人外周血淋巴细胞视黄酸受体基因捕达与调控

研究维生素Ａ增强人体免疫功能的机理。方法：采用ＲＴ－ＰＣＲ技术，检测分析人视黄酸受体基因在脐血和成人外周血淋巴细胞的表达，及丝裂原和视黄酸对其的调节。结论：维生素Ａ促进免疫功能的机制中，调节表疫细胞中ＲＡＲｓ的表达可能是一条重要途径。     

视黄酸受体基因在小儿淋巴结的表达与B细胞的发育

目的:研究视黄酸受体基因在小儿淋巴结的表达与B细胞发育的关系,阐明视黄酸促进抗体产生的途径与机制。方法:取5岁以下儿童正常淋巴结作冰冻切片,用地高辛素标记六种视黄酸受体基因(RARα、β、γ、RXRα、β、γ)反义RNA探针作原位杂交,及采用RT-荧光定量PCR,观察视黄酸受体基因在淋巴结的表达与分布,分析其与B细胞发育的关系。结果:原位杂交结果显示:六种视黄酸受体基因在淋巴结中的淋巴细胞和网状细胞中均有表达,分布广泛。RT-荧光定量PCR显示:在不同年龄儿童淋巴结六种视黄酸受体基因表达水平有所差异,1岁以下儿童受体基因表达水平普遍较低,此后随免疫发育而升高。结论:视黄酸受体基因的表达可能参与了B细胞的个体发育和免疫应答。这可能是维生素A增强儿童抗感染免疫力的重要环节和介导视黄酸作用的主要途径。     

视黄酸对人脐血淋巴细胞生长因子基因的调节

目的　探讨维生素 A促进免疫细胞功能的机制。方法　采用逆转录——聚合酶链反应 ,检测分析视黄酸 (RA)对体外培养的脐血淋巴细胞 (CBL)胰岛素样生长因子 1 (IGF- )及两类受体 (IGF- R,- R)基因表达水平的调节。结果　在加入生理浓度 RA培养 6～ 2 4 h CBLIGF- ,IGF- R和 IGF- R基因表达显著上调。结论　在 RA对免疫细胞的作用中 IGFs的调节可能是一条重要途径。     

视黄酸受体在脐血淋巴细胞抗体生成中的作用

目的 :　研究视黄酸 (RA)促进脐血淋巴细胞 (CBL )抗体生成的作用机制。方法 :　对脐血标本进行血清维生素 A(VA)浓度测定 ,采用 RT- PCR法检测 CBL中视黄酸受体 -α(RAR-α)的基因表达水平 ,并采用 ELISA法检测细胞培养上清液中 Ig M含量。结果 :　脐血血清 VA水平与未培养 CBL中 RAR- α的基因表达水平之间存在正相关 :r=0 .50 (P<0 .0 1 ) ;RA增加金黄色葡萄球菌 Cowan 株 (SAC)活化 CBL的 Ig M生成能力 (P<0 .0 0 1 ) ;RA上调 SAC活化 CBL中RAR- α的基因表达水平 (P<0 .0 0 1 ) ;RA使 RAR- α基因表达的上调幅度与 RA使 Ig M生成的上调幅度之间存在正相关 :r=0 .40 (P<0 .0 5)。结论 :　 RA对 CBL抗体生成的促进作用可能通过RAR-α途径传递     

视黄酸受体特异性激动剂对脐血T淋巴细胞细胞因子的影响

[目的]研究体外培养中视黄酸受体(RAR)特异性激动剂四氢-四甲基萘丙烯苯甲酸(TTNPB)对脐血T淋巴细胞IFN-γ和IL-4产生的影响,初步探究其作用机制,为脐血运用于今后临床研究奠定基础.[方法]采用体外细胞培养体系,从足月正常分娩新生儿脐血中分离T淋巴细胞,加入不同浓度TTNPB(10-4 mol/L,100 mol/L,10-6 mol/L,10-7 mol/L,10-8 mol/L和空白对照组)体外培养,提取上清液,用EUSA法测定IFN-γ、IL-4的OD值,用单因素方差检验分析各剂量对IFN-γ、IL-4产生的影响.[结果]TTNPB在10-4 mol/L,IFN-γ的浓度为(12.11±5.57)pg/ml(P<0.05),IL-4的浓度为(2.937 1±0.076 6)pg/ml(P<0.05).[结论]TTNPB在10-4 mol/L下对IFN-γ有明显抑制作用,对IL-4有明显促进作用,这种调节可能是通过RAR选径起作用.     

视黄酸对淋巴细胞膜IL—2Rα、TfR表达及淋巴细胞功能活性影响的研究

用流式细胞仪观测一定剂量视黄酸（ＲＡ）对淋巴细胞膜白介素２受体α链（ＩＬ—２Ｒα）及铁传递蛋白受体（ＴｆＲ）表达及淋巴细胞细胞周期相细胞分布特征的影响，同时测定淋巴细胞增殖功能和（４５）Ｃα内流。结果显示：１＞ＲＡ在２．５×１０（－５）～２．５×１０（－７）ｍｏｌ／Ｌ剂量范围内能促进入外周血淋巴细胞膜ＩＬ—２Ｒａ、ＴｆＲ表达，２．５×１０（－６）ｍｏｌ／Ｌ作用最明显，２．５×１０（－４）ｍｏｌ／Ｌ则对ＩＬ—２Ｒα、ＴｆＲ表达有一定抑制作用；２＞２．５×１０（－６）～２．５×１０（－７）ｍｏｌ／ＬＲＡ能促进ＰＨＡ诱导的淋巴细胞增殖，Ｇ２＋Ｍ期和Ｓ期细胞较溶剂对照明显增多，而２．５×１０（－４）ｍｏｌ／ＬＲＡ作用后，细胞多停留在Ｇ０／Ｇ１期；３＞高浓度ＲＡ（２．５×１０（－４）ｍｏｌ／Ｌ）能抑制淋巴细胞（４５）Ｃａ内流，而一定浓度（２．５×１０（－６）ｍｏｌ／Ｌ）ＲＡ则能促进（４５）Ｃａ内流。     

视黄酸对淋巴细胞跨膜电位影响的研究

用流式细胞仪检测大剂量视黄酸（Ｒｅｔｉｎｏｉｃａｃｉｄ，ＲＡ）及生理剂量ＲＡ对淋巴细胞跨膜电位的影响。结果显示ＲＡ能诱导静止淋巴细胞起极化，尤以大剂量ＲＡ作用明显、ＲＡ与淋巴细胞３７℃温育５～３０ｍｉｎ后用ＣｏｎＡ活化．２．５×１０－４ｍｏｌ／ＬＲＡ诱导的细胞超极化反应较ＲＡ单独作用时减弱，而２．５×１０－６ｍｏｌ／ＬＲＡ先诱导一弱的超极化（温育５ｍｉｎ），然后细胞进入轻微去极化状态；另外ＲＡ与细胞温育３０ｍｉｎ后，用ＴＰＡ活化，２．５×１０－６ｍｏｌ／ＬＲＡ诱导的膜电位变化与ＴＰＡ对照无明显差异，但２．５×１０－４ｍｏｌ／ＬＲＡ的作用则使细胞进一步超极化。     

视黄酸对淋巴细胞膜IL—2Ra,TfR表达及淋巴细胞功能活性影…

用流式细胞仪观测一定剂量视黄酸对淋巴细胞蛋白介素２受体ａ链及铁传递蛋白受体表达及淋巴细胞细胞周期相细胞分布特征的影响，同时测定淋巴细胞增殖功能和＾４５Ｃａ内流，结果显示：１＞ＲＡ在２．５×１０＾－５－２．５×１０＾７ｍｏｌ／Ｌ剂量范围内能促进人外周血淋巴细胞膜ＩＬ－２Ｒａ，ＴｆＲ表达，２．５×１０＾６ｍｏｌ／Ｌ作用最明显，２．５×１０＾－４ｍｏｌ／ｌ     

视黄酸受体抑动剂对正常人体T淋巴细胞增殖的影响

[目的]评价视黄酸受体RARs特异性抑动剂BIBn和视黄酸受体RXRs特异性抑动剂HX603对正常成年人体T淋巴细胞的增殖的影响,确定剂量水平,建立一套通过受体途径研究维生素A功能的实验方法。[方法]用密度梯度分离法和磁性细胞分选法从健康人的外周血分离T淋巴细胞,进行体外培养,采用MTT法,绘制人T淋巴细胞的体外生长曲线,并测定在10-4mol/L、10-5mol/L、10-6mol/L、10-7mol/L4个不同浓度时的OD值,用方差检验分析各剂量对细胞的影响。[结果]在培养24h时1×10-4mol/L、1×10-5mol/L、1×10-6mol/L、1×10-7mol/L浓度的BIBn剂量组结果OD值分别为0.538±0.128、0.692±0.068、0.627±0.136、0.730±0.157(P﹤0.05)。[结论]在培养24h时BIBn对T淋巴细胞增殖有抑制作用。HX603对T淋巴细胞增殖可能有抑制作用。     

视黄酸对幼儿淋巴结B细胞发育的影响

目的:研究视黄酸在B细胞分化发育中的作用,探讨维生素A增加抗体产生的机制。方法:取幼儿正常淋巴结细胞体外培养,加入视黄酸或视黄酸受体拮抗剂干预前后,采用流式细胞术检测分析细胞表面标志的变化,观察B细胞的成熟分化。结果:体外培养的幼儿淋巴结B细胞在无刺激剂存在时,CD19+IgM+的成熟B细胞百分比随培养时间逐渐增加,而相对不成熟的CD19+IgM-B细胞百分比逐渐减少,以48h明显(P<0.05);体外培养加入视黄酸可使CD19+IgM+B细胞百分比进一步升高,在培养24h和48h均显著高于对照组(P均<0.05);同时加入视黄酸拮抗剂则能完全拮抗该促进作用。结论:视黄酸通过视黄酸受体介导促进体外培养的淋巴结B细胞的分化发育。     

REGULATION OF GROWTH HORMONE GENE EXPRESSION BY RETINOIC ACID

Retinoic acid, acting in synergism with thyroid hormone, stimulates production of growth hormone in cultured pituitary cells. Evidence shows that retinoic acid produces this effect by binding to its nuclear receptor, a step followed by association of the retinoic acid-receptor complex with an element of the promoter of the growth homone gene, in concert with thyroid hormone.     

视黄酸对脐血树突状细胞的作用及其途径

目的:研究视黄酸(RA)对脐血树突状细胞(dendriticcell,DC)分化、成熟和功能的影响,探讨视黄酸受体(retinoicacidreceptorα,RARα)在RA对脐血DC调节中的作用。方法:收集脐血9份,分离单个核细胞后,均匀分为4组:对照组、RA组、RARα特异性拮抗剂组(RO组)、RA+RO组。在体外进行DC的诱导培养,流式细胞仪检测细胞表面标记及其荧光强度,观察RA及RARα对DC分化、成熟的影响;培养DC与T细胞进行混合淋巴细胞反应(mixedlymphocytereaction,MLR)后,观察RA及RARα对DC刺激异体T细胞增殖能力的作用;采用ELISA法和RT-PCR法研究RA和RARα在DC对Th细胞极向分化调节中的作用。结果:RA使DC的分化、成熟明显受抑,但当RO同时加入时,则可逆转该影响;MLR后发现RO可逆转RA对T细胞增殖的抑制作用;在DC对T细胞极向分化的研究中,无论在蛋白水平还是基因水平,RO均可明显阻止RA对Th1(IFN-γ)的下调和对Th2(IL-4、IL-10)的上调作用。结论:RA抑制体外培养的脐血单个核细胞向DC的分化和成熟,降低其MLR能力,使免疫反应向Th2方向偏移。RARα从多个环节上参与了RA对脐血DC的调节作用。     

边缘VA缺乏对大鼠胚胎骨骼发育及视黄酸受体表达的影响

目的研究边缘性维生素A(VA)缺乏及补充对大鼠胚胎骨骼发育的影响,及其与视黄酸受体(RARs)基因表达的关联性。方法初断乳SD雌性大鼠30只,按体重随机分为边缘性VA缺乏组(AM),边缘性VA缺乏妊娠0d(E0d)补充组(AS)和正常对照组(AN)。AM和AS组喂饲边缘性VA缺乏饲料(含VA0.4IU/gdiet),AN组喂饲VA充足饲料(含VA4IU/gdiet)。60d后与正常雄鼠交配。AS组自E0起改喂VA补充饲料(含VA10IU/gdiet)。于E12.5d和E19.5d将孕鼠处死,取胚胎。观测E19.5d胚胎骨骼发育指标;用荧光定量PCR及Westernblot检测E12.5d胚胎组织视黄酸受体的表达。结果AM组97.2%的E19.5d胚胎骨骼发育明显迟缓并出现多种骨骼畸形;E12.5d胚胎RARβ、RARγ表达水平明显下降。AS组胚胎各指标较AN组无异。结论视黄酸受体参与介导边缘性VA缺乏导致的大鼠胚胎骨骼发育异常,孕早期补充VA可有效预防骨骼畸形的发生。     

视黄酸对人胸腺细胞成熟分化影响及其作用机制

目的:研究视黄酸调节胸腺细胞发育的作用及其机制。方法:采用体外胸腺组织培养体系,在培养体系中加入视黄酸或视黄酸受体拮抗剂。在培养的不同时间收集胸腺细胞,用荧光标记的抗CD3、CD4、CD8抗体染色,并进行流式细胞仪分析,观察胸腺细胞表面标志随成熟分化的变化。胸腺细胞抽提的RNA采用实时定量PCR法检测视黄酸受体α(RARα) mRNA的表达。结果:体外胸腺组织培养体系能支持胸腺细胞的发育成熟。在培养24 h促进未成熟的CD4+CD8+胸腺细胞向CD4+成熟细胞分化发育作用明显,并且该作用可被RARα特异性拮抗剂Ro41-5253所拮抗。视黄酸也能显著抑制CD4+CD8+胸腺细胞向CD8+细胞分化,该作用也在培养24 h出现。实时定量PCR显示,视黄酸能促进RARα mRNA表达,并且 RARαmRNA表达水平与CD4+CD8+胸腺细胞百分数之间存在正相关,与CD8+胸腺细胞百分数之间存在负相关。结论:视黄酸可能通过影响其受体RARα表达而影响胸腺细胞的成熟分化。     

二十碳五烯酸联合视黄酸对HL-60细胞株N-ras基因表达的影响

目的 :　研究二十碳五烯酸 (Eicosapentaenoicacid,EPA )是否协同视黄酸 (retinoicacid,RA)影响 HL-60细胞的增殖与分化功能及相应分子机制。方法 :　流式细胞仪 (FCM)测定细胞增殖功能 ;NBT还原实验鉴定 HL-60细胞分化 ;Western blot法分析 p2 1 N- ras表达。结果 :　EPA和 RA联合应用能增强 HL-60细胞的增殖抑制和分化效应 ,同时细胞内 p2 1 N- ras表达降低。结论 :　 EPA和 RA可能通过下调节 N-ras基因的蛋白质表达 ,发挥它们对 HL-60细胞增殖与分化功能的联合效应     

RETINOIC ACID AND THYROID HORMONE REGULATE GENE EXPRESSION THROUGH A COMMON GENE ELEMENT

Retinoic acid and thyroid hormone share a common hormone-responsive gene element whereby they can regulate gene expression.