神经酰胺对人内皮细胞凋亡及bax、bcl-2表达的影响

目的 观察外源性神经酰胺(C2-ceramide)对内皮细胞凋亡及相关基因bax和bcl-2表达变化的影响.方法 原代培养人脐静脉血管内皮细胞,加药组加入终浓度分别为5、12.5、25、50 μmol/L的C2-ceramide,对照组加入体积分数为0.1%的无水乙醇.采用TUNEL法检测细胞凋亡,用RT-PCR、Western blot技术对bax mRNA、bcl-2 mRNA及蛋白表达进行分析.结果 加药组内皮细胞的凋亡阳性率显著高于对照组(P＜0.05),且具有时间和剂量依赖性;加药组bax mRNA及蛋白的表达较对照组显著升高(P＜0.05),bcl-2 mRNA及蛋白的表达较对照组则显著降低(P＜0.05).结论 外源性神经酰胺通过上调bax及下调bcl-2表达水平,改变bax/bcl-2值,从而诱导内皮细胞凋亡.     

尿激酶治疗下肢深静脉血栓形成

<正> 1997年1～5月,笔者采用尿激酶(UK)治疗下肢深静脉血栓(DVT)4例,疗效满意。报告如下。 临床资料 1 一般情况 本组病例男2例,女2例,年龄分别为76、51、30、28岁。病程分别为4周、2周和1周(2例)。2例与长期卧床有关,另2例分别与药物和妇科手术有关。主要临床表现为患肢麻木、肿痛,行走困难。患肢温暖、肤色加深、无触痛,     

对大鼠肝脏缺氧性损伤中凋亡机制的研究

目的：研究凋亡机制在大鼠肝脏缺氧性损伤过程中的作用。方法：应用缺氧法制造大鼠肝脏缺氧模型。对肝组织进行原位缺口末端DNA标记技术检测肝细胞的凋亡情况。用原位杂交及RT－PCR方法检测凋亡相关基因bcl-2和bax的表达。结果：大鼠在连续缺氧（10％O2，8h/d)30天后，缺氧组及对照组肝细胞均有凋亡，但缺氧组凋亡细胞明显减少。bcl-2在缺氧组中表达强度明显高于对照组，而bax在缺氧组中的表达低于对照组。结论：在缺氧因素作用下，bcl-2和bac 2种基因表达比例发生变化，使肝脏组织内肝细胞凋亡减少。     

C反应蛋白调节bcl-2/bax蛋白表达诱导人脐静脉内皮细胞凋亡

目的观察不同浓度C反应蛋白对体外培养的人脐静脉内皮细胞（Human umbilical vein endothelial cells,hUVEC）凋亡的影响及其分子机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,用吖啶橙/溴化已啶荧光染色观察凋亡细胞形态。四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT）分别测定与不同浓度C反应蛋白（5mg/L、10mg/L、20mg/L）作用12、24、48h后hUVEC的增殖率,流式细胞仪和Western blotting分别检测与不同浓度C反应蛋白作用24h后的细胞早期凋亡率及bcl-2/bax蛋白表达水平。结果随着C反应蛋白浓度的增加,hUVEC的MTT值逐渐降低,而细胞早期凋亡率则逐渐升高。与对照组相比,24h后高C反应蛋白组MTT值明显下降（P〈0.05）,而细胞早期凋亡率显著增加（P〈0.01）。内皮细胞在高C反应蛋白作用24h后,bcl-2蛋白表达减弱,bax蛋白表达增强,它们的表达量与对照组相比差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 C反应蛋白可能通过调节bcl-2/bax蛋白表达诱导人内皮细胞凋亡。     

血管紧张素Ⅱ调控bax、bcl-2 mRNA表达诱导血管内皮细胞凋亡

目的研究血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导细胞凋亡的机制。方法健康胎儿脐静脉内皮细胞培养至第3代，用不同浓度AngⅡ作用18h，用TUNEL和ELISA检测AngⅡ能否诱导细胞凋亡及其量效关系；用RT—PCR检测bax和bcl-2的mRNA表达。结果．AngⅡ与2型血管紧张素Ⅱ受体（AT2）激动剂CGP42112A一样可以诱导血管内皮细胞凋亡；并且凋亡强度与AngⅡ是典型的剂量依赖关系。在AngⅡ与CGP4211A作用18h后，bax mRNA显著增加，bcl-2 mRNA显著减少。结论AngⅡ通过在转录水平调节bax和bcl-2 mRNA的表达，从而诱导血管内皮细胞凋亡。     

局部注药溶解血管内血栓的新方法

目的　探讨血栓闭塞性脉管炎、动脉硬化性闭塞症形成继发急性动脉血栓形成时的动脉溶栓 ,下肢深静脉血栓形成时静脉溶栓的治疗效果和临床应用中的有关问题。方法　动脉溶栓 :选择患肢股动脉 ,血管内推注尿激酶 10～ 5 0万U。静脉溶栓 :选择下肢肿胀部位远端的外周血管穿刺 ,静点尿激酶 2 0万～ 5 0万U。结果　血栓闭塞性脉管炎、动脉硬化性闭塞症动脉溶栓疗效 :用药后患肢血运改善 ,足背皮肤较前温暖、足趾青紫消退、足背溃疡很快愈合。 5例发现疼痛时间在 5d内的患者 ,用药后缓解。 3例合并足趾坏死的疼痛减轻。溶栓组改善和增进肢体的血供减轻或解除疼痛 ,促进溃疡愈合 ,显著好于普通用药组 ,溶栓组与对照组 (普通用药 )统计学分析P <0 .0 5 ,溶栓组疗效较好。下肢深静脉血栓形成 5 4例 ,静脉溶栓疗效98%。结论　动脉硬化性闭塞症、血栓闭塞性脉管炎 ,可继发肢体急性动脉血栓形成。此时 ,可直接穿刺栓塞近端动脉 ,注入溶栓药物 ,溶解血栓。对下肢深静脉血栓形成的患者 ,选择下肢肿胀部位远端的外周血管静脉输入溶栓药物 ,局部溶栓治疗效果显著     

Melatonin通过影响Bcl-2／Bax比率抑制再灌注后大鼠肝细胞凋亡

目的 探讨再灌注损伤对大鼠肝细胞凋亡的影响。Mel对大鼠肝再灌注细胞凋亡的影响作用及其机制。方法 150只健康雄性Wistar大鼠（质量190-210g，6-7周龄），随机分为褪黑素处理组（Mel）、酒精溶媒对照组（Alc）和生理盐水对照组（NS）。建立肝缺血再灌注损伤模型，缺血均为60min。之后每组分别按再灌注后0．5、1、6、12及24h采集标本。M组（20mg／kg）于缺血前30min腹腔注射melatonin；A组采取与Mel组相同浓度的酒精液，N组则注射同比例的生理盐水。测定血清天门冬酸氨基转移酶（AST）进行测定；对肝组织进行Bcl-2及Bax免疫组化染色；并在此基础上进行透射电镜观察肝细胞核及细胞器。结果 Mel组在再灌注后的6及12h时点AST均显著低于Alc及NS对照组（aP〈0．05），且Alc组与NS组相比差异无显著性。Mel组在再灌注后各时点的Bcl-2染色的阳性细胞率显著高于Alc及NS对照组（aP〈0．05），且各时点内Alc组与NS组相比差异无显著性。Mel组在再灌注后1，6，12及24h时点的Bax染色的阳性细胞率显著低于Alc及NS对照组（cP〈0．05）。且各时点内Alc组与NS组相比差异无显著性。Mel组再灌注后6，12及24h的Bcl-2／Bax值显著高于Alc组和NS组（aP〈0．05）。且上述每时点内的Alcohol组与N．s．组相比差异无显著性。电镜观察结果在Alcohol组及N．s对照组发现了普遍的肝细胞凋亡现象，相同时点Mel组则未发现肝细胞凋亡的发生。结论 外源性Mel可以抑制再灌注后血清天门冬酸氨基转移酶（AST）。增强肝细胞Bcl-2蛋白的表达，抑制Bd-2蛋白的表达，通过提升Bcl-2／Bax值来抑制再灌注后肝细胞凋亡的发生。     

30例下肢深静脉血栓形成原因分析

下肢深静脉血栓形成(ＤＶＴ)是一种常见疾患,可并发肺栓塞而引起死亡,或由于慢性静脉高压而使肢体残废。因此预防及治疗静脉血栓形成显得尤为重要。笔者总结了我院1992～1999年深静脉血栓形成30例发生的原因,旨在进一步探讨下肢深静脉血栓形成的原因及预防措施。1　临床资料本组30例,男20例,女10例,年龄20岁～3例,30岁～4例,40岁～5例,50岁～6例,60岁～5例,70岁～5例,>80岁2例。累及左下肢22例,右下肢6例,双下肢2例。全组40例均有肢体肿胀,活动受限,部分并肢体疼痛,静脉怒张。发热6例,白细胞增高3例。患肢肤色紫绀12例,其中1例小腿皮肤有多…     

白花丹参上调Bcl-2抑制内皮细胞凋亡

[摘要]目的研究白花丹参对过氧化氢(H2O2)诱导的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)凋亡的抑制作用及对凋亡相关基因Bcl-2表达的调节。方法应用酶消化灌注法分离人脐静脉血管内皮细胞,采用形态学观察和Ⅷ因子抗体免疫荧光检测法进行鉴定。取对数生长期的细胞分组进行干预(白花丹参高剂量组0.10 g/ml, 白花丹参低剂量组0.01 g/ml),应用流式细胞技术观察细胞凋亡情况,应用免疫细胞荧光技术检测凋亡相关基因Bcl-2的表达。结果在白花丹参干预下,H2O2诱导的HUVEC凋亡率降低(高剂量组P<0.01,低剂量组P<0.05),高剂量组Bcl-2的表达增加(P<0.01)。结论白花丹参对H2O2诱导的HUVEC凋亡具有抑制作用,这种作用与Bcl-2表达上调有关。     

兔脑出血灶周围脑组织细胞凋亡及bcl—2和bax的检测

目的：探讨兔脑出血灶周围脑组织中bcl-2、bax蛋白表达和细胞凋亡的关系。方法：家兔40只,分为A、B、C、D4组。B、C、D3组采用兔自体血二次注射法制作脑出血模型,分别于模型制作完成后12h,24h,72h断头处死,运用TUNEL法、免疫组化SP技术,检测出血灶周围脑组织中细胞凋亡及bcl-2、bax蛋白表达。结果：出血灶周围脑组织中细胞凋亡、bcl-2和bax蛋白表达在各组间差异有显著性（P＜0．05）。bcl-2蛋白表达与凋亡阳性细胞数呈负相关(r=－0．781,P＜0．05）,bax蛋白表达与其呈正相关（r＝0．723,P＜0．05）。结论：出血灶周围脑组织中存在细胞凋亡,细胞凋亡的变化在一定程度上反映了周围脑组织的损伤程度。bcl-2和bax蛋白对凋亡具有调控作用。     

静脉血栓形成动物模型的病理学研究

目的：观察兔颈静脉血栓形成（VT）模型的病理学变化。探讨其可靠性，方法：通过结扎静脉，阻碍血流，损伤血管壁，激活凝血因子等方法而形成模型并分期观察其病理学演变。结果：VT后3天内，血栓与管壁无粘连，内皮细胞不全，炎性浸润明显，7天后血栓收缩，与内壁机化粘连，渐有内皮细胞覆盖。结论：本模型病理过程和组织病理学变化类似于人类深静脉血栓形成，方法恒定，可靠。     

Relationship between endothelial cell protein C receptor gene 6936A/G polymorphisms and deep venous thrombosis

Background  Deep venous thrombosis (DVT) can result in pulmonary embolism, a fatal complication that is due to the dislodgement and movement of a blood clot (thrombus) from a limb into the lungs. Genetic risk factors related to DVT development include mutations in coagulation proteins, especially the endothelial protein C receptor (EPCR), a component of the anticoagulation protein C (PC) pathway. The objective of the present study was to analyze the relationship between the 6936A/G polymorphism in the EPCR gene and the occurrence of DVT. 

Methods  This study involved 65 patients with DVT and 71 age- and gender-matched healthy controls. Peripheral blood samples were collected from all subjects. Plasma levels of soluble EPCR (sEPCR) were measured by enzyme-linked immunosorbent assay. Genomic DNA was extracted and EPCR gene product was amplified by a standard PCR reaction. Gene product bands were sequenced to identify EPCR gene polymorphisms.

Results  In the control group, the level of sEPCR in subjects with 6936AG genotype was significantly higher than that in subjects with 6936AA genotype ((0.97±0.32) pg/ml vs. (0.61±0.24) pg/ml, P <0.01). Similarly in the DVT group, the level of sEPCR in subjects with the 6936AG were greater than that in subjects with the 6936AA genotype ((0.87±0.21) pg/ml vs. (0.50±0.18) pg/ml, P <0.01). The sEPCR level in DVT patients was significantly higher than that in healthy controls ((0.68±0.32) pg/ml vs. (0.54±0.22) pg/ml, P <0.05). The 6936AG genotype frequency in DVT patients was significantly higher than that in healthy controls (P <0.05). In contrast, the 6936AA genotype frequency in DVT patients was lower than that in healthy controls (P <0.05). Subjects carrying 6936AG had an increased risk of thrombosis (OR=2.75, 95% CI: 1.04–7.30, P <0.05).

Conclusions  EPCR gene 6936A/G polymorphism is associated with increased plasma levels of sEPCR. Subjects carrying 6936AG likely have an increased risk of thrombosis.

     

Incidence of deep venous thrombosis after gynaecological laparoscopy

目的　研究妇科腹腔镜术后深静脉血栓的发生率。方法　在澳大利亚悉尼Liverpool医院 1997年 5月～ 1997年 9月 72例妇科腹腔镜手术采用Doppler超声检查静脉血流的通畅性和血管腔内的回声团用以诊断深静脉血栓。 61例患者充气时间 <60分钟为小手术组 ,11例 >60分钟为大手术组。每例患者在术后 2 4小时内及术后 7天行两次超声Doppler检查 ,所有 72人均行术后 2 4小时内的超声Doppler检查 ,小手术组 61例中 4 0例、大手术组 11例中 9例行二次超声检查。 2 3例未行二次超声检查者均行电话随访。结果　在我们的研究中两组患者均未发现DVT。本文同时报道北京复兴医院一例腹腔镜下右卵巢巧克力囊肿剥除术、左卵巢及部分输卵管切除术患者术后并发DVT ,其诊断及治疗经过。结论　这项研究证实妇科腹腔镜手术DVT虽发生率极低 ,一旦发生需及时诊治 ,以免发生肺栓塞等致命并发症。     

大剂量甲基强的松龙对大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响

目的:探讨大剂量甲基强的松龙(Methylprednisolone,MP)对大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响。方法:60只Wistar成年大鼠分为MP治疗组与对照组。Allen氏重物坠击法制作T8脊髓损伤模型,治疗组经尾静脉注射大剂量MP,对照组注入等量生理盐水。术后1、3、7、14、28 d取脊髓组织分别进行HE染色、TUNEL法检测凋亡细胞、SABC法检测bcl-2和bax的含量,并对大鼠神经功能评分。结果:大鼠脊髓损伤后神经细胞发生凋亡,1 d后出现,3 d达高峰,28 d下降明显。MP组凋亡率较对照组明显降低,其bcl-2/bax比例增加,大鼠双下肢运动功能改善明显。结论:大剂量MP通过增强大鼠脊髓损伤后bcl-2/bax比例,抑制神经细胞凋亡,从而减轻损伤后的继发性损害。     

老年下肢深静脉血栓的治疗

目的探讨和观察老年下肢深静脉血栓的治疗方法,并配合相关护理治疗,记录和整理其中要点。方法选取在我院已经确诊的48例下肢深静脉血栓老年患者,对他们实施抬高患肢尝试性治疗,在这个过程中同时进行溶栓药物治疗,并配合相关的活血药物进行护理治疗,观察和了解患者的临床表现,进行一定的健康教导,观察和记录治疗效果。结果选取的48例老年下肢深静脉血栓患者经过相关治疗后,其中治疗效果为显效的患者有27例,有效为20例,其中一例因为肺梗塞死亡。结论通过使用相关药物治疗,加上临床上用相关活血性药物进行护理治疗等治疗方法,对患有下肢深静脉血栓病症的老年患者有着很好的疗效,若是在该症状的早期就实行相关治疗,效果更加明显。     

白细胞介素-18与深静脉血栓疾病的相关性研究

目的：探讨白细胞介素‐18（IL‐18）的表达变化与深静脉血栓疾病（DVT）发生、发展的相关性及临床意义。方法收集临床DVT病例（DVT组,n＝40）、实验对照组（n＝40）、健康对照组（n＝20）的血液,以ELISA法检测其中IL‐18的表达并分析差异;培养原代培养的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）行目标蛋白免疫荧光检测明确其定位;构建人IL‐18过表达和干扰病毒载体（IL‐18‐pCDH‐GFP、IL‐18‐LMP‐shRNAmir1）感染HUVECs并进行基因表达谱芯片检测和KEGG Pathway 等生物信息技术,分析IL‐18与疾病的相关性。结果人血 ELISA 检测发现在 DVT 组和两对照组中 IL‐18的表达差异均有统计学意义（F＝11．248,P＜0．01）;实验对照组与健康对照组之间IL‐18的表达差异无统计学意义（ P＞0．05）;免疫荧光检测显示目标蛋白定位于细胞质;人IL‐18过表达和干扰载体经病毒转染后感染 HUVECs ;基因芯片检测发现与正常细胞比较,过表达载体 IL‐18‐pC‐DH‐GFP感染细胞有17条信号通路下调、16条上调;干扰载体IL‐18‐LMP‐shRNAmir1感染细胞有23条信号通路下调、9条上调。结论 IL‐18对HUVECs有确切影响,同时与DVT疾病密切相关,有希望作为深静脉血栓疾病临床预测诊断的候选分子标记物。     

Transplantation of VEGF165-gene-transfected endothelial progenitor cells in the treatment of chronic venous thrombosis in rats

Background The organization and recanalization of thrombi is a dynamic and complex process. The aim of this research was to study the cotherapeutic effect of stem cell transplantation and gene transfection on chronic venous thrombosis. Methods We constructed a recombinant adenoviral vector carrying the vascular endothelial growth factor 165 （VEGF165） gene by using the pAdEasy system, which was subsequently identified and amplified. Simultaneously, endothelial progenitor cells （EPCs） were isolated from rat bone marrow using Ficoll, cultured in EBM-2MV medium, and identified. Then, the cells were transfected with the recombinant Ad-VEGF165. The EPCs were labeled with 1 ,1＇-dioctadecyl-3,3,3＇,3＇-tetramethylindocarbocyanine （Dil） before transplantation. A rat model of chronic vein thrombosis was developed by partial ligation of the inferior vena cava. The rats were randomly divided into 4 groups （n=25, each）： A, Ad-VEGF165/EPC-transplantation group received 1 ml （10^6） of Ad-VEGF165/EPCs; B, EPC-transplantation group received 1 ml （10^6） of EPCs; C, Ad/EPC-transplantation group received 1 ml （10^6） of Ad/EPCs; D, control group received 1 ml of the transplantation medium. The thrombi and adjacent caval walls were harvested 28 days after transplantation; real-time quantitative polymerase chain reaction was used to detect the expression level of vascular endothelial growth factor （VEGF） mRNA; and western blotting was used to measure changes in VEGF protein expression. Hematoxylin-eosin staining and immunohistochemical staining were performed to detect recanalization. Neovascularization was detected by immunohistochemical staining using the antibody for von Willebrand factor （vWF）, which is a component of endothelial cells.The capillary density was quantitatively determined by counting the capillaries under a high-power microscope. Results The Ad-VEGF165 was constructed, and bone-marrow-derived EPCs were cultivated and successfully identified. We determined the optimum transfection ratio that promoted the growth of EPCs. After transfection, the EPCs secreted the VEGF protein. After transplantation, the in vivo survival of EPCs and their differentiation into endothelial cells were determined by detecting the fluorescence associated with the Dil stain. VEGF mRNA was expressed in groups A, B, C and D after transplantation, and the VEGF mRNA level in group A was significantly higher than those in groups B, C and D （P〈0.05）; the VEGF mRNA levels in groups B and C were significantly higher than those in group D （P〈0.05）, and there was no statistical significance between the VEGF mRNA levels in groups B and C. The recanalization capillary density in group A was significantly higher than those in groups B, C （P 〈0.05） and D （P 〈0.01）; the recanalization capillary densities in groups B and C were significantly higher than that in group D （P 〈0.05）. Moreover, there was no statistical significant difference between the values for groups B and C. Conclusions The EPCs were successfully transfected by Ad-VEGF165. A suitable transfection ratio can improve the efficiency of EPCs and the possibility of promotion of angiogenesis after transplantation. Transfected EPCs caused accelerated organization and recanalization of vein thrombi.     

PFT-α对隐睾所致生精细胞凋亡的影响

目的：通过研究PFT-α对隐睾生精细胞中p53和bcl-2/bax表达的影响,探讨生精细胞凋亡的分子机制。方
法：将雄性SD大鼠随机分为假手术组、隐睾组、隐睾+p53抑制剂(p-fifty three inhibitor-alpha,PFT-α)组、隐睾+ PFT-α溶
媒(DMSO)组。后三组建立单侧隐睾模型,后两组分别于大鼠腹腔内注射PFT-α和PFT-α溶媒,每天1次,定时定量。
7 d后处死所有大鼠,取双侧睾丸称湿重。观察手术侧睾丸生精细胞组织形态,采用TUNEL法结合流式细胞术(flow
cytometry,FCM)检测生精细胞凋亡程度,免疫组织化学和Western 印迹分别检测p53和bcl-2/bax的表达。结果：隐睾+PFT-α组
与隐睾组和隐睾+PFT-α溶媒组比较,生精上皮排列有序,细胞层数厚,凋亡指数较低,p53和bax表达弱,bcl-2表达强。结
论：PFT-α可能通过上调bcl-2,下调p53和bax的表达,抑制隐睾生精细胞的过度凋亡。     

褪黑素对小鼠肝癌细胞凋亡及自然杀伤细胞活性的影响

目的 探讨褪黑素(MLT)在体内对H22肝癌细胞凋亡及免疫调节作用的影响及其机制。方法 应用免疫组织化学染色方法及原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法(TUNEL)对Bc1-2、Bax的表达及凋亡细胞进行检酗，MTT比色法检测脾细胞NK杀伤活性。结果 实验发现MLT治疗组、预防组及5-Fu组Bcl-2和Bax的表达及凋亡细胞数明显高于生理盐水组(P＜0．01)。Bax／Bcl-2比例在MLT预防组最大。NK杀伤活性在MLT治疗组、预防组较其它组明显增高(P＜0．05)。结论 MLT在体内有促进肿瘤细胞凋亡的作用，且可使NK杀伤活性增高，推测Bcl-2、Bax和机体的免疫系统参与了褪黑素的抗肿瘤作用。