邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯对StAR基因表达的影响

目的探讨邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)对类固醇合成急性调节蛋白(St AR)基因表达水平和蛋白表达水平的影响。方法用不同剂量DEHP(0.05~0.80 mmol/L)对MCF-7细胞染毒24、48 h,采用荧光定量PCR检测St AR基因表达水平,观察DEHP染毒的剂量-效应关系;用单一剂量DEHP 0.80 mmol/L染毒细胞3、6、12、24、48 h,荧光定量PCR检测St AR基因表达水平,观察DEHP染毒的时间-效应关系;DEHP(0.10~0.80)mmol/L染毒24 h,western blot检测St AR蛋白表达水平的改变。结果 DEHP染毒24 h,(0.10~0.80)mmol/L剂量组St AR基因表达水平都显著高于对照组50%~130%,差异有统计学意义(P0.01);DEHP染毒48 h,(0.05~0.80)mmol/L剂量组St AR基因表达水平比对照组升高30%~185%,差异有统计学意义(P0.01或P0.05)。DEHP 0.8 mmol/L染毒3 h后St AR基因表达比对照组升高35%(P0.05),染毒6 h后St AR基因表达升高65%(P0.01),染毒12 h升高130%(P0.01),染毒24 h升高145%(P0.01),染毒48 h升高260%(P0.01)。Western blot结果显示,DEHP 0.10 mmol/L组St AR蛋白表达与对照组比较无明显变化,0.20 mmol/L组St AR蛋白表达比对照组明显升高35%(P0.05),0.40 mmol/L组St AR蛋白表达升高55%(P0.01),0.80 mmol/L组St AR蛋白表达升高70%(P0.01)。结论 DEHP可引起St AR基因表达和蛋白表达水平上调,推测DEHP可能通过影响类固醇激素合成过程中St AR表达水平变化,从而产生生殖毒性作用。     

游离脂肪酸对肝细胞ACSL1表达及相关脂代谢的影响

目的研究游离脂肪酸(FFA)的诱导对L02肝细胞长链脂酰CoA合成酶1(ACSL1)的表达及相关代谢的影响。方法用含不同浓度(0.2、0.4、0.8 mmol/L)FFA的培养液诱导L02细胞48 h,Western blot检测ACSL1蛋白水平,荧光定量PCR检测ACSL1 mRNA水平,比色法测定甘油三酯(TG)含量、ATP水平和培养上清FFA浓度变化,生化法测定酮体含量和培养上清葡萄糖浓度变化。结果 FFA的诱导可显著提高ACSL1蛋白表达水平(P<0.01),但对ACSL1 mRNA水平无明显影响(P>0.05),细胞内TG含量显著升高(P<0.01或P<0.05),酮体含量显著升高(P<0.05),培养上清葡萄糖消耗显著增加(P<0.01),胞内ATP水平无明显变化(P>0.05),与0.2 mmol/L、0.4 mmol/L FFA组相比,0.8 mmol/L FFA组培养上清FFA消耗显著增加(P<0.01或P<0.05)。结论 FFA通过上调ACSL1蛋白表达水平致肝细胞TG蓄积。     

替米沙坦对高糖状态下血管内皮细胞胰岛素敏感性的影响

目的探讨替米沙坦对高糖状态下血管内皮细胞胰岛素敏感性的影响。方法在细胞培养皿上均匀接种人脐静脉内皮细胞(HUVECs),随机分为高糖组(HG)与替米沙坦处理组(HG+TM)共2组。HG组在含葡萄糖(Glucose)33mmol/L的DMEM完全培养液培养48h。HG+TM组先在含33mmol/LGlucose的DMEM完全培养液培养24h,然后在含替米沙坦500μg/L+Glucose33mmol/L完全培养液培养24h。按照上条件处理结束后,两组细胞在含5.5mmol/L Glucose的DMEM(无血清)继续培养4h,加入终浓度为5mIU/L胰岛素继续培养10 min,最后将两组细胞上清液进行收集,检测细胞上清液中TNF-α、IL-6、NO及ET-1水平进行比较。结果与HG组相比,HG+TM组NO水平升高,TNF-α、IL-6、ET-1水平下降,差异具有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论替米沙坦可增加高糖状态下血管内皮细胞胰岛素敏感性,其机制可能降低TNF-α、IL-6炎症因子水平有关。     

p115RhoGEF/RhoA信号通路在高糖致脑微血管内皮细胞通透性异常中的作用

目的探讨p115RhoGEF/RhoA信号通路在高浓度葡萄糖(Glucose)致小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3通透性异常中的作用。方法体外培养小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3),构建单层血脑屏障体外模型。通过ESR电阻仪测定跨内皮细胞间电阻(TEER),分光光度法检测碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷胺酞胺转移酶(γ-GT)活性以评估其屏障功能;对照组(5.6mmol/L葡萄糖)、高糖诱导组(15.6、25.6、35.6、45.6mmol/L葡萄糖)处理细胞48h,MTT检测细胞相对存活率,分光光度法检测培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)活性,免疫印迹法(Western blot)检测紧密连接蛋白ZO-1、Occludin表达水平,评估高糖对脑微血管内皮细胞通透性的影响;Western blot检测不同浓度葡萄糖处理细胞后p115RhoGEF蛋白表达水平,体外蛋白与蛋白结合试验(Pull-Down)检测RhoA活性。转染p115RhoGEF-siRNA建立p115RhoGEF基因沉默的bEnd.3细胞模型,检测不同处理组RhoA活性及p115RhoGEF、TJ蛋白表达水平。结果细胞TEER值随培养时间延长逐渐升高,ALP、γ-GT活力均随时间延长逐渐升高;与对照组比较,35.6、45.6mmo/L葡萄糖诱导组的细胞活力出现明显下降作用,且诱导时间越长,细胞存活率越低(P0.05);35.6mmol/L葡萄糖诱导组的LDH水平明显升高(P0.05);随着葡萄糖浓度升高,ZO-1、Occludin蛋白表达下降而p115RhoGEF蛋白表达升高,差异有统计学意义(P0.05);Pull-down结果显示,25.6、35.6mmol/L葡萄糖组的RhoA活性较对照组明显升高(P0.05)。细胞转染p115RhoGEF-siRNA后,p115RhoGEF蛋白表达较对照组明显下降;高糖诱导48h后,与NCsiRNA组比较,p115RhoGEF-siRNA组的GTP-RhoA活性下降、 ZO-1、 Occludin表达水平明显上调(P0.05)。结论高糖通过诱导p115RhoGEF/RhoA信号通路活化,下调紧密连接蛋白表达,引起脑微血管内皮细胞通透性增加。[营养学报,2019,41(2):154-162]     

钙磷对体外培养成骨细胞增殖、分化和矿化影响的研究

目的研究钙、磷对体外培养成骨细胞(OB)增殖、分化及矿化的作用,探讨钙、磷对骨代谢的影响。方法在体外培养OB的基础上,分别添加1、2、4mmol/L钙、1、2、4mmol/L磷及2mmol/L钙+1mmol/L磷(钙磷比2∶1)、1mmol/L钙+2mmol/L磷(钙磷比1∶2)。检测细胞增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性、骨桥蛋白(OPN)和Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)含量及其mRNA表达情况。结果与对照组比,饲料中添加4mmol/L钙从D2开始促进OB增殖,差异显著(P<0.05),添加1、2mmol/L钙从D5开始差异显著(P<0.05),而钙磷比2:1与1:2到D8差异才显著(P<0.05)。除1mmol/L钙组外,各试验组从D2起均抑制细胞内ALP活性(P<0.05),在D5抑制其mRNA表达(P<0.01),在D2、D8促进其mRNA表达(P<0.05)。除1mmol/L钙组外,各试验组在D2均促进Col-Ⅰ分泌(P<0.01),但钙各组和1mmol/L磷组在D5、D8及2mmol/L磷组和钙磷比(1:2)组在D8均抑制其分泌(P<0.05)。各试验组,在D2、D8均促进Col-ⅠmRNA表达(P<0.01),在D5除钙磷比(1:2)组外均抑制其mRNA表达(P<0.01)。各试验组促进OPNmRNA表达(P<0.01),除1、2mmol/L钙组外,各实验组从D2起均促进其分泌(P<0.0)。结论添加钙及2种钙磷比(2:1,1:2)均能抑制成骨细胞早期分化,诱导其增殖及重叠生长,促进其基质成熟及矿化,而磷对其增殖作用不明显。     

游离脂肪酸引起肝细胞胰岛素抵抗及缺陷位点研究

目的研究游离脂肪酸诱导人肝细胞(HepG2)引起胰岛素抵抗及信号转导缺陷位点。方法用含0.25mmol/L的软脂酸(PA)或100nmol/L胰岛素的DMEM培养基培养HepG2细胞24h后,用100nmol/L胰岛素刺激不同时间后,分别测定培养液的葡萄糖浓度,细胞内的糖原含量,磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)活性以及磷酸化的蛋白激酶B(P鄄Ser473PKB)的蛋白水平。磷酯酰肌醇3激酶(PI鄄3K)的抑制剂Wortmannin加入培养基,终浓度10-6mol/L。结果与正常对照组相比,PA处理组和高胰岛素组培养液中葡萄糖含量增高(P<0.05);PA处理组胰岛素刺激的PEPCK活性高于正常对照组(P<0.01),P鄄Ser473PKB蛋白水平低于正常对照组(P<0.01)。用Wortmannin处理后,正常对照组中PEPCK活性差别有统计学意义(P<0.01),PA处理组中的PEPCK活性差别无统计学意义(P>0.05);正常对照组和PA处理组中P鄄Ser473PKB差别均有统计学意义(P<0.01)。结论0.25mmol/L的AP培养24h后,细胞产生了胰岛素抵抗并且胰岛素信号转导途径存在障碍,可能蛋白激酶B(PKB)及下游分子缺陷参与了肝胰岛素抵抗的形成。     

高浓度葡萄糖对小鼠囊胚细胞线粒体和细胞色素氧化酶的影响

目的:探讨高浓度葡萄糖对小鼠囊胚细胞线粒体和细胞色素氧化酶的影响,探讨高浓度葡萄糖对小鼠囊胚有氧代谢的影响,为糖尿病妊娠导致胎儿畸形的机制和预防提供理论依据。方法:通过促超排卵,获取妊娠3.5天小鼠囊胚,随机分成三组,即对照组(空白)、低糖组(葡萄糖浓度为7.5 mmol/L)和高糖组(葡萄糖浓度为28.0 mmol/L),分别培养在含0、7.5 mmol/L和28.0 mmol/L葡萄糖的M199培养基中,培养24 h后,然后再吸山囊胚。每组随机吸取30个囊胚用罗丹明123荧光染料标记线粒体和组织化学方法显示细胞色素C氧化酶,观察囊胚细胞线粒体和细胞色素C氧化酶(Cytochrome C Oxidase)的变化。结果:①高糖组小鼠囊胚线粒体功能活性明显降低,荧光密度值较低,且线粒体的位置分布发生了明显变化,空白组和低糖组囊胚胞浆中线粒体分布均匀,荧光密度值较高,线粒体仍具有一定的活性。空白组与低糖组囊胚荧光密度值无显著性差异(P>0.05),高糖组与空白组和低糖组相比均存在显著性差异(P<0.05);②细胞色素氧化酶(COX)活性的变化:高糖组小鼠囊胚胞浆淡染,反应产物呈浅黄色,COX活性明显降低;空白组和低糖组囊胚胞浆可见明显的棕褐色物质,COX活性较高,统计学分析,空白组与低糖组囊胚灰度值无显著性差异(P>0.05),高糖组与空白组和低糖组相比均存在显著性差异(P<0.05)。结论:高浓度葡萄糖对小鼠囊胚线粒体的分布、功能以及COX活性均有影响。     

枸杞多糖主要组分甘露糖及其潜在靶标代谢物肌醇对小鼠胰岛β-TC6细胞的影响

目的初步探讨枸杞多糖主要组分甘露糖及其潜在靶标代谢物肌醇对小鼠胰岛β-TC6细胞的影响。方法以不同浓度(0、4.6875、9.375、18.75、37.5、75和150μg/mL)甘露糖或肌醇干预β-TC6细胞24 h,CCK-8(cell counting kit-8)法测定细胞增殖活性;20 mmol/L葡萄糖联合不同浓度(0、18.75、75和150μg/mL)甘露糖或肌醇干预β-TC6细胞60 min,酶联免疫法检测细胞胰岛素分泌量;设立吡格列酮阳性对照组(3.92 mg/L),经(0、9.375、18.75、75和150μg/mL)甘露糖或肌醇干预24 h后,应用实时荧光定量PCR法检测β-TC6细胞胰岛素、葡萄糖激酶(glucose kinase,GK)、葡萄糖转运蛋白4(glucose transporter 4,GLUT4)以及糖原合成酶(glycogen synthase,GS)mRNA表达水平。结果与空白对照组相比,4.6875～150μg/mL甘露糖和18.75～150μg/mL肌醇均呈浓度依赖性促进β-TC6细胞增殖(P0.05),4.6875和9.375μg/mL肌醇虽然有促进细胞增殖的趋势,但差异无统计学意义(P0.05)。在20 mmol/L葡萄糖刺激下,18.75、75和150μg/mL甘露糖或肌醇干预后,β-TC6细胞胰岛素分泌量与对照组相比差异均无统计学意义(P0.05)。与对照组相比,150μg/mL甘露糖组GLUT4 mRNA表达上调(P0.01),75μg/mL肌醇组GK和GLUT4基因表达水平都上调(P0.01),18.75μg/mL肌醇仅使GLUT4基因表达上调(P0.01)。结论甘露糖和肌醇可通过改善GLUT4 mRNA表达水平,从而提高外周细胞对葡萄糖的摄取;此外,肌醇还可以通过上调GK mRNA表达水平以提高胰岛素敏感性,改善葡萄糖代谢。     

波动性高糖对内皮细胞自噬基因表达的影响

【目的】探讨波动性高糖对内皮细胞自噬的影响及其可能的机制。【方法】体外培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)用于实验。实验分正常对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)和葡萄糖交替处理组(5.5/28 mmol/L葡萄糖)。其中葡萄糖交替处理模拟人血糖波动状态,方案是前12 h内每隔4 h交替培养,后12 h内葡萄糖维持5.5 mmol/L水平,按此循环,共培养48 h。用CCK-8检测细胞活性,酶标仪检测氧化应激相关指标,实时荧光定量PCR检测自噬相关基因的表达情况。【结果】与正常对照组相比,葡萄糖交替处理组降低HUVEC细胞活性(P<0.01);降低细胞内抗氧化酶活性,增加丙二醛和8-羟基脱氧鸟苷的含量(P<0.01);增加自噬相关基因Atg4和Atg5的表达(P<0.001)。【结论】波动性高糖可能是先通过诱导HUVEC产生氧化应激,进而使HUVEC产生自噬,最终降低细胞活性。     

高糖及波动性高糖对血管内皮细胞凋亡的影响

目的 探讨高糖及波动性高糖对血管内皮细胞凋亡的影响.方法 以人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)作为研究对象,分别设置A组持续高糖组(25mmol/L),B组波动高糖组(5.5mmol/L与25mmol/L之间转换)和C组对照组(5.5mmol/L).使用流式细胞仪正确分析Annexin V-FITC/PI双染的细胞测定细胞凋亡率,进而研究高糖及波动性高糖对血管内皮细胞凋亡的影响.结果 随着时间的增长,细胞凋亡指数逐渐上升,而高糖和波动性高糖环境可以明显的加速细胞凋亡,波动高糖组B组与对照组C组和持续高糖组A组相比较,细胞凋亡速度明显加快,1d、2d、3d的凋亡指数均明显高于另外两组,比较差异明显,有统计学意义(P＜0.05).结论 波动性高糖与持续性高糖相比,对于血管内皮细胞的细胞毒性更大,损伤更严重.     

Diallyl trisulfide modulates cell viability and the antioxidation and detoxification systems of rat primary hepatocytes

This study investigated the effects of various concentrations of diallyl trisulfide (DATS) and incubation times on cell viability, glutathione (GSH) content, and GSH-related enzyme activity in rat primary hepatocytes. Isolated and cultured primary rat hepatocytes were used as an experimental model. Cells were treated with 0 (control), 0.025, 0.05, or 0.25 mmol/L DATS for 0, 4, 8, or 24 h. After 24 h of treatment, some cells were incubated in fresh medium without DATS for an additional 24 h (48-h incubations). Based on lactate dehydrogenase (LDH) leakage and morphological examination, hepatocytes treated with 0.025 mmol/L DATS did not differ from the control cells at 4, 8, 24, and 48 h of incubation. However, LDH leakage was higher than in the control cells (P < 0.05) when the hepatocytes were treated with 0.05 or 0.25 mmol/L DATS for 4 h or more. The intracellular GSH levels of hepatocytes treated with 0.025 or 0.05 mmol/L DATS were higher than those of the control cells (P < 0.05), whereas those treated with 0.25 mmol/L DATS did not differ. The activity of glutathione reductase (GRd) was higher than in the control cells at 24 h (P < 0.05) when the hepatocytes were treated with 0.025 mmol/L DATS. When the hepatocytes were treated with 0.025 mmol/L DATS, the activity of glutathione S-transferase (GST) was higher than in the control cells at 48 h (P < 0.05). In hepatocytes treated with 0.05 mmol/L DATS, the activity of GST and glutathione peroxidase (GPx) was higher than in the control cells (P < 0.05) at 24 and 48 h of incubation. The results indicate that 0.025 or 0.05 mmol/L DATS could enhance antioxidation and detoxification capabilities by increasing the intracellular GSH level and the activity of GPx, GRd, or GST in rat primary hepatocytes. However, 0.05 or 0.25 mmol/L DATS might adversely affect the viability of hepatocytes.     

Increased glucose availability activates chicken thymocyte metabolism and survival

Glucose metabolism in mammalian thymocytes is coupled to their development and selection in the thymus. In chickens, thymocytes develop in a low glucose concentration in ovo and a high glucose concentration posthatch. To determine the effect of glucose concentration on thymocyte glucose metabolism, embryonic thymic lobes were cultured in media containing varying glucose concentrations and thymocytes were isolated for analysis. Glucose transporter-1 (Glut-1) and Glut-3 mRNA abundance was at least 2-fold higher in thymocytes incubated with 10 and 20 mmol/L glucose than in those incubated with 0 mmol/L glucose (P < 0.05) and glucose uptake was greatest in thymocytes incubated with 20 mmol/L glucose (P < 0.05). Thymocytes incubated with 0 and 20 mmol/L glucose had 185% greater hexokinase activity than in those incubated with 10 mmol/L glucose (P < 0.05). Consequently, thymocyte glucose utilization was dependent upon glucose availability. Increased glucose utilization resulted in a higher mitochondrial membrane potential in thymocytes incubated with 15 mmol/L glucose than in those incubated with 5 mmol/L glucose (P < 0.05), indicating enhanced thymocyte energy status in response to high glucose concentrations. Additionally, thymocyte viability was lower in thymocytes incubated with 5 mmol/L glucose than in those incubated with 10 and 15 mmol/L glucose (P < 0.05) and rates of thymocyte apoptosis were higher in thymocytes incubated with 5 mmol/L glucose than in those incubated with 15 mmol/L glucose (P < 0.05). Glucose availability induced metabolic changes in thymocytes that altered their energy status and survival. Consequently, these data indicate that glucose availability may influence the development of na?ve T cells in the chicken thymus.     

黄绿青霉素对肿瘤坏死因子α诱导的血管内皮细胞表达单核细胞趋化蛋白1和白细胞介素的影响

目的观察黄绿青霉素(CIT)对血管内皮细胞表达单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白细胞介素1β(IL-lβ)、IL-6和IL-8等细胞因子的影响,以及CIT上调肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的内皮细胞表达MCP-1、IL-lβ、IL-6和IL-8的作用。方法体外原代培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),选择第5～6代进行试验,待细胞融合80%后随机分组,加入TNF-α(10μg/L)、CIT(2μmol/L)建立TNF-α组、CIT组、TNF-α+CIT联合处理组和空白对照组,处理时间24h。用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液IL-lβ、IL-6、IL-8及MCP-1的含量;免疫荧光染色法测定细胞核转录因子κB(NF-κB)的激活表达;RT-PCR检测各组MCP-1 mRNA表达。结果在TNF-α组和TNF-α+CIT组,细胞上清液IL-lβ、IL-6、IL-8、MCP-1浓度,细胞MCP-1 mRNA表达量,NF-κB P65蛋白表达量均高于空白对照组(P<0.05);且TNF-α+CIT组均高于TNF-α组(P<0.05)。结论 CIT可明显上调TNF-α诱导的内皮细胞MCP-1、IL-lβ、IL-6、IL-8表达和NF-κB的激活。     

乙醇诱导人脐静脉内皮细胞损伤及ADMA/NOS/NO信号机制

目的探讨乙醇诱导人脐静脉内皮细胞损伤效应及ADMA/NOS/NO信号机制。方法用不同浓度的乙醇与人脐静脉内皮细胞共培养,观察细胞形态和活性,通过检测细胞上清液丙二醛（MDA）、非对称性二甲基精氨酸（AD-MA）、一氧化氮（NO）的含量和一氧化氮合酶（NOS）的活性等指标,观察乙醇对人脐静脉内皮细胞损伤的量-效关系（乙醇处理细胞24 h）和时-效关系（终浓度为100 mmol/L的乙醇分别于处理0、3、6、12、24、48 h后观察检测指标）。实验分为正常对照组（加入与处理组等体积的D-Hank’s液,乙醇浓度为0 mmol/L）、乙醇处理组（终浓度分别为25、50、100、200mmol/L的乙醇）、乙醇＆VitC组（乙醇终浓度为100 mmol/L,VitC终浓度为100 mg/L）和阳性对照组（终浓度为500μmol/L的过氧化氢）。结果50-200 mmol/L乙醇能显著改变细胞形态、降低细胞活性（OD值：0.91±0.10-0.58±0.04,细胞生长抑制率：0.00±0.00-35.57±3.13,P〈0.01）;能显著性诱导内皮细胞MDA升高（258.72±7.36-524.07±8.25,P〈0.01）。50-200 mmol/L的乙醇还能显著性诱导：内皮型一氧化氮合酶（eNOS）活性下降（6.27±0.10-0.47±0.23,P〈0.05）及总NOS活性下降（10.69±0.54-3.77±0.32,P〈0.05）;NO含量降低（191.61±7.96-88.38±5.07,P〈0.05）。而且上述生物学效应均具有显著的时间依赖性,各处理组间两两比较也具有显著性（P〈0.05或P〈0.01）。100 mmol/L乙醇处理时细胞诱导型一氧化氮合酶（iNOS）活性及ADMA含量最高,且分别在处理后24 h到达最高峰。VitC均能扭转上述生物学效应,且具有显著性（P〈0.01）。结论50-200 mmol/L的乙醇能显著诱导人脐静脉内皮细胞损伤;ADMA在乙醇诱导人脐静脉内皮细胞损伤中有着重要作用。     

Alpha-linolenic acid attenuates high glucose-induced apoptosis in cultured human umbilical vein endothelial cells via PI3K/Akt/eNOS pathway

OBJECTIVE: High glucose-induced apoptosis in vascular endothelial cells contributes to the acceleration of atherosclerosis associated with diabetes. We hypothesized that alpha-linolenic acid (ALA) might attenuate high glucose-induced apoptosis in cultured human umbilical vein endothelial cells (HUVECs). METHODS: HUVECs were cultured at 5.5 and 33 mmol/L for 72 h. ALA with different concentrations was added with defatted bovine serum albumin as a carrier for 18 h before incubation with high glucose. RESULTS: Exposure of HUVECs to high glucose media for 72 h significantly increased the number of apoptotic cells compared with normal glucose control, as evaluated by flow cytometry and terminal deoxyuridine triphosphate nick end labeling assay. Pretreatment with low concentrations of ALA (10, 50, and 100 micromol/L) significantly attenuated high glucose-induced apoptosis of HUVECs, but increasing ALA to 200 micromol/L exerted the opposite effect. Furthermore, high glucose reduced phosphorylation of Akt and endothelial nitric oxide synthase (eNOS) with subsequent nitric oxide production, whereas ALA treatment attenuated the reduction caused by high glucose. Pretreatment with phosphatidylinositol 3' -kinase kinase inhibitor LY294002 and eNOS inhibitor N(G)-nitro-arginine methyl ester eliminated ALA' antiapoptotic effect. CONCLUSION: ALA exerts an antiapoptotic effect by the phosphatidylinositol 3'-kinase/Akt/eNOS pathway in HUVECs exposed to high glucose and thus may represent a candidate therapeutic agent for diabetic cardiovascular complications.     

三氯乙烯对肝细胞凋亡基因和肝代谢酶基因表达水平的影响

目的研究三氯乙烯（TCE）对人肝细胞凋亡基因（Caspase-3、Caspase-8、BAX、Bcl-2）和肝代谢酶基因(CYP1A2、CYP2E1、CYP3A4) mRNA表达水平的影响。方法用含10%胎牛血清的RPMI-1640 培养肝细胞,DMSO作为溶剂对照,采用不同浓度TCE（0.2、0.4、0.8、1.6、3.2 mmol/L）染毒L02肝细胞24 h,另外用TCE 1.0 mmol/L染毒细胞不同时间（2 h, 4h, 8h, 16h, 32h）,采用Real-time 荧光定量PCR技术检测肝细胞中凋亡基因和CYP基因mRNA表达水平。结果不同剂量TCE染毒后,凋亡基因Caspase-3、Caspase-8、BAX表达水平比对照组升高21%~145%,差异有统计学意义（P<0.05 或P<0.01）, Bcl-2表达水平下降20%~35%。TCE染毒引起CYP1A2、CYP3A4、CYP2E1的 mRNA表达明显上升,比对照组升高30%~550%,差异有统计学意义（P<0.05 或P<0.01）。用TCE 1.0 mmol/L染毒2 h~32 h,同样发现凋亡基因和肝代谢酶基因表达增加,与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05,或P<0.01）。结论TCE可引起肝细胞凋亡基因和肝代谢酶基因表达变化,凋亡基因和肝代谢酶基因可能在TCE对肝细胞毒性效应中发挥重要作用。     

三氯乙酸对L-02细胞DNA甲基化转移酶1蛋白及mRNA表达的影响

目的探讨三氯乙酸(TCA)染毒对L-02细胞DNA甲基化转移酶1(DNMT1)蛋白及mRNA表达的影响。方法取处于对数生长期的正常肝细胞(L-02细胞),分别加入含0(对照)、0.1、0.3、0.9 mmo/L TCA的培养液继续培养24、48、72 h,同时,设DNA甲基化酶抑制剂5-氮杂胞苷(5-aza-d C,5μmol/L)处理组,TCA-re组(0.9 mmol/L TCA处理后换正常培养基继续培养24 h)和人肝癌(HepG2)细胞组作为对照。检测细胞DNMT1蛋白和mRNA的表达水平。结果与对照组比较,各浓度TCA染毒组及5-aza-d C处理组、TCA-re组L-02细胞DNMT1 mRNA的表达水平均较低,而HepG2细胞组DNMT1 mRNA的表达水平较高,差异均有统计学意义(P0.05)。与相同剂量TCA染毒24 h比较,各浓度TCA染毒48、72 h后L-02细胞DNMT1 mRNA的表达水平均较低,除0.1、0.9 mmol/L TCA染毒48 h外,差异均有统计学意义(P0.05)。且随着TCA染毒浓度的升高和染毒时间的延长,L-02细胞DNMT1 mRNA的表达水平均呈下降趋势。与0.9 mmol/L TCA染毒组比较,TCA-re组L-02细胞DNMT1 mRNA的表达水平较高,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,各浓度TCA染毒组及5-aza-d C处理组L-02细胞DNMT1蛋白的表达水平均较低,除0.1 mmol/L TCA染毒24、48 h及0.3mmol/L TCA染毒24 h外,差异均有统计学意义(P0.05);而TCA-re组L-02细胞和HepG2细胞组DNMT1蛋白的表达水平均无明显变化。与相同剂量TCA染毒24 h比较,各浓度TCA染毒48、72 h后L-02细胞DNMT1蛋白的表达水平均较低,差异均有统计学意义(P0.05)。除TCA染毒24 h时L-02细胞DNMT1蛋白的表达水平随染毒浓度的升高而呈先升高后下降的趋势外,随着TCA染毒浓度的升高和染毒时间的延长,L-02细胞DNMT1蛋白的表达水平均呈下降趋势。与0.9 mmol/L TCA染毒组比较,TCA-re组L-02细胞DNMT1蛋白表达水平较高,差异有统计学意义(P0.05)。结论 TCA体外染毒可能通过抑制DNMT1的表达维持或者促进细胞的DNA低甲基化状态。     

同型半胱氨酸体外对VCAM-1的表达及内皮单核细胞黏附的影响

目的:探讨同型半胱氨酸(Hcy)对血管内皮细胞VCAM-1的表达及内皮-单核细胞黏附率的影响。方法:体外培养的大鼠主动脉内皮细胞通过区组接种随机分为5组,分别用0、0.01、0.1、1.0、5.0mmol/LHcy干预24h后,检测培养上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性、丙二醛(MDA)浓度及内皮-单核细胞黏附率;免疫细胞化学法检测NF-кB蛋白的表达;Hcy干预8h后检测VCAM-1mRNA表达量。结果:与对照及0.01mmol/LHcy组相比,0.1～5.0mmol/LHcy可明显降低SOD、GSH-Px的活性,增加MDA的生成量;上调NF-кB、VCAM-1的表达,促进内皮-单核细胞黏附。结论:Hcy可能通过自身巯基氧化激活NF-кB,上调VCAM-1等黏附分子的表达,促进内皮-单核细胞的黏附,这可能是Hcy致动脉粥样硬化(AS)的机制之一。     

高糖对肾小管上皮细胞Toll样受体4表达的影响

目的本实验旨在探讨高糖对。肾小管上皮细胞Toll样受体4（TLR4）表达的影响及其在糖尿病。肾病中的意义。方法体外培养。肾小管上皮细胞（NRK-52E），分成LG组（给予5mmol／L葡萄糖的DMEM培养）和HG组（给予25mmol／L葡萄糖的DMEM培养），不同时间收集细胞，采用细胞免疫化学、Rt—PCR、WesternBlot检测TLR4蛋白和mRNA表达情况，同时取细胞培养上清液用Elisa法检测IL-6、TNF-α水平。结果在高糖刺激6hTLR4mRNA出现表达明显增高，维持较高表达至274h，而48h后表达有所下降（P〈0．05）。HG组培养24hTLR4蛋白升高，48hTLR4蛋白表达进一步升高，与LG组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。HG组NRK-52E上清液IL-6、TNF一仅的表达较LG组明显升高（P〈O．05），并与TLR4蛋白呈正相关（r=0．799，0.820）。结论高糖可能通过上调NRK-52E的TLR4的表达，导致TNF-α、IL-6等炎性因子表达升高，TLR4参与了糖尿病肾病的进展。     

Effects of diet and ketones on rat pancreatic lipase in cultured acinar cells

The activity, synthesis rate and mRNA level of pancreatic lipase increase with dietary fat intake. Ketones, intermediates of lipid metabolism, have been proposed to mediate this change. Therefore, we investigated their direct effect on cultured pancreatic acinar cells and examined their possible interactive effects with glucose and dietary fat. beta-Hydroxybutyrate (0.01 to 2 mmol/L) did not affect lipase activity in cells isolated from rats fed a commercial nonpurified (NP) diet and cultured in high glucose (HG, 27.8 mmol/L) or low glucose (LG, 6.9 mmol/L) medium. The effects of ketones were also examined in acinar cells isolated from rats fed purified high fat (HF, 67% of energy from fat) or low fat (LF, 11% of energy from fat) diet. Cellular lipase was significantly higher in cells from HF-fed rats at both 24 and 48 h (264% and 145% of LF values, respectively; P less than 0.0001). beta-Hydroxybutyrate significantly increased (P less than 0.04) lipase activity in LF cells at 48 h but did not affect lipase activity in HF cells. These studies suggest that ketones may be involved in the regulation of pancreatic lipase in rats fed a LF diet, but their role is complex and interactive with dietary carbohydrate and fat.