链脲霉素AD模型大鼠学习记忆及海马CA_1区神经元的影响

目的:探讨电针对阿尔茨海默病(AD)大鼠学习记忆影响的机制。方法:将48只Wistar大鼠随机分成4组:空白组、模型组、西药组和电针组,每组12只。通过侧脑室注射链脲霉素(STZ)的方法制备动物模型。电针组选取"百会"、"大椎"、"肾俞"、"太溪"、"足三里"电针治疗。以Morris水迷宫评价各组大鼠学习记忆能力,HE染色法观察海马CA1区神经元细胞排列。结果:与空白组比,模型组海马CA1区神经元细胞排列紊乱,学习记忆能力减退(P0.01)。治疗后与治疗前相比较,电针组与西药组细胞排列较规则,学习记忆能力增强(P0.01)。结论:电针治疗可改善AD大鼠海马CA1区神经元细胞形态学变化,增强学习记忆能力。     

煤工尘肺大鼠的学习记忆能力测定

目的探讨煤工尘肺模型大鼠的学习记忆情况。方法建立煤工尘肺大鼠模型,并进行血氧检测,应用Morris水迷宫系统测定大鼠学习记忆能力。通过大鼠在Morris水迷宫中平均逃避潜伏期来评估其学习能力,穿越平台次数及跨越目标象限时间占总时间百分比来评估其记忆能力。结果动脉血氧分压70mmHg95mmHg（1mmHg＝0．133kPa）,动脉血氧饱和度80％－95％。Morris水迷宫学习成绩．第4天训练结束时,模型组大鼠逃避潜伏期明显长于对照组（P〈0．05）。模型组穿越平台次数比对照组显著减少（P〈0．01）;模型组在跨越目标象限时间占整个游泳时间百分率也比正常组显著减少（P〈0．01）。结论煤工尘肺模型大鼠的学习记忆能力有所减退．     

穴位埋线对VD大鼠学习记忆能力及血清Livin表达的影响

目的 观察穴位埋线对血管性痴呆（vascular dementia,VD）大鼠学习记忆能力和血清抗凋亡因子（Livin）含量的影响,探讨穴位埋线对VD大鼠脑缺血性损伤的神经保护机制.方法 将大鼠随机分成假手术组、VD模型组、穴位埋线组、尼莫地平组,采用改良Pulsinelli＇s四血管闭塞法（four-vessel occlusion,4-VO）建立VD大鼠模型,2个治疗组分别施行穴位埋线和尼莫地平治疗,连续15d,Morris水迷宫检测各组大鼠学习记忆能力,酶联免疫吸附法测定血清Livin含量,制作海马组织病理切片并进行HE染色,观察并比较各组大鼠学习能力、血清Livin含量及海马神经元损伤的变化.结果 模型组表现出明显的学习记忆障碍,定位航行试验、空间探索试验与假手术组相比有显著性差异（P〈0.01）;与VD模型组比较,穴位埋线治疗后VD大鼠学习记忆能力显著提高（P〈0.05,P〈0.01）,血清Livin含量升高（P〈0.05）.结论 穴位埋线可改善VD大鼠学习记忆能力,其机理可能与埋线后提升血清Livin含量,进一步抑制神经细胞凋亡有关.     

滋肾醒脑汤对阿尔茨海默病模型大鼠行为学及海马组织中Caspase-3、Caspase-9表达的影响

目的：观察滋肾醒脑汤对阿尔茨海默病(AD)大鼠的学习记忆能力及海马组织Caspase-3、Caspase-9的表达影响。方法：采用侧脑室注入β淀粉样蛋白25-35制备AD大鼠模型,同时采用滋肾健脑汤进行干预,采用Morris水迷宫检测滋肾醒脑汤对AD模型大鼠学习记忆能力及空间探索能力的影响,通过免疫组织化学法观察大鼠海马CA1区Caspase-3、Caspase-9的表达。结果：Morris水迷宫试验：模型组大鼠学习记忆能力较假手术组明显下降(P<0.05)。苏木精-伊红(HE)染色结果显示：模型组大鼠海马神经元细胞损伤严重,而中药组和阳性对照组神经元细胞损伤情况均较模型组减轻。免疫组织化学结果：模型组大鼠海马区Caspase-3、Caspase-9明显增加(均P<0.05),而中药组能明显降低Caspase-3、Caspase-9的表达(均P<0.05)。结论：滋肾醒脑汤可减轻大鼠海马神经元的损伤,提高AD大鼠学习记忆能力,其机制可能与抑制海马组织中Caspase-3、Caspase-9的表达有关。     

穴位埋线对持续光照大鼠空间记忆损伤的保护作用

目的：观察持续光照对大鼠空间记忆的损伤以及穴位埋线对这种损伤的保护作用。方法：雄性清洁级Wistar大鼠48只,经过7d四个象限的Morris水迷宫训练后,第8d随机分为正常组、模型组、褪黑素组和穴位埋线组,每组12只。采用持续（24h）和长期（42d）光照大鼠造成其空间记忆损伤,同时给予“内关”穴埋线和腹膜注射褪黑素治疗,选用Morris水迷宫和海马电镜为观察指标。结果：模型组Morris水迷宫寻台潜伏期（SPL）与正常组相比显著延长（P〈0．05）,褪黑素组和穴位埋线组显著缩短（P〈0．05,P〈0．05）,与正常组相比无差异（P〉0．05,P〉0．05）。模型组海马神经元电镜示线粒体、突触、轴突及其血管内皮不同程度受损。褪黑素组和穴位埋线组与正常组一样,少见这些损伤。     

葡萄籽原花青素对骨髓间充质干细胞诱导分化后神经元样细胞凋亡的影响

目的探讨葡萄籽原花青素（grape seed proanthocyanidins,GSP）对骨髓间充质干细胞（BMSCs）诱导分化后神经元样细胞是否具有抗凋亡作用及作用的最适剂量。方法BMSCs由成年健康雄性WISTAR大鼠股骨全骨髓法取得,经贴壁培养法分离纯化,取第五代BMSCs用低中高剂量（20mg/L、40mg/L、80mg/L）GSP干预24h,设立空白对照组。以含有20%胎牛血清的1mmol/L B-巯基乙醇（BME）预诱导24h后,继而用含有40ng/mL碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的无血清培养基作为诱导液诱导24h。采用免疫细胞化学法鉴定神经细胞特异性抗原标记神经元特异性烯醇化酶（neuronspecificenolase,NSE）和微管相关蛋白-2（microtubule-associated protein2,MAP-2）的表达。MTT法检测不同剂量的GSP干预24h后对神经元样细胞活力的影响,流式细胞仪检测以Fluo-3AM为荧光探针标记的细胞内游离钙浓度,以Annexin V凋亡试剂盒检测组间细胞凋亡率。结果成功分离培养WISTAR大鼠BMSCs,经诱导分化后大部BMSCs变成神经元样细胞并表达NSE和MAP-2。GSP干预组细胞生长状态,活力及存活细胞比例较好。结论GSP能使BMSCs诱导分化后神经元样细胞保持较好的活力,对抗自由基产生,减少细胞凋亡。     

电针对AD大鼠学习记忆及神经干细胞表达的影响

目的：探讨电针对老年痴呆大鼠学习记忆功能和神经干细胞的巢蛋白（Nestin）、碱性成纤维细胞生长因子 （bFGF）表达的影响。方法：成年Wistar雄性大鼠随机分为正常组、模型对照组、模型组、西药组、电针组,每组12只。链脲霉素（STZ）注射法造大鼠AD模型.电针治疗三个疗程。Morris水迷宫测试大鼠学习记忆能力,免疫组化检测Nestin和bFGF表达。结果：定位航行试验显示,平均逃避潜伏期比较,AD模型组明显长于正常组、模型对照组,治疗后西药组、电针组有提高（P〈0.05, .电针组大鼠海马的Nestin和bFGF）阳性细胞数目最多,与模型组相比,差异具有显著性（P〈0.05）。结论：电针能够显著增强痴呆大鼠学习记忆功能, 修复AD大鼠的神经缺损,实现神经的保护效应。     

肉苁蓉含药血清对BMSC分化为神经细胞的诱导作用研究

目的：观察肉苁蓉含药血清对骨髓间充质干细胞（BMSC）分化为神经细胞的诱导作用。方法：原代培养BMSC并鉴定;SD大鼠灌胃肉苁蓉水煎剂,给药10天后取大鼠血清,将不同浓度的含药血清加入到培养至第三代的BMSC中诱导细胞分化;5小时后免疫细胞化学法检测神经元特异性烯醇化酶（NSE）、神经巢蛋白（Nestin）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）3种蛋白的表达;流式细胞仪检测细胞周期变化。结果：肉苁蓉含药血清能诱导BMSC向神经细胞分化,与对照组比较,各浓度组细胞的NSE、Nestin表达均升高（P〈0.05）,且高、低浓度组之间比较有统计学意义（P〈0.05）,GFAP表达极低;流式细胞仪检测细胞周期结果显示,肉苁蓉含药血清诱导后,中、低浓度组G0/G1期细胞明显减少（P〈0.05）,S期细胞增多（P〈0.05）。结论：肉苁蓉含药血清能诱导BMSC向神经细胞分化,并促进细胞增殖。     

针刺预处理对血管性痴呆大鼠学习记忆能力的影响

目的研究电针百会、肾俞、后三里对血管性痴呆（VD）大鼠学习记忆能力的影响。方法SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组和电针预处理组。采用改良线栓法制备VD模型,观察电针百会、肾俞、足三里对VD大鼠Morris水迷宫的学习记忆能力。结果模型组大鼠在水迷宫实验中的平均逃避潜伏期延长,与假手术组比较差异具有统计学意义（P〈0．01）;电针预处理组大鼠平均逃避潜伏期缩短,与模型组比较差异具有统计学意义（P〈0．01）,定位航行试验成绩与模型组比较差异具有统计学意义（P〈0．01）。结论电针预处理可改善VD大鼠学习记忆能力。     

头穴丛刺对慢性酒精中毒大鼠学习记忆能力及TH表达的干预作用

目的：探讨头穴丛刺对慢性酒精中毒大鼠的学习记忆能力及酪氨酸羟化酶（TH）表达的影响。方法：通过酒精灌胃的方法,建立慢性酒精性中毒大鼠的模型,运用Morris圆形水迷宫、免疫组化等方法及手段,观察头穴丛刺对慢性酒精中毒性大鼠学习记忆能力和TH表达的影响。结果：头穴组大鼠水迷宫逃避潜伏期较模型组明显缩短（P〈0.05）;免疫组化检测头穴组酪氨酸羟化酶的表达明显高于模型组（P〈0.05）。结论：头穴丛刺可能通过促进TH表达,从而改善慢性酒精中毒大鼠的学习记忆能力。     

软脉灵口服液对拟血管性痴呆大鼠学习记忆和海马CA1区神经元凋亡的影响

目的观察软脉灵口服液对实验性血管性痴呆（VaD）大鼠空间学习记忆能力和海马CA1区神经元凋亡的影响。方法选用永久性结扎双侧颈总动脉（2VO）制作VaD模型,用Morris水迷宫测定大鼠学习记忆能力,HE染色观察大鼠海马CA1区的形态学变化,TUNEI．染色观察大鼠海马CA1区的神经元凋亡情况。结果与模型组比较,软脉灵高剂量组逃避潜伏期缩短（P〈0．001）、1min穿越原平台所在位置次数增加（P〈0．001）;软脉灵高剂量组与低剂量组大鼠海马CA1区的凋亡细胞比模型组减少（P〈0．01）;与软脉灵低剂量组比较．高剂量组大鼠海马CA1区的凋亡细胞更少（P〈0．01）。结论软脉灵口服液能改善拟VaD尢鼠的空间学习记忆能力,减少拟VaD大鼠海马CA1区的凋亡细胞。这些作用呈一定的量效关系。     

夏天无总生物碱对东莨菪碱及D-半乳糖所致大鼠学习记忆障碍的影响

目的　研究夏天无总生物碱对东莨菪碱及 D-半乳糖致学习记忆障碍大鼠行为学的影响。方法　大鼠连续ig夏天无总生物碱 15 d后 ,对东莨菪碱造成记忆获得障碍大鼠进行“Y”型电迷宫和 Morris水迷宫行为学检测 ;D-半乳糖 sc 6周、夏天无总生物碱给药 5周后进行“Y”型电迷宫行为学检测。结果　在“Y”型电迷宫行为学检测中 ,夏天无总生物碱用药组〔0 .5～ 4mg/ ( kg· d)〕大鼠学习记忆成绩较模型组均有显著的提高 ( P<0 .0 5 ) ;Morris水迷宫行为学检测中 ,夏天无总生物碱用药组〔0 .2 5～ 1.0 mg/ ( kg· d)〕大鼠对撤去平台的记忆成绩较模型组大鼠有显著的提高 ( P<0 .0 5 )。结论　夏天无总生物碱对东莨菪碱及 D-半乳糖造成的两种学习记忆获得障碍大鼠的学习记忆能力均有明显的改善作用。     

针刺耳穴对血管性痴呆大鼠海马Caspase-3表达的影响

目的：探讨针刺耳穴对血管性痴呆（VD）大鼠的治疗机制。方法：用四血管阻塞改良法建立VD大鼠模型,造模后针刺“肾”、“心”耳穴,用Morris水迷宫检测大鼠平均逃避潜伏期、第Ⅲ象限活动时间和穿越站台次数,免疫组织化学SABC法检测大鼠海马Caspase-3免疫反应阳性细胞表达。结果：针刺耳穴后,VD大鼠学习记忆能力明显提高（P〈0.01或P〈0.05）,海马Caspase-3免疫反应阳性神经元明显减少（P〈0.05）。结论：针刺“肾”、“心”耳穴可改善VD大鼠学习记忆能力,其机制可能与Caspase-3表达减少、抑制缺血海马神经细胞的凋亡有关。